西格列汀在高糖高脂环境下对H9c2细胞自噬及凋亡的影响

目的：探讨西格列汀在高糖高脂环境下对大鼠H9c2心肌细胞自噬及凋亡的影响。方法：体外培养的大鼠H9c2心肌细胞随机分为正常对照组（Con组）、高糖高脂组（HP组）、西格列汀组（Sit组）和高糖高脂+西格列汀组（HP+Sit组），采用CCK-8检测细胞活力，采用单丹磺酰戊二胺（MDC）荧光染色法检测细胞内自噬体的形成，用Western blot法及流式细胞术检测西格列汀对高糖高脂条件下H9c2细胞自噬及凋亡的影响。结果：Con组H9c2细胞存在着较低水平的自噬表达；给予高糖高脂刺激后，细胞自噬水平明显减弱，凋亡显著增强。给予西格列汀处理，可显著增强H9c2心肌细胞自噬水平的表达，并降低细胞凋亡率。结论：在高糖高脂条件下，西格列汀可通过促进细胞自噬，抑制细胞凋亡，减轻高糖高脂对H9c2心肌细胞的损伤，可能对糖尿病患者的心肌有一定的保护作用。     

白花丹醌对TBHP诱导的H9c2心肌细胞损伤的保护作用研究

目的：探讨白花丹醌（plumbagin,PLB）对叔丁基过氧化氢（TBHP）诱导的H9c2心肌细胞损伤的保护作用。方法：评估PLB对TBHP （75 μmol·L^-1）诱导的活性氧（ROS）介导的H9c2心肌细胞的氧化应激和细胞凋亡的保护作用。结果：用5,10和20 μmol·L^-1 PLB预处理后,可显著恢复TBHP诱导的H9c2细胞中的细胞活力,显著降低肌酸激酶（CK）和乳酸脱氢酶（LDH）活性。TBHP导致心肌细胞凋亡增加,而PLB预处理以剂量依赖性方式抑制TBHP诱导的细胞凋亡。此外,经PLB处理后,微管相关蛋白1a/1B轻链3B （LC3）-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达水平升高,提示PLB能够诱导心肌细胞自噬。结论：PLB对TBHP诱导的心肌细胞损伤具有保护作用,该作用可能与PLB抑制ROS介导的氧化应激、凋亡和自噬作用有关。     

高糖应激对H9c2细胞凋亡作用

目的 探讨高糖应激早期对H9c2细胞存活的影响及其可能的信号转导通路.方法 高糖培养H9c2细胞24 h后,收集细胞进行细胞活力和凋亡的测定,用Western blot方法 测定蛋白激酶(Akt)的磷酸化水平和内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)的表达.结果 与对照(NG)组相比,高糖培养(HG)组H9c2细胞活力改善,凋亡减少,而P13K抑制剂LY294002预处理和NOS抑制剂L-NAME处理均抑制短期高糖培养对H9c2细胞的保护作用.与NG组相比,HG组早期Akt磷酸化水平升高,eNOS蛋白表达增加,结论 在高糖应激早期(24 h内),高糖通过活化P13K/Akt/eNOS信号通路,改善H9c2细胞的活力,减少其凋亡.     

白藜芦醇通过上调SIRT1抑制阿霉素诱导的H9c2细胞损伤

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,RSV)对阿霉素(doxorubicine,DOX)引起的心肌细胞损伤的保护作用及相应机制。方法应用DOX,RSV,SIRT1 siRNA处理H9c2细胞,对照组(CON)不做任何处理。MTT比色法检测H9c2细胞活力,流式细胞术检测凋亡率,Western免疫印迹检测SIRT1蛋白表达,荧光显微镜下观察转染GFP的细胞,并随机选取视野计算转染率。结果 DOX降低细胞活力,诱导细胞凋亡,呈现时间、剂量依赖性。RSV时间、剂量依赖性上调SIRT1蛋白表达。RSV预处理能明显降低DOX对H9c2细胞的损伤。然而,SIRT1 siRNA预处理则加重DOX引起的H9c2细胞损伤。这种细胞损伤未能被RSV预处理所改善。结论 RSV可减轻DOX引起的H9c2细胞损伤,这种保护作用可能是通过上调SIRT1来实现的。     

阿魏酸预处理对阿霉素诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用

目的研究阿魏酸(FA)对阿霉素(DOX)诱导H9c2心肌细胞损伤的影响。方法 1μmol·L-1DOX处理H9c2细胞24 h,建立心肌损伤模型。FA预处理组,10、20、40μmol·L-1FA预处理2 h后,再与DOX共培养24 h。CCK-8比色法测定细胞生存率;相差显微镜观察细胞形态学改变;生化试剂盒检测LDH、CK、MDA、SOD;DCF-DA荧光染色流式细胞术检测细胞内活性氧;AO-EB染色、DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;Western blot法测定caspase-3、Bax、Bcl-2表达。结果 DOX降低H9c2细胞生存率,诱导氧化应激损伤和细胞凋亡。FA预处理剂量依赖性提高细胞生存率,减轻LDH、CK外漏和损伤细胞形态学改变。FA减少ROS生成,降低细胞MDA水平,增加SOD酶活性,抑制DOX诱导的氧化应激。FA下调促凋亡蛋白caspase-3和Bax,上调凋亡抑制蛋白Bcl-2,减少心肌细胞凋亡。结论 FA可抑制DOX诱导的氧化应激和心肌细胞凋亡,减轻心肌损伤。     

鹿茸多肽对阿霉素诱导H9c2细胞损伤保护作用的研究

目的：探讨鹿茸多肽对阿霉素诱导的H9c2细胞损伤的保护作用与其作用机制。方法：培养H9c2细胞，采用CCK-8方法考察ADR和PAP对H9c2细胞存活率的影响，选择最优给药时间与浓度，分成4组，空白对照组（BCG组）、阿霉素诱导组（ADR组）、鹿茸多肽组（PAP组）、阿霉素与鹿茸多肽联合诱导组（ADR+PAP组），ELISA检测H9c2上清液中cTnT和cTnI的含量，免疫荧光法检测Caspase9的表达水平，Western blot法检测各组细胞相关蛋白TGF-β₁、SMAD7、PKC表达。结果：与BCG组比较，ADR组cTnT和cTnI含量显著升高（P<0.05），Caspase9活性表达降低，TGF-β₁蛋白表达升高（P<0.01），SMAD7、PKC蛋白表达降低（P<0.01），PAP组无显著性差异（P>0.05），与ADR组比较，ADR+PAP组cTnT和cTnI含量减少（P<0.05），Caspase9活性表达升高，TGF-β₁蛋白表达降低（P<0.05），SMAD7、PKC蛋白表达升高（P<0.01，P<0.05）。结论：鹿茸多肽可以对阿霉素诱导的H9c2细胞损伤有保护作用，其作用机制可能与调控TGF-β₁、SMAD7、PKC蛋白表达量有关。     

杨桃根活性成分对高糖诱导H9c2心肌细胞损伤的改善作用及机制

目的:研究杨桃根活性成分2-十二烷基-6-甲氧基-2,5-二烯-1,4-环己二酮(DMDD)对高糖诱导H9c2心肌细胞损伤的改善作用及机制.方法:将H9c2心肌细胞分为正常组、高糖组、渗透压对照组和DMDD高、中、低浓度组(8、4、2μmol/L).正常组和高糖组细胞分别加入低糖(含5.5 mmol/L葡萄糖,下同)、...     

甘油醛-3-磷酸脱氢酶核转位与高糖应激诱导的H9c2细胞凋亡密切相关

目的:探讨高糖应激是否引起心肌细胞中甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)核转位以及GAPDH核转位是否与细胞凋亡有关。方法:高糖培养H9c2细胞48 h后,收集细胞进行细胞凋亡的测定,用DCFH-DA荧光探针测定细胞中活性氧簇(ROS)的水平,用Western Blotting方法测定细胞质和细胞核中GAPDH以及细胞中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达,用细胞免疫荧光的方法测定GAPDH的核转位情况。结果:与低糖培养组相比,高糖培养组H9c2细胞凋亡率增高,ROS生成和iNOS表达增多,GAPDH由细胞质向细胞核转位;而线粒体呼吸链复合体I抑制剂鱼藤酮和iNOS抑制剂1400W均阻断GAP-DH的转位,并减少高糖诱导的H9c2细胞的凋亡。结论:高糖诱导H9c2细胞中GAPDH由细胞质向细胞核转位;鱼藤酮和1400W可抑制高糖Flavonoids诱导的细胞凋亡,这一作用与抑制GAPDH核转位有关。     

槲皮黄酮对高糖诱导的心肌H9c2细胞凋亡和氧化应激的抑制作用

目的:观察槲皮黄酮对高糖刺激心肌H9c2细胞凋亡和活性氧(ROS)水平的影响.方法:体外培养H9c2细胞,并将其分为对照组、高糖组(25 mmol·L-1)、高糖+槲皮黄酮低浓度组(25 mmol·L-1+50 μmol·L-1)、高糖+槲皮黄酮中浓度组(25 mmol·L-1+100 μmol·L-1)和高糖+槲皮黄...     

合成红景天苷对H9c2细胞氧化应激损伤的保护作用研究

目的：研究合成红景天苷对过氧化氢所致H9c2心肌细胞氧化应激损伤的保护作用。方法：体外培养H9c2细胞,分为正常对照组、模型组、提取红景天苷（10-4 mol·L-1）组和合成红景天苷（10-6、10-5、10-4mol·L-1）组,药物孵育24 h后,加入过氧化氢终浓度400μmol·L-1损伤4h,检测各组细胞活力和培养液上清液中乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、超氧化物歧化酶（SOD）活性以及丙二醛（MDA）含量。结果：与正常对照组相比,模型组细胞活力、SOD活性显著降低,LDH、CK活性和MDA含量显著升高（P〈0.01）。与模型组相比,红景天苷预处理组能明显提高细胞活力和SOD活性（P〈0.05）,明显降低LDH、CK活性及MDA含量（P〈0.05）,并与浓度呈正相关。结论：红景天苷对过氧化氢造成的心肌细胞氧化应激损伤有明显的保护作用,且合成红景天苷效果优于提取红景天苷。     

尼可地尔对抗高糖引起的H9c2心肌细胞损伤和炎症反应

目的探讨尼可地尔(nicorandil,Nic)能否通过调控核因子-κB(nuclear factorκB,NF-κB)/环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)通路对抗高糖引起的H9c2心肌细胞损伤和炎症。方法应用细胞计数盒(CCK-8)检测心肌细胞存活率;蛋白质免疫印迹法测定NF-κB、COX-2和cleaved caspase-3蛋白的表达水平;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒检测细胞培养液中LDH的活性;双氯荧光素染色荧光显微镜照相法测定胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相法测定凋亡细胞数量;罗丹明123染色荧光显微镜照相法检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP);ELISA法检测细胞培养液中白介素~(-1)β(IL~(-1)β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。结果 35 mmol·L~(-1)葡萄糖(高糖,HG)作用H9c2心肌细胞24 h能明显降低心肌细胞存活率。在HG作用前,应用20~100μmol·L~(-1)Nic预处理60 min或50μmol·L~(-1)Nic预处理30~120 min均可明显对抗HG对心肌细胞存活率的抑制作用。另一方面,HG可上调心肌细胞磷酸化(p)-NF-κB p65和COX-2的表达,50μmol·L~(-1)Nic预处理心肌细胞60 min能抑制HG诱导的p-NF-κB p65和COX-2表达的上调。此外,HG作用心肌细胞24 h可引起明显的心肌细胞损伤和炎症反应,使培养液中LDH活性、ROS生成、凋亡细胞数量、cleaved caspase-3表达、MMP丢失及炎症因子IL~(-1)β和TNF-α的分泌均增加;在HG作用前,应用50μmol·L~(-1)Nic预处理心肌细胞60 min或应用100μmol·L~(-1)PDTC(NF-κB抑制剂)或10μmol·L~(-1)NS-398(COX-2抑制剂)和HG共处理心肌细胞24 h能明显拮抗HG引起的上述损伤和炎症反应。结论 Nic通过抑制NF-κB/COX-2通路对抗HG引起的H9c2心肌细胞损伤和炎症。     

ATP敏感性钾通道-Akt通路在硫化氢对抗高糖损伤H9c2心肌细胞中的作用

目的研究ATP敏感性钾通道(ATP-sensitive K+channel,KATP通道)-Akt通路在外源性硫化氢(hydrogen sulfide,H_2S)对抗高糖引起的H9c2心肌细胞损伤中的作用。方法应用Western blot法检测心肌细胞Akt蛋白的表达水平;细胞计数盒测定心肌细胞存活率;Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相测定凋亡细胞数量的变化;双氯荧光素染色荧光显微镜照相法检测胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;JC-1染色荧光显微镜照相法测定线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)。结果应用高糖(35 mmol·L~(-1),HG)处理H9c2心肌细胞0~24 h,其中3 h起磷酸化(p)-Akt蛋白表达水平开始明显下降,24 h p-Akt表达水平降至最低。在HG处理心肌细胞24 h前,应用50μmol·L~(-1)KATP通道开放剂吡拉地尔(pinacidil,Pin)和400μmol·L~(-1)硫氢化钠(NaHS,为H_2S的供体)预处理30 min均能明显地抑制HG对p-Akt表达的下调作用。应用1mmol·L~(-1)K_(ATP)通道阻断剂格列本脲(glibenclamide,Gli)预处理心肌细胞能阻断NaHS对HG下调p-Akt表达水平的抑制作用。此外,30μmol·L~(-1)Akt的抑制剂LY294002能明显阻断NaHS对抗HG损伤心肌细胞的保护作用,表现为细胞存活率和MMP降低,凋亡细胞数量、ROS生成增多。结论 K_(ATP)通道-Akt通路介导H_2S对抗高糖引起的心肌细胞损伤的保护作用。     

NADPH氧化酶在高糖诱导的H9c2心肌细胞损伤中的作用

目的探讨还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶在高糖损伤H9c2心肌细胞中的作用。方法不同浓度(5.5、11、22、33、44、55 mmol·L-1)高糖刺激H9c2心肌细胞24 h及33 mmol·L-1浓度高糖刺激H9c2心肌细胞(0、12、24、36、48、72 h),MTT比色法检测细胞存活率;Western blot检测细胞内Bcl-2、Bax以及NADPH氧化酶亚基p22phox、p47phox以及p67phox的表达水平。结果 33 mmol·L-1浓度高糖刺激H9c2心肌细胞24 h后,细胞存活率开始明显下降,Bcl-2表达减少,而Bax表达增加(P<0.05);此外,NADPH氧化酶亚基p22phox、p47phox以及p67phox蛋白表达水平明显上调(P<0.05)。结论心肌细胞内NADPH氧化酶活性升高可能是介导高糖损伤心肌细胞的重要机制。     

坏死性凋亡和p38 MAPK通路的相互作用介导高糖引起的H9c2心肌细胞损伤

目的研究坏死性凋亡(necroptosis,Nec)和p38丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路的相互作用在高糖引起H9c2心肌细胞损伤中的作用。方法应用细胞计数盒检测心肌细胞存活率;双氯荧光素染色荧光显微镜照相法检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;罗丹明123染色荧光显微镜照相法测定线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP);蛋白质免疫印迹法测定RIP3蛋白(反映Nec的指标)和p38MAPK蛋白的表达水平。结果高糖(35 mmol·L~(-1)葡萄糖,HG)作用H9c2心肌细胞24 h可引起明显的细胞损伤,表现为细胞存活率降低,ROS生成及MMP丢失增多;应用100μmol·L~(-1)necrostatin-1(Nec-1,Nec特异性抑制剂)和HG共处理心肌细胞24 h或3μmol·L~(-1)SB203580(p38MAPK抑制剂)预处理心肌细胞60 min,再予HG作用24 h可减轻高糖引起的上述损伤。此外,HG作用心肌细胞1、3、6、9、12、24、36和48 h均能明显增加RIP3蛋白的表达水平,其中24 h时表达水平增加最明显。应用100μmol·L~(-1)Nec-1共处理或3μmol·L~(-1)SB203580预处理心肌细胞均能明显地抑制HG对RIP3蛋白表达的上调作用。另一方面,应用100μmol·L~(-1)Nec-1共处理心肌细胞能阻断HG对磷酸化(p)-p38MAPK表达的上调作用。结论 Nec和p38 MAPK通路的相互作用介导高糖引起H9c2心肌细胞损伤。     

圣草次苷激活Nrf2信号通路保护H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤作用研究

目的 建立大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧（H/R）损伤模型,考察圣草次苷改善心肌缺血再灌注损伤的作用机制。方法 利用无糖无血清培养基结合厌氧（94%N₂、5%CO₂、1%O₂）处理H9c2心肌细胞4h后,更换新鲜完全培养基再放入正常孵箱复氧24h,制备H/R损伤模型。在造模前12h给予圣草次苷（5、10、20μg·mL^-1）,细胞活力及乳酸脱氢酶（LDH）检测实验中选择灯盏乙素（20μg·mL^-1）作为阳性药,对照组及模型组给予等体积DMSO。MTT法测定细胞存活率;试剂盒检测细胞培养上清液中LDH水平;试剂盒检测细胞内丙二醛（MDA）水平和超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力;TUNEL染色检测细胞凋亡;DCFH-DA和JC-1探针分别检测细胞内活性氧（ROS）和线粒体膜电位改变;Western blotting检测核蛋白中转录因子（NF）-E2相关因子2（Nrf2）和总蛋白中血红素氧合酶1（HO-1）、γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶（GCL）水平。结果 与对照组比较,H/R损伤诱导的模型组细胞存活率明显下降,凋亡明显增加,LDH水平明显升高,细胞内MDA水平明显升高,SOD、CAT、GSH-Px活力明显降低,ROS释放明显增多,线粒体膜电位明显降低,差异均有统计学意义（P＜0.01）;与模型组比较,圣草次苷可剂量相关性地改善上述变化,其中10、20μg·mL^-1组均差异显著（P＜0.01）。Western blotting结果显示,与对照组比较,模型组细胞Nrf2核转位以及HO-1、GCL表达水平无显著变化;与模型组比较,圣草次苷10、20μg·mL^-1显著增加Nrf2核转位及HO-1、GCL表达水平（P＜0.01）。结论 圣草次苷能够保护H/R诱导的H9c2心肌细胞损伤,其可能通过激活Nrf2抗氧化信号通路,增加细胞内源性抗氧化能力,抑制氧化应激损伤,保护线粒体功能以阻止细胞凋亡的发生。     

参百益通过诱导自噬和抑制NLRP3炎症小体保护顺铂诱导的HK-2细胞损伤

目的：考察参百益的有效成分人参皂苷Rg3对顺铂诱导人肾小管上皮细胞（HK-2）损伤的保护作用和作用机制。方法：利用MTT法检测参百益和顺铂对HK-2细胞存活率的影响,通过Western blot法和荧光免疫检测法对HK-2细胞内炎症和自噬相关蛋白的表达进行检测。结果：参百益抑制了顺铂诱导的HK-2细胞凋亡,使HK-2细胞的存活率显著升高。参百益与顺铂联合作用,使NLRP3、p-p65和p62的表达显著降低,LC3II/I和Becline-1的表达明显升高。结论：参百益与顺铂联用,可以通过抑制炎症小体激活和诱导细胞自噬,减弱顺铂的肾毒性,为参百益的临床应用提供了理论依据。     

Hydrogen sulphide protects H9c2 cells against chemical hypoxia‐induced injury

1. The aim of the present study was to investigate the effect of hydrogen sulphide (H₂S) on cobalt chloride (CoCl₂)‐induced injury in H9c2 embryonic rat cardiac cells. 2. After 36 h incubation in the presence of 600 μmol/L CoCl₂, reduced cell viability of H9c2 cells was observed, as well as the induction of apoptosis. In addition, CoCl₂ (600 μmol/L) enhanced the production of reactive oxygen species (ROS) and the expression of cleaved caspase 3, induced a loss of mitochondrial membrane potential (MMP) and decreased reduced glutathione (GSH) production. These results suggest that CoCl₂ induces similar responses to hypoxia/ischaemia. 3. Pretreatment of cells with 400 μmol/L NaHS (a H₂S donor) for 30 min prior to exposure to CoCl₂ (600 μmol/L) significantly protected H9c2 cells against CoCl₂‐induced injury. Specifically, increased cell viability and decreased apoptosis were observed. In addition, NaHS pretreatment blocked the CoCl₂‐induced increases in ROS production and cleaved caspase 3 expression, as well as the decreases in GSH production and loss of MMP. 4. Pretreatment of cells with 2000 μmol/L N‐acetylcysteine (NAC), a ROS scavenger, for 1 h prior to CoCl₂ exposure significantly protected H9c2 cells against CoCl₂‐induced injury, specifically enhancing cell viability, decreasing ROS production and preventing loss of MMP. 5. The findings of the present study suggest that H₂S protects H9c2 cells against CoCl₂‐induced injury by suppressing oxidative stress and caspase 3 activation.     

柚皮苷保护H9c2心肌细胞对抗阿霉素诱导的心肌毒性

目的探讨柚皮苷(NRG)能否保护H9c2心肌细胞对抗阿霉素(DOX)诱导的心肌毒性。方法应用DOX处理H9c2心肌细胞建立DOX心肌损伤模型。CCK-8比色法测定细胞存活率;谷胱甘肽试剂盒检测GSSG/(GSSG+GSH)的比值;Hoechst 33258核染色法观察细胞凋亡的形态学和数量改变;Western blot法测定葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达水平;双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜摄片检测细胞活性氧(ROS)水平;罗丹明123(Rh123)染色荧光显微镜照像测定线粒体膜电位(MMP)。结果 DOX在3⁷μmol·L-1浓度范围内处理H9c2心肌细胞24 h,呈剂量依赖性降低细胞存活率,其中5μmol·L-1DOX能明显引起心肌细胞损伤,表现为使细胞存活率下降近50%,并呈时间依赖性上调GRP78蛋白的表达;1μmol·L-1NRG预处理60min可明显抑制5μmol·L-1DOX引起的心肌毒性作用,表现为细胞存活率升高,GSSG/(GSSG+GSH)的比值下降,凋亡细胞数目减少,GRP78表达被抑制,细胞内ROS产生及MMP丢失减少。结论 NRG能保护心肌细胞对抗DOX诱导的心肌细胞损伤,保护作用可能与其抗氧化应激及内质网应激有关。