拟康氏木霉胞外多糖抗肿瘤活性研究

目的：研究拟康氏木霉胞外多糖体内外抗肿瘤活性。方法：体外采用MTT法检测拟康氏木霉胞外多糖对人白血病细胞HL一60抑制作用;体内试验是将昆明种小鼠接种S180实体瘤后随机分组,灌胃50、100、200mg·kg-1·d-1剂量的多糖,以生理盐水和环磷酰胺为空白对照组和阳性对照组。检测受试药物对小鼠S180实体瘤的抑制作用,计算小鼠的相对生长率及其免疫器官指数。结果：经MTT法检测,拟康氏木霉胞外多糖0．2～1．0mg／mL五个浓度对HL一60细胞均有不同程度的抑制作用,并呈现出剂量相关性,其中1．0mg／mL多糖浓度在72h的抑制率可达40．36％。而该多糖低、中、高三个剂量组均能明显减少S180小鼠的瘤重,其中高、中剂量组能明显提高小鼠的胸腺指数和脾指数（P〈0．05,P〈0．01）,但与空白对照组比较,三个给药组对小鼠的相对生长情况并无明显影响。结论：拟康氏木霉胞外多糖具有一定的抗肿瘤作用。     

氯喹联合顺铂对结肠癌HCT116细胞的增殖和凋亡的影响

目的探讨氯喹(CQ)联合顺铂(DDP)对人结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法将HCT116细胞分组为16组:空白对照组(不加药物)、5个浓度(5,10,20,40,80μmol·L^-1)氯喹-1组至氯喹-5组,5个浓度(2,4,8,16,32μmol·L^-1)顺铂-1组至顺铂-5组和5个浓度(20μmol·L^-1氯喹+2,4,8,16,32μmol·L^-1顺铂)联合-1组至联合-5组,各组均培养24 h。用噻唑蓝法检测细胞的存活率,用PI单染流式细胞术检测细胞的凋亡情况,用蛋白质印迹法检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)等凋亡相关蛋白的表达水平(灰度值)。结果空白对照组、氯喹-1组至氯喹-5组、顺铂-1组至顺铂-5组和联合-1组至联合-5组于24 h的细胞存活率分别为(100.00±1.05)%,(99.65±1.98)%,(97.43±0.72)%,(83.88±0.51)%,(69.65±3.33)%,(51.87±0.49)%,(98.55±1.50)%,(92.33±0.50)%,(81.66±4.29)%,(70.41±0.50)%,(48.34±1.50)%,(78.61±4.37)%,(59.01±3.52)%,(37.23±0.57)%,(32.88±3.96)%和(21.09±2.57)%。空白对照组、氯喹-3组、顺铂-3组和联合-3组的细胞凋亡率分别为(1.63%±0.50%),(15.97%±1.40%),(24.83%±2.12%)和(47.23±4.29)%;这4组的Bcl-2相对表达量分别为1.11±0.01,0.92±0.03和0.73±0.08,0.46±0.07;这4组的Bax蛋白相对表达量分别为0.18±0.01,0.27±0.03,0.46±0.09和0.58±0.04。氯喹联合顺铂能显著减少抗凋亡Bcl-2蛋白的表达,并上调促凋亡Bax蛋白的表达。联合组与单用组比较,上述指标的差异均有统计学意义(均P<0.05);各给药组与空白对照组比较,上述指标的差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论氯喹可以增强顺铂对HCT116细胞的增殖抑制作用,同时可以增强顺铂诱导结肠癌细胞的凋亡,其机制可能与下调Bcl-2和上调Bax有关联。     

雷公藤甲素对人结肠癌HCT116细胞增殖、自噬和凋亡的影响

目的探究雷公藤甲素(TP)对人结肠癌HCT116细胞增殖的的影响和可能的抑制机制。方法取TP不同浓度、不同时间作用HCT116细胞,MTT检测细胞的存活率,流式细胞术检测TP对细胞凋亡的影响,免疫印迹检测蛋白LC3-Ⅱ表达,MDC检测细胞自噬。结果 TP能够抑制HCT116细胞的增殖,不同浓度的TP作用HCT116细胞48 h后,LC3-Ⅱ的水平随着TP浓度的增加而升高,呈浓度依赖性;用40nmol·L~(-1)TP作用HCT116细胞,LC3-Ⅱ蛋白水平随作用时间的延长而增加,呈时间依赖性,同时荧光显微镜观察到HCT116细胞中酸性自噬囊泡的数量增多。TP+3-MA作用HCT116细胞48 h,与对照组比较TP组细胞凋亡率下降;与TP组比较TP+3-MA组细胞凋亡率明显下降。TP+RAPA作用HCT116细胞24 h,与对照组比较TP组细胞凋亡率增加;与TP组比较TP+RAPA组细胞凋亡率明显增加。结论TP能够抑制人结肠癌HCT116细胞的增殖,诱导HCT116细胞凋亡,提示自噬和凋亡间可能有协同关系。     

紫草素对人结肠癌细胞HCT116自噬和凋亡的影响

目的:研究紫草素对人结肠癌细胞HCT116自噬和凋亡的影响。方法:以0(空白对照)、10、20、40μg/mL紫草素作用于HCT116细胞48 h后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;分别采用实时荧光定量-聚合酶链式反应法和Western blotting法检测细胞中微管相关蛋白轻链3(LC3)和自噬相关蛋白Beclin-1、p62的mRNA及其蛋白表达水平。结果:与空白对照比较,10、20、40μg/mL紫草素作用48 h后HCT116细胞的增殖抑制率和凋亡率均显著升高(P<0.05或P<0.01)。10、20、40μg/mL紫草素作用于HCT116细胞48 h后均可不同程度地升高细胞中LC3、Beclin-1、p62 mRNA及其蛋白的表达水平,除10μg/mL紫草素作用后细胞中LC3 m RNA表达水平升高不显著外,其余指标水平与空白对照比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:紫草素可诱导人结肠癌细胞HCT116发生凋亡,并激活其自噬途径。     

染料木黄酮对人白血病K562细胞凋亡及增殖的影响

目的:观察染料木黄酮(GEN)对人白血病细胞增殖及凋亡的影响,探讨其抗白血病的可能性。方法:不同浓度(10、20、30、40、50 mg/L),不同时间(6、12、24、48、72 h)染料木黄酮作用后,甲基噻唑基四唑(MTT)法检测K562细胞(慢性髓细胞性白血病细胞株)及人外周血单个核细胞增殖;DNA断裂梯带电泳、Annexin-V/PI双染色流式细胞仪分析检测GEN诱导K562细胞凋亡的作用。结果:GEN可有效地抑制肿瘤细胞增殖,而对正常细胞毒性较小(PBM-CIC50=35.5 mg/L和K562 IC50=13.2 mg/L),抑制作用呈明显的时间、剂量—效应关系(P<0.05);GEN体外能够诱导K562细胞凋亡,诱导作用呈时间、剂量依赖关系(P<0.05);结论:GEN具有抗白血病细胞的作用。     

红花多糖对人结肠癌loVo细胞凋亡抑制作用机制研究

目的:红花多糖对人结肠癌 LoVo 细胞凋亡作用机制研究.方法:体外培养人结肠癌 LoVo 细胞,不同浓度(0.5mg/ml、1.0mg/ml、1.5mg/ml、1.8mg/ml)红花多糖处理后,分别在干预24、48、72h采用 MTT 比色法测定红花多糖对细胞的增殖抑制作用,利用倒置显微镜观察细胞的形态,采用PI单标流式细胞仪测定细胞周期分布,Annexin V-FITC /PI 双标法检测细胞凋亡率; 采用RT-PCR检测Bax、Bcl-2mRNA表达水平及检测caspase-3活性,Western-blot检测Bax、Bcl-2蛋白表达情况;应用Transwell细胞侵袭试验检测红花多糖对结肠癌LoVo细胞侵袭能力的影响.结果: MTT 检测显示红花多糖能显著抑制人结肠癌 LoVo 细胞的生长、増殖,呈现浓度和时间效应关系;倒置显微镜显示红花多糖能使结肠癌LoVo 细胞发生典型凋亡特征;流式细胞仪分析示红花多糖能调节细胞周期.RT-PCR实验和Western-blot显示红花多糖可促进细胞中Bax、Caspase-3 mRNA表达,抑制 Bcl-2 mRNA表达.Transwell侵袭实验显示随着红花多糖浓度增加,LoVo 细胞侵袭能力降低.结论:红花多糖能显著抑制人结肠癌 LoVo 细胞凋亡,可使结肠癌LoVo 细胞增殖受到抑制,侵袭能力减弱,调节细胞周期,这种生物学效应可能与Bax、Bacl-2、Caspase-3 的信号通路有关。     

Temporin-PE肽对结肠癌LoVo细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的 在细胞水平上初步探讨Temporin-PE肽抗结肠癌作用.方法 分别用50、100、150、200μg/ml Temporin-PE肽处理的人结肠癌LoVo细胞株作为实验组,以等体积DMEM-H(无血清)处理的LoVo细胞作为对照组.通过CCK-8法和细胞克隆形成实验检测不同浓度Temporin-PE肽对LoVo...     

黄芩茎叶总黄酮对结肠癌HCT116细胞凋亡、迁移和侵袭的影响

目的 研究黄芩茎叶总黄酮（SBTF）对结肠癌HCT116细胞凋亡、迁移和侵袭的影响。方法 采用CCK8法检测SBTF（5、10、20、50、100、200、400、600 μg·mL^-1）对HCT116细胞增殖的影响;Annexin V/PI双染法检测SBTF （80、120、160 μg·mL^-1）对HCT116细胞凋亡的影响;JC-1染色法检测SBTF对细胞线粒体膜电位的影响;Transwell小室迁移和侵袭实验检测SBTF对细胞迁移和侵袭的影响;Western blotting法检测SBTF对细胞凋亡、迁移和侵袭相关蛋白表达的影响。结果 与对照组比较,SBTF可明显抑制HCT116细胞增殖,干预24、48 h后的半数抑制浓度（IC₅₀）值分别为156.50、98.59 μg·mL^-1;SBTF显著提高HCT116细胞凋亡率（P＜0.05、0.01）;SBTF明显促进HCT116细胞线粒体膜电位改变;SBTF显著降低HCT116细胞迁移和侵袭率（P＜0.05、0.01）;SBTF显著上调HCT116细胞的Bax/Bcl-2值和cleaved Caspase-3蛋白表达（P＜0.05、0.01）,显著下调MMP-2、MMP-9蛋白表达（P＜0.05、0.01）。结论 SBTF可通过诱导HCT116细胞凋亡和抑制细胞迁移、侵袭发挥抗结肠癌作用。     

单唾液酸四己糖神经节苷脂联合奥沙利铂对HCT116细胞增殖和周期的影响

目的研究外源性单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)联合奥沙利铂对HCT116细胞增殖和细胞周期的影响。方法进行人结肠癌肿瘤细胞株HCT116细胞培养,HCT116细胞在20μmol/L奥沙利铂与不同浓度GM1(5~300μmol/L)联合干预,孵育12、24、48 h后通过CCK-8法检测药物对于HCT116细胞增殖活性的影响。倒置显微镜观察药物作用后细胞形态学变化。流式细胞术检测GM1联合奥沙利铂对于HCT116细胞细胞周期分布及凋亡的影响。结果奥沙利铂导致HCT116细胞增殖活性显著降低,该作用呈现显著时间依赖性,并且不受GM1药物作用的影响(P>0.05)。细胞形态学观察,奥沙利铂作用24 h后,HCT116细胞生长出现显著抑制,联合使用GM1对奥沙利铂引起的HCT116细胞的生长抑制亦无明显影响。流式细胞术检测,奥沙利铂作用24 h后,HCT116细胞周期G0/G1期和S期细胞减少,G2/M期细胞增多,细胞凋亡增多(P<0.05),联合使用GM1对于奥沙利铂引起的HCT116细胞细胞周期和凋亡的改变无明显影响(P>0.05)。结论GM1在体外不降低奥沙利铂对HCT116细胞增殖的抑制作用,不影响奥沙利铂引起的细胞周期和凋亡的变化。     

前列腺源性ETS因子对HCT116细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨前列腺源性ETS因子(prostate-derived Ets factor,PDEF)对HCT116细胞增殖与凋亡的影响.方法 体外培养HCT116细胞,分成空白对照组,空质粒组和重组表达质粒组,空质粒组转染不含PDEF的空载体,重组表达质粒组转染PDEF重组表达质粒.荧光显微镜下观察PDEF重组质粒表达情况;RT-PCR、Western blot检测3组细胞PDEF mRNA和蛋白的表达情况;CCK8法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 荧光显微镜下空质粒组和重组表达质粒组HCT116细胞均可观察到绿色荧光蛋白的表达,表明质粒已成功转染HCT116细胞;RT-PCR结果显示,与空质粒组相比,重组质粒组PDEF基因表达增高263倍;Western blot结果可见重组质粒组有PDEF蛋白的表达,而空质粒组和对照组没有;CCK8法检测发现PDEF基因的表达能够明显抑制HCT116细胞的增殖(P＜0.05);流式细胞仪结果显示重组质粒组细胞凋亡率显著高于对照组和空质粒组(P＜0.05).结论 在HCT116细胞中表达前列腺上皮源性ETS转录因子,可以抑制细胞的增殖和促进细胞凋亡.     

辛伐他汀对结肠癌细胞HCT116凋亡的诱导作用及其机制

目的观察辛伐他汀对结肠癌细胞HCT116凋亡的诱导作用,初探其可能机制。方法采用MTT法测定辛伐他汀对小鼠结肠癌细胞株HCT116生长的抑制作用;用Western blot法测定辛伐他汀对细胞凋亡相关蛋白PARP、cleaved-PARP和KLF2、KLF4以及细胞增殖相关蛋白P21、P-P53表达的影响情况。结果辛伐他汀对小鼠结肠癌细胞HCT116的生长具明显抑制作用;凋亡标志蛋白cleaved-PARP的水平明显上升;阻断AMPK信号途径可明显抑制辛伐他汀对cleaved-PARP蛋白的诱导作用。结论辛伐他汀具有明显的抗肿瘤作用,可能与AMPK信号途径有关。     

DZNep inhibits the proliferation of colon cancer HCT116 cells by inducing senescence and apoptosis

EZH2 is over-expressed in human colon cancer and is closely associated with tumor proliferation, metastasis and poor prognosis. Targeting and inhibiting EZH2 may be an effective therapeutic strategy for colon cancer. 3-Deazaneplanocin A (DZNep), as an EZH2 inhibitor, can suppress cancer cell growth. However, the anti-cancer role of DZNep in colon cancer cells has been rarely studied. In this study, we demonstrate that DZNep can inhibit the growth and survival of colon cancer HCT116 cells by inducing cellular senescence and apoptosis. The study provides a novel view of anti-cancer mechanisms of DZNep in human colon cancer cells.KEY WORDS: EZH2, Human colon cancer HCT116 cells, DZNep, Anti-cancer mechanisms     

Citrinin induces apoptosis in human HCT116 colon cancer cells through endoplasmic reticulum stress

The mycotoxin citrinin (CTN) is a natural contaminant of various human foods that may produce serious adverse health problems. Several studies demonstrated that citrinin exerts cytotoxic and genotoxic effects in both in vivo and in vitro systems. However, the precise mechanisms of action (MOA), particularly in intestinal cells remain unclear. The aim of the present study was to examine the precise MOA of citrinin in vitro. Data demonstrated that CTN significantly decreased the number of viable human intestinal HCT116 cells and induced apoptotic events including (1) decrease in Δ?m indicative of mitochondrial membrane permeabilization, (2) activation of caspase 3, (3) elevated production of reactive oxygen species (ROS) and (4) relative persistence of plasma membrane integrity. Further, the genetic deficiency of the pro-apoptotic protein Bax protected cells against CTN-induced apoptosis, indicating that Bax is required for CTN-mediated toxicity. It was also found that CTN triggered endoplasmic reticulum (ER) stress and activated different arms of the unfolded protein response (UPR) as demonstrated by increase in expression of GRP78 (glucose-regulated protein-78), GRP94 (glucose-regulated protein-94), GADD34 (growth arrest and DNA damage-inducible protein-34), the protein disulfide isomerase associated 6 (PDIA6), CHOP (C/EBP-homologous protein) and the splicing of XBP1 (X-Box Binding Protein 1). Pretreatment of cells with the chemical chaperone 4-phenylbutyrate (PBA), known to alleviate ER stress, prevented significantly the apoptotic process triggered by CTN. Taken together, these results suggest that CTN exerts its cytotoxic effects in HCT116 cells by inducing apoptosis, at least in part, through induction of ER stress.     

槲寄生凝集素抑制人大肠癌HCT116细胞环氧化酶-2表达的研究

目的：探讨槲寄生凝集素对人大肠癌HCT116细胞环氧化酶（COX-2）表达的影响。方法：采用RT-PCR、Western blotting和ELISA等方法检测不同浓度（0.1～1mg/L）槲寄生凝集素对细胞COX-2及其产物前列腺素E2（PGE2）表达的影响。结果：槲寄生凝集素可抑制HCT116细胞的COX-2mRNA、蛋白表达及PGE2的水平,其抑制COX-2蛋白的表达与PGE2的水平相一致,只在大剂量（1mg/L）时对COX-1mRNA有抑制作用。结论：槲寄生凝集素具有抑制HCT116细胞的COX-2基因转录、蛋白表达和功能活性等作用,在一定浓度（0.1～1mg/L）和时间范围（3～24h）内,表现出时效与量效关系。     

环阿尔廷烷型四环三萜化合物对HCT116细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的探讨升麻中分离的环阿尔廷烷型四环三萜化合物(KY17)对人结肠癌HCT116(p53WT)细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响。方法MTT法测定KY17对小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)和HCT116细胞株增殖的影响;检测KY17对HCT116细胞周期的影响;荧光显微镜、流式细胞仪分析细胞凋亡情况;Western blot法检测KY17对细胞凋亡蛋白PARP表达的影响;q PCR法检测miRNA-34a的表达情况。结果KY17处理MEF细胞的IC₅₀值为27.28μmol·L^-1。KY17处理HCT116细胞的IC₅₀值为9.31μmol·L^-1,细胞周期阻滞在G_2/M期,且凋亡蛋白PARP有切割;同时,miRNA-34a上调,p53蛋白表达量增加。结论KY17对HCT116细胞的增殖具有抑制作用,使细胞周期停滞于G_2/M期,最终诱导肿瘤细胞的凋亡,其作用机制与miRNA-34a上调、p53基因激活有关。     

沉默Prohibitin基因对人结直肠癌细胞株HCT116增殖和凋亡的影响

目的 siRNA介导抗增殖蛋白Prohibitin (PHB)基因沉默对人结直肠癌细胞株HCT116增殖和凋亡的影响.方法 通过脂质体LipofectamineTM 2000在HCT116细胞中转染PHB-siRNA,以Western blot来筛选siRNA片段.设立阴性对照NC组和高效沉默PHB138,PHB539 siRNA片段为实验组,重新转染HCT116,通过平板克隆形成实验、CCK-8检测细胞增殖能力;Annexin Ⅴ-FITC细胞凋亡试剂流式细胞术、Caspase-3/ Caspase-9活性检测等方法检测细胞凋亡;Annexin Ⅴ-FITC和Hoechst染色荧光显微镜观察.结果 Western blot结果显示siRNA片段PHB138、PHB539能明显抑制PHB蛋白表达;转染后HCT 116平板克隆形成率分别PHB138 (31.1±4.0)％、PHB539 (12.4±1.2)％、NC (43.4±2.1)％,差异有统计学意义(P＜0.001);CCK8实验发现转染后1～5 d,实验组与对照组比较,细胞增殖未收到显著影响(P＞0.05).在转染第7天,PHB539 siRNA能显著抑制细胞增殖(P＜0.01);Caspase-3活性度为PHB138 (1.50±0.39)、PHB539 (1.81±0.41),Caspase-9活性度PHB138(2.02±0.43)、PHB539 (2.81±0.51),差异有统计学意义(P＜0.05);Annexin Ⅴ-FITC和Hoechst染色均在荧光显微镜下观测有明显的凋亡现象,且凋亡比例和强度比阴性对照强.结论 靶向PHB-siRNA干扰可以有效地沉默结直肠癌细胞HCT116 PHB基因,下调PHB蛋白水平,从而抑制结直肠癌细胞HCT116增殖、促进凋亡.