树舌多糖GF对HepA瘤细胞N-ras、C-myc基因表达的影响

目的 为探明树舌多糖GF对HepA瘤组织N-ras、C-myc基因表达的影响.方法 运用原位杂交法、SP免疫组化染色技术及多媒体彩色病理图文分析系统测定HepA瘤细胞中N-ras、C-myc mRNA及蛋白的表达量.结果 树舌多糖组、猪苓多糖组中N-ras、C-myc mRNA及蛋白的表达量均显著低于荷瘤组(P＜0.01),树舌多糖组与猪苓多糖组无显著性差异.结论 树舌多糖GF可通过降低N-ras、C-myc mRNA及蛋白的表达,而抑制HepA瘤细胞的增殖.     

树舌多糖GF对HepA瘤细胞N-ras、C-myc基因表达的影响

目的为探明树舌多糖GF对HepA瘤组织N-ras、C-myc基因表达的影响。方法运用原位杂交法、SP免疫组化染色技术及多媒体彩色病理图文分析系统测定HepA瘤细胞中N-ras、C-myc mRNA及蛋白的表达量。结果树舌多糖组、猪苓多糖组中N-ras、C-myc mRNA及蛋白的表达量均显著低于荷瘤组（P〈0.01）,树舌多糖组与猪苓多糖组无显著性差异。结论树舌多糖GF可通过降低N-ras、C-myc mRNA及蛋白的表达,而抑制HepA瘤细胞的增殖。     

树舌多糖GF对人胃癌细胞SGC-7901增殖影响

目的研究树舌多糖GF组分对人胃癌细胞SGC-7901增殖抑制的机理,探讨多糖抗肿瘤的分子机制。方法用MTT法、流式细胞术分析树舌多糖GF对体外培养的人肝癌细胞SGC-7901生长、细胞周期及细胞凋亡的影响。结果树舌多糖GF组分作用48h后,癌细胞胞膜起泡、核固缩,有凋亡小体形成,对人胃癌细胞SGC-7901抑制率、凋亡率显著提高。结论树舌多糖GF组分可抑制人胃癌细胞SGC-7901S活性,诱导其凋亡,对胃癌细胞SGC-7901S增殖有显著的抑制作用。     

siRNA介导的新趋化因子VCC-1沉默对人SMMC7721肝癌细胞生长的影响

 目的 探讨siRNA靶向抑制VCC-1表达对人肝癌细胞株SMMC27721生长的影响。方法 采用脂质体法将siRNA质粒导入SMMC7721细胞,建立VEGF相关的趋化因子1（(VEGF correlated chemokine 1,VCC-1）)VCC-1基因表达沉默的肝癌细胞系,用Western blot检测细胞中VCC-1的表达水平,用MTT法、软琼脂克隆形成实验等研究siRNA靶向抑制VCC-1表达对SMMC7721细胞生长的影响。结果 Western blot 结果显示RNA干扰组（shVCC1-1组）细胞VCC-1蛋白表达水平明显低于对照组（P<0.01）; ,MTT法结果显示shVCC1-1组细胞增殖速度、克隆形成率均低于对照组（P<0.05）。结论 siRNA靶向抑制 VCC-1表达可以抑制人SMMC7721肝癌细胞增殖能力及克隆形成能力。     

树舌多糖GF抗肿瘤的研究进展

树舌多糖GF是从树舌多糖中提取的一个组分,在抗肿瘤及化疗辅助作用方面具有生物活性,本文就其生药学、抗肿瘤活性等方面对其研究情况简要综述.     

树舌多糖GF注射液对环磷酰胺增效减毒作用的实验研究

目的 探讨树舌多糖GF注射液对环磷酰胺(CTX)的增效减毒作用。方法 采用移植性H22肝癌小鼠，随机分为阴性对照组、树舌多糖组、CTX组和联合用药组。连续给药10d后，测定其抑瘤率及q值、WBC数、胸腺指数和脾指数。结果 树舌多糖GF注射液与CTX合用有增效作用，q值大于0．85；能减轻CTX的毒副作用，对CTX所致WBC减少、免疫器官萎缩等有一定保护作用。结论 树舌多糖GF注射液对CTX具有明显的增效减毒作用。     

树舌多糖GF抑制小鼠HepA瘤生长机制的初步研究

目的 该研究主要初步探讨树舌多糖(Ganoderm applanatum polysaccharide,GAP)GF抑制小鼠HepA瘤的生长机制.方法 树舌多糖GF注射到HepA小鼠后,通过测定瘤体的质量计算树舌多糖抑瘤率,通过电镜观察HepA细胞的超微结构,通过TUNEL法检测凋亡细胞,通过Western-blot检测Fas、caspase-3、Bcl-2的表达.结果 树舌多糖GF注射到HepA小鼠后,GAPGF的抑瘤率为51.82%;电镜下观察到HepA细胞核固缩、染色质浓缩及凋亡小体形成等典型的细胞凋亡特征;TUNEL分析显示GAPGF能明显诱导HepA细胞凋亡;Western blot分析显示GAPGF可使Fas与cmpase-3表达上调,Bcl-2表达降低.结论 GAPGF通过诱导HepA细胞凋亡抑制小鼠HepA瘤的生长,其分子机制可能与Fas的激活、caspase-3表达的上调以及Bcl-2表达的降低有关.     

原位杂交法检测树舌多糖GF对HepA瘤细胞N-ras、C-myc基因mRNA表达的影响

目的:探明树舌多糖GF对HepA瘤细胞癌基因N-ras、C-myc mRNA水平的影响.方法:应用地高辛标记探针原位杂交技术,检测树舌多糖GF对HepA瘤细胞中癌基因N-ras、C-myc mRNA丰度的影响.结果:树舌多糖组、猪苓多糖组中mRNA表达量均显著低于模型组(P＜0.01),树舌多糖组与猪苓多糖组无显著性差异.结论:树舌多糖GF可通过调节N-ras、C-myc基因mRNA的表达,而抑制HepA瘤细胞的增殖.     

双向电泳法分析树舌多糖GF对小鼠HepA癌细胞可溶性蛋白质组表达的影响

目的：探明树舌多糖（GAPS）GF对小鼠HepA癌细胞可溶性蛋白质组表达的影响。方法：昆明种小鼠随机分为2组：肿瘤组和树舌多糖组,接种后各组肌肉注射给药,分别给与生理盐水和树舌多糖GF。连续10天,于末次给药24h,处死小鼠,剥离肿瘤组织。应用2-DE技术检测各组小鼠HepA癌细胞可溶性蛋白的表达。应用PDQuest软件分析电泳结果,找出差异表达的蛋白质点。根据近似等电点和分子量的数值进行数据库和文献综合检索,推测差异点的蛋白质身份。结果：肿瘤组共获得蛋白质点101个,树舌多糖组85个;其中54个蛋白点为肿瘤组特异表达,38个蛋白点为树舌多糖组特异表达;肿瘤组与树舌多糖组共表达的蛋白质点中,有14个点表达量相差两倍以上。第1098号斑点认为可能是抑癌基因PTEN的产物。结论：树舌多糖GF可以影响小鼠HepA瘤细胞多种可溶性蛋白的表达,这种影响很可能与树舌多糖GF的抗肿瘤机制有关;其抗肿瘤的作用靶点之一可能为抑癌基因PTEN。     

靶向CDK2、cyclinE的siRNA对HepG2细胞周期及凋亡的影响

目的：探讨细胞周期蛋白依赖性激酶（cyclin-dependent-kinase 2,CDK2）活性对肝癌细胞株HepG2细胞周期和细胞凋亡的影响。方法：根据基因库中登录的人和鼠CDK2、cyclinE序列,设计并构建CDK2、cyclinE干扰RNA真核表达载体;脂质体法转染肝癌细胞株HepG2细胞,流式细胞术分析CDK2及cyclinE对HepG2细胞增殖的影响;蛋白质印迹法检测CDK2、cyclinE活性的变化caspase-3活性的影响。结果：1.成功构建CDK2及cyclinE干扰RNA真核表达载体psiCDK2、psiCyclinE,用脂质体法导入肝癌细胞株HepG2细胞中,有效表达。2.转染48h后与空载体组相比：psiCDK2、psiCyclinE组G1期细胞增多,G2/M和S期细胞减少;蛋白质印迹法分析表明psiCDK2、psiCyclinE组caspase-3酶原被激活。结论：靶向CDK2、cyclinE的siRNA能抑制HepG2细胞的增殖;靶向CDK2、cyclinE的siRNA能激活caspase-3,诱导肝癌细胞HepG2凋亡。     

抗癌生物活性肽对人胃癌BGC-823细胞周期相关蛋白CDC2、CDK4表达的影响

目的：探讨抗癌生物活性肽对人胃癌细胞周期相关蛋白CDC2、CDK4的影响及其作用机制。方法：实验分为活性肽组及对照组,将不同浓度的抗癌生物活性肽按不同时间作用于培养的人胃癌细胞株（BGC-823）,应用MTT法检测增殖抑制率。建立荷胃癌裸鼠模型,给予生理盐水作为阴性对照组,应用免疫组化技术对抗癌生物活性肽作用前后的胃癌裸鼠肿瘤中CDK4、CDC2的表达进行检测。结果：不同浓度的抗癌生物活性肽对胃癌细胞均有增殖抑制作用;抗癌活性肽S-2作用后人胃癌组织中的CDK4表达明显低于对照组（P〈0.01）,而CDC2表达高于对照组（P〈0.01）。结论：抗癌生物活性肽具有抗胃癌细胞增殖作用,其抗肿瘤作用机制可能是通过下调CDK4和上调CDC2的表达实现。     

P21基因表达与肝细胞肝癌关系的病例对照研究

目的:探讨抑癌基因P21表达与肝细胞肝癌的关系。方法:采用以医院为基础的病例对照研究方法,通过RT-PCR方法检测100例肝细胞肝癌病人和100例非肿瘤病人外周血白细胞中P21基因mRNA的表达。结果:P21mRNA在肝细胞肝癌病人外周血白细胞中相对表达量为0.256 1±0.144 3,在非肿瘤病人的外周血白细胞中相对表达量为0.043 2±0.032 2,肿瘤病人P21mRNA表达水平高于非肿瘤病人,差异有统计学意义(P<0.05),P21mRNA的表达水平与年龄、性别、HBV感染、肝癌家族史、吸烟、饮酒、AFP含量无关(P>0.05)。结论:P21基因的表达可能与肝细胞肝癌有一定关系,可为筛检肝细胞肝癌高危人群提供参考依据。     

A CASE-CONTROL STUDY ON THE EXPRESSION OF P21 GENE OF HEPATOCELLULAR CARCINOMA

目的:探讨抑癌基因P21表达与肝细胞肝癌的关系.方法:采用以医院为基础的病例对照研究方法,通过RT-PCR方法检测100例肝细胞肝癌病人和100例非肿瘤病人外周血白细胞中P21基因mRNA的表达.结果:P21 mRNA在肝细胞肝癌病人外周血白细胞中相对表达量为0.256 1±0.144 3,在非肿瘤病人的外周血白细胞中相对表达量为0.043 2±0.032 2,肿瘤病人P21 mRNA表达水平高于非肿瘤病人,差异有统计学意义(P＜0.05),P21 mRNA的表达水平与年龄、性别、HBV感染、肝癌家族史、吸烟、饮酒、AFP含量无关(P＞0.05).结论:P21基因的表达可能与肝细胞肝癌有一定关系,可为筛检肝细胞肝癌高危人群提供参考依据.     

RNA干扰survivin基因对人肝癌HepG2细胞增殖影响

目的 探讨RNA干扰技术抑制survivin基因表达对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖的影响.方法 构建针对人肝癌HepG2细胞 survivin基因3个不同靶序列的 shRNA真核表达载体pshRNA-survivin-323/387/52,用Lipofectamine 2000脂质体介导转染法转染质粒, 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测survivin 基因mRNA表达水平.选择对survivin基因表达抑制作用最强的shRNA载体转染HepG2细胞后, 免疫细胞化学法(ICC)检测HepG2细胞survivin蛋白的表达情况,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞的增殖情况.结果 与对照组比较,构建的3个shRNA质粒中pshRNA-survivin-387转染组survivin mRNA水平下调,差异有显著性(F=18.64,q=4.293～4.925,P<0.05),而pshRNA-survivin-323/52质粒对survivin的表达及mRNA水平的影响差异无显著性(q=0.631～0.126,P>0.05).转染pshRNA-survivin-387质粒的HepG2细胞survivin蛋白表达较对照组明显下调(F=68.39,q=13.71、14.37,P<0.01),其增殖能力较对照组显著下降(F=20.06～47.65,q=11.186、 12.601,P<0.01).结论 构建的针对人survivin基因387位靶序列的shRNA表达载体pshRNA-survivin-387可显著抑制survivin的表达及HepG2细胞增殖.     

FOLFOX方案联合沙利度胺体外抑制人肝癌HepG2细胞VEGF、Caspase-3基因表达的研究

目的研究沙利度胺联合FOLFOX(folinic acid fluorouracil oxaliplatin)作用肝癌细胞HepG2后VEGF、Caspase-3的表达,以及探讨沙利度胺联合FOLFOX诱导HepG2细胞凋亡的机制。方法应用MTT法和流式细胞仪体外研究沙利度胺对HepG2细胞增殖的影响;采用western blot法,观察沙利度胺联合FOLFOX作用HepG2细胞48h后VEGF、Caspase-3的表达情况。结果沙利度胺对肝癌HepG2细胞有抑制作用,且沙利度胺联合FOLFOX显著提高了对肝癌细胞生长的抑制作用,沙利度胺联合FOLFOX作用于HepG2细胞48h后,细胞表面Caspase-3的表达均增强,VEGF的表达均降低。结论沙利度胺联合FOLFOX诱导肝癌HepG2细胞凋亡的机制可能可能通过调节VEGF蛋白表达激活caspase-3,从而诱导HepG2细胞凋亡。     

RNA干扰survivin基因对HepG2细胞凋亡及化疗影响

目的 探讨RNA干扰survivin基因对HepG2细胞凋亡及化疗敏感性的影响.方法 构建针对HepG2细胞 survivin基因的 shRNA真核表达载体pshRNA-survivin-387.将HepG2细胞接种于6孔板中,分为空白对照组(不加药物)、阴性对照组(每孔加pshRNA-survivin-NC为3.2 μg)、低浓度转染组(每孔加pshRNA-survivin-387为0.8 μg)、中浓度转染组(每孔加pshRNA-survivin-387为1.6 μg)、高浓度转染组(每孔加pshRNA-survivin-387为3.2 μg),作用48 h后收集细胞,流式细胞术检测各组细胞凋亡指数;将HepG2细胞接种于96孔板中,分为3组:空白对照组(不加药物)、阴性对照组(每孔加pshRNA-survivin-NC为0.2 μg)、实验组(每孔加 pshRNA-survivin-387为0.2 μg),四甲基偶氮唑蓝法检测各组细胞分别与顺铂(2.0 mg/L)作用24、36、48、60 h后的增殖水平.结果 各浓度转染组细胞的凋亡指数明显高于空白对照组和阴性对照组(F=228.87,q=10.45～38.21,P＜0.01),高浓度转染组细胞凋亡指数高于低浓度转染组(q=23.99,P＜0.01).顺铂对实验组细胞的细胞抑制率在24、36、48、60 h时明显高于空白对照组和阴性对照组(F=235.88～910.86,q=28.04～52.28,P＜0.01).结论 pshRNA-survivin-387转染能诱导肝癌细胞的凋亡,增强肝癌细胞对顺铂化疗的敏感性.     

ERK2蛋白在肝癌组织中的表达及临床意义

目的：探讨肝癌组织中ERK2的表达。方法：用免疫组化快捷法检测50例肝癌组织和15例正常肝组织中ERK2蛋白的表达,并分析与肝癌临床病理特征,侵袭性的关系。结果：HCC中ERK2阳性表达率明显高于正常肝组织,其与HCC组织侵袭性有关（p〈0.05）,而与HCC组织分化程度、性别、术前AFP水平无关（P〉0.05）。结论：ERK2的表达一定程度上反映HCC侵袭性强弱。     

bcl—xl和p53在人肝癌Bel7402细胞中的表达及中药的干预作用

目的：从基因水平探讨白花蛇舌草多糖对体外培养的人肝癌Bel7402细胞凋亡诱导的作用及机制。方法：水提醇沉法提取白花蛇舌草多糖，人肝癌Bel7402细胞常规体外细胞培养，设定空白对照组、5-氟尿嘧啶阳性对照组、白花蛇舌草多糖组。HE染色法光镜下观察细胞形态改变，计算凋亡指数，采用MTT法检测白花蛇舌草多糖对癌细胞的生长抑制作用，RT—PCR法检测原癌基因bcl—xl、抑癌基因p53基因mRNA表达的变化。结果：白花蛇舌草多糖体外抑制人肝癌Bel7402细胞生长、促进细胞凋亡，凋亡指数达16．97％，以MTT显色法检测细胞抑制率达到61．5％，以RT—PCR半定量法检测，上调p53基因mRNA表达，降低bcl—xl基因mRNA表达，以上各指标与空白对照组相比均有显著差异。结论：白花蛇舌草多糖抑制人肝癌Bel7402细胞增长，诱导细胞凋亡，其分子机制可能与激活抑癌基因p53基因、抑制原癌基因bcl—xl基因表达有关。     

Bcl-2和Fas在人食管癌细胞Ec-9706细胞中表达及中药干预作用

目的：研究白毛藤诱导人食管癌细胞凋亡的作用及其机制。方法：荧光显微镜观察不同浓度白毛藤诱导Ec-9706细胞凋亡的作用,RT-PCR检测Bcl-2、Fas基因表达量的变化。结果：白毛藤具有诱导Ec-9706细胞凋亡的作用,并且上调Fas基因、降低Bcl-2基因的表达。结论：白毛藤促进Ec-9706细胞凋亡,其机制可能与激活Fas基因、抑制Bcl-2基因表达有关。