神经酰胺在紫外光诱导细胞凋亡中作用

近年研究发现 ,紫外光诱导的凋亡与神经酰胺密切相关。１神经酰胺的代谢神经酰胺是疏水性最强的分子之一。神经酰胺的来源途径［１］:（１）二氢鞘氨醇在神经酰胺合成酶催化下发生酰化作用 ,形成二氢神经酰胺 ,后者经二氢神经酰胺还原酶作用 ,转化为神经酰胺 ;(２)鞘髓磷脂经鞘髓磷脂酶催化分解为神经酰胺 ;(３)复合物糖鞘脂经酸性水解酶作用产生神经酰胺。神经酰胺分解途径有 :(１)经神经酰胺激酶作用 ,分解为神经酰胺—１—磷酸 ;(２)经鞘髓磷脂合成酶作用 ,分解为鞘髓磷脂 ;(３)在Ｇｏｌｇｉ结构 ,经糖基神经酰胺合成酶作用 ,神经酰胺发…     

白藜芦醇诱导人成骨肉瘤细胞凋亡及其机制

目的 探讨白藜芦醇(resveratrol)诱导人成骨肉瘤细胞株MG63的凋亡作用及其分子机制.方法 应用不同浓度的白藜芦醇作用于MG63细胞,利用透射电镜观察细胞形态学变化;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测药物对细胞的增殖抑制率;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡、细胞周期分布;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测P21cip1/WAF1 mRNA、Survivin mRNA的表达.结果 白藜芦醇能明显抑制MG63细胞的增殖,并呈剂量和时间依赖性.经白藜芦醇处理MG 63细胞后,透射电镜下可见到凋亡细胞,FCM分析发现,10、20 μg/ml的白藜芦醇处理细胞72 h后,凋亡率分别为(11.9±0.6)%、(19.7%±0.9)%(P＜0.01),处理后的细胞G0/G1期比例增高,S期、G2/M期细胞比例减少;RT-PCR检测到P21cip1/WAF1表达升高,Survivin表达降低(P＜0.01).结论 白藜芦醇能明显抑制MG63细胞的增殖,诱导其凋亡,其机制可能与促进P21cip1/WAF1表达、抑制Survivin的表达有关.     

神经酰胺诱导人结肠癌细胞凋亡作用

目的探讨外源性神经酰胺诱导人结肠癌HT-29细胞的凋亡作用。方法采用光镜、电镜、荧光显微镜和琼脂糖凝胶电泳方法检测C2-神经酰胺诱导HT-29细胞凋亡。MTT法检测C2-神经酰胺对HT-29细胞线粒体功能的影响。结果C2-神经酰胺使HT-29细胞发生核染色质断裂、DNA Ladder、凋亡小体等典型凋亡表现,12和24 h凋亡细胞率分别为64.1%和81.3%,呈现时间-剂量依赖关系。同时C2-神经酰胺处理细胞6 h后,细胞线粒体功能即出现损伤。结论外源性神经酰胺能诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡,参与其凋亡调控。     

神经酰胺诱导结肠癌HT-29细胞凋亡与线粒体膜电位变化的关系

目的 探索神经酰胺(C2-ceramide,C2-cer)对人结肠癌HT-29细胞增殖、线粒体膜电位改变、细胞凋亡等的影响.方法 正常培养的HT-29细胞分为C2-cer处理组与非处理组,用MTT法、流式细胞仪等方法观察不同时间C2-cer对细胞增殖、线粒体膜电位改变、细胞凋亡等的影响.结果 加入C2-cer可引起HT-29细胞线粒体膜电位 (△Ψm)下降,细胞增殖受抑,并导致细胞凋亡.上述效应与C2-cer剂量以及作用时间相关.结论 C2-cer可导致HT-29细胞线粒体膜电位(△Ψm)下降,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡.     

葛根素通过神经酰胺通路抑制UVB诱导的HaCaT细胞DNA损伤

研究葛根素(puerarin,PUE)对UVB诱导的HaCaT细胞DNA损伤的影响和作用机制。葛根素预处理细胞以30 mJ.cm2 UVB照射,24 h后以彗星电泳实验检测DNA损伤,薄层色谱法和气相色谱法检测神经酰胺,流式细胞术检测细胞内游离钙离子,Western blotting法检测p38蛋白磷酸化水平。结果显示,UVB模型组细胞DNA损伤、细胞内游离钙离子、神经酰胺、磷酸化p38蛋白显著增加;与UVB模型组相比,各葛根素预处理组的DNA损伤、细胞内游离钙离子、神经酰胺、磷酸化p38蛋白均减少。结果表明,葛根素首先抑制神经酰胺蓄积,阻止下游的细胞内钙离子升高和p38 MAPK通路激活,从而减轻UVB诱导的HaCaT细胞DNA损伤。     

C2-神经酰胺诱导大鼠脑胶质瘤细胞C6的早期凋亡作用

目的 :研究外源性C2 神经酰胺对大鼠脑胶质瘤细胞C6活力的抑制作用以及早期凋亡诱导作用。方法 :采用MTT法测定C2 神经酰胺对C6细胞活力的影响 ;倒置荧光显微系统观察细胞形态变化 ;An nexinⅤ PI双染色流式细胞术对细胞早期凋亡进行定量分析。结果 :C2 神经酰胺可显著抑制C6细胞的活力 ,IC50 为 2 .2× 10 -5mol·L-1;荧光染色可见核浓染等细胞凋亡特征形态改变 ;流式细胞术分析表明C2 神经酰胺可诱导C6细胞发生早期凋亡作用 ,且凋亡百分率呈时间及浓度依赖性 ,C2 神经酰胺 2× 10 -5mol·L-1处理 2 4h后平均早期凋亡率高达4 9 .3%。结论 :C2 神经酰胺主要通过诱导早期细胞凋亡对大鼠脑胶质瘤C6细胞发挥细胞毒作用 ,提高神经酰胺水平有望成为肿瘤化疗的新途径。     

神经酰胺在胰岛β细胞凋亡中作用的研究进展

胰岛β细胞凋亡是糖尿病发生及进展的重要机制,研究表明神经酰胺在β细胞凋亡中发挥了重要作用。它通过激活内质网应激、内/外源性细胞凋亡途径、改变线粒体膜通透性诱导β细胞凋亡,同时介导ROS/RNS、炎症因子等细胞毒作用,使胰岛β细胞进一步丢失、胰岛素分泌减少。本文就神经酰胺在胰岛β细胞凋亡过程所发挥的作用作一综述。     

萎缩性胃炎组织中p21~(WAF1)的表达状况

p21~(WAF1)基因(简称p21基因)定位于第6号染色体短臂上(6p~(21.2)),现认为其是一种抑癌基因,已发现p21在胃癌组织中的表达下调(减弱或消失)。我们应用免疫组织化学方法检测了p21在萎缩性胃炎中的表达状况,以了解胃癌癌前疾病中p21基因表达情况。     

神经酰胺诱导肝肿瘤Bel7402细胞凋亡(英文)

目的:了解神经酰胺信号转导在肝肿瘤细胞中的生物学意义。方法:MTT法、荧光染色、流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳、Western blot。结果:神经酰胺对Bel7402细胞生长抑制的IC_(50)值为14.28μmol·L~(-1)。细胞核浓缩,荧光明显增强;DNA呈现典型“梯型”变化;p53蛋白表达呈下降趋势;Bcl-2蛋白表达明显降低;Bax蛋白表达无明显改变。结论:神经酰胺诱导肝肿瘤细胞凋亡,与Bcl-2表达下调有关。     

腺病毒介导的p21基因联合顺铂对胃癌的作用

目的 探讨腺病毒介导的p21基因在人胃癌细胞株SGC-7901中的表达及其对肿瘤细胞生长和荷瘤小鼠的作用。方法 采用腺病毒载体携带周期控制基因p21转染人胃癌细胞株,用流式细胞仪技术测定p21基因对SGC-7901细胞周期的影响,并与CDDP联合应用,观察p21基因和／或CDDP对SGC7901细胞株和荷瘤小鼠的作用。结果 腺病毒介导的p21基因可在胃癌细胞株SGC-7901中过度表达,使胃癌细胞株S期含量下降,抑制其生长(抑制率为80％),并可诱导胃癌细胞的凋亡;p21基因联合CDDP作用使SGC-7901细胞G2／M含量明显下降,并可抑制荷瘤小鼠肿瘤细胞的生长,且联合作用比单一用药作用更明显。结论 腺病毒介导的p21基因可抑制人胃癌细胞株的生长,抑制瘤体的生长,结合化疗药物作用更强,为临床应用提供了依据。     

2-Methoxyestradiol induces cell cycle arrest and apoptosis of nasopharyngeal carcinoma cells

AIM: To investigate 2-methoxyestradiol induced apoptosis and its mechanism of action in CNE2 cell lines.METHODS: CNE2 cells were cultured in RPMI-1640 medium and treated with 2-methoxyestradiol in different concentrations. MTT assay was used to detect growth inhibition. Flow cytometry and DNA ladders were used to detect apoptosis. Western blotting was used to observe the expression of p53, p21WAF1, Bax, and Bcl-2 protein.RESULTS: 2-methoxyestradiol inhibited proliferation of nasopharyngeal carcinoma CNE2 cells with IC50 value of2.82 μmol/L. The results of flow cytometry showed an accumulation of CNE2 cells in G2/M phase in response to 2-methoxyestradiol. Treatment of CNE2 cells with 2-methoxyestradiol resulted in DNA fragmentation. The expression levels of protein p53 and Bcl-2 decreased following 2-methoxyestradiol treatment in CNE2 cells, whereas Bax and p21WAF1 protein expression were unaffected after treatment with 2-methoxyestradiol. CONCLUSION:These results suggest that 2-methoxyestradiol induced cell cycle arrest at G2/M phase and apoptosis of CNE2 cells which was associated to Bcl-2 down-regulation.     

土贝母皂苷诱导人鼻咽癌细胞株CNE-2Z细胞凋亡的研究

目的　研究土贝母皂苷 (下称皂苷 )对人鼻咽癌细胞株CNE 2Z细胞凋亡的影响。方法　MTT法检测皂苷对CNE 2Z细胞生长的影响 ;形态学方法 (荧光显微镜和透射电镜 )、流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳观察和分析在皂苷作用下CNE 2Z细胞形态、DNA含量的变化和DNA断裂的情况 ;蛋白免疫印迹法检测凋亡相关基因bcl 2、bax和cas pase 3表达的变化。 结果　皂苷抑制CNE 2Z细胞的生长 ,其效果与皂苷的浓度和作用时间相关 ;诱导CNE 2Z细胞发生典型程序性死亡 ;凋亡抑制基因bcl 2表达逐渐减少 ;而凋亡诱导基因bax和caspase 3在 1、3、5h表达增高。 结论　诱导细胞凋亡是皂苷发挥抗瘤效果的一种重要机制 ;皂苷诱导的CNE 2Z细胞凋亡与bcl 2、bax和caspase 3基因有关     

p21WAF1和p53在宫颈鳞癌中的表达及意义

目的探讨p21WAF1和p53蛋白在宫颈鳞癌发生发展中的表达以及相互关系。方法采用免疫组化方法研究50例宫颈鳞癌和30例正常子宫颈组织p21WAF1和p53蛋白的表达。结果宫颈鳞癌组织中p21WAF1蛋白阳性表达率42.0%,明显低于正常对照组73.33%(P<0.05);p53蛋白的阳性表达率为54%,明显高于正常对照组6.67%(P<0.05)。p21WAF1与p53表达存在明显负相关。结论 p21WAF1蛋白的低表达和p53蛋白的高表达与宫颈鳞癌的发生发展相关。     

去甲斑蝥素诱导人鼻咽癌细胞CNE1凋亡的实验研究

目的检测去甲斑蝥素对人鼻咽癌细胞CNE1增殖、凋亡的影响,为临床应用NCTD治疗鼻咽癌细胞提供实验基础。方法体外常规培养CNE1细胞用于实验,经NCTD作用后,采用MTT比色法检测细胞增殖情况,流式细胞仪观察鼻咽癌细胞凋亡、细胞周期。结果 NCTD对鼻咽癌细胞的生长有明显的抑制作用,呈剂量依赖性,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);NCTD可剂量和时间依赖性地诱导肿瘤细胞凋亡;NCTD可剂量依赖性地诱导肿瘤细胞周期发生改变,将鼻咽癌细胞阻滞在G2期。结论 NCTD对体外培养的CNE1细胞的生长有明显抑制作用和诱导凋亡的作用。     

肝素和阿霉素对人鼻咽癌CNE2细胞增殖与凋亡的协同作用

目的:观察肝素联合阿霉素对人鼻咽癌细胞的=增殖与凋亡的影响及其可能的分子机制.方法:用MTT法、流式细胞术观察肝素联合阿霉素对人鼻咽癌细胞增殖及细胞周期的影响;而用TUNEL、琼脂糖凝胶电泳、Westem blot等方法观察肝素与阿霉素联合应用对人鼻咽癌细胞凋亡的作用.结果:肝素与阿霉素联合应用后对鼻咽癌细胞的生长抑制及其凋亡具有显著增强作用,同阿霉素单独应用于诱导细胞凋亡相比,低剂量的肝素与阿霉素联合应用后发现:TUNEL阳性细胞从12.6％±1.1％增加到65.7％±1.3％;G_0/G_1期细胞阻止,S期细胞明显减少,DNA“梯形”变化更加明显;Bax/Bcl-2的比率及p~(53)和p~(21)基因的表达明显升高.结论:肝素与阿霉素对人鼻咽癌细胞在抗增殖及促凋亡方面有协同作用,这可能与Bax/Bcx-2比率的升高及p~(53)和p~(21)的表达上调有关.     

转染p21基因对人宫颈癌Hela细胞的影响

目的研究转染p21基因对人宫颈癌Hela细胞的抑制及凋亡影响。方法用Lipofectamine2000脂质体介导,将质粒pcDNA3．1（＋）-p21基因转入人宫颈癌Hela细胞株;免疫组化法检测转染021基因后,其编码蛋白在Hela细胞的表达情况;描绘p21基因转染后Hela细胞的增殖曲线;WST-1法测定OD值,计算细胞生长抑制率及流式细胞仪检测p21基因转染对Hela细胞的凋亡影响。结果免疫组化法显示p21基因转染后在Hela细胞的胞核内高表达;p21基因的表达可抑制Hela细胞的体外生长,且Hela／021细胞的生长曲线较对照组明显降低;WST-1法显示Hela／p21的细胞活力与对照组相比有显著性差异（P〈0．05）;流式细胞仪检测显示转染p21基因的Hela细胞凋亡率显著高于对照组,约20％以上。结论转染p21基因对Hela细胞具有明显的抑制和诱导凋亡作用。     

Induction of apoptosis and transient increase of phosphorylated MAPKs by diallyl disulfide treatment in human nasopharyngeal carcinoma CNE2 cells

This study was undertaken to elucidate the effect of diallyl disulfide (DADS), an oil-soluble organosulfur compound found in garlic, in suppressing human nasopharyngeal carcinoma cells. A potent increase (of at least 9-fold) in apoptotic cells has accompanied 1) a decrease in cell viability, 2) a increase of the fraction of S-phase cells by up to 63.8%, and 3) a transient increase of the phospho-p38 and phospho-p42/44 (phosphorylated p38 MAPK and phosphorylated p42/44 MAPK) in a time- and concentration-dependent manner. These results indicate that DADS can induce apoptosis in human nasopharyngeal carcinoma cells via, at least partly, S-phase block of the cell cycle, related to a rise in MAPK phosphorylation.     

Upregulation of Fas/Fas ligand-mediated apoptosis by gossypol in an immortalized human alveolar lung cancer cell line

Gossypol has wide antineoplastic effects in vitro, but its effects on human lung cancer have not been explored. To evaluate the activity of gossypol against alveolar cell lung cancer and to provide information on the mechanism of action, we examined the effects of gossypol on the proliferation of A549 cells indirectly using an XTT assay and on the distribution of cells within the phases of the cell cycle using flow cytometry. We also examined several factors that may affect apoptosis, including p53, p21/WAF1, Fas receptor, Fas ligand (FasL) and caspase 8 activity. The results showed that gossypol inhibited proliferation of A549 cells at a concentration of 0.5 micromol/L after 12 h treatment. The effect was both dose- and time-dependent by the induction of apoptosis without the effect of p53 and p21/WAF1. Upregulation of Fas/FasL, in association with the activation of downstream caspase 8 activity, was observed following treatment with gossypol. The Fas/FasL pathway accounted for 75% of gossypol-mediated apoptosis. We suggest that the Fas/FasL apoptotic system is the major pathway for gossypol-mediated apoptosis of A549 cells. Gossypol had no effect on the distribution of A549 cells within the phases of the cell cycle. In conclusion, gossypol inhibited A549 cells mainly by induction of the Fas/FasL apoptotic pathway, but not the p53 and p21/WAF1 pathway.     

8-溴-7-甲氧基白杨素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的观察8-溴-7-甲氧基白杨素(8-bromo-7-methoxy-chrysin,BrMChR)诱导人胃癌(SGC-7901)细胞凋亡作用。方法体外培养SGC-7901细胞,MTT法测定细胞存活率;PI染色流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率;DNA琼脂糖凝胶电泳观察梯形条带。结果MTT测定结果显示,BrMChR明显抑制SGC-7901细胞增殖,呈浓度依赖性,其IC50为2.6μmol·L-1,BrMChR的效价强度约是白杨素(ChR,IC50为16.5μmol·L-1)的8倍,约为氟尿嘧啶(5-FU,IC50为7.7μmol·L-1)的3倍。PI染色FCM分析发现BrMChR(1.25、5.00、20.00μmol·L-1)作用SGC-7901细胞48h的细胞凋亡率分别是19.8%±0.2%,36.8%±1.9%,45.5%±3.5%,BrMChR(1.25μmol·L-1)处理的细胞凋亡率较ChR(20.00μmol·L-1)的凋亡率(12.9%±1.5%)高;DNA琼脂糖凝胶电泳观察BrMChR(20.00μmol·L-1)作用24h和48h后SGC-7901细胞的基因DNA呈现典型梯形条带,且能被PPARγ阻断剂GW9662(10.00μmol·L-1)预孵育减弱。结论BrMChR可能部分通过活化PPARγ诱导SGC-7901细胞凋亡。