白藜芦醇抑制人结肠癌细胞增殖与p38 MAPK的关系研究

目的研究白藜芦醇(resveratrol,Res)抑制人结肠癌细胞生长的作用与p38 MAPK的可能关系。方法利用结晶紫染色、Western blot和流式细胞术检测Res对LoVo细胞增殖的抑制作用;Western blot分析Res对LoVo细胞凋亡的促进作用,以及Res对p38 MAPK磷酸化的影响;利用p38MAPK抑制剂,通过结晶紫染色和Western blot实验,分析Res抑制结肠癌LoVo细胞增殖的作用与p38 MAPK之间的关系。结果与对照组相比,Res在20μmol·L~(-1)时就能明显抑制LoVo细胞增殖(P<0.05),并促使细胞周期阻滞在S期,上调PCNA蛋白水平;Res能呈浓度依赖性增加Bad的蛋白水平,而抑制Bcl-2蛋白表达;Res对p38 MAPK总蛋白水平无明显影响,但可明显增加p38 MAPK的磷酸化水平;抑制p38 MAPK明显促进LoVo细胞增殖,并能减弱Res对LoVo细胞增殖的抑制作用、对Bad表达促进作用和对Bcl-2表达的抑制作用。结论 Res对LoVo细胞的增殖具有抑制作用并促进凋亡,其机制可能与Res促进p38 MAPK的磷酸化有关。     

IGFBP-3在白藜芦醇抑制胃癌细胞增殖过程中的作用

目的研究在白藜芦醇(Res)抑制胃癌细胞增殖过程中,胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)表达的变化。方法噻唑蓝(MTT)法测定Res对BGC-823细胞增殖的抑制程度,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot技术检测Res处理后BGC-823细胞中IGFBP-3表达变化,siRNA技术沉默IGFBP-3基因表达,MTT法观察Res对BGC-823细胞增殖的影响,流式细胞技术测定各组细胞凋亡率。结果 Res能够抑制BGC-823生长,经20,40,80,160μmol·L-1Res处理后,细胞存活率分别为(82.35±10.65)%,(74.30±12.36)%,(62.80±14.66)%,(50.75±11.14)%。Res刺激后,IGFBP-3表达水平升高,与对照组比较,IGFBP-3 mRNA水平增高2.96倍(P<0.05),IGFBP-3蛋白水平变化与其mRNA一致。siRNA技术沉默IGFBP-3表达后,160μmol·L-1Res刺激BGC-823细胞,细胞存活率下降(78.5±9.86)%,但高于同浓度下Res刺激的未经IGFBP-3沉默的BGC-823细胞(P<0.05)。IGFBP-3沉默后,160μmol·L-1Res处理后BGC-823细胞凋亡率(20.13±9.12)%,明显低于未经IGFBP-3沉默的BGC-823细胞[(35.48±11.12)%],且差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Res可以抑制BGC-823细胞增殖,促进其凋亡。该机制涉及IGFBP-3高表达。     

ASPP2调控GRP78在L-NAME诱导胎盘滋养细胞凋亡中的作用

目的探讨p53凋亡刺激蛋白2(apoptosis stimulating protein 2 of p53,ASPP2)调控葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)在N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-nitroarginine methyl ester,L-NAME)诱导胎盘滋养细胞凋亡中的作用,为临床研究妊娠期高血压疾病提供理论依据。方法体外培养HTR-8/SVneo人胎盘滋养细胞,分为对照组(0μmol·L~(-1)L-NAME)和L-NAME组(100μmol·L~(-1)LNAME),干预48 h后,分别采用Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术和吖啶橙/溴化乙锭染色,检测胎盘滋养细胞凋亡水平的变化;运用Western blot检测caspase-12、GRP78和ASPP2的蛋白变化; ASPP2干扰腺病毒感染人胎盘滋养细胞后,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ASPP2的mRNA表达水平,Western blot检测GRP78的蛋白表达水平;给予100μmol·L~(-1) L-NAME干预48 h后,Western blot和免疫荧光分别检测caspase-12和GRP78的蛋白表达。结果与对照组相比,L-NAME组胎盘滋养细胞凋亡水平明显增加(P <0. 05);吖啶橙染色显示,与对照组相比,L-NAME组细胞多数呈现鲜亮的橙色,晚期凋亡细胞数明显增加;同时caspase-12、GRP78和ASPP2蛋白的表达明显增加(P <0. 05,P <0. 01);干扰ASPP2后,caspase-12和GRP78蛋白表达明显降低(P <0. 05)。结论下调ASPP2可降低GRP78的表达,进而抑制L-NAME诱导的胎盘滋养细胞凋亡。     

白藜芦醇抑制HCT116结肠癌细胞增殖与Wnt/β-catenin的关系研究

目的研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对人结肠癌细胞增殖的抑制作用及可能的分子机制。方法采用结晶紫染色和Western blot分析Res对HCT116细胞增殖的抑制作用;应用流式细胞术和Western blot分析Res对HCT116细胞凋亡的促进作用;利用TCF4/LEF萤光素酶报告质粒检测Res对Wnt/β-catenin信号转导的影响。采用Western blot和PCR分析Res对HCT116细胞内β-catenin表达水平的影响。结果与对照组相比,Res能抑制HCT116细胞增殖,下调PCNA蛋白水平;流式细胞术和Western blot检测结果均显示,Res能明显促进HCT116细胞凋亡;报告质粒分析结果显示,Res呈浓度依赖性降低TCF4/LEF报告质粒萤光素酶活性(Res为20μmol·L-1时,P<0.05;Res为40或80μmol·L-1时,P<0.01);Western blot和PCR分析结果显示,Res不仅明显降低HCT116细胞中β-catenin的蛋白水平,同时也下调β-catenin mRNA的表达水平。结论Res能抑制HCT116细胞增殖并促进凋亡,其机制可能至少与Res下调β-catenin mRNA表达,抑制Wnt/β-catenin信号转导有关。     

白藜芦醇对人胚肺成纤维细胞株MRC-5生长的抑制作用

目的探讨白藜芦醇(Res)对人胚肺成纤维细胞生长的抑制作用及相关机制。方法以人胚肺成纤维细胞MRC-5为研究对象,分别予20μL二甲基亚砜(DMSO)及0、12.5、25、50、100、200μmol·L-1Res处理细胞24、48、72 h,通过MTT法分析细胞增殖抑制率。另外,以20μL DMSO(溶媒组)及50、100μmol·L-1Res孵育细胞48 h,采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡率,行原位缺口末端标记法(TUNEL)测定细胞凋亡指数(AI),应用荧光实时定量PCR和Western blot分别检测细胞周期蛋白D1(cell cycle protein D1,Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)mRNA与蛋白表达,Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果随着Res浓度的升高和处理时间的延长,细胞增殖抑制率逐渐增加(P<0.01)。在共同培养48h后,50、100μmol·L-1Res处理组S、G2/M期DNA比例及Cyclin D1、CDK4 mRNA与蛋白表达水平、Bcl-2蛋白表达水平降低,而G0/G1期DNA比例、AI、凋亡率及Bax蛋白表达水平增加,与溶媒组比较,差异均有显著性(P<0.01),并且100μmol·L-1Res效果强于50μmol·L-1(P<0.01)。结论Res能抑制MRC-5细胞增殖,其机制可能与阻碍细胞周期进展及促进细胞凋亡有关。     

氯喹对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响及其机制

目的观察氯喹对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响,并探讨其机制。方法用氯喹20,40和80μmol·L~(-1)分别处理MDA-MB-231细胞24和48 h,采用CCK-8法和细胞克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western印迹法检测细胞周期相关蛋白即细胞周期蛋白D3、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)和CDK4,细胞凋亡相关蛋白即活化胱天蛋白酶3和活化聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)及自噬标志蛋白即自噬微管相关蛋白轻链3B(LC3B)和自噬底物SQSTM1表达水平。结果氯喹20,40和80μmol·L~(-1)与MDA-MB-231细胞作用24和48 h后,均能有效抑制细胞增殖(P<0.01)。与细胞对照组相比,氯喹20和40μmol·L~(-1)处理24 h,G_0/G_1期细胞百分比显著增高(P<0.01);80μmol·L~(-1)组G_2/M期细胞百分比升高(P<0.01),且细胞凋亡率增加(P<0.01)。处理48 h,与细胞对照组相比,氯喹用药3组细胞凋亡率均显著升高(P<0.05)。氯喹3组处理24 h,与细胞对照组相比,细胞周期蛋白D3、CDK2和CDK4表达水平降低(P<0.01),活化胱天蛋白酶3和活化PARP表达增强(P<0.01),LC3B和SQSTM1表达水平显著升高(P<0.01)。结论氯喹可通过抑制MDA-MB-231细胞自噬、阻滞细胞周期进程并促进细胞凋亡而抑制其增殖。     

齐墩果酸诱导Kasumi-1细胞凋亡及对AML1-ETO表达的影响

目的 观察齐墩果酸(OA)诱导入急性髓系白血病M2型细胞株Kasumi-1凋亡及对AML1-ETO表达的影响.方法 用不同浓度OA作用于人急性髓系白血病M2型Kasumi-1细胞株,四氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率;Annexin V/PI双染色后,流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot法检测AML1-ETO蛋白表达水平;荧光原位杂交(Fish)检测融合基因AML1-ETO的变化.结果 OA以时间和剂量依赖方式抑制Kasumi-1细胞的增殖,24,48,72 h的IC50分别约为0.58,0.41,0.35 μmol·L-1.不同浓度(0.4,0.6,0.9μmol·L-1)OA作用24h后,细胞凋亡率明显增加,AML1-ETO蛋白表达下调.结论 OA对Kasumi-1细胞的抑制增殖和诱导凋亡作用可能与AML1-ETO的抑制有关.     

18ku转位蛋白选择性配体YL-IPA08对皮质酮诱导BV-2细胞凋亡的保护作用

目的探讨18 ku转位蛋白TSPO选择性配体YL-IPA08对皮质酮诱导BV-2细胞凋亡的保护作用,并研究其可能的作用机制。方法选择性TSPO配体YL-IPA08 1~100 nmol·L~(-1)和(或)TSPO拮抗剂PK11195 100 nmol·L~(-1)预处理小胶质细胞系BV-2细胞2 h,加入皮质酮200μmol·L~(-1)继续培养24 h,分别用流式细胞术检测细胞凋亡,CCK-8法检测细胞存活,Western蛋白质印迹法检测TSPO蛋白表达水平,ELISA法检测细胞培养上清中四氢孕酮的水平。结果与溶剂对照组相比,YL-IPA08 1~100 nmol·L~(-1)与阳性化合物AC-5216一样能降低皮质酮处理的BV-2细胞的凋亡率(P<0.01),且100 nmol·L~(-1)时作用最为显著,该作用能被PK11195 100 nmol·L~(-1)所拮抗(P<0.05)。细胞活性检测显示,YL-IPA08 100 nmol·L~(-1)时能显著升高细胞活性(P<0.01),PK11195 100 nmol·L~(-1)处理会拮抗该作用(P<0.01)。Western蛋白质印迹和ELISA法结果显示,YL-IPA08 100 nmol·L~(-1)时能显著增加皮质酮处理的BV-2细胞TSPO蛋白的表达(P<0.05)并显著升高培养液中四氢孕酮的水平(P<0.05),PK11195 100 nmol·L~(-1)显著逆转该现象,降低四氢孕酮的水平(P<0.05)。结论 YL-IPA08显著抑制皮质酮诱导BV-2细胞的凋亡,表现出对小胶质细胞的保护作用,该作用与其增加TSPO蛋白的表达、升高四氢孕酮的水平密切相关。     

白藜芦醇诱导人乳腺癌MDA-MB231细胞凋亡及自噬

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)诱导人乳腺癌MDA-MB231细胞凋亡及自噬蛋白表达的作用与机制。方法以人乳腺癌MDA-MB231细胞为研究对象,MTT法检测Res(0、1、5、10、20、50、100、200 mg·L~(-1))抑制MDA-MB231细胞增殖情况; Res(0、5、20、60 mg·L~(-1))处理MDA-MB231细胞,划痕实验检测细胞迁移能力,Annexin V/PI双染法检测细胞早期凋亡率,免疫荧光法检测细胞LC3Ⅰ/Ⅱ的表达;Res(0、20、60 mg·L~(-1))处理MDA-MB231细胞,蛋白免疫印迹法检测细胞中自噬相关蛋白p62及Beclin-1的表达。结果Res在体外可明显抑制MDA-MB231细胞增殖,且呈浓度依赖关系。随着Res浓度的增高,乳腺癌细胞迁移能力较对照组分别下降了(8. 7±1. 1)%、(16. 5±2. 9)%和(32. 2±3. 6)%。流式细胞仪检测结果表明,早期凋亡细胞数增加;激光共聚焦检查显示,细胞质中LC3Ⅰ/Ⅱ绿色荧光增加;蛋白免疫印迹法检测出MDA-MB231细胞p62蛋白表达下降,Beclin-1蛋白表达升高。结论 Res可抑制人乳腺癌MDA-MB231细胞增殖,其机制可能与Res诱导细胞凋亡和自噬有关。     

没食子酸诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡机制的探讨

目的探讨没食子酸(gallic acid,GA)抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖的作用,揭示其促凋亡的相关分子机制。方法体外培养人肝癌细胞SMMC-7721,MTT法观察细胞在GA作用24、48、72 h后的增殖情况;用倒置显微镜观察细胞形态学的变化;透视电镜观察细胞内部结构变化;Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡;采用RT-PCR技术研究p53 mRNA的变化;应用Western blot法检测p53蛋白水平的表达。探讨GA对人肝癌细胞SMMC-7721的诱导凋亡作用及机制。结果剂量为6.25⁵0μmol·L-1GA作用SMMC-7721细胞48 h有明显的增殖抑制活性,引起核固缩、凝聚、碎裂,诱导细胞凋亡,并呈剂量依赖性;RT-PCR和Western blot结果显示,GA能升高p53 mRNA水平和p53蛋白表达。结论 GA可抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖,诱导凋亡,可能与其上调肿瘤相关抑癌基因p53有关。