兔自体肌腱细胞与碳纤维联合培养后体内植入实验研究

为了观察兔自体肌腱细胞与碳纤维联合培养后植入体内的改变，采用自体肌腱细胞传代后与碳纤维编织带联合体外培养，植入兔体内，分期观察了肌腱细胞的形态学改变及合成胶原的类型。结果发现：体内植入后肌腱细胞能继续增殖，并能合成Ⅰ型胶原。同时发现肌腱细胞在植入４周后脱离碳纤维支架，在编织带间增殖、合成胶原，其胶原纤维相互衔接，形成了致密的组织结构。桥接肌腱处，胶原纤维互相衔接，表明植入体与受体肌腱已愈合。扫描电镜下观察肌腱细胞在碳纤维间排列整齐、均匀，胶原纤维间相互连接形成网状，纤维条索主体与碳纤维方向一致。透射电镜下细胞核核仁清晰，细胞器丰富。为进一步研究有生命的人工材料提供了依据。     

腱细胞与人工材料体外联合培养的形态学观察

目的：为了探索肌腱细胞与人工材料是否有可能复合形成新型有活性的人工肌腱，特设计了本项研究。方法：取第４代腱细胞，复苏后分别加入碳纤维编织带、涤纶编织带及几丁质编织带联合培养，在倒置显微镜及透射电镜下观察形态学改变及细胞与材料的相容性。结果：腱细胞与碳纤维有良好的相容性。腱细胞沿碳纤维生长、繁殖，并合成胶原。腱细胞与涤纶的相容性较差，在几丁质上无细胞附着。结论：腱细胞与碳纤维联合培养后，保持了腱细胞的形态特征，与碳纤维的相容性最好。有可能成为一种新型有活性的人工肌腱材料     

兔肌腱细胞和成纤维细胞与人工材料体外联合培养的形态学观察

在兔肌腱细胞、成纤维细胞分离培养的基础上，将冻存复苏的传代细胞与碳纤维、涤纶及几丁质三种材料体外联合培养，观察细胞与材料的相容性以及细胞在材料上的生长情况，比较这两种细胞在三种材料上的生长差异。结果发现，在体外培养条件下，碳纤维与两种细胞的相容性均好，有良好的吸附性；涤纶材料上两种细胞生长均少，可能与其表面结构有关；几丁质明显抑制这两种细胞生长。同时发现，无论肌腱细胞，还是成纤维细胞，在碳纤维上座落的数量都明显优于涤纶、几丁质。三种材料交错在一起时，胶原纤维方向是以碳纤维为轴，形成网状，交织缠绕在材料之间。随时间延长，细胞在单根碳纤维或多根碳纤维上排列均匀，包绕碳纤维，且相互衔接。研究结果，为进一步研究有生命的人工肌腱、韧带提供了依据。     

同种脱细胞软骨基质与软骨细胞复合物修复兔甲状软骨缺损的实验研究

目的 探讨脱细胞软骨基质(acelluar cartilaginous matrix，ACM)与软骨细胞复合后植入兔体内，能否形成软骨修复甲状软骨缺损。方法 分离培养免甲状软骨细胞，与ACM体外复合培养，形成ACM-软骨细胞复合物，进行组织学分析及用于修复兔甲状软骨缺损。新西兰大白兔18只，制成两侧甲状软骨缺损模型，随机分为3组，每组6只。对照组：只制备缺损，不作修复；ACM修复组：采用单纯ACM修复缺损；实验组：用ACM-软骨细胞复合物修复。术后8周处死动物，取出标本，进行大体和组织学观察。结果 体外培养时，软骨细胞能在ACM表面生长，未长入基质内。动物实验结果，对照组：甲状软骨缺损处被肌肉、结缔组织充填；ACM修复组：ACM内炎性细胞浸润，轻度吸收变形；实验组：复合物植人体内后8周未形成软骨，甲状软骨缺损修复不理想。结论 ACM体外培养和体内植入均未能为软骨细胞生长提供支持，作为一种天然细胞培养支架，尚有待进一步改进与完善。     

复合类新型骨基质材料生物相容性研究

目的 评价一种新型无机—有机复合类骨基质材料(NBM)的生物相容性。方法 应用组织培养技术对NBM体外复合兔成骨细胞培养1—14天，然后进行形态学观察、细胞增殖、细胞蛋白含量与碱性磷酸团(ALP)活性测定；对NBM采用同种兔体内植入观察2、4和8周，通过倒置显微镜、扫描电镜及组织学观察其体内成骨情况。结果 体外培养时NBM对成骨细胞的体外增殖和ALP的表达无明显抑制作用，成骨细胞与材料可良好黏附、增殖，并分泌大量细胞外基质成分；而细胞—材料复合体肌内植入后4周可见大量淋巴细胞和巨噬细胞浸润，8周仍未见新生骨组织生成。结论 NBM材料的体内外生物相容性差异可能与NBM免疫原性有关，体内植入后引起宿主免疫反应，影响体内成骨。无机—有机复合材料引起的移植免疫排斥反应应引起组织工程研究的注意。     

珍珠层/聚乳酸人工骨的生物相容性研究

目的：研究珍珠层／聚乳酸人工骨在体内外的生物相容性。方法：将珍珠层／聚乳酸人工骨在体外与兔成骨细胞复合培养作实验组，以脱钙骨／聚乳酸人工骨作对照，行MTT法、组织学和扫描电镜检测，观察成骨细胞在材料表面的粘附、生长和增殖情况；将同种异体成骨细胞—珍珠层／聚乳酸人工骨复合植入体内，观察机体对细胞与材料的排斥反应。结果：肌法显示随培养时间的延长，细胞在材料表面不断增殖；组织学及电镜显示，在体外细胞于材料表面及孔隙中附着、生长良好，存在接触抑制现象；细胞与材料复合植入体内，珍珠层／聚乳酸组的炎性反应明显比对照组轻。结论：珍珠层／聚乳酸人工骨在体内外有良好的生物相容性。     

新型双相陶瓷材料复合成骨细胞构建人工骨及其体内成骨的观察

目的 观察骨髓来源的成骨细胞与新型双相陶瓷材料复合培养后细胞生长状况及其体内异位成骨能力。方法 将来源于兔骨髓的成骨细胞与新法制备的HA／TCP共培养2周，通过相差显微镜、扫描电镜观察体外细胞生长情况；然后将复合物自体异位植入体内，6周后观察体内成骨情况。结果 扫描电镜显示材料表面和孔隙内均有成骨细胞生长，有良好增殖活动性和稳定细胞表型，材料中心区未见细胞生长；植入体内6周后取材见内植物有新骨形成、多位于内植物表面，可见成骨细胞、骨细胞、髓腔样结构、板层样骨基质等正常骨组织结构。结论 新型双相陶瓷支架可用作组织工程骨的细胞外基质材料，骨髓来源的成骨细胞可用作骨组织工程的种子细胞。     

ptsA58H质粒转化人胚腱细胞的生物学特性研究

目的 研究经ｐｔｓＡ５８Ｈ质粒转染的转化人胚腱细胞的生物学特性及致瘤性。方法 体外培养转化人胚腱细胞，对细胞进行形态学、超微结构及一般特征的观察。绘制细胞生长曲线，平板克隆实验检测克隆形成率，软琼脂培养，植入鼠体内观察有无致瘤性，Ｂｒｄｕ标记细胞，检测细胞植入体内的转归及细胞的分泌功能。结果 转化人胚腱细胞能４长期传代，增殖能力强，在软琼脂中不生长，接种裸鼠不致瘤。且在裸鼠体内细胞存活，增殖能力旺     

无定形磷酸钙负载rhBMP-2纳米缓释体的制备及细胞毒性实验

[目的]制备无定形磷酸钙（ACP）负载重组人骨形态发生蛋白-2（rhBMP-2／ACP）纳米缓释体并观察其细胞毒性，为进一步体内植入提供实验依据。[方法]采用湿化学法合成rhBMP-2／ACP纳米缓释体；兔间充质干细胞（BMSCs）与rhBMP-2／ACP纳米缓释体进行体外复合培养，观察细胞在材料表面的黏附、增殖及功能表达，检测材料的细胞毒性。[结果]材料浸提液对兔BMSCs的生长无影响，其细胞相对增殖率在100．2％～102．5％之间，细胞毒性评级为0级；BMSCs于复合材料表面的黏附、生长速度、形态与对照组无明显差别。[结论]rhBMP-2／ACP纳米缓释体无细胞毒性，复合培养不影响BMSCs的正常生理功能，细胞相容性良好。     

新型双相陶瓷材料复合成骨细胞构建人工骨及其体内成骨的观察

目的 观察骨髓来源的成骨细胞与新型双相陶瓷材料复合培养后细胞生长状况及其体内异位成骨能力。方法 将来源于兔骨髓的成骨细胞与新法制备的HA/TCP共培养2周,通过相差显微镜、扫描电镜观察体外细胞生长情况;然后将复合物自体异位植入体内,6周后观察体内成骨情况。结果 扫描电镜显示材料表面和孔隙内均有成骨细胞生长,有良好增殖活动性和稳定细胞表型,材料中心区未见细胞生长;植入体内6周后取材见内植物有新骨形成、多位于内植物表面,可见成骨细胞、骨细胞、髓腔样结构、板层样骨基质等正常骨组织结构。结论 新型双相陶瓷支架可用作组织工程骨的细胞外基质材料,骨髓来源的成骨细胞可用作骨组织工程的种子细胞。