益精养血方对帕金森病大鼠多巴胺能神经元Bcl-2及caspase-3表达的影响

为了观察益精养血方对帕金森病(Parkinson’sdisease,PD)大鼠多巴胺能神经元Bcl-2及caspase-3表达的影响,本研究采用6-羟多巴胺注入右侧黑质制备的PD模型大鼠,实验分为模型组、实验(益精养血方)组和正常组。正常组和模型组大鼠用生理盐水灌胃,实验组大鼠用益精养血方灌胃,各30d。灌胃结束两周后进行旋转行为学检测,并用免疫荧光组织化学方法观察黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元及神经纤维的变化,用免疫组织化学方法观测黑质神经元Bcl-2、caspase-3的表达。结果显示:(1)实验组大鼠的旋转圈数比治疗前明显减少(P<0.05);(2)实验组损毁侧与健侧黑质TH阳性神经元数量百分比和网状部TH阳性纤维面积百分比较模型组显著提高(P<0.05);(3)实验组损毁侧黑质神经元caspase-3表达的OD值比模型组显著降低(P<0.05),而Bcl-2的表达与caspase-3相反。以上结果提示益精养血方可使帕金森病大鼠黑质内多巴胺能神经元Bcl-2的表达升高,caspase-3的表达降低,进而明显抑制神经细胞的凋亡。     

益精养血方对帕金森病大鼠多巴胺能神经元凋亡的影响

目的:研究益精养血方对帕金森病(Parkinson disease,PD)大鼠多巴胺能神经元凋亡的影响。方法:采用6-羟多巴胺制备的大鼠PD模型,实验分为模型组、实验(中药)组和正常组。正常组和模型组大鼠生理盐水灌胃,实验组大鼠益精养血方灌胃,各30 d。灌胃结束2周后行行为学检测,免疫组织化学方法观测黑质酪氨酸羟化酶(TH)、Bcl- 2、Caspase-3的表达,免疫电镜技术观察黑质多巴胺能神经元结构变化。结果:实验组大鼠的旋转圈数比治疗前明显减少;实验组损毁侧与健侧黑质TH阳性细胞数量较模型组显著提高;实验组损毁侧黑质Caspase-3表达的D值比模型组显著降低,而Bcl-2的表达与Caspase-3相反;免疫电镜观察TH免疫反应产物表达于黑质DA能神经元高尔基复合体质膜面及胞质内,电子密度较高,在正常组中多见,实验组较少,而模型组很少见。结论:益精养血方对PD大鼠多巴胺能神经元凋亡有明显抑制作用。     

帕金森病大鼠未注射侧纹状体和黑质酪氨酸羟化酶的表达

目的:观察不同病程偏侧帕金森病(PD)大鼠未注射侧纹状体和黑质酪氨酸羟化酶(TH)的表达.方法:6-羟基多巴胺(6-OHDA)右侧前脑内侧束立体定位注射1周,阿朴吗啡旋转实验筛选PD模型大鼠,随机分为2、4周和6周模型组,另设正常对照组.行嘴侧纹状体节段和黑质节段连续冠状石蜡切片,采用焦油紫染色定位,以TH抗体免疫组织化学阳性显示多巴胺(DA)能神经元胞体和纤维.结果:正常对照组和2周模型组大鼠左侧纹状体有较强的TH表达,而4周和6周模型组左侧纹状体的TH表达强度较上述两组降低,4周和6周模型组之间无差异.4组大鼠左侧黑质TH表达阳性细胞数无差异.正常对照组、2周和4周模型组左侧黑质有较强的TH表达,3组的表达强度无差异,而6周模型组左侧黑质的TH表达强度较上述3组均降低.结论:6-OHDA单侧注射制备的PD模型大鼠,注射侧的长期病变致未注射侧纹状体和黑质TH的表达减弱.     

丹参酮IIA对帕金森大鼠中脑内Caspase-12和CHOP的影响

目的观察丹参酮IIA对帕金森病(PD)模型大鼠中脑黑质内CHOP蛋白、Caspase-12蛋白、Caspase-3蛋白和酪氨酸羟化酶(TH)蛋白表达的影响,探讨其对帕金森病模型大鼠的作用及相关机制。方法 (1)帕金森病(PD)模型大鼠的制备:60只健康、雄性SD大鼠,采用数字表法随机分为模型组(30只)、假手术组(sham组)(15只)和正常对照组(15只)。对照组对照组正常饲养,不作任何处理;假手术组,采用在大鼠颈背部皮下注射不含鱼藤酮的葵花油乳化液;模型组采用在大鼠颈背部皮下注射鱼藤酮。每天注射1次,连续30 d。用药期间观察实验大鼠外观和行为学变化。(2)把制备成功的模型组先分为处理组(丹参酮IIA组,15只)和生理盐水组(NS组,15只)。两组大鼠分别被注射生理盐水和丹参酮IIA,每天注射1次,连续注射14 d。(3)用药期间观察实验大鼠外观和行为学变化。(4)第14 d,采用免疫组织化学染色检测3组大鼠中脑黑质内TH蛋白、CHOP蛋白、Caspase-12蛋白和Caspase-3蛋白的表达情况。结果与正常对照组及假手术组比较,模型组大鼠出现典型的帕金森病样症状,可以进行后续实验;免疫组织化学染色见NS组大鼠中脑黑质内可见CHOP蛋白、Caspase-12蛋白和Caspase-3蛋白的表达增多,TH蛋白的表达则降低,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。处理组大鼠中脑黑质内可见CHOP蛋白、Caspase-12蛋白和Caspase-3蛋白的表达降低,TH蛋白的表达则增多,与NS组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论丹参酮IIA通过减弱内质网应激反应介导的神经元调亡,从而减轻帕金森病模型大鼠中脑黑质内多巴胺能神经元的丢失。     

帕金森病模型大鼠中脑腹侧被盖区酪氨酸羟化酶免疫阳性神经元的改变

目的探讨帕金森病(PD)模型大鼠中脑腹侧被盖区(VTA)酪氨酸羟化酶(TH)免疫阳性神经元的改变。方法将6-羟基多巴胺(6-OHDA)分别注入实验组大鼠左侧黑质致密部和中脑被盖腹侧区以建立帕金森病模型,于术后4d、7d、14d、21d、28d腹腔注射阿扑吗啡(apomorphine,APO),观察并记录大鼠行为学变化情况,利用Nissl染色、酪氨酸羟化酶(TH)免疫细胞化学染色观察大鼠中脑腹侧被盖区神经组织及TH免疫阳性神经元的改变。结果APO诱发实验组PD大鼠均向健侧(右侧)旋转,旋转启动时间逐渐缩短,持续时间逐渐延长,旋转速度逐渐加快,至术后2周旋转行为趋于稳定;Nissl染色见实验组PD大鼠损毁侧(左侧)中脑VTA区神经元数目显著减少,尼氏体模糊,颗粒及密度均降低,伴有大量胶质细胞增生,术后2周、4周注射侧神经元数目较术后1周明显减少(P<0.05);实验组PD大鼠损毁侧(左侧)中脑VTA的TH阳性神经元明显减少,神经元胞体轮廓及突起不清晰,TH阳性纤维也明显减少,分布稀疏,术后2周、4周注射侧阳性神经元数目较术后1周明显减少(P<0.05)。结论PD大鼠损毁侧中脑VTA神经组织有明显破坏,TH阳性神经元显著减少,提示中脑腹侧被盖区TH免疫阳性神经元的改变参与了PD模型大鼠的病理学变化。     

褪黑素对6-OHDA诱导大鼠模型黑质神经元和胶质细胞的影响

目的探察褪黑素(melatonin,MT)对6-羟基多巴(6-hydroxydopamine,6-OHDA)诱导的帕金森病(Parkinson’sdisease,PD)模型大鼠黑质神经元和胶质细胞的影响。方法选取35只成年雄性SD大鼠,随机分成正常对照组、6-OHDA处理组和6-OHDA+MT处理组,采用免疫组化染色检测各组大鼠黑质Iba1、GFAP阳性胶质细胞及多巴胺(Dopamine,DA)能神经元的形态结构变化,并进行细胞计数,蛋白印迹技术(Western blotting)检测TH、GFAP、OX42蛋白表达水平的变化。实验数据用统计学软件进行分析,P<0.05为差异具有统计学意义。结果 6-OHDA处理组黑质胶质细胞呈激活状态,且数量明显多于对照组和6-OHDA+MT处理组(P<0.05),TH阳性多巴胺能神经元数量明显少于对照组和6-OHDA+MT处理组(P<0.05),对照组和6-OHDA+MT处理组无明显差异(P>0.05);6-OHDA处理组TH蛋白的表达水平明显下调(P<0.05),OX42、GFAP蛋白的表达水平明显上调(P<0.05),对照组和6-OHDA+MT处理组无明显差异(P>0.05)。结论MT能够抑制6-OHDA帕金森病大鼠模型黑质胶质细胞的增殖和活化,并推测MT可能通过这一抑制作用保护DA能神经元。     

帕金森病大鼠黑质免疫球蛋白IgG及其mRNA的表达变化

目的:观察帕金森病(PD)模型大鼠黑质致密部(SNc)免疫球蛋白G(IgG)及其mRNA的表达变化,探讨Ig G在PD发病中的作用。方法:单侧微量注射6-羟多巴胺(6-OHDA)制备PD大鼠模型。免疫组化法观察对照组大鼠双侧、模型组大鼠健侧及注射侧SNc酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元和IgG阳性细胞的数量变化,RTPCR法检测两组大鼠黑质TH mRNA、IgG mRNA的表达变化。结果:模型组大鼠注射侧SNc内TH阳性神经元的数量较健侧显著减少(P0.05),两组大鼠SNc均可见IgG阳性细胞,但模型组大鼠注射侧SNc IgG阳性细胞的数量显著增加(P0.05),染色较深。模型组大鼠注射侧TH mRNA表达明显低于健侧和对照组双侧,IgG mRNA表达明显高于健侧和对照组双侧。结论:PD大鼠黑质致密部细胞IgG蛋白及其mRNA表达均增加,表明IgG与PD的发生有关。     

血管活性肠肽对帕金森病大鼠黑质多巴胺能神经元存活及小胶质细胞功能的影响

目的:观察血管活性肠肽(VIP)对帕金森病(PD)大鼠黑质多巴胺(DA)能神经元存活和小胶质细胞活化的影响。方法:采用脑立体定位术将6-羟多巴胺注射至纹状体,制备大鼠PD模型。将PD大鼠随机分为VIP组和模型组,VIP组大鼠腹腔注射VIP 1 ml(20 ng/ml)。另10只正常大鼠为对照组。采用免疫组织化学和RT-PCR方法观测各组大鼠黑质DA能(酪氨酸羟化酶(TH)阳性)神经元数量、小胶质细胞(CD11b阳性)的数量和形态变化以及肿瘤坏死因子(TNF-α)和环氧酶-2(COX-2)的表达及相关分子mRNA水平达变化。结果:PD大鼠损毁侧黑质TH阳性神经元数量较对照组明显减少(P0.05),小胶质细胞(CD11b阳性细胞)数量显著增加(P0.05),并呈"阿米巴"样改变,TNF-α和COX-2阳性细胞数量明显增加(P0.05);VIP组大鼠与模型组相比,黑质TH阳性神经元数量明显增加(P0.05),CD11b阳性细胞数量明显减少(P0.05),TNF-α和COX-2的阳性细胞数量显著减少(P0.05)。RT-PCR检测结果可见,模型组大鼠黑质TH mRNA较对照组显著降低,而VIP组TH mRNA较模型组显著升高(P0.05),模型组CD11b mRNA、TNF-αmRNA表达明显高于对照组,而VIP组大鼠CD11b mRNA、TNF-αmRNA表达显著低于模型组。结论:VIP对6-OHDA所致PD大鼠DA能神经元具有保护作用,并且可以抑制黑质内小胶质细胞活化及相关炎性因子的表达。     

血管活性肠肽对帕金森病大鼠黑质胶质细胞活化及相关炎性因子释放的影响

目的探讨血管活性肠肽(VIP)对帕金森病(PD)大鼠模型中脑黑质胶质细胞活化及相关炎性因子表达的影响。方法将6-羟多巴胺(6-OHDA)定向注入大鼠右侧纹状体制备PD模型。32只制备成功的PD大鼠随机分为VIP组和模型组,VIP组大鼠腹腔注射VIP 1ml(20μg/L),另10只正常大鼠为对照组。分别采用免疫组织化学、Western blotting、RT-PCR方法观察大鼠中脑黑质多巴胺(DA)能神经元、小胶质细胞、星形胶质细胞的数量和形态变化以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)和环氧化酶2(COX-2)的表达变化。结果模型组大鼠黑质损毁侧小胶质细胞即白细胞分化抗原11b(CD11b)阳性细胞,数量较对照组明显增加(P0.05)并呈阿米巴样改变,星形胶质细胞(GFAP阳性细胞)数量明显增加(P0.05),炎性因子表达水平也明显上升(P0.05),DA能神经元数量较对照组明显下降(P0.05);与模型组相比,VIP组大鼠损毁侧黑质小胶质细胞和星形胶质细胞数量明显下降(P0.05),炎性因子表达水平显著降低(P0.05),DA能神经元数量较模型组增加(P0.05)。结论 VIP对帕金森病大鼠黑质小胶质细胞和星形胶质细胞的活化具有抑制作用,并可减少相关炎症因子的表达,从而保护黑质DA能神经元。     

重组人改构体酸性成纤维细胞生长因子减少帕金森病大鼠黑质酪氨酸羟化酶免疫阳性神经元丢失

目的 探讨重组人改构体酸性成纤维细胞生长因子(Mrh-aFGF)对帕金森病(PD)大鼠旋转行为和酪氨酸羟化酶(TH)免疫阳性神经元的影响.方法 6-OHDA分别注入黑质和腹侧被盖区后建立PD大鼠模型,侧脑室内注射Mrh-aFGF,用阿扑吗啡诱导旋转行为,免疫细胞化学染色观察TH免疫阳性神经元和纤维,并进行定量分析.结果 对照组均未引出旋转行为;PD组术后旋转启动时间缩短,持续时间延长,速度加快;生理盐水(NS)处理组旋转行为未见明显改善;Mrh-aFGF处理组旋转启动时间延长,持续时间缩短,速度减慢(P＜0.01).各组大鼠健侧黑质TH阳性神经元的数量维持在相近的水平.同组内健侧和损毁侧阳性神经元比较,对照组损毁侧无明显改变;PD组、NS处理组和Mrh-aFGF处理组损毁侧阳性神经元与健侧比较均明显减少(P＜0.01).其中PD组损毁侧黑质TH免疫阳性神经元数量随时问延长逐渐减少(P＜0.01).NS处理组损毁侧黑质TH免疫阳性神经元的变化与PD组相似;Mrh-aFGF处理组损毁侧黑质阳性神经元较PD组及NS处理组有明显改善,阳性神经元的数量明显增加(P＜0.01).结论 Mrh-aFGF能减少PD大鼠黑质TH免疫阳性神经元的丢失,并改善其旋转行为.     

帕金森病模型大鼠中脑腹侧被盖区多巴胺能神经元改变的实验研究

目的：探讨帕金森病（Parkinson’s disease，PD）大鼠模型中脑腹侧被盖区（ventral tegmentalarea，VTA）多巴胺能神经元的改变。方法：应用6-羟基多巴胺（6-hydroxydopamine，6-OHDA）注射右侧黑质致密区（substantia nigra compacta，SNc）制作PD大鼠模型，进行阿朴吗啡（apomorphine，APO）诱发行为学观察、电镜、尼氏染色观察中脑VTA神经元的改变、酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase，TH）免疫组织化学ABC观察其DA能神经元的改变并进行图像分析。结果：APO诱发PD大鼠模型异常旋转行为，尼氏染色见PD大鼠中脑VTA有神经细胞肿胀、坏死等变化，VTA TH阳性神经元数量减少，形态学改变。结论：中脑VTA DA能神经参与PD模型大鼠的改变；APO能诱导6-OHDAPD模型大鼠的旋转行为，其强弱可能与TH^＋神经元数量直接相关。     

A unilateral 6-hydroxydopamine lesion decreases the expression of metabotropic glutamate receptors in rat substantia nigra

Loss of dopaminergic neurons in the substantia nigra pars compacta (SNc) in Parkinson's disease (PD) leads to augmentation of glutamatergic activity in the subthalamic nucleus (STN). Moreover, antagonizing excitotoxicity has yielded mostly symptomatic improvements in experimental animals of PD. Therefore, we used immunocytochemistry to examine the effect of unilateral 6-hydroxydopamine lesions of SNc on the expression of metabotropic glutamate receptors (mGluR1a, 2/3, 5, 4, 8) and tyrosine hydroxylase (TH). 6-Hydroxydopamine causes a fall in the number of mGluRs and TH in the lesioned lateral substantia nigra. Pharmacological activation of group II or III mGluRs or blockade of group I mGluRs for 1 week significantly increased the expression of the same group receptors. The alteration in the receptor expression may be a compensatory mechanism developed after mGluRs ligands neuroprotective treatment.     

天麻对帕金森病大鼠黑质凋亡细胞表达及酪氨酸羟化酶阳性神经元的影响

目的研究和探讨帕金森病（PD）的发病机理及天麻防治PD的作用机制。方法采用6-羟基多巴胺（6-OHDA）大鼠模型,通过免疫组化技术观察天麻对PD大鼠黑质酪氮酸羟化酶阳性（TH^＋）神经元及Caspase-3阳性（Caspase-3^＋）神经元表达水平的影响。结果PD大鼠脑组织黑质致密部（SNpc）及腹侧被盖区（VTA）TH^＋神经元表达水平组间比较差异有统计学意义（F值分别为13．29、5．04,P〈0．01）。与正常组大鼠脑组织SNpc和VTA区TH^＋神经元表达水平[（32．13±4．84）,（30．23±3．21）]比较,模型组大鼠TH^＋神经元表达水平[（18．89±3．73）和（24．20±6．35）]明显下降（P〈0．01）;经天麻和美多巴治疗后TH^＋神经元丢失减少,天麻小剂量组TH^＋神经元表达水平分别为（26．24±3．06）和（26．31±6．1）,中剂量组分别为（22．44±3．81）和（26．91±6．28）;大剂量绀分别为（20．95±4．71）和（27．3±7．1）;美多巴组分别为（27．89±4．56）和（25．974±5．14）;其中,天麻小剂量组和美多巴组SNpc区TH^＋神经元表达水平和模型组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。PD大鼠脑组织SNpc及VTA区Caspase-3阳性细胞表达水平组间比较差异有统计学意义（F值分别为6．09、5．53,P〈0．01）。与正常组Caspase-3阳性细胞表达水平[（9．83±3．03）,（7．04±1．76）]比较,模型组火鼠Caspase-3阳性细胞表达水平[（14．53±2．33）和（12．84±2．58）]明显升高（P〈0．01）;经天麻和美多巴治疗后Caspase-3阳性细胞表达水平下降,天麻小剂量组分别为（10．68±1．83）和（7．72±1．92）,中剂量组分别为（11．29±2．8）和（10．38±3．79）;大剂量组分别为（11．89±2．97）和（11．37±1．86）;美多巴组分别为（9．99±3．3）和（10．69±3．11）;其中,美多巴组SNpc区和天麻小剂量组VTA区Caspase-3阳性细胞表达水平和模型组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。天麻和美多巴治疗各组TH^＋神经元表达与Caspase-3^＋神经元表达呈相反趋势。结论细胞凋亡可能是PD大鼠中腑多巴胺神经元丢失的主要方式。天麻可通过调节Caspase-3减少细胞凋亡,其中,小剂量天麻对治疗PD具有较好的作用。本研究结果提示天麻可不同程度地保护多巴胺神经元。     

帕金森病大鼠黑质区神经干细胞分化的观察

目的:探讨帕金森病(Parkinson's disease,PD)大鼠中脑黑质区神经干细胞(NSCs)的分化情况.方法:将6-OHDA注入纹状体内制作PD大鼠模型.随机将成功模型分为3 d、5 d、7 d、14 d、28 d组,每组6只;另设假手术及正常对照组各3只.向成功模型鼠腹腔注射5-溴脱氧尿苷(Brdu).用Brdu/NeuN、Brdu/GFAP、Brdu/TH免疫双标组织化学方法检测黑质区内源性NSCs向神经元、神经胶质细胞和多巴胺(DA)能神经元的分化情况.结果:PD模型7 d组,在黑质区Brdu /GFAP 、Brdu /NeuN 细胞开始出现,14 d组双标的阳性细胞数量逐渐增加,28 d达到高峰,14 d、28 d组与其它组比较差异显著(P＜0.05).在这些双标细胞中,Brdu /GFAP 细胞数量较多,Brdu /NeuN 细胞数量较少(P＜0.05),未发现Brdu /TH 细胞.结论:PD大鼠模型黑质区NSCs多数分化为神经胶质细胞,少数分化为神经元,在没有诱导和干预下,未见有向DA能神经元分化.     

Substantia nigra compacta neurons that innervate the reticular thalamic nucleus in the rat also project to striatum or globus pallidus: implications for abnormal motor behavior

The projections of the substantia nigra pars compacta (SNc) to the reticular thalamic nucleus (RTn) were assessed by measuring dopamine content and counting tyrosine hydroxylase positive (TH (+)) cells in rats with unilateral lesions induced by 6-hydroxydopamine (6-OHDA), and by using a fluorescent tract-tracing technique in rats without lesions. Injection of 6-OHDA in the RTn reduced dopamine content and the number of TH (+) cells in the SNc by about 50%. Branching of SNc was suggested by the finding that 6-OHDA deposited in the RTn significantly reduced dopamine in the striatum and globus pallidus. Moreover, injections of 6-OHDA into either the striatum or the globus pallidus significantly reduced dopamine content in the RTn. Fluorescent tracers injected into the RTn labeled TH (+) cells in the SNc. A high proportion of these TH (+) cells was double labeled when tracers were also injected into either the globus pallidus or striatum. Other experiments showed that systemic injection of apomorphine or methamphetamine induced turning behavior in rats with local deposits of 6-OHDA in either the RTn or the studied basal ganglia nuclei. The extensive dopaminergic branching suggests that the abnormal motor behavior of rats with 6-OHDA deposits in the RTn may be caused by dopaminergic denervation of more than one structure. The fact that lesion of a single dopaminergic neuron can reduce dopamine transmission in more than one structure is probably important in generating the manifestations of Parkinson's disease.     

胚腹侧中脑移植入震颤麻痹症模型鼠靶区与非靶区的实验研究

用６－羟基多巴胺注入ＳＤ鼠右侧被盖腹侧区黑质内侧端，制成震颤麻痹症动物模型．毁损后３～５周，用胚龄１５ｄ的胚鼠腹侧中脑混悬液植入模型鼠靶区──纹状体与非靶区──黑质、丘脑等部位．动物存活８～１２周后处死，于尾壳核、黑质及丘脑均可见有存活的移植区．移植区内均可见ＴＨ免疫阳性细胞．本实验表明，用胚腹侧中脑移植入震颤麻痹症模型鼠靶区及非靶区，移植物均能存活、生长并发挥其功能效应．     

龟板促进帕金森病大鼠黑质神经生长因子信号分子的表达

目的:进一步探讨神经生长因子(NGF)/酪氨酸受体激酶A(TrkA)通路是否为龟板抗帕金森病(PD)大鼠多巴胺能神经元凋亡中的机制.方法:采用大鼠左侧黑质致密带注射6-羟基多巴胺(6-OHDA,0 2%)2μl造成PD模型,同时设立龟板组、模型组和正常对照组,用免疫组织化学显色方法观察PD大鼠中脑黑质NGF、 TrkA和磷酸化的糖原合成酶激酶-3β(p-GSK-3β)阳性神经元数目.免疫印迹法检测NGF、 TrkA、 p-GSK-3β蛋白表达水平的变化.结果:免疫组织化学显色显示龟板组PD大鼠中脑黑质致密部NGF、 TrkA的阳性细胞数明显多于模型组.免疫印迹法结果显示龟板组PD大鼠中脑黑质致密部NGF、 TrkA的蛋白表达水平高于模型组.结论:龟板能上调6-OHDA诱导的PD大鼠中脑黑质NGF、 TrkA和p-GSK-3β的表达,这可能是其抗PD大鼠多巴胺能神经元凋亡的分子机制.