甲泼尼龙对大鼠视神经轴突切断后视网膜兴奋性氨基酸转运蛋白-1和谷氨酰胺合酶表达的影响

【摘要】目的研究甲泼尼龙（methylprednisolone）对大鼠视神经轴突切断术后视网膜兴奋性氨基酸转运蛋白-1（EAAT-1）和谷氨酰胺合酶（GS）表达的影响。方法建立大鼠单眼视神经轴突切断模型56只,并随机分为4组,每组14只大鼠。第1组和第2组分别给予甲泼尼龙10mg／kg/d和20mg／kg／d静脉注射,共5d;第3组给予甲泼尼龙30mg/kg静脉注射1次,以后按5．4mg/kg／h给药直到24h;第4组给予生理盐水静脉注射;第4组大鼠的对侧眼作为正常对照组不予注射。各组于术后7d随机选择2只大鼠进行上丘脑荧光金逆行标记检查视神经轴突切断状况。术后14d、21d随机选择6只大鼠进行免疫组织化学分析视网膜EAAT-1和GS的表达。结果视神经轴突切断术后14d、21d各实验组EAAT-1的表达的差异无统计学意义,但均低于正常对照组。第4组的GS表达术后14d、21d时均低于第1组和正常对照组,术后14d时低于第3组,术后21d时也低于第2组;第3组术后21d的GS表达低于术后14d。结论视神经轴突切断术后大鼠视网膜EAAT-1、GS的表达降低;甲泼尼龙能促进视神经损伤后大鼠视网膜GS而不是EAAT-1的表达。     

视神经损伤对大鼠视网膜兴奋性氨基酸转运蛋白-1表达的影响

目的 研究视神经损伤对兴奋性氨基酸转运蛋白-1(EAAT-1)的表达以及对视网膜谷氨酸(Glu)摄取的影响.方法 建立大鼠右眼视神经损伤模型48只.术后1、7、14d以高效液相色谱分析检测大鼠玻璃体谷氨酸浓度;通过免疫组织化学检测大鼠视网膜EAAT-1的表达.结果 视神经损伤后1、7、14d,实验眼玻璃体谷氨酸浓度升高,与对照眼比较,差异均有统计学意义(t1h=10.171,P=0.000;t7h=3.871,P=0.006;t14h=5.599,P=0.001);实验眼视网膜EAAT-1表达降低,与对照眼比较,差异均有统计学意义(t1h=3.460,P=0.011;t7h=4.182,P=0.004;t14h=4.077,P=0.005).结论 视神经损伤后视网膜内谷氨酸积聚,与视网膜EAAT-1的表达降低有关.     

银杏叶提取物对大鼠视神经挫伤后视网膜形态及视神经GAP-43表达的影响

目的观察银杏叶提取物（EGb761）对大鼠视神经夹挫伤后视网膜形态学及视神经GAP-43表达的影响。方法SD大鼠60只随机分为正常组12只、对照组24只、治疗组24只。后两组建立视神经不完全损伤模型,从伤后1 h开始,隔日1次,对照组给予生理盐水球后注射,治疗组给予EGb761球后注射。在伤后3 d、7 d、14 d、28 d取材,HE染色观察两组视网膜形态学改变;RT-PCR检测两组视神经中GAP-43 mRNA的表达水平。结果各时间点视网膜病理学改变治疗组轻于对照组,GAP-43 mRNA的表达治疗组较对照组高（P〈0.05）。结论EGb761可以抑制神经节细胞的损伤,使视神经组织中GAP-43 mRNA表达增加,促进视神经夹挫伤后视神经的再生。     

葡萄糖转运蛋白-1在糖尿病早期大鼠视网膜的表达

目的　通过检测糖尿病早期大鼠视网膜葡萄糖转运蛋白-１（ｇｌｕｃｏｓｅｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ-１,ＧＬＵＴ１）表达的变化,揭示ＧＬＵＴ１对早期糖尿病视网膜的影响。方法　选取鼠龄为１２周的健康雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠８０只,随机选取４０只采用链脲佐菌素左下腹腔一次性注射建立１型糖尿病模型（实验中４只因严重感染而死）,另取４０只作为对照组注射同等量柠檬酸缓冲液。模型组大鼠建模成功后分别在４周、８周、１２周、１６周（每周９只大鼠）测定血糖和糖化血红蛋白,取同时期对照组（每周１０只）大鼠做相同检测。免疫组织化学方法检测视网膜ＧＬＵＴ１蛋白表达,利用ＡＤＰ酶组织化学染色方法进行视网膜铺片,了解视网膜血管改变情况。结果　糖尿病组血糖及糖化血红蛋白显著高于对照组。免疫组织化学染色、光镜形态学观察显示糖尿病组１６周视网膜节细胞层细胞排列极其紊乱,但未见出血,视网膜内核层水肿,内外核层细胞排列紊乱。糖尿病组ＧＬＵＴ１表达较对照组大鼠视网膜中阳性染色颗粒均明显增加。糖尿病组视网膜ＧＬＵＴ１表达的平均积分光密度在４周（６３．９０３３±４２．２４５３）、８周（９６．３６９１±１８．６９７２）、１２周（１０２．００２８±２３．９９８９）、１６周（１３０．４０８７±７２．７４５１）依次有所增强,其中８周和１２周差异无统计学意义,其他各时间点均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）;两组各个时间点相比较,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。ＡＤＰ酶组织化学染色显示:对照组视网膜血管自视盘发出的大血管向四周呈放射状分布,毛细血管分布均匀;糖尿病组大鼠１６周视网膜出现视盘周围血管灌注降低,周边部部分毛细血管迂曲及血管闭塞。结论　糖尿病大鼠视网膜中ＧＬＵＴ１表达增强,并随病程进展逐渐增高。出现明显视网膜微血管改变时,显著增高。     

米诺环素对大鼠视网膜诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的探讨米诺环素对大鼠视神经损伤后的保护作用。方法观察米诺环素对诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响。成年SD大鼠54只（右眼54只）,随机分为正常组6只（右眼6只）、实验组24只（右眼24只）、对照组（右眼24只）。后两组均制备右眼视神经钳夹伤模型,伤后1h分别给予45mg／kg米诺环素和等量生理盐水腹腔注射,此后1次／d。于伤后1、3、7、14d取材,观察视网膜组织形态学变化,利用计算机图像分析技术对经免疫组织化学染色后视网膜组织中iNOS表达的平均光密度值进行半定量检测。结果1d、3d,7d及14d实验组iNOS表达水平明显较对照组降低（t1d=9．497、t3d=11．203、t7d=15．622、t14d=4．889,均P〈0．001）。结论米诺环素可通过抑制视神经钳夹伤后视网膜组织中iNOS的表达,而对损伤视神经起到抗氧化和抗凋亡作用。     

压力对大鼠纯化视网膜神经节细胞诱导型一氧化氮合酶mRNA及其蛋白表达的影响

目的 研究不同压力下纯化培养的大鼠视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells,RGCs)中诱导一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS)mRNA及其蛋白质的表达,探讨青光眼患者RGCs损伤的机制。方法 将纯化培养的Sprague-Dawley大鼠RGCs随机分成对照组A,B,C,及D组,分别在0,20,40,60及80mmHg(1mmHg=0.133KPa)的压力下培养48h后,用原位杂交,RTPCR及Western blot法检测RGCs中iNOSmRNA及其蛋白质的表达,并用全自动图像分析系统测定其吸光度值。结果 纯化培养的RGCs纯度为98％。原位杂交,RT－PCR及Western blot法检测RGCs中iNOS mRNA及其蛋白表达结果变化均呈平行关系;对照组无表达,A组有较弱的表达信号,B,C及D组表达逐渐增强;3项检测结果用全自动图像分析显示;A组iNOSmRNA均弱表达,与对照组比较差异有显著意义（P＜0．05）;B,C及D组均为强表达,各组与对照组比较差异有非常显著意义（P＜0．01）。结论 压力可激活RGCs中iNOSmRNA及其蛋白质的表达,由此产生过量的NO损伤RGCs成为青光眼的发病因素之一。     

牛磺酸对高糖刺激大鼠视网膜Müller细胞GLAST和GS表达的影响

目的:通过检测牛磺酸对高糖刺激大鼠视网膜Müller细胞谷氨酸转运蛋白(glutamate-aspartate transporters,GLAST)和谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)表达的影响,探讨牛磺酸保护糖尿病引起视网膜损伤的机制。方法:高糖培养大鼠视网膜Müller细胞,分正常对照组(NC)、高糖组(high glucose,HG,25mmol/L)、高糖 0.1mmol/L牛磺酸(taurine,T)干预组(HG 0.1T)、高糖 1mmol/L牛磺酸干预组(HG 1T)、高糖 10mmol/L牛磺酸干预组(HG 10T)。用免疫荧光化学法和Western-blotting检测大鼠视网膜Müller细胞中GLAST和GS的表达。结果:高糖培养后,大鼠视网膜Müller细胞中GLAST和GS的表达明显减少(P<0.05),与高糖组相比,1mmol/L和10mmol/L牛磺酸干预可明显增加GLAST和GS的表达(P<0.05)。结论:牛磺酸增加Müller细胞中GLAST和GS的表达抑制糖尿病引起的视网膜Müller细胞功能改变。     

牛磺酸对高糖刺激大鼠视网膜Müller细胞GLAST和GS表达的影响

目的:通过检测牛磺酸对高糖刺激大鼠视网膜Müller细胞谷氨酸转运蛋白(glutamate-aspartate transporters,GLAST)和谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)表达的影响,探讨牛磺酸保护糖尿病引起视网膜损伤的机制。方法:高糖培养大鼠视网膜Müller细胞,分正常对照组(NC)、高糖组(high glucose,HG,25mmol/L)、高糖+0.1mmol/L牛磺酸(taurine,T)干预组(HG+0.1T)、高糖+1mmol/L牛磺酸干预组(HG+1T)、高糖+10mmol/L牛磺酸干预组(HG+10T)。用免疫荧光化学法和Western-blotting检测大鼠视网膜Müller细胞中GLAST和GS的表达。结果:高糖培养后,大鼠视网膜Müller细胞中GLAST和GS的表达明显减少(P<0.05),与高糖组相比,1mmol/L和10mmol/L牛磺酸干预可明显增加GLAST和GS的表达(P<0.05)。结论:牛磺酸增加Müller细胞中GLAST和GS的表达抑制糖尿病引起的视网膜Müller细胞功能改变。     

谷氨酸对视网膜Muller细胞超微结构和谷氨酰胺合成酶表达的影响

目的探讨谷氨酸对大鼠视网膜Muller细胞超微结构和谷氨酰胺合成酶（GS）表达的影响。方法取5～7d清洁级Wistar乳鼠视网膜,在含质量分数10%新生牛血清的Dulbecco改良Eagle培养基中传代培养大鼠视网膜Muller细胞。第3代Muller细胞培养基中加入终浓度分别为10、20、50、100、200μmol/L的谷氨酸作用10min。正常对照组Muller细胞培养基中未加入谷氨酸。通过免疫细胞化学法检测GS的表达鉴定视网膜Muller细胞。透射电镜观察各组Muller细胞超微结构的改变。采用Westernblot法半定量检测GS的表达。结果培养的Muller细胞中,GS阳性细胞达95%以上。透射电镜下正常对照组Muller细胞超微结构正常,谷氨酸10、20、50μmol/L组Mller细胞超微结构无明显改变。100μmol/L谷氨酸组可见Muller细胞线粒体肿胀和染色质的凝集、边聚。在200μmol/L谷氨酸组可见Muller细胞空泡样变性和凋亡小体。Westernblot结果显示,10、20、50μmol/L组GS在Muller细胞中表达较正常对照组升高,差异均有统计学意义（q=29.32、q=75.54、q=48.36、q=130.20,P〈0.01）,50μmol/L谷氨酸组GS的表达达高峰,100μmol/L谷氨酸组表达开始下降,200μmol/L谷氨酸组的表达低于正常对照组（q=46.67,P〈0.01）。结论谷氨酸浓度影响视网膜Muller细胞中GS的表达,谷氨酸浓度超过50μmol/L可引起视网膜Muller细胞超微结构的改变。     

急性高眼压后大鼠视网膜谷氨酰胺合成酶mRNA表达的变化

目的观察急性高眼压后大鼠视网膜谷氨酰胺合成酶（GS）mRNA的表达变化。方法前房灌注加压至110mmHg，维持60min。提取视网膜总RNA，以RT—PCR半定量GSmRNA。结果大鼠前房加压解除后4h，GSmRNA的表达较对照眼开始升高（P〈0．05），至24h达高峰（P〈0．01），36h降低（P〈0．05），72h（P〉0．05）恢复至正常水平。结论急性高眼压后大鼠视网膜GSmRNA的表达呈现明显升高过程，可能引起GS表达上调，促进谷氨酸转化为谷氨酰胺，从而减轻视网膜神经节细胞（RGCs）的损伤。     

Effect of triiodothyronine on glutamine synthetase in the developing rat retina.

It has been previously demonstrated that triiodothyronine (T3) causes a precocious increase in glutamine syntehtase (GS) activity in the developing retina as measured by the glutamyltransferase (GT) reaction. To determine its distribution and the mechanism of its increased activity an immunohistochemical study was performed in retinas of 1 to 24-day-old rats given a subcutaneous injection of T3 on the day of birth. No difference was seen between T3-treated rats and controls on postnatal days 1 and 2. However, there was significantly less stain in T3-injected animals than in control animals especially in the pigment epithelium on day 5 and in Müller cells on days 8. By days 12 and 24 no difference was observed between experimental and control rats. We were thus unable to demonstrate increased synthesis of GS to correlated with its increased activity following T3 administration. On the contrary, we obtained evidence of decreased GS synthesis. It is suggested that T3 either causes both increased GT activity and decreased GS synthesis or that the T3-induced elevation of GS activity results in decreased synthesis of GS presumably through end-product inhibition.     

Glutamine synthetase in the developing rat retina: an immunohistochemical study.

The distribution of glutamine synthetase (GS) was studied in rat retinas from the day of birth to adulthood by means of immunohistochemistry. GS was present in the pigment epithelium in the newborn rat, and over the next few days it was demonstrated around blood vessels and within small glial cells. The enzyme was first detected in perikarya and processes of Müller cells on day 5. The adult GS pattern was acquired by day 12, except for persistence of GS in the pigment epithelium. GS in the pigment epithelium gradually diminished to trace amounts between day 12 and 2 months. Additionally, GS was found in the inner epithelium of the ciliary body and posterior epithelium of the iris during the developmental period and in adults. Our results indicate that the dramatic rise in retinal GS biochemically demonstrated by other workers occurs exclusively in Müller cells. Moreover, the complete acquisition of GS in rat retina corresponds chronologically with certain maturational events including the onset of the electroretinographic response. The role of GS in the pigment epithelium and extraretinal structures is uncertain but it may denote their involvement in mucopolysaccharide metabolism.     

Neuroprotective effect of transcorneal electrical stimulation on ischemic damage in the rat retina

Some previous studies have showed that transcorneal electrical stimulation (TES) could protect retinal neurons in certain rodent models. However, it is not yet clear whether TES could also definitely protect retinal neurons against ischemic insults. In the present study, we hypothesized that TES had such a neuroprotective effect and further investigated its underlying mechanism. Adult female Sprague–Dawley (SD) rats received TES treatment every other day after ocular ischemia was induced by elevating the intraocular pressure to 120 mmHg for 60 min. Retinal ganglion cells (RGCs) were labeled retrogradely 7 days before ischemia and were counted 7 and 14 days later. At the same time points, retinal function was assessed by scotopic electroretinography (ERG), combined with retinal histological analysis. The glutamine synthetase (GS) immunoreactivity was compared between ischemic retinas with TES and those with sham stimulation under identical confocal laser microscope conditions. The immunohistochemical indications were confirmed by Western blot analysis. Higher mean density of RGCs was quantified in TES treated retinas compared to retinas with sham stimulation on days 7 and 14 after ischemia. Similarly, histological analysis showed that TES better preserved the mean thickness of separate retinal layers. ERG studies indicated that by undergoing TES treatment, the b-wave amplitude was also significantly preserved on day 7 after ischemia and recovered robustly on day 14. Immunohistochemical and Western blot analysis both revealed that GS levels remarkably increased after TES and lasted for at least 7 days. Our results indicate that TES can protect retinal neurons against ischemic insults, probably related to increasing levels of GS localized in Müller cells. These findings suggest a new approach for potential clinical application to ocular ischemic diseases.     

复方樟柳碱注射液治疗视神经挫伤的疗效

目的：探讨复方樟柳碱注射液治疗视神经挫伤的临床疗效。 方法：回顾分析2009-01/2011-05于沧州市人民医院住院治疗的视神经挫伤患者72例72眼。其中36例36眼应用复方樟柳碱注射液行颞浅动脉旁皮下注射为治疗组,36例36眼应用传统药物治疗为对照组。 结果：治疗28d后,治疗组的视力、眼底及视野恢复情况均明显优于对照组。 结论：复方樟柳碱注射液治疗视神经挫伤是一种有效易行的手段。     

眼钝伤后视神经的电生理改变

以３．５７Ｊ能量挫伤兔眼后，闪光视诱发电位（Ｆ－ＶＥＰ）峰时值延迟，振幅下降，至伤后１０周不能恢复正常。并致暗视视网膜电图（Ｄ－ＥＲＧ）ａ、ｂ波振幅下降，其中ｂ液下降明显，４周恢复。视网膜电图振荡电位（ＯＰｓ）的总和波幅下降程度不及ＥＲＧ严重。以上电生理改变均于伤后当时及３周明显。     

视神经管减压术治疗间接性视神经挫伤30例

目的评价视神经管减压术治疗视神经挫伤的疗效和影响疗效的因素。方法手术治疗限定于外伤后1月内,并且无严重颅脑损伤、无严重全身病患者。手术方式采用经眶—筛窦—蝶窦视神经管减压术,全麻或局麻下施行。术前、术后常规应用大剂量糖皮质激素和神经营养药物治疗。结果30例患者中19例术后视力有不同程度提高,有效率为63%(19/30),24例术前无光感者,13例术后1周以后恢复光感以上的视力,有效率为54%(13/24),6例术前有光感～0.04,术后视力提高显著,有效率100%。手术病程15d以内者优于15d以上者。结论对严重的视神经挫伤患者应尽早行视神经管减压术,手术的效果与患者手术前的视力状况及病程的长短有关,术前、术后大剂量糖皮质激素及神经营养药物的应用对提高有效率也尤为必要。     

视神经挫伤轴浆运输和超微结构变化的实验研究

目的 研究实验性视神经挫伤轴浆运输与超微结构的变化。方法采用自行设计的弹簧冲击器对家兔视神经进行定量损伤，术后1、3、7、14d应用辣根过氧化物酶(HRP)顺行标记和透射电镜观察视神经轴浆运输以及超微结构的变化。结果 不同时间实验组HRP反应产物较正常对照组明显降低，差异有显著性，HRP反应产物随观察时间延长逐渐增加，但至术后14d仍明显低于正常。电镜观察见损伤后1d大部分轴突颗粒状变性，线粒体肿胀，髓鞘松解，3d时损伤最重，14d部分轴突恢复正常。结论 视神经挫伤后局部轴浆运输发生障碍，同时轴突变性，14d部分轴突功能恢复。