杨梅素调节cAMP/PKA/CREB信号通路对炎症性肠病大鼠免疫功能的影响

目的 探究杨梅素（Myr）调节环磷酸腺苷（cAMP）/蛋白激酶A（PKA）/环磷酸腺苷反应成分结合蛋白（CREB）信号通路对炎症性肠病（IBD）大鼠免疫功能的影响。方法 建立IBD大鼠模型,实验分为Control组、Model组、杨梅素低、中、高剂量（Myr-L、Myr-M、Myr-H,28、56、112mg/kg/d Myr）组和杨梅素高剂量+PKA抑制剂H89（Myr-H+H89,112mg/kg/d Myr+7mg/kg/d H89）组。对大鼠疾病活动指数（DAI）进行评分;测定免疫功能指标及结肠长度;试剂盒测定血清中IL-6、IL-17A、TNF-α、cAMP水平;HE染色观察结肠组织病理变化;流式细胞术测定Treg细胞比例;免疫组化检测结肠组织中MPO表达;Western blot测定cAMP/PKA/CREB信号通路相关蛋白。结果 与Control组相比,Model组结肠组织细胞排列紊乱、有大量炎性细胞浸润,出现严重溃疡现象,大量细胞坏死,粘膜水肿和结肠壁增厚,DAI评分、IL-6、TNF-α和IL-17A水平、脾脏系数、胸腺系数、MPO光密度值显著增加（P<0.05）,结肠长度、Treg细胞比例、cAMP浓度、p-PKA/PKA和p-CREB/CREB水平显著降低（P<0.05）。与Model组相比,Myr-L、Myr-M和Myr-H组结肠组织细胞排列较整齐、粘膜水肿和结肠壁增厚减轻,炎性细胞浸润、细胞坏死及溃疡现象减少,DAI评分、IL-6、TNF-α和IL-17A水平、脾脏系数、胸腺系数、MPO光密度值逐渐降低（P<0.05）,结肠长度、Treg细胞比例、cAMP浓度、p-PKA/PKA和p-CREB/CREB水平逐渐增加（P<0.05）。与Myr-H组相比,Myr-H+H89组结肠组织病理变化加重,DAI评分、IL-6、TNF-α和IL-17A水平、脾脏系数、胸腺系数、MPO光密度值显著增加（P<0.05）,结肠长度、Treg细胞比例、cAMP浓度、p-PKA/PKA和p-CREB/CREB水平显著降低（P<0.05）。结论 杨梅素可能通过激活cAMP/PKA/CREB信号通路抑制机体炎症水平,调节免疫功能,对IBD大鼠发挥保护作用。     

当归芍药散通过AMPK/mTOR通路对高糖诱导的足细胞损伤的影响

目的:探讨当归芍药散是否可以通过AMPK/mTOR信号通路激活自噬改善高糖诱导的足细胞损伤。方法:分别将足细胞分为正常对照组、模型组、当归芍药散含药血清组、自噬抑制剂组、当归芍药散含药血清加自噬抑制剂组、自噬激动剂、AMPK抑制剂、当归芍药散含药血清加AMPK抑制剂组和AMPK激动剂,并观察各组的自噬相关蛋白、细胞活性和细胞凋亡率。结果:与对照组相比,高糖组足细胞活力和Beclin-1/LC3/p-AMPK蛋白表达均降低,细胞凋亡率和p-mTOR蛋白表达均增加(P<0.01);和高糖组相比,当归芍药散含药血清组、自噬激动组、AMPK激动剂组的细胞活力和Beclin-1/LC3Ⅱ/p-AMPK蛋白表达均提高,细胞凋亡率和p-mTOR蛋白表达均降低(P<0.01);与高糖组相比,自噬抑制剂组、AMPK抑制剂组足细胞的细胞活力和Beclin-1/LC3Ⅱ/p-AMPK蛋白表达均降低,细胞凋亡率和p-mTOR蛋白表达均增加(P<0.01)。结论:当归芍药散可以通过AMPK/mTOR通路激活自噬改善高糖诱导的足细胞损伤。     

人参多糖通过cAMP/PKA/CREB信号通路抗糖尿病肾病肾纤维化作用机制研究

目的探讨人参多糖对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病肾病(DN)模型小鼠肾纤维化的治疗作用,并揭示其可能的作用机制。方法 STZ(120 mg·kg~(-1))尾静脉注射构建糖尿病小鼠模型,并随机分为模型组、人参多糖(25、50、100 mg·kg~(-1))组、空白组,连续灌胃给药12周。12周末,比较各组小鼠空腹血糖(FBG)、24 h尿微量白蛋白(mAlb)、血清肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)含量变化;肾脏Masson染色观察肾脏病理学变化;免疫组织化学法检测肾皮质中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;放射免疫分析法检测肾皮质中环磷酸腺苷(c AMP)含量;Western blot检测肾皮质中细胞外基质及信号通路PKA/CREB相关蛋白的表达。结果人参多糖能够明显降低DN小鼠FBG、mAlb、Scr、BUN含量,并通过抑制cAMP/PKA/CREB信号通路的激活,降低肾小管上皮细胞表型转化蛋白α-SMA及细胞外基质相关蛋白LN、FN的表达,延缓肾纤维化的进程。结论人参多糖对DN小鼠肾纤维化具有明显的抑制作用,其机制可能与其抑制c AMP/PKA/CREB信号通路的激活有关。     

芍药苷调控环磷酸腺苷 /蛋白激酶 A/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白通路对脑卒中大鼠的影响

目的探讨芍药苷调控环磷酸腺苷( cAMP)/蛋白激酶 A(PKA)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白( CREB)通路对脑卒中大鼠的影响。方法该研究起止时间为 2019年 12月至 2020年 12月。 40只 SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、药苷组(灌胃 30 mg/kg芍药苷)、 H89组［腹腔注射 1 mg/kg H89(PKA抑制剂)］、芍药苷 +H89组(灌胃芍药苷后腹腔注射 H89)芍,除假手术组仅进行动脉分离,其余各组均构建缺血性脑卒中模型,模型构建成功后进行药物干预,持续给药 2周,模型组、假手术组以生理盐水代替。根据 Zea Longa评分法对各组大鼠进行神经功能缺损评分, Morris水迷宫测定大鼠记忆行为学能力,酶联免疫吸附测定( ELISA)试剂盒检测大鼠血清炎性因子水平,苏木精 -伊红( HE)染色观察大鼠脑组织病理学变化,蛋白质印迹法检测大鼠脑组织 cAMP/PKA/CREB通路相关蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组脑组织受损严重,大鼠神经功能缺损评分、血清中炎性因子水平显著升高( P<0.05)记忆行为学能力、脑组织中 cAMP［( 0.31±0.05)比( 1.03±0.23)］、 PKA［( 0.30±     

胡黄连苷Ⅱ调节cAMP/PKA信号轴对脊髓损伤大鼠神经功能恢复的影响

目的 探讨胡黄连苷Ⅱ(PicrosideⅡ,PⅡ)对脊髓损伤(spinal cord injury, SCI)大鼠神经功能恢复的影响及对环磷酸腺苷(cAMP)-蛋白激酶A(PKA)信号通路的调节作用。方法 建立SCI大鼠模型,大鼠分为正常组(CT组)、SCI模型组(SCI组)、PⅡ低剂量组(PⅡL组,5 mg·kg^-1·d^-1)、PⅡ高剂量组(PⅡH组,20 mg·kg^-1·d^-1)和PⅡ高剂量+PKA抑制剂组(PⅡH+H-89组,20 mg·kg^-1·d^-1 PⅡ+5 mg·kg^-1·d^-1),每组18只。Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分评价SCI大鼠运动功能,HE染色评价脊髓组织病理学特征,劳克坚牢蓝(LFB)染色观察脱髓鞘情况,免疫荧光检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、离子钙结合适配器分子-1(IBA-1)表达,ELISA检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、环腺苷酸(...     

当归芍药散含药血清对ET-1诱导的HSC-T6细胞收缩的影响

目的:通过体外实验研究当归芍药散含药血清对ET-1诱导的肝星状细胞(HSC-T6细胞)收缩的作用。方法:采用FITC-鬼笔环肽细胞骨架染色方法观察HSC-T6细胞肌动蛋白丝变化的数量;采用I型鼠尾胶原法观察HSC-T6细胞收缩的影响。结果:当归芍药散含药血清各剂量组能有效抑制肌动蛋白丝数量增多;在第24 h,模型组(ET-1)的胶原凝胶面积明显缩小(P<0.01);当归芍药散含药血清各剂量组可以不同程度地抑制ET-1(10 nmol/L)引起的HSC-T6细胞胶原凝胶收缩(P<0.05)。结论:当归芍药散含药血清可以抑制ET-1诱导的HSCs收缩。     

当归芍药散对抗结核药物致大鼠肝损伤的保护作用及其机制研究

目的探讨当归芍药散水提取物对抗结核药物肝损伤的保护作用及其机制。方法将60只SD大鼠随机分为6组,即对照组、模型组、硫普罗宁组(60 mg/kg)和当归芍药散水提取物低、中、高剂量(8、16、32 g/kg)组,给药8周。分别测定大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平及血清和肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;采用RT-PCR方法测定大鼠肝脏肿瘤坏死因子-α(TNF-α)m RNA表达水平;利用Western Blotting法测定大鼠肝脏TNF-α蛋白表达水平。结果与模型组比较,当归芍药散水提取物中、高剂量组均显著降低血清ALT、AST水平,上调血清和肝脏SOD活性,下调血清和肝脏MDA水平,并降低肝脏TNF-αm RNA和蛋白表达水平。结论当归芍药散水提取物对抗结核药物肝损伤的保护作用机制可能与抑制TNF-α表达和脂质过氧化有关。     

补锌对PKA/CREB信号通路及边缘锌缺乏小鼠生精功能的影响CSCD

目的探讨补锌对蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP-response element binding protein,CREB)(PKA/CREB)通路及边缘锌缺乏(marginal zinc dificiency,MZD)雄性小鼠生精功能的影响。方法75只4周龄SPF级ICR雄性小鼠随机分为对照组(饲料锌含量为30 mg/kg)、MZD组(饲料锌含量为10 mg/kg)和低(MZD+ZnY2,饲料锌10 mg/kg+补锌2 mg/kg·bw)、中(MZD+ZnY4,饲料锌10 mg/kg+补锌4 mg/kg·bw)、高(MZD+ZnY8,饲料锌10 mg/kg+补锌8 mg/kg·bw)剂量组,每天1次灌胃补锌。35 d后,检测精子质量、锌含量、血清性激素水平、以及CREB、PKA和激素合成相关基因StAR、3β-HSD、P450scc和CYP17A1 mRNA相对表达水平。结果各实验组小鼠间体重和饮水、摄食量差异无统计学意义。与对照组比较,MZD组精子存活率、低渗肿胀率、血清锌和T含量均降低,精子畸形率升高;CREB、PKA以及StAR、3β-HSD、P450scc mRNA相对表达量降低(P<0.05)。与MZD组比较,MZD+ZnY 4和MZD+ZnY 8组精子存活率,低渗肿胀率均明显回升,精子畸形率降低(P<0.05);MZD+ZnY8组血清锌水平明显回升(P<0.05);MZD+ZnY2组3β-HSD、CREB mRNA以及MZD+ZnY4组3β-HSD、P450scc mRNA相对表达量均明显回升(P<0.05)。结论锌可通过PKA/CREB信号通路调控性激素水平影响雄性小鼠生精功能;适量补锌能综合改善MZD小鼠精子质量。     

加味当归芍药散抑制组蛋白乙酰化酶p300/血清环加氧酶-2通路调控核因子E2相关因子2在黄褐斑形成中的作用机制研究

目的探讨加味当归芍药散抑制组蛋白乙酰化酶p300(p300HAT)/血清环加氧酶-2(COX-2)通路调控核因子E2相关因子2(Nrf2)在黄褐斑形成中的作用机制。方法健康人表皮黑素细胞及30只雌性小鼠纳入研究,采用不同浓度加味当归芍药散处理健康人表皮黑素细胞,肌肉注射黄体酮及紫外线照射建立黄褐斑小鼠模型,将小鼠随机分为空白组、低剂量组及高剂量组各10只,分别给予常规剂量0.9%氯化钠注射液、低剂量及高剂量加味当归芍药散处理,检测不同浓度处理下细胞活力、细胞黑素含量及细胞中p300HAT、COX-2及Nrf2的RNA及蛋白表达量,同时检测治疗前后3组小鼠皮肤及肝脏的p300HAT、COX-2及Nrf2的RNA、蛋白质表达量。结果加味当归芍药散浓度为1.0mg/mL时健康人表皮黑素细胞活力较对照组明显低,差异有统计学意义(P<0.05);加味当归芍药散处理的健康人表皮黑素细胞p300HAT、COX-2的RNA及蛋白表达量和黑素相对含量较对照组明显低,Nrf2的RNA及蛋白表达量较对照组明显高,且随着加味当归芍药散浓度增加,健康人表皮黑素细胞p300HAT、COX-2、Nrf2的RNA及蛋白表达量降低、升高越明显,健康人表皮黑素细胞黑素相对含量降低越明显,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后仅低剂量、高剂量组p300HAT、COX-2的RNA、蛋白表达量较治疗前明显降低,Nrf2的RNA、蛋白表达量明显升高,且治疗后高剂量组各项指标变化较低剂量组明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结论加味当归芍药散治疗黄褐斑的机制可能与其抑制p300HAT/COX-2通路调控Nrf2表达有关。     

苦参碱对阿霉素所致H9c2心肌细胞损伤的保护作用及与线粒体Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶关系的研究

目的：研究苦参碱对阿霉素所致H9c2心肌细胞损伤的保护作用及其机制。方法：将H9c2心肌细胞培养,取2~3代细胞进行试验,共分为4组。对照组：接受生理盐水作为干预因素;阿霉素组：接受0.5 mg·L^-1阿霉素作为损伤模型;苦参碱+阿霉素组：接受0.5 mg·L^-1阿霉素和不同浓度苦参碱（50,150,200 mg·L^-1）作为干预因素;苦参碱组：接受不同浓度苦参碱（50,150,200 mg·L^-1）作为干预因素。以上各组相应干预24 h后,应用流式细胞仪检测H9c2心肌细胞凋亡水平,应用分光光度法检测线粒体Na⁺-K⁺-ATP酶、Ca²⁺-ATP酶活性,利用JC-1法检测线粒体膜电位。结果：与阿霉素组相比,苦参碱+阿霉素组H9c2心肌细胞凋亡显著减少、线粒体Na⁺-K⁺-ATP酶、Ca²⁺-ATP酶活性显著升高（P<0.05）、线粒体膜电位显著改善。结论：苦参碱对阿霉素所致H9c2心肌细胞有保护作用,减轻心肌细胞凋亡,改善线粒体膜电位、提高线粒体Na⁺-K⁺-ATP酶、Ca²⁺-ATP酶活性。     

Constitutive activity of H3 autoreceptors modulates histamine synthesis in rat brain through the cAMP/PKA pathway

We previously described that agonist-activated histamine H3 autoreceptors inhibit the stimulation of histamine synthesis mediated by calcium/calmodulin- and cAMP-dependent protein kinases (CaMKII and PKA respectively) in histaminergic nerve endings. In the absence of an agonist H3 receptors show partial constitutive activity, so we hypothesized that suppression of constitutive activity by an inverse agonist could stimulate these transduction pathways. We show here that the H3 inverse agonist thioperamide increases histamine synthesis in rat brain cortical slices independently from the amounts of extracellular histamine. Thioperamide effects were mimicked by the inverse agonists clobenpropit and A-331440, but not by the neutral antagonist VUF-5681. In contrast, coincubation with VUF-5681 suppressed thioperamide effects. The effects of thioperamide were completely blocked by the PKA inhibitor peptide myristoyl-PKI14-22, a peptide that did not block depolarization stimulation of histamine synthesis. In addition, thioperamide effects required depolarization and were impaired by blockade of N-type calcium channels (mediating depolarization), but not by CaMKII inhibition. These results indicate that constitutive activity of H3 receptors in rat brain cortex inhibits the adenylate cyclase/PKA pathway, and perhaps also the opening of N-type voltage sensitive calcium channels, but apparently not CaMKII.     

高糖致大鼠视网膜神经细胞凋亡的PI3K-AKT通路机制及PKA/PKC的调控作用研究

目的对高糖致大鼠视网膜神经细胞凋亡的磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶(PI3K-AKT)通路机制及PKA/PKC的调控作用进行研究,为相关疾病治疗提供参考。方法细胞随机分为4组:对照组、高糖组、蛋白激酶A(PKA)抑制剂H89组和蛋白激酶C(PKC)抑制剂H7组(n=9)。除对照组外,其余各组细胞给予10 mmol·L~(-1)高糖溶液处理6 h,PKA抑制剂H89组和PKC抑制剂H7组细胞分别于最后4 h加入H89(10 mmol·L~(-1))和H7(10 mmol·L~(-1)),共培养,免疫印迹法或免疫细胞化学法分析细胞凋亡状态及PI3K-AKT和结缔组织生长因子(CTGF)的表达。结果高糖组细胞发生明显的细胞凋亡,且PI3K-AKT和CTGF的表达明显增强,而PKA抑制剂H89组上述异常显著恢复(P<0.05)。结论激活的PI3K-AKT通路及CTGF参与了高糖诱导的视网膜神经细胞凋亡过程,且其是由PKA调控的。     

cAMP/PKA信号通路在肾上腺肿瘤中的作用

目的：探讨cAMP/PKA信号通路在肾上腺肿瘤中的作用。方法将人肾上腺肿瘤H295R细胞随机分为对照组、实验组A及实验组B,对照组不进行处理,实验组A加入cAMP衍生物db-cAMP,实验组B加入db-cAMP及cAMP/PKA信号通路抑制剂H-89,分别检测细胞PKA活性;应用Western Blot方法检测cAMP/PKA信号通路下游CREB蛋白的磷酸化水平;CCK8实验检测细胞72 h的增殖水平;糖皮质激素分泌实验检测3组H295R的激素分泌能力。结果实验组A的PKA活性水平、CREB蛋白的磷酸化水平、细胞增殖水平、糖皮质激素分泌水平均较对照组和实验组B显著升高(P<0．05);而实验组B与对照组比较差异无统计学意义(P<0．05)。结论 cAMP/PKA信号通路的异常活化能够促进肾上腺肿瘤的形成与功能的发挥。     

基于ROS/PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨玫瑰花甲醇提取物对前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响

目的：探讨玫瑰花甲醇提取物（RE）对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响及潜在作用机制。方法：采用CCK8法检测不同浓度RE对PC-3细胞增殖的影响;采用Hoechst染色法和Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;DCFH-DA检测细胞ROS水平;Western blot法检测Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3、Cyt-C、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR的蛋白表达。结果：RE呈浓度依赖性抑制前列腺癌PC-3细胞增殖,24 h和48 h后的IC₅₀值分别为31.30 mg·mL^-1和16.76 mg·mL^-1;RE能显著诱导PC-3细胞凋亡（P<0.05,P<0.01）,且呈现浓度依赖性;RE可显著提高PC-3细胞ROS水平（P<0.05,P<0.01）,且具有浓度依赖性;RE能显著上调PC-3细胞Bax、cleaved caspase-3、Cyt-C的蛋白表达及Bax/Bcl-2的比值（P<0.05,P<0.01）,显著下调Bcl-2、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR的蛋白表达（P<0.05,P<0.01）,以上均呈现浓度依赖性。结论：本研究表明RE在体外有明显抑制前列腺癌细胞PC-3的增殖作用,并可能通过调控ROS/PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导其凋亡,研究结果可为玫瑰花及其组方临床治疗前列腺癌提供实验依据。     

Splitomicin inhibits fMLP-induced superoxide anion production in human neutrophils by activate cAMP/PKA signaling inhibition of ERK pathway

Splitomicin, is a cell-permeable lactone derived from naphthol and known to be a potent selective inhibitor of Sir2 (silent information regulator 2). Previous studies have demonstrated that naphtholic compounds possess an inhibitory effect on neutrophils. Here, we present our investigation on the inhibitory effects of splitomicin in human neutrophils. The primary goal of our study was to locate a possible candidate on inflammatory reactions and to hopefully develop a novel anti-inflammatory therapy. Neutrophils were prepared following standard procedures. Neutrophils induced by either fMLP (1 μM) or PMA (100 nM) were observed using a flow cytometer and the intracellular production of superoxide anions was investigated at different splitomicin concentrations. The cytosolic Ca(++) influx concentration was measured using a fluorescence spectrophotometer, and Mac-1 expression was detected with a flow cytometer. The MAP kinases were measured using western blotting. Our results showed that splitomicin inhibited superoxide anion production by fMLP (1 μM) and NaF (20mM) in a concentration-dependent manner (37.5-450 μM). Splitomicin (300 and 450 μM) also suppressed fMLP-induced intracellular calcium ion mobilization and extracellular-signal regulated kinase (ERK) phosphorylation. Moreover, splitomicin could inhibit fMLP-induced Mac-1 expression and increase cAMP levels in human neutrophils. Our data demonstrated that splitomicin exhibits a noticeable inhibitory effect on superoxide anion production in human neutrophils. This negative effect was well-correlated with increased cAMP levels via PKA activity and the subsequent inhibition of ERK (p42/p44) phosphorylation to decrease superoxide anion production.     

Pomegranate peel extract polyphenols induced apoptosis in human hepatoma cells by mitochondrial pathway

This study was aimed to investigate the influence of pomegranate peel polyphenols (PPPs) on the proliferation and apoptosis of HepG2 cells (a kind of human hepatoma cells) and the related mechanism. The inverted fluorescence microscope and the flow cytometer (FCM) were used to test the changes of the cellular morphology, cell cycle, apoptosis, reactive oxygen species (ROS) and mitochondrial transmembrane potential (Δψm). The kit was used to measure the activities of caspase-3/9, and Western Blot was used to detect the expressions of apoptosis-associated proteins including p53, Bcl-2/Bax, Cyt-c and PARP. The results showed that the cells cycle of HepG2 arrested at the S-phase by PPPs and the amount of the early apoptotic cells and ROS level were increased obviously, the level of Cyt-c and the activity of Caspase-3/9 markedly were also increased by PPPs, as well as the ratio of Bax/Bcl-2 and the protein expressions of P53. It was concluded that PPPs could inhibit the growth of HepG2 cells by blocking the cell cycle and inducing the mitochondrial apoptotic pathway in a dose-dependent manner.