食管癌细胞核仁抗原单克隆抗体的制备及其特性的初步鉴定

目的 制备抗原食管癌细胞核仁抗原单克隆抗体，用于寻找肿瘤的标志物和癌的病理诊断。方法 以食管癌组织核基质为抗原，采用足垫法免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，运用杂交瘤技术建立分泌特异性单抗的杂交瘤细胞株，制备食管癌细胞抗原片和食管癌冰冻切片，采用免疫组化检测并采用蛋白印迹法分析，鉴定是否为特异性单克隆抗体。结果 获得一细胞株能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株，１－７／Ｅ能与食管癌细胞和其他１０种癌细胞的核仁反应，不     

肿瘤病人血清中癌细胞凝集因子单克隆抗体的制备

目的 通过制备癌细胞凝集因子的单克隆抗体，进一步研究该凝集因子的结构、功能、组织来源，并建立检测试剂盒打下了基础。方法 采用杂交瘤技术将免疫小鼠脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞融合，经ＥＬＩＳＡ法结合癌细胞凝集抑制实验选出阳性克隆。结果 融合阳性率７８．１％；筛选出的杂交瘤细胞染色体数目为９６－１０６条，ＳＰ２＝０骨髓绞炙６８条，小鼠脾细胞为４０条，得到的ＭｃＡｂ亚类分别是ＩｇＧ１（Ｅ９）和ＩｇＧ２α（Ｅ１     

抗—BudR单克隆抗体制备及特性鉴定

用碘化还原法将溴脱氧尿嘧啶(BudR)与牛r—球蛋白(BGG)偶联作为抗原(BudR—BGG)免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(653)进行融合,经放射免疫分析法(RIA)筛选和克隆化后,获得四株阳性杂交瘤Ⅱ_1B_7、Ⅱ_4B_4、Ⅰ_3F_(11)和Ⅱ_1H_7。杂交瘤细胞分别腹腔注射BALB/c小鼠,其中三株(Ⅱ_1B_7、Ⅱ_4B_4和Ⅱ_1H_7)获得腹水,纯化抗体并对其特性进行鉴定,三株单抗均可与BudR、IudR反应,而不与CdR、TdR及FudR反应,具有较高的特异性。     

肿瘤病人血清中癌细胞凝集因子单克隆抗体的制备

①目的通过制备癌细胞凝集因子的单克隆抗体（ＭｃＡｂ），进一步研究该凝集因子的结构、功能、组织来源，并为临床建立检测试剂盒打下基础。②方法采用杂交瘤技术将免疫小鼠脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞融合，经ＥＬＩＳＡ法结合癌细胞凝集抑制实验筛选出阳性克隆。③结果融合阳性率７８．１％；筛选出的杂交瘤细胞染色体数目为９６～１０６条，ＳＰ２／０骨髓瘤细胞为６８条，小鼠脾细胞为４０条，得到的ＭｃＡｂ亚类分别是ＩｇＧ１（Ｅ９）和ＩｇＧ２α（Ｅ１１）．④结论获得了２株既能分泌抗体，又能阻断癌细胞凝集的杂交瘤细胞株（Ｅ９和Ｅ１１）。     

抗人A血型单克隆抗体的制备及其初步鉴定

分别用A型全血球和提取A型膜抗原免疫8周龄Balb/c鼠,进行细胞融合,建立了10株抗A型血型单克隆抗体。特异性鉴定表明仅与A、AB型血球发生盐水凝集。无冷凝集现象。培养上清和腹水与2％A型血球盐水凝集效价分别在1:32～128和1:512～4096,对200人份献血员血液标本检定,其中6株与标准人血清符合率达100％,A亚型鉴定10株全部属抗A_1亚型。免疫球蛋白亚类测定除A_4株是IgG_3,余均属IgM。     

抗人粒细胞单克隆抗体的制备及其鉴定

目的制备抗人粒细胞单克隆抗体(McAb),并对其组织特异性及相关特性进行鉴定.方法采用分离的人全白细胞免疫Balb/c小鼠,按常规融合方法并经ELISA筛选后进行McAb特性研究.结果成功制备1株抗人粒细胞McAb,命名为SZ-102.ELISA法测定其腹水效价为5×10-5.琼脂糖双扩散鉴定均为IgG1类.流式细胞仪及SP免疫组化法测定表明SZ-102McAb与外周血液中的粒细胞、单核细胞呈强阳性反应,与淋巴细胞、红细胞、血小板不反应;SZ-102抗原在正常人肝、肺、胸腺、脾、淋巴结组织中也表达.免疫沉淀测定抗原分子量为20kD左右的蛋白多肽.结论抗人粒细胞McAb的研制将有助于临床肿瘤感染病灶和隐匿性炎症的放免显像诊断研究.     

肾综合征出血热病毒大鼠单克隆抗体制备及其对病毒抗原特性的鉴定

用肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）免疫Ｌｏｕ／ｃ大鼠脾细胞与ＩＲ９８３Ｆ骨髓瘤细胞融合，获得１１株能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞系。用放射免疫沉淀、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ及免疫酶技术等对这一组大鼠单克隆抗体（单抗）进行了特性鉴定和病毒抗原性分析。发现１１株单抗中，９株为抗核壳蛋白（ＮＰ）特异性，２株为抗Ｇ２糖蛋白。大多数抗ＮＰ单抗无中和活性及血凝抑制（ＨＩ）活性，但有２株例外，具有一定程度的中和或（和）ＨＩ活性。而抗Ｇ２单抗均只有一定程度的中和或（和）ＨＩ活性。在ＨＦＲＳＶ抗原性分析方面，可初步将１１株大鼠单抗分成组、亚组、野鼠型及亚型特异性单抗，并对上述单抗特性进行了讨论。     

重组人内抑素单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的制备抗重组人内抑素(ES)单克隆抗体(McAb)并进行鉴定。方法利用重组人ES为抗原,免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术将免疫小鼠的脾细胞与同源小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,间接ELISA法对细胞培养上清进行筛检,对能稳定分泌抗重组人ES的细胞株,进行扩大培养。体内诱生法制备腹水并对其初步鉴定。结果获得3B4、1D10、1G5、2D10,4株能稳定分泌抗重组人ESMcAb的杂交瘤细胞株,并对3B4和1D10两株给予鉴定,其免疫亚型为IgG2a、IgG3。腹水ELISA效价为10-6、10-5。通过蛋白免疫印迹法和免疫组化证明抗体有特异性和敏感性。结论成功制备分泌抗重组人ES的杂交瘤细胞株,为研究人ES的表达及相关领域奠定了基础。     

抗食管癌单克隆抗体及食管癌细胞膜抗原的初步研究

以食管癌“109”细胞株免疫 BALB/C 小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞株SP2/0 融合,经三次克隆化,获得稳定分泌抗食管癌“109”细胞株单克隆抗体的杂交瘤细胞系2GF3。其分泌的单克隆2GF3抗体与外周血淋巴组胞、ABO 型红细胞、癌胚抗原以及3/5胃癌细胞株无反应,与2/5胃癌细胞株有弱(+)反应。与2GF3抗体对应的抗原为2GF3抗原,荧光标记检测表明后者主要表达在细胞膜上。用去污剂提取膜抗原进行电泳后转移至硝酸纤维素膜上进行酶标分析,2GF3抗原是分子量53KD 的糖蛋白,在还原及非还原条件下均显示相同的区带。它与抗癌胚抗原抗体及抗甲胎蛋白抗体均无反应,表明它不同于癌胚抗原和甲胎蛋白。     

抗人食管癌单克隆抗体在荷瘤裸鼠体内的定位

【目的】研究抗人食管癌单克隆抗体G9(McAbG9)在荷瘤裸鼠体内对食管癌组织的定位作用。【方法】采用氯胺-T法制备标记物     

一种单纯疱疹病毒共有型单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的：建立能稳定分泌单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）共有型单克隆抗体（Ｍａｂ）的细胞株并进行初步鉴定。方法：本研究利用杂交瘤技术建立了 １３株能稳定分泌抗 ＨＳＶ 特异性 Ｍａｂ的杂交瘤细胞株,其中 ５株能稳定分泌抗 ＨＳＶ型共有单克隆抗体（５Ｂ４－２、５Ｂ４－６、６Ｂ３－２－３、Ｄｂ４、Ｅｂ４）,并对５Ｂ４－６株进行了初步鉴定。结果：免疫双扩散法确定Ｍａｂ５Ｂ４－６的 Ｉｇ类型为 ＩｇＧ２ｂ。经微量免疫荧光法（Ｍｉｃｒｏ－ＩＦＡ）法测定杂交瘤培养上清及腹水中单抗效价,分别为 １∶１６及１∶２０４８０。杂交瘤细胞核型分析显示其染色体数目为９１．８±６．２。杂交瘤细胞经４次克隆,传代６个月仍能稳定地分泌抗体。用免疫印渍法进一步鉴定Ｍａｂ５Ｂ４－６所结合抗原的分子量约为７７ＫＤ。结论：细胞株５Ｂ４－６能稳定分泌一种新奇的针对具有ＨＳＶ型共有抗原表位的７７ＫＤ 蛋白的特异性单抗。     

抗乳腺癌人单克隆抗体的制备及其应用的实验研究

用乳腺癌术后腋下淋巴结淋巴细胞与人鼠骨髓瘤细胞ＳＨＭ－Ｄ_（３３）融合，获得分泌抗乳腺癌人单克隆抗体杂交瘤细胞株ＣＭ－１。用ＰＡＰ免疫组化法分析，ＣＭ－１与被检乳腺癌均呈阳性反应，但与乳腺纤维瘤和被检其他肿瘤组织及正常组织均无反应。ＣＭ－１用于裸鼠移植瘤放免显像（ＲＩＩ）能进行肿瘤定位。ＲＩＩ对乳腺癌志愿者能初步达到乳腺癌腋下淋巴结转移灶定位。ＣＭ－１－药物（平阳霉素；ＰＹＭ）偶联物对裸鼠移植乳腺癌生长的抑瘤率为９５％，而同等剂量的游离药物为５８％。显示了抗乳腺癌人单抗ＣＭ－１的特异性及其在临床诊断和治疗乳腺癌中的光明前景。     

抗结直肠癌缺陷蛋白合成肽单克隆抗体的制备与初步鉴定

目的 制备针对结直肠癌缺陷（ｄｅｌｅｔｅｄ ｃｏｌｏｒｅｃｔａ ｃａｒｅｉｎｏｍａ,ＤＣＣ）蛋白抗原决定簇多肽的单克隆抗体。方法 用合成的ＤＣＣ蛋白抗原决定簇多肽（氨基酸序列从１９５～２０４）为抗原,免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,经细胞融合,有限稀释法筛选出能分泌抗ＤＣＣ合成肽单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对单克隆抗体进行了初步鉴定。结果 细胞融合率７５％,经３次亚克隆,最后保留一株能稳定分泌抗ＤＣＣ民肽单     

胃癌单克隆抗体MG7相应抗原在不同型肠化组织中的表达

应用抗人胃癌单克隆抗体MG7及ABC免疫酶标技术,检测了胃癌相关抗原在110例手术切除胃癌标本及343例胃粘膜活检肠化标本的表达。应用粘液组化方法将肠化分为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型。110例胃癌中,有92例(83.6％)MG7染色阳性。在不同类型肠化中,Ⅲ型肠化中MG7相应抗原的阳性率(46.7％)显著高于Ⅱ型(25.6％)和Ⅰ型肠化(18.6％)(P<0.01)。结果表明,Ⅲ型肠化与胃癌的发生有密切关系,应作为癌前病变对待;单克隆抗体MG7对筛选肠化患者中胃癌高危病例可能有重要价值。     

大肠癌单克隆抗体MC3在移行粘膜及息肉的表达

作者采用免疫组化方法对大肠癌,移行粘膜,大肠息肉及胎儿大肠进行MC_3标记观察,阳性率分别为:大肠癌95.38％,移行粘膜47.00％,胎儿大肠70.83％,家族性息肉65.08％,绒毛状腺癌69.23％,管状腺瘤42,00％,幼年性息肉37.50％。另外,阳性率随息肉增生级别增高而递增。结果提示,MC_3可作为大肠息肉癌变倾向的检测指标。移行粘膜存在有癌前病变。     

抗组氨酰-tRNA合成酶单克隆抗体的制备及初步鉴定

  【目的】 制备均一性和特异性高的抗组氨酰-tRNA 合成酶抗体,为研究皮肌炎和多肌炎的检测提供方法,为制备检测试剂盒提供原料?【方法】 采用常规融合和间接ELISA检测法,获取杂交瘤细胞株;Protein G Sepharose 4FF和Sephadex G50结合对含有单克隆抗体的腹水进行纯化;SDS-PAGA电泳技术进行单克隆抗体的鉴定?【结果】 筛选获得了2株稳定分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为W001和W002;杂交瘤细胞克隆后,100%的检测孔保持了分泌抗组氨酰-tRNA合成酶抗体的能力;腹水纯化达到了较理想的效果;该2株单克隆抗体能特异性针对组氨酰-tRNA合成酶,并能跟天然的蛋白结合?【结论】 所制备的均一性和特异性高的抗组氨酰-tRNA 合成酶抗体,可直接用于在ELISA?免疫印迹?免疫组化学等研究方面,达到了试验的目的?     

心钠素单克隆抗体的制备及鉴定

将心房肽Ⅲ(APⅢ)与牛血清白蛋白(BSA)偶联成大分子复合物,免疫BALB/C小鼠,制备出三株分泌心房肽Ⅲ单克隆抗体(APⅢ-McAb),行亚类鉴定为IgG_1型,琼脂双向扩散与BSA未出现沉淀线。应用APⅢ-McAb制备的亲和层析柱对心钠素有很高的亲和力,其洗脱峰管,有明显的降压作用。     

应用尿素溶性抗原制备抗猪囊虫单抗的研究

目的 为提高抗猪囊虫单抗的特异性。方法 使用猪囊虫原素溶性抗原（Ａｇ－ａ）并用水溶性抗原（Ａｇ－ｗ）作对照分别免疫ＢＡＢＬ／ｃ小鼠,取其脾细胞分别与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合,ＥＬＩＳＡ法进行筛选。同时筛选出的阳性克隆扩大培养,取上清单抗分别与包虫、血吸虫、肺吸虫、姜片虫和丝虫抗原进行交叉反应性测定。结果 Ａｇ－ｕ、Ａｇ－ｗ的阳性克隆率分别为１３．５％（１３／９６）和１２．５％（１２／９６）,特异性     

抗人甲状腺素单克隆抗体的制备及其初步的临床应用

本文用甲状腺素(T_4)甲酯—BSA抗原免疫BALB/C小鼠,获得4株分泌抗人甲状腺素单克隆抗体的杂交瘤细胞系。亚类鉴定均属IgG_1型。将单克隆抗体应用在放射免疫分析(RIA)中,取代多克隆抗体,证实其在甲状腺疾病诊断中,甲状腺机能亢进的诊断符合率高于多克隆抗体,显示其特异性强、灵敏度高、亲和力好(亲和常数K=1.26x10~(10)L/M)、反应平衡时间短等优点。