不同侵袭潜能卵巢癌细胞系蛋白质谱的比较

目的探讨与卵巢癌侵袭潜能相关的蛋白质。方法将卵巢癌细胞系SKOV-3在裸鼠体内多次传代,体外培养建系,结合体外黏附、侵袭、移动实验,筛选不同侵袭潜能的细胞亚系,用表面增强激光解吸电离-飞行时间-质谱技术检测其蛋白质谱。结果SKOV-3F3细胞亚系较其母系SKOV-3侵袭潜能更高。有6个差异蛋白质峰(质荷比M/Z分别为6249、14675、15425、15717、17123和17660)仅在SKOV-3中表达,3个差异蛋白质峰(M/Z分别为4355、4823和5763)仅在SKOV-3F3中表达,2个差异蛋白质峰(M/Z分别为1842和3145)可在SKOV-3的3代亚系中捕获。此外,5个差异蛋白质峰(M/Z分别为1242、5465、6899、6568和14027)和1组蛋白质谱峰簇在SKOV-3和其3代亚系中均可表达,但强度不同。结论体内传代结合体外实验可筛选出不同侵袭潜能的卵巢癌细胞,它们之间的差异蛋白与侵袭潜能密切相关。     

不同方式诱导卵巢癌紫杉醇耐药细胞系的比较

目的通过不同诱导方式建立紫杉醇耐药的卵巢癌细胞系,探讨耐药机制。方法分别采用紫杉醇大剂量诱导法和小剂量间歇诱导法诱导卵巢癌细胞系SKOV3,建立卵巢癌紫杉醇耐药细胞系SKOV3/Taxol-P和SKOV3/Taxol-25。倒置显微镜进行形态学观察;细胞计数观测生长增殖规律;MTT法检测IC50和RI;流式细胞仪检测细胞周期分布;RT-PCR法检测耐药相关基因MDR1、MRP1、LRP1、GST-π等mRNA的表达。结果SKOV3/Taxol-P和SKOV3/Taxol-25的耐药指数分别为261.98±32.89和622.76±71.37,均伴有细胞形态、生长增殖、细胞周期的改变。SKOV3/Taxol-25的MDR1、LRP1表达增强,MRP1、GST-π表达均下调;SKOV3/Taxol-P中4种基因表达无改变。结论不同方式诱导的细胞系存在着差异。紫杉醇耐药涉及多个耐药基因和因素的变化。间歇诱导方式更易产生耐药。     

不同方式诱导卵巢癌顺铂耐药细胞系的比较

目的用不同诱导方式建立卵巢癌顺铂耐药细胞系,探讨耐药机制。方法分别采用顺铂大剂量诱导法和小剂量间歇诱导法诱导卵巢癌细胞系SKOV3,建立卵巢癌顺铂耐药细胞系SKOV3/CDDP-P和SKOV3/CDDP-80。倒置显微镜进行形态学观察;细胞计数观测生长增殖规律;MTT法检测IC50和RI;流式细胞仪检测细胞周期分布;RT-PCR法检测耐药相关基因,包括MDR1、MRP1、LRP1、GST-π等mRNA的表达。结果SKOV3/CDDP-P和SK-OV3/CDDP-80的耐药指数分别为4.12±2.01和11.50±3.15,均伴有细胞形态、生长增殖、细胞周期的改变;SK-OV3/CDDP-P的MDR1表达增强,MRP1、LRP1表达均下调;SKOV3/CDDP-80除MDR1表达上调外,其余三种基因表达无改变。结论不同方式诱导的细胞系存在着差异,顺铂耐药涉及多个耐药基因、因素的变化,间歇诱导方式更易产生耐药。     

小鼠囊胚与不同侵袭转移潜能肝癌细胞系共培养模型的建立及生物学行为观察

目的: 探讨两种生命形式细胞-囊胚细胞和肝癌细胞在体外相同微环境下的相互作用及整体生物学行为变化。方法: 建立小鼠囊胚与人肝癌细胞共培养模型,观察两种生命形式细胞在共培养系统中的生物学行为及相互影响。结果: 与对照组相比,不同侵袭转移潜能的肝癌细胞显著提高囊胚的脱带率、贴附率和扩展率(P＜0.05),但肝癌细胞各组之间无显著差异(P＞ 0.05)。囊胚细胞能在不同侵袭转移潜能的肝癌细胞上进行脱带、粘附,分化的滋养层细胞能侵袭肝癌细胞并在两者之间形成清楚的边界。界面上的肝癌细胞有生长方向和细胞形状的改变且不能侵袭囊胚细胞。结论: 肝癌细胞能促进囊胚的发育。囊胚细胞能植入和侵袭肝癌细胞,表明囊胚细胞在体外植入与相作用细胞的种属和分化水平无关,这种低选择性可能与早期生命高适应性有关。     

不同转移潜能鼻咽癌细胞株的差异膜蛋白质组研究

目的:采用定量蛋白质组学技术筛选鼻咽癌转移相关的膜蛋白质。方法:在富集高转移鼻咽癌细胞株5–8F和不转移鼻咽癌细胞株6–10B膜蛋白质的基础上,采用稳定同位素18O标记结合串联质谱技术比较两株细胞膜蛋白质组的差异,采用Western印迹对差异表达膜蛋白质EphA2的表达水平进行验证,采用生物信息学方法对差异蛋白质进行GO(gene oncology)功能聚类和全基因组及代谢途径数据库(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)信号通路分析。结果:鉴定了31个5–8F与6–10B细胞的差异膜蛋白,其中25个蛋白质在5–8F中表达上调、6个蛋白质表达下调,Western印迹技术验证了差异膜蛋白质EphA2的表达。生物信息分析显示,差异膜蛋白的功能主要涉及细胞黏附、受体再循环和细胞连接等生物学过程,并参与了14个KEGG通路,其中许多通路涉及细胞黏附、细胞连接以及细胞运动。结论:31个差异膜蛋白质可能在鼻咽癌转移过程中发挥重要作用,为进一步研究鼻咽癌转移的分子机制提供了新线索。     

不同转移潜能的人体横纹肌肉瘤细胞系细胞间通讯的研究

目的：研究细胞间通讯功能在3种不同转移潜能的人体横纹肌肉瘤细胞系间及其与培养的正常人肌母细胞的差别及其意义。方法：采用间接免疫荧光法,用激光扫描共聚焦显微镜定量测定与细胞间通讯有关的间隙连接蛋白（connexin43,CX43)的含量,并用荧光漂白后恢复技术检测间隙连接介导的细胞间通讯的功能。结果：CX43在正常肌母细胞中呈高表达,主要定位于细胞膜,有时定位于胞质,而在横纹肌肉瘤中表达下降;CX43阳性率及荧光强度均随着横纹肌肉瘤转移潜能的增加而降低（P＜0．05）,荧光漂白后恢复技术结果显示横纹肌肉瘤细胞荧光漂白后恢复率下降而且与横纹肌肉瘤细胞的转移潜能呈负相关（P＜0．05）,结论：不同程度细胞间通讯细胞的抑制可能与横纹肌肉瘤的转移潜能不同有关,其有可能成为判断横纹肌肉瘤恶性程度及预后的指标之一。     

人鼻咽癌细胞系CNE2分泌蛋白质谱的初步建立

目的：建立鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）细胞系CNE2细胞的分泌蛋白质谱。方法：采用无血清培养法培养CNE2细胞,超滤法脱盐并浓缩细胞培养上清制备分泌蛋白质,采用双向凝胶电泳技术（two-dimensional electrophoresis,2-DE)分离蛋白质,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS)鉴定蛋白质,利用生物信息学资源对所鉴定的蛋白质的功能和亚细胞定位进行分析。结果：建立了CNE2细胞分泌蛋白质的2-DE图谱,鉴定了52种非冗余的CNE2细胞分泌蛋白质,并对52种蛋白质按功能和亚细胞分布进行了初步分类。结论：初步建立CNE2细胞的分泌蛋白质谱,为研究鼻咽癌分泌蛋白质在鼻咽癌发生发展中的作用提供了有意义的资料。     

过表达内质网蛋白29抑制人卵巢癌细胞系OVCAR3侵袭和迁移

目的 探究内质网蛋白29(ERP29)过表达对人卵巢癌细胞系OVCAR3的侵袭、迁移能力的影响及机制.方法 取对数增殖期OVCAR3细胞系,分为过表达组、空载组及对照组.过表达组用脂质体转染法转染ERP29过表达RNA重组真核载体pcDNA3.1-ERP29质粒,空载组转染阴性对照载体pcDNA3.1质粒,对照组不做处...     

新基因NOR1对肝癌细胞系HepG2蛋白质表达谱的影响

目的:研究NOR1基因对肝癌细胞系HepG2蛋白质表达谱的影响.方法:将pcDNA3.1( )/ NOR1的表达质粒经脂质体导入HepG2 细胞,Northern blot筛选出阳性克隆,通过双向电泳分离过表达NOR1的HepG2细胞内蛋白质,筛选出差异表达的蛋白质点,并进行质谱分析鉴定.结果:鉴定出6种表达上调的蛋白质点,包括锌指蛋白、肿瘤坏死因子受体、酪氨酸蛋白磷酸化受体等,这些蛋白质涉及基因转录、信号转导等肿瘤发生相关事件.结论:NOR1基因可能通过上调这些蛋白参与多种途径影响肝癌的发生发展.     

体外培养的不同亚型上皮性卵巢癌细胞系差异蛋白的分析

目的分析体外培养的不同亚型上皮性卵巢癌细胞系蛋白质表达差异,筛选卵巢癌的肿瘤标志物.方法提取体外培养的不同亚型上皮性卵巢癌细胞系（OVCAR-3、SKOV-3、3AO和TOV-112D）与原代培养的正常卵巢生发上皮细胞（OGE）的总蛋白,采用表面增强激光解吸离子化（SELDI）蛋白质芯片技术的H4和SAX2两种蛋白芯片检测其蛋白质谱,最后利用蛋白芯片阅读机（PBS-Ⅱ型）读取数据,获得的数据采用Ciphergen Proteinchip 3.0.2版本的软件分析.结果4种亚型的上皮性卵巢癌细胞系与正常卵巢生发上皮细胞比较,有16个蛋白发生明显改变,其中7个蛋白表达降低,9个蛋白表达升高.此外,不同亚型的上皮性卵巢癌细胞之间也有很多差异蛋白,尤其是OVCAR-3、SKOV-3和3AO三者与TOV-112D之间有18个蛋白仅在前3种癌细胞中表达,16个蛋白仅在后者表达.结论不同亚型上皮性卵巢癌细胞与正常卵巢生发上皮细胞的蛋白质谱相比较有共同的差异蛋白,同时不同亚型的上皮性卵巢癌细胞之间的蛋白质谱表达也有差别.     

Snail在卵巢癌细胞侵袭转移潜能方面研究

目的研究Snail与卵巢癌侵袭转移问的关系,并探讨其分子机制。方法分别构建正义全长Snail真核表达载体和小分子干扰RNA,分别转染卵巢癌细胞系A2780、C13＊。采用Western印迹方法分析相关蛋白表达,Transwell试验检测细胞侵袭转移能力。结果①成功构建Snail正义全长真核表达载体,并合成Snail小分子RNA干扰片段;②在转染PEGFPCI／Snail的卵巢癌细胞株A2780、C13＊中E-eadhefin表达明显下调,Snail和Vimentin则表达上调;而在转染Snail／SiRNA的卵巢癌细胞株A2780、C13‘中E—cadherin表达明显上调,Snail和Vimentin则表达下调;③Snail过表达可显著促进卵巢癌细胞株A2780、C13＊的侵袭转移潜能;封闭Snail表达水平可一定水平抑制卵巢癌细胞株A2780、C13＊的侵袭转移潜能。结论snail可通过促进卵巢癌上皮细胞间质化转变（epithelial—mesenchymaltransition,EMT）而提高其侵袭转移能力;封闭Snail表达可一定程度逆转卵巢癌上皮细胞间质化转变（EMT）而抑制其侵袭转移能力。     

SIRT2在浆液性卵巢癌细胞系中的表达及其对增殖、迁移和侵袭的影响

目的:研究SIRT2在卵巢表层上皮(ovarian surface epithelium,OSE)及浆液性卵巢癌(serous ovarian carcinoma,SOC)细胞系中的表达情况并从细胞增殖、迁移和侵袭这3个方面探讨SIRT2对SOC恶性生物学行为的影响。方法:运用Western blot技术检测OSE和SOC细胞系中SIRT2蛋白的表达水平;设计靶向SIRT2的siRNA,构建SIRT2过表达载体,分别瞬时转染OSE细胞系HOSEpi C和SOC细胞系HO8910,平板克隆形成实验和CCK-8实验研究SIRT2对细胞生长的影响;细胞划痕实验考察SIRT2在SOC细胞迁移中的作用;Transwell实验研究SIRT2对SOC细胞侵袭能力的影响。结果:5株SOC细胞系中SIRT2的表达水平显著低于OSE细胞系。在HOSEpi C细胞中沉默SIRT2,细胞克隆形成数增多,细胞活力增强。相反,在HO8910细胞中过表达SIRT2,细胞克隆形成数减少,细胞活力降低。沉默SIRT2促进HOSEpi C细胞的迁移,而过表达SIRT2则抑制HO8910细胞的迁移。沉默SIRT2的HOSEpi C细胞侵袭能力明显增加,而过表达SIRT2的HO8910细胞侵袭能力则显著降低。结论:SIRT2在SOC细胞中表达显著下调。SIRT2在OSE细胞中是肿瘤抑制蛋白,抑制细胞增殖、迁移和侵袭。     

罗勒多糖抗卵巢癌侵袭转移的体外实验研究

目的： 探讨罗勒多糖抗卵巢癌侵袭转移的作用机制及其肿瘤乏氧微环境对其效应的影响,为临床应用研究提供依据。方法：罗勒多糖分别在常氧（21%O2、5%CO2）和乏氧（1%O2、5%CO2和94%N2）环境中作用于人卵巢癌SKOV3细胞,形态学观察不同氧环境下各组细胞形态差异;Transwell小室实验检测各组细胞的侵袭运动能力;明胶酶谱法分析各组细胞分泌的基质金属蛋白酶-2（MMP-2）活性差异;RT-PCR技术检测骨桥蛋白（OPN）mRNA表达水平;免疫细胞化学法观察各组细胞胞内OPN表达情况。结果：与对照组相比,罗勒多糖在常氧和乏氧环境下都能够降低SKOV3细胞的侵袭运动能力,抑制细胞中MMP-2的分泌,抑制人卵巢癌SKOV3细胞中OPN的表达（转录水平、蛋白水平）,且乏氧环境下罗勒多糖的上述作用更为显著。结论：低氧显著增强人卵巢癌SKOV3细胞的迁移能力,罗勒多糖可能通过下调骨桥蛋白表达及基质金属蛋白酶-2的分泌,抑制其侵袭运动能力。     

miR-767-5p通过调控TBL1XR1蛋白表达抑制人卵巢癌细胞系侵袭

目的 探索miR-767-5p和转导素β1X连锁受体蛋白1(TBL1XR1)对卵巢癌进展的影响以及作用机制。方法 数据库分析：使用GEO、miRPATH数据库和RStudio对miR-767-5p进行KEGG(京都百科全书)富集分析,并在GEO数据集低表达和高表达microRNA中各选择差异表达倍数TOP5的microRNAs,按照差异倍数由低到高排列;miRDB等数据库预测miR-767-5p可结合的靶基因并取交集,结合Open Target Platform、GEPIA等数据库筛选出目的基因;GEPIA、THPA数据库分析TBL1XR1在人体各器官表达量分析、免疫组化分析以及生存曲线分析。实验验证：双荧光素酶报告基因实验验证miR-767-5p和TBL1XR1存在结合靶点;Western blot检测卵巢癌细胞系(OC3、SKOV-3、HO-8910)和正常卵巢上皮细胞系(IOSE80)中TBL1XR1的表达;在SKOV-3细胞中转入miR-767-5p过表达质粒与TBL1XR1过表达质粒后,Western blot检测TBL1XR1表达量,Tanswell小室法检测细胞侵袭。结果...     

雄激素对人卵巢癌细胞系雄激素受体的影响

本文以卵巢浆液性囊腺癌细胞系为模型，氚标记的人工合成的雄激素＾３Ｈ－Ｒ１８８１为配体，采用完整细胞受体测定法，证实ＨＯ－８９１０细胞存在＾３Ｈ－Ｒ１８８１特异结合位点，这些位点与＾３Ｈ－Ｒ１８８１特异结合有饱合现象，在Ｓｃａｔｃｈａｒｄ作图上成一直线。     

来自4例卵巢癌细胞系的细胞遗传学所见

用细胞遗传学方法检查了6个来源于4例原发卵巢癌的细胞系。这些细胞系都用RPMI1640培养基和营养素维持。用标准细胞遗传学技术进行气干法制片,但秋水仙素作用时间在20分钟至30分钟之间,低渗液为1%的柠檬酸盐。制片后于37℃放置两周再进行GTG和C显带。通过染色体计数发现6个细胞系均为非整倍体,但其中1个细胞系含有两个群体,分别具有假二倍体和假四倍     

内皮抑素对人卵巢癌细胞系生长的抑制作用

目的探讨人内皮抑素对人卵巢癌SKOV3细胞生长的抑制作用及其作用机制。方法MTT法检测细胞生长;透射电镜观察细胞凋亡;免疫细胞化学、RT-PCR及Western blot法检测细胞中BCL-2和BAX蛋白及mRNA的表达。结果内皮抑素抑制SKOV3细胞增殖(P<0.01);能诱导SKOV3细胞凋亡;而对细胞中BCL-2和BAX蛋白及mRNA的表达无明显影响。结论人内皮抑素具有抑制卵巢癌细胞SKOV3生长的作用,其作用机制可能与诱发细胞凋亡相关。     

大鼠肝癌细胞系N1不同途径造模及比较

目的观察大鼠肝癌细胞系N1经肝、脾原位接种后肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的发生与转移等情况,比较及筛选适宜的HCC N1发生及肺转移动物模型。方法 N1细胞进行体外培养。24只8周龄雌性BALB/c A裸鼠随机分为2组(12只/组)并分别进行N1的肝、脾原位接种,观察并比较两组间小鼠的存活率,肝、脾成瘤及肝、肺转移率等肿瘤生物及病理学特征。结果 N1细胞肝原位接种组肝成瘤率为100%,肿瘤呈结节状生长,与腹壁及周围组织有不同程度的粘连侵袭,肺及肺门淋巴结转移率分别为44%和22%,未见脾转移。N1细胞脾原位接种组脾成瘤率为64%,肝转移率为91%,肿瘤呈结节状生长,与腹壁及周围组织亦有不同程度的侵袭粘连,肺及肺门淋巴结转移率均为18%。结论 N1细胞肝、脾原位接种均易成瘤,是良好的HCC发生、发展及相关干预的动物模型,其中,肝原位接种鼠可能更适合于HCC发生与肺转移机制及药物干预等研究。