癫痫大鼠海马CA3区凋亡相关蛋白表达及意义

目的探讨癫痫大鼠神经元凋亡的分子机制。方法将SD大鼠分为观察组36只和对照组12只,观察组腹腔注射海人藻酸（KA）制作癫痫模型,对照组腹腔注射等量生理盐水。制模3、6、12h及1、3d采用免疫印迹法检测两组海马CA3区凋亡相关蛋白p-c-Jun、FasL、Bax、Bcl-2的表达;制模7d后采用TUNEL染色法检测CA3区神经元凋亡情况。结果制模6、12h观察组胞核内c-Jun的磷酸化和表达、胞质中FasL表达均明显高于对照组（P均〈0.05）;制模6h时Bax的表达急剧增加,而Bcl-2蛋白表达却明显降低,P均〈0.05;制模7d后CA3区每1mm长度范围内TUNEL阳性细胞数为（177.0±24.7）个,对照组为（21.4±6.8）个,两组相比P〈0.05。结论c-Jun介导的核通路和Bcl-2介导的非核通路共同参与了大鼠海马神经元的凋亡过程。     

温肺降浊方对血管性痴呆大鼠海马CA1区神经元凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的观察温肺降浊方对血管性痴呆(VD)大鼠海马CA1区神经元凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨温肺降浊方对VD大鼠海马神经元的保护机制。方法取SD大鼠,采用双侧颈总动脉永久性结扎法制做VD模型大鼠,将造模成功的大鼠随机分为VD模型组,温肺降浊方低、中、高剂量组及石杉碱甲组,另设假手术组。灌胃给予相应药物治疗,连续给药30 d后,用TUNEL法检测大鼠海马CA1区神经元凋亡的情况,Western印迹检测海马组织Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果 TUNEL结果显示,温肺降浊方各组神经元凋亡指数较模型组明显降低(P<0.01)。Western印迹结果显示,温肺降浊方各组大鼠海马组织Bcl-2蛋白表达较模型组明显增加(P<0.01),Bax蛋白表达较模型组明显减少(P<0.01)。结论温肺降浊方可通过提高海马组织Bcl-2蛋白表达,降低Bax蛋白表达,减少VD模型大鼠海马CA1神经元的凋亡,保护神经元,改善VD大鼠学习记忆能力。     

三七总皂苷对老年大鼠学习能力、记忆力及海马神经元凋亡的影响研究

目的探讨三七总皂苷(PNS)对老年大鼠学习能力、记忆力及海马神经元凋亡的影响。方法选择22月龄雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠45只,随机分为低剂量组15只、高剂量组15只、老年对照组15只;另选择2月龄雌性SD大鼠15只作为青年对照组。低剂量组大鼠每天注射1次PNS,剂量为50μg/kg;高剂量组大鼠每天注射1次PNS,剂量为100μg/kg;青年对照组和老年对照组大鼠均注射等量0.9%氯化钠溶液。各组大鼠均连续注射30 d。对各组大鼠进行学习能力、记忆力测试,计算其正确反应率;采用TUNEL法检测海马CA1区神经元凋亡情况。结果青年对照组、低剂量组、高剂量组学习能力及记忆力测试正确反应率高于老年对照组,高剂量组学习能力及记忆力测试正确反应率高于低剂量组(P0.05)。青年对照组、低剂量组、高剂量组海马CA1区TUNEL阳性细胞数低于老年对照组,高剂量组海马CA1区TUNEL阳性细胞数低于低剂量组(P0.05)。结论 PNS能改善老年大鼠的学习能力和记忆力,减少海马神经元凋亡,大剂量应用时效果较好。     

塞来昔布对大鼠癫痫持续状态海马神经元凋亡及Bcl-2表达的影响

目的探讨塞来昔布对大鼠癫痫持续状态（SE）后海马神经元凋亡的影响及其可能机制。方法采用氯化锂-匹罗卡品制作大鼠癫痫持续状态模型。Wistar大鼠54只，随机分为模型组、塞来昔布组和对照组。采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）观察SE后12h、24h、72h和7d海马神经细胞凋亡的动态变化，免疫组化法观察各组海马Bcl-2的表达。结果对照组未见TUNEL阳性细胞；模型组SE后12h可见较多TUNEL阳性细胞，72h达高峰，7d减少；塞来昔布组各时间点凋亡细胞数均明显少于模型组（P〈0．01）。对照组Bcl-2有基础量的表达；模型组SE后12h观察到Bcl-2表达增多，24h减弱，72h后仅有少量表达；塞来昔布组24h后各时间点Bcl-2表达均高于模型组（P〈0．01）。结论塞来昔布可增加海马Bcl-2的表达，对癫痫发作后神经元凋亡具有保护作用。     

丙酮酸乙酯对癫痫持续状态大鼠神经元凋亡及XIAP、Caspase-3表达的影响

目的探讨丙酮酸乙酯干预对大鼠癫痫持续状态(SE)后导致神经元损伤的影响及其可能机制。方法雄性Wistar大鼠54只随机分为对照组(N组)、模型组(M组)和丙酮酸乙酯组(EP组),后两组再分为6h、12h、24h、48h亚组,每亚组6只。应用氯化锂-匹罗卡品制备SE动物模型,TUNEL法检测大鼠海马神经元凋亡,免疫组化法检测XIAP和Caspase-3蛋白的表达。结果 M组在SE后6h脑内可见TUNEL、XIAP和Caspase-3阳性细胞,TUNEL和Caspase-3表达高峰在24h;XIAP表达高峰在12h。EP组各时间点TUNEL和Caspase-3阳性细胞数较M组明显减少(除6h外,均P<0.05),而XIAP阳性细胞数则明显增加(除6h外,均P<0.05)。结论丙酮酸乙酯能够提高XIAP蛋白的表达,抑制Caspase-3蛋白的表达,对大鼠癫痫持续状态后神经元损伤具有保护作用。     

雷公藤内酯醇对AD模型大鼠海马神经细胞凋亡的影响

目的探讨雷公藤内酯醇(TP)对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马神经细胞凋亡及其相关蛋白表达的影响。方法健康雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组及用药组。模型组给予双侧海马各一次性注射凝聚态Aβ1-40,Morris水迷宫实验判断模型成功与否。对照组大鼠双侧海马注射等量生理盐水。用药组大鼠在模型制作成功后每日腹腔注射TP0.4mg/kg,共15d。应用流式细胞仪、TUNEL染色、透射电镜技术检测各组大鼠海马神经细胞凋亡的变化,免疫组织化学法检测各组大鼠海马神经细胞细胞色素C和Bcl-2蛋白表达的变化。结果用药组大鼠海马神经细胞凋亡率较模型组明显降低(P0.01),TUNEL染色阳性细胞数较模型组明显减少(P0.01);用药组大鼠海马细胞色素C阳性产物数和平均光密度均较模型组明显减少(P0.01),Bcl-2阳性细胞数和平均光密度均较模型组明显增加(P0.01)。结论 TP对AD模型大鼠海马神经细胞凋亡有抑制作用,其机制可能与TP增加AD模型大鼠海马神经细胞Bcl-2蛋白表达、减少细胞色素C的释放有关。     

质粒PLXSN介导bcl-2基因对癫痫大鼠海马神经细胞凋亡的保护作用

选择28只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、生理盐水组、空质粒组和bcl-2组.24 h后用红藻氨酸(KA)局部注射诱导癫痫模型,以TUNEL方法检测凋亡细胞在大鼠海马CA3区的表达,采用免疫组织化学方法和半定量RT-PCR技术检测bcl-2蛋白及bcl-2 mRNA的表达.结果 显示,生理盐水组与空质粒组CA3区有大量凋亡细胞,给予PLXSN-bcl-2基因后凋亡细胞数明显减少.与空质粒组比较,bcl-2组海马CA3区bcl-2阳性细胞百分比及bcl-2 mRNA表达均明显升高.认为质粒PLXSN介导bcl-2基因转入脑内,对KA致癫痫大鼠海马神经元凋亡有抑制作用,起到脑保护作用.     

血糖波动对糖尿病大鼠海马神经元凋亡的影响

目的观察糖尿病(DM)大鼠在血糖波动状态下海马神经元凋亡及Caspase-3的异常表达,探讨血糖波动对大鼠海马神经元凋亡的影响。方法用链脲佐菌素(STZ)诱导,间断短效胰岛素应用制备DM血糖波动模型。12 w后,用TUNEL法检测海马神经元的凋亡,用免疫组化法检测海马神经元凋亡蛋白Caspase-3的表达。结果 DM组大鼠海马可见少数阳性凋亡细胞表达,与对照组(NC组)相比明显增多(P<0.01);血糖波动组(RDM组)凋亡阳性细胞较DM组增多更加明显(P<0.01)。DM组大鼠海马神经元Caspase-3表达较NC组明显增强(P<0.05),RDM组Caspase-3的表达较DM组进一步增强(P<0.05)。结论 DM大鼠血糖波动可明显加速海马神经元的凋亡,Caspase-3介导的细胞凋亡机制可能参与DM大鼠海马神经元的损伤。     

长托宁对癫痫持续状态大鼠海马神经元保护作用研究

目的探讨长托宁干预对癫痫持续状态(SE)后大鼠海马神经元损伤的保护作用及其可能机制。方法54只Wistar大鼠随机分为A组(对照组)、B组(模型组)和C组(长托宁组),后两组又分为6h、12h、24h、48h亚组。应用氯化锂-匹罗卡品制备SE模型。TUNEL法检测大鼠海马细胞凋亡,免疫组化法检测Bcl-2和Caspase-3的表达。结果SE后6h海马组织可见TUNEL、Caspase-3和Bcl-2阳性细胞表达,TUNEL和Caspase-3表达高峰均在24h;Bcl-2表达高峰在12h。C组各时间点TUNEL、Caspase-3阳性细胞较B组减少(除6h外,均P0.05),而Bcl-2阳性细胞数增加(除6h外,均P0.05)。结论长托宁可以上调Bcl-2,下调Caspase-3,长托宁可能通过抑制SE后海马神经元凋亡的机制,减轻SE时脑组织损伤,起到脑保护作用。     

细胞外信号调节激酶抑制剂对间歇低氧早期大鼠神经元凋亡及P53表达的影响

目的探讨细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路对间歇低氧早期大鼠海马CA1区神经元凋亡及凋亡相关蛋白P53表达的影响。方法选择雄性Wistar大鼠135只,采用随机数字法分为对照组、间歇低氧组、U0126组,每组45只,每组又分为1、3、7、10、14d共5个时间点,每个时间点9只。各组大鼠采用免疫组织化学法及蛋白免疫印迹法检测海马CA1区ERK1/2、P53表达;TUNEL法检测海马CA1区神经细胞凋亡情况。结果与间歇低氧组比较,U0126组海马CA1区神经细胞1、3、7、10、14dERK1/2蛋白和P53蛋白表达明显降低(P0.05)。与对照组比较,间歇低氧组和U0126组海马CA1区3、7、10、14d神经细胞凋亡指数明显升高(P0.05)。与间歇低氧组比较,U0126组海马CA1区3、7、10、14d神经细胞凋亡指数明显降低(0.100±0.021 vs 0.133±0.015,0.160±0.017 vs 0.253±0.019,0.239±0.027 vs 0.351±0.024,0.332±0.033 vs 0.500±0.048,P0.05)。结论 ERK抑制剂U0126通过阻断ERK信号通路减少间歇低氧早期神经细胞的凋亡,可能与其降低P53表达有关。     

十二指肠胃反流对大鼠胃黏膜细胞凋亡及相关细胞因子表达的影响

目的研究十二指肠胃反流(duodenogastric reflux,DGR)对大鼠胃黏膜细胞凋亡及相关细胞因子表达的影响,探讨DGR胃黏膜损伤机制。方法手术组成年SD大鼠10只用于制备和收集十二指肠混合液。DGR模型组和对照组各取SD大鼠8只,前者十二指肠液灌胃,后者生理盐水灌胃。2周后处死大鼠。采用TUNEL技术观察胃黏膜细胞凋亡情况。采用免疫组化方法分析胃黏膜组织TNF-α、ET-1和NOS-2的表达。结果 DGR模型大鼠胃黏膜病理提示造模成功。DGR模型组胃黏膜凋亡细胞在黏膜全层均可见,凋亡指数(AI)显著高于对照组(P<0.05)。DGR模型组大鼠胃黏膜细胞的TNF-α、ET-1和NOS-2的表达均明显高于对照组(P<0.05)。结论细胞凋亡与TNF-α、ET-1和NOS-2等细胞因子表达异常可能参与DGR胃黏膜损伤乃至细胞癌变的发病机制。     

丹参对衰老鼠脑海马神经细胞凋亡作用的研究

目的：研究丹参对衰老鼠脑海马神经细胞凋亡的作用。方法：用TUNEL法及流式细胞仪观察衰老鼠的神经细胞凋亡,并用免疫组织化学法检测相关基因表达变化。以丹参注射液干预衰老的大鼠模型,观察了丹参对衰老鼠神经细胞凋亡的作用。结果：衰老鼠海马细胞有典型的凋亡特征,与丹参组比较海马细胞的凋亡率有明显差异,衰老鼠bcl-2表达下调,bax的表达量明显增加,基因表达变化与流式细胞仪测定的细胞凋亡率一致。结论：丹参对衰老鼠的脑神经细胞凋有明显的抑制作用。     

肝细胞凋亡及凋亡相关基因Caspase-3、Bcl-2在慢性乙型重型肝炎中的作用

目的 探讨肝细胞凋亡及凋亡相关基因Caspase-3、Bcl-2在慢性乙型重型肝炎(慢重肝)发生发展机制中的作用.方法 选择慢重肝肝组织标本68例(慢重肝组),正常肝组织标本20例(对照组).采用原位末端转移酶标记技术(terminaldeoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP...     

舒林酸诱导胃癌BGC-823细胞凋亡的研究

目的 探讨舒林酸诱导人胃癌BGC-823细胞株凋亡的作用及其机制。方法将舒林酸作用于人胃癌BGC-823细胞,并设置不同的作用浓度和作用时间,应用流式细胞术、TUNEL法检测胃癌细胞的凋亡率;免疫组化（S-P）法检测凋亡基因蛋白bcl-2、Sru—vivin的表达以及环氧合酶-2（COX-2）蛋白的表达情况。结果 流式细胞仪检测出凋亡峰;其凋亡检测率及TUNEL法检测的细胞凋亡率均高于对照组（P〈0.05）;免疫组化结果显示凋亡基因蛋白bcl-2、survivin等在胃癌细胞表达下降,COX-2蛋白的表达阳性率也显著低于对照组,均呈时间和剂量依赖性（P〈O.05）。结论舒林酸可诱导胃癌BGC-823细胞凋亡,其机制与抑制凋亡抑制基因bcl-2和survivin的表达及下凋COX-2蛋白的表达有关。     

Ⅱ组代谢型谷氨酸受体阻断剂对大鼠海马神经元凋亡的影响

目的观察Ⅱ组代谢型谷氨酸受体阻断剂对大鼠海马神经元凋亡的影响。方法 SD大鼠24只随机分为假手术组、痴呆组和阻断剂组,每组8只。大鼠脑室注射凝聚肽Aβ_(25-35)5建立痴呆大鼠模型,阻断剂组1周后行阻断剂脑室注射,另2组等量注射人工脑脊液4周行Morris水迷宫测试;测试1周后取材行病理观察,采用TUNEL法检测海马CA1区锥体细胞凋亡情况。结果与假手术组比较,痴呆组大鼠平均潜伏期明显延长,平台象限滞留时间明显缩短(P0.05);与痴呆组比较,阻断剂组大鼠上述指标明显提高(P0.05)。与假手术组比较,痴呆组大鼠海马CA1区可见大量的凋亡锥体细胞,阳性锥体细胞数、总面积、平均吸光度(A)值明显升高(P0.05);与痴呆组比较,阻断剂组大鼠海马CA1区可见明显的阳性细胞和核固缩,但其阳性染色锥体细胞数、总面积、平均A值明显降低(P0.05)。结论Ⅱ组代谢型谷氨酸受体阻断剂可明显抑制痴呆引起的海马CA1区锥体细胞的凋亡,提示其可能通过影响细胞凋亡,参与痴呆的发病过程。     

依达拉奉对癫痫大鼠海马中MDR1产物P-gp表达的影响

目的研究自由基清除剂依达拉奉对癫痫持续状态(SE)大鼠海马中多药耐药基因(MDR1)产物P-糖蛋白(P-gp)表达的影响,以探讨自由基清除剂对难治性癫痫(IE)的防治作用。方法成年SD大鼠随机分为对照组、模型组、依达拉奉组。采用氯化锂-毛果芸香碱腹腔注射制备癫痫持续状态模型,经腹腔注射给药,依达拉奉组于造模成功后即刻腹腔注射依达拉奉,2次/d,3 d后断头取海马,免疫组化检测P-gp表达,图像分析测其表达的灰度值。结果模型组P-gp表达明显高于对照组及依达拉奉组(P<0.01)。结论癫痫发作本身可能是IE的成因,依达拉奉通过清除自由基减轻神经元损伤,进而抑制P-gp表达,可能成为防治IE的有效方法。     

硫化氢对血管性痴呆大鼠缺血再灌注损伤中NLRP3表达的影响

目的探讨硫化氢(H₃S)对血管性痴呆(VaD)大鼠缺血再灌注损伤(IRI)中NLRP3表达的影响。方法采用改良四血管法(4-VO)制作VaD大鼠IRI模型,随机数字表法将大鼠分为假手术组、模型组、抑制剂组(CY-09组)、NaHS组,每组各6只,共24只大鼠。应用Morris水迷宫实验评价大鼠学习记忆能力,收集各组大鼠脑组织标本,采用苏木素-伊红(HE)染色,观察海马区形态。各组大鼠血清H₃S含量采用亚甲蓝法检测;白细胞介素(IL)-1β、IL-18采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测;用Western印迹检测各组大鼠海马组织中炎症小体NLRP3、Caspase-1表达水平。结果VaD大鼠模型构建成功;模型组大鼠海马区神经元细胞损伤明显,海马组织NLRP3、Caspase-1蛋白相对表达量显著增加(P<0.05)。NaHS组大鼠海马区神经元细胞损伤减轻,血清H₃S含量较模型组明显升高(P<0.05),海马组织NLRP3、Caspase-1蛋白较模型组降低(P<0.05);CY-09组大鼠海马区神经元细胞损伤减轻,海马组织NLRP3、Caspase-1蛋白较模型组降低(P<0.05),血清IL-1β、IL-18显著低于模型组(P<0.05)。结论VaD大鼠IRI可引起NLRP3表达增加;H₃S能够通过降低NLRP3表达,减轻大鼠IRI。     

银杏叶提取物对大鼠脑缺血再灌注损伤热休克蛋白70表达的影响

目的探讨银杏叶提取物对大鼠缺血再灌注损伤热休克蛋白70表达的影响。方法42只大鼠随机分为3组:假手术组、单纯缺血再灌注组、缺血再灌注+银杏叶提取物组,每组14只。通过免疫组织化学方法和原位末端标记法(TUNEL)检测热休克蛋白70表达及凋亡细胞数,TTC染色观察梗死体积。结果3组均可检测到热休克蛋白70的表达,单纯缺血再灌注组热休克蛋白70的表达较假手术组增强(P<0.01),缺血再灌注+银杏叶提取物组较缺血再灌注组表达增强(P<0.05)。缺血再灌注+银杏叶提取物组梗死体积及凋亡细胞数明显少于缺血再灌注组(P<0.01)。结论银杏叶提取物可能通过上调缺血缺氧后热休克蛋白70的表达减少神经细胞凋亡。     

重组人胰岛素样生长因子1对脑出血大鼠磷酸化丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶及凋亡细胞的作用

目的探讨重组人胰岛素样生长因子1（rhIGF-1）对大鼠脑出血血肿周围区磷酸化丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶（p-Akt）及凋亡细胞的影响。方法健康雄性Wistar大鼠78只,随机将其分为假手术组（6只）、脑出血对照组（简称对照组,36只）、rhIGF-1干预组（简称干预组,36只）。对照组和干预组大鼠按照给予干预措施后的6个时间点再随机分为6个亚组：6、12 h组和1、2、4、7 d组,每个亚组为6只大鼠。采用Ⅳ型胶原酶立体定位法制备大鼠急性脑出血模型。干预组经尾静脉注射rhIGF-1（50μg/kg）,1次/d,直至实验结束。假手术组和对照组每天经尾静脉注射等量等渗盐水。各组在规定的时间取材,采用免疫组化方法观察血肿周围区p-Akt的表达;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术（TUNEL）法检测凋亡细胞。结果①对照组大鼠和干预组大鼠的神经功能缺损评分在术后1 d或2 d达到最高,此后逐渐降低,干预组大鼠的评分仅在术后第7天时低于对照组,差异均有统计学意义,P〈0.05。②假手术组大鼠仅少量表达p-Akt阳性细胞。在6 h以外的其余各时间点,干预组大鼠的p-Akt阳性细胞数量均高于对照组,差异有统计学意义,P〈0.05。③假手术组大鼠仅少量表达TUNEL阳性细胞。在除6 h外的其余各时间点,干预组大鼠的TUNEL阳性细胞数量均低于对照组,差异均有统计学意义,P〈0.05。结论 rhIGF-1能减少脑出血后的细胞凋亡,改善神经功能缺损评分,其作用可能与p-Akt的激活有关。