儿童过敏性紫癜CD40-CD40L的表达

目的　探讨儿童过敏性紫癜(HSP)CD4 0- CD4 0L的表达与免疫紊乱的关系。方法　采用流式细胞术检测30例HSP患儿外周血淋巴细胞CD4 0 - CD4 0L的表达以及免疫功能,同时以30名健康儿童作为对照组。结果　(1)HSP组CD4 0的表达与对照组比较差异无显著性(P >0 .0 5 ) ,而CD4 0L的表达较对照组增高(P <0 .0 1)。(2 )HSP患儿TH2类细胞因子中的IL 4 ,IL 5及IL 6明显增高,TH2的特异性膜蛋白分子CD30表达也显著高于正常水平,TH1类细胞因子IL- 2及IFN γ分泌减少。(3)HSP存在选择性的IgG的异常增高,血浆中仅IgA、IgE水平高于对照,IgG、IgM无差别。结论　HSP儿童存在CD4 0 CD4 0L表达异常与免疫功能紊乱,且二者有内在的联系。     

糖皮质激素对多发性硬化患者外周血淋巴细胞CD40和CD40L表达的影响

目的 探讨多发性硬化(MS)患者外周血淋巴细胞上CD40和CD40配体(CD40L)的表达和糖皮质激素(GC)治疗对CD40和CD40L表达的影响.方法 利用流式细胞仪对MS急性发作患者(Ms组,32例)GC治疗前后及健康对照组(30例)外周血淋巴细胞中CD40和CD40L进行检测.结果 治疗前MS组淋巴细胞中CD40和CD40L的表达较健康对照组显著升高,分别为CD40(29.67±9.95)%vs(26.60±6.28)%(P＜0.05)和CD40L(9.65±3.62%)VS(6.90±1.66)%(P＜0.01);GC治疗后淋巴细胞CD40L表达较治疗前显著降低(8.27±2.28)%vs(10.07±4.00)%(P＜0.05),而CD40表达较治疗前显著增高(34.75±7.86)%VS(29.51±9.95)%(P＜0.05).结论 Ms急性发作时患者外周血淋巴细胞上CD40和CD40L的表迭明显增高,GC对MS患者淋巴细胞CD40L表达有调节作用,对细胞免疫有抑制作用.     

动脉粥样硬化斑块中CD40-CD40配体介导的炎性反应及他汀类药物的抑制作用

动脉粥样硬化是脑血管疾病的病理基础,高血压、糖尿病、脂代谢异常、微量蛋白尿均是动脉粥样硬化的重要危险因素。目前有观点认为动脉粥样硬化是一种慢性炎症性疾病[1-2]。近来研究发现,CD40与CD40配体(CD40L)相互作用不只局限于免疫炎性细胞的信号传递,还参与了动脉硬化斑块内主要炎性反应的调节,对破坏斑     

丙肝病毒核心抗原试剂检测进展

丙肝病毒(HCV)核心抗原是HCV结构蛋白之一,其血清中的滴度和HCV RNA水平密切相关。目前使用的HCV抗体诊断试剂和核酸检测技术存在诸多问题。随着HCV核心抗原检测系统的不断完善,该系统将有可能取代抗体和核酸检测,成为筛选献血者HCV的检测项目。     

重组人血小板CD36基因真核表达载体的构建及蛋白表达

目的制备具有功能活性的重组人血小板表面CD36抗原的纯化表达蛋白胞外区30～439氨基酸残基段。方法提取人肝细胞组织总RNA,经RT-PCR扩增编码人血小板CD36抗原胞外区(Gly30～Asn439)氨基酸残基cDNA,构建于原核表达载体pMD18并转化大肠杆菌DH5α,筛选获得阳性重组子pMD18-CD36,提取质粒。经序列测定后,将该基因插入到真核细胞瞬时表达载体pTE2上,构建成为pTE2-s-CD36-10 his真核瞬时表达载体。采用lipofectamine 2000(invitrogen)转染法,将重组质粒转染HEK-293细胞,表达产物经Ni2+2NTA柱层析纯化。结果 RT-PCR扩增获得了1.4 kb的片段。invitrogen测序,该序列分析结果与Genebank中的NM_001001547.2完全一致。SDS-PAGE证实转染的HEK-293细胞表达了人CD36抗原胞外区蛋白片段。结论利用构建的真核载体pTE2-s-CD36转染人胚肾细胞(HEK293)可高效表达CD36 Gly30～Asn439,得到纯化蛋白,为人血小板CD36表面抗原对血小板输注无效影响的深入研究奠定基础。     

慢性肾衰竭患者血浆sCD40和sCD40L的变化

目的 探讨慢性肾衰竭(CRF)患者血浆中可溶性CD40(sCD40)和可溶性CD40配体(sCD40L)的变化以及在肾损伤和免疫异常中的可能作用.方法 选择2006年9月至12月首都医科大学附属北京同仁医院肾内科收治的慢性肾衰竭未透析患者(CRF组)30例,血液透析中心维持性血液透析3个月以上的尿毒症患者(HD组)30例,与患者年龄、性别相匹配的健康正常对照组20例.采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血浆sCD40和sCD40L的水平,并进行相关因素分析,观察血液透析对sCD40和sCD40L的影响.用方差分析和Pearson相关性分析进行统计学分析.结果 (1)CRF组和HI)组sCD40水平均明显高于对照组(P＜0.01),HD组sCD40水平较CRF组升高(P＜0.01);(2)CRF组和HD组sCD40L水平均明显高于对照组(P＜0.01),HD组sCD40L水平较CRF组轻度升高,但无显著差异(P＞0.05);(3)CRF组sCD40水平与血肌酐(Scr)和C-反应蛋白(CRP)之间成正相关(r=0.637,P＜0.01;r=0.551,P＜0.05),sCD40L水平与Scr和CRP之间也存在相关性(r=0.553,P＜0.05;r=0.686,P＜0.01),sCD40、sCD40L水平与血压、血红蛋白(Hb)、血小板(PLT)、白细胞(WBC)、血白蛋白(Alb)、血糖(Glu)、尿素氮(Bun)及血脂等指标之间无相关性(P＞0.05).血液透析组sCD40、sCD40L与上述指标之间无相关性,与透析病程和透析充分性(Kt/V)之间也无相关性(P＞0.05);(4)一次血液透析过程,HD后sCD40水平较HD前略有升高,差异无统计学意义(P＞0.05),HD后sCD40L水平较HD前下降,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 CRF患者血浆中sCD40和sCD40L水平升高,HD患者更明显,有可能参与CRF患者肾损伤和免疫异常.     

探讨丙肝核心抗原检测在母婴传播中的应用价值

目的：探讨丙肝核心抗原检测在母婴传播中的应用价值。方法选取选取2014年1月～2015年1月在我院就诊的HCV‐Ab（ELISA）阳性产妇100例作为研究对象,产妇于生产前采集静脉血3～5 mL ,新生儿采集脐血2～3 mL 进行检测。首先使用HCV‐RNA 对100例HCV‐Ab（IGg）阳性产妇血清标本进行检测。使用HCV‐cAg、HCV‐Ab、HCVRNA三种方法对新生儿脐血标本进行检测,观察三种方法的阳性率。结果 HCVcAg阳性率与 HCV‐Ab（IgG）的阳性率比较差异具有统计学意义,P＜0．05。HCVcAg阳性率与HCV‐RNA阳性率比较,差异没有统计学意,P＞0．05。结论 HCVcAg检测在HCV母婴传播初期诊断中,可作为临床诊治的依据,值得基层医院推广。     

丙肝病毒核心抗原检测的临床价值及其与HCV-RNA、ALT、AST的关系研究

目的 探讨丙肝病毒核心抗原(HCV-cAg)检测的临床价值及其与HCV-RNA、ALT、AST的关系。方法 留取112例HCV-cAg检测阳性标本,205例丙肝病毒核心抗体(HCV-Ab)阳性标本,利用实时定量PCR法测定HCV-RNA,同时进行肝功能(ALT、AST)检测。结果 112例HCV-cAg阳性和205例HCV-Ab阳性标本中,HCV-RNA阳性分别为95例(阳性率84.8%)和142例(阳性率69.3%),前者显著高于后者(P0.05);前者肝功能异常70例(占62.5%),后者肝功能异常95例(占46.3%),前者显著高于后者(P0.05)。HCV-cAg结果S/CO值增高与HCV-RNA 阳性率和肝功能异常率呈正相关。结论 HCV-cAg检测阳性结果与HCV-RNA符合率高,并能够反应肝功能损伤程度,HCV-cAg检测对辅助临床诊疗具有重要的价值。     

SSA抗原真核表达载体的构建

目的：通过基因克隆构建表达人干燥综合征抗原A（SSA）的巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体。方法：从人白血病淋巴细胞HL60株中提取RNA，反转录出cDNA，然后以cDNA为模板，通过PCR法扩增目的基因SSA，经纯化、双酶切、DNA浓缩回收，插入到酵母分泌型表达载体pPIC9k，用热冲击法转化感受态细胞DH5a，筛选阳性克隆提取质粒，双酶切鉴定并测序。结果：PCR产物大小符合要求，重组质粒pPIC9k-SSA双酶切鉴定与预期一致，测序结果正确。结论：成功构建SSA毕赤酵母分泌型表达载体，为今后获取高纯度、高产量的SSA抗原，研制新型抗SSA诊断试剂盒作前期准备。     

SLE患者外周血淋巴细胞的CD40-CD40L表达及意义

系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus SLE）是自身免疫介导的、以免疫性炎症为突出表现的弥漫性结缔组织病。SLE的发病机制复杂，至今仍未完全阐明，目前普遍认为免疫调节异常在其发病中起到了主导作用，其中包括一对共刺激信号CD40-CD40L的调节异常，淋巴细胞的功能失调、异常活化等。     

肺癌患者血浆CD62P、血清sCD40/sCD40L水平的检测及临床意义

目的：通过测定肺癌患者血清中可溶性CD40（sCD40）、可溶性CD40L（sCD40L）、血浆CD62P的含量,探讨血小板源性CD40/CD40L在肺癌外周血中的表达及其临床意义。方法体外分离85例肺癌患者（肺癌组）和25名健康志愿者（对照组）的血清和血浆。用酶联免疫吸附试验（ELISA）法对血清sCD40、sCD40L、血浆CD62P的含量进行测定。结果（1）肺癌组血清sCD40、sCD40L、血浆CD62P含量明显高于健康对照组（P均＜0.01）。（2）不同病理类型肺癌患者血清sCD40、sCD40L含量、血浆CD62P含量差异均无统计学意义（P均＞0.05）。（3）肺癌患者sCD40、sCD40L、CD62P的含量随临床分期的进展而呈升高趋势。（4）有远处转移肺癌患者sCD40、sCD40L、CD62P的含量明显高于无远处转移患者（P均＜0.05）。（5）肺癌患者术后2周时血浆CD62P、血清sCD40L的含量均较术前下降,但血清sCD40含量与术前相比差异无统计学意义。且其CD62P、sCD40L的表达水平成正相关关系（r=0.300,P＜0.05）。结论（1）肺癌患者血清sCD40、sCD40L、血浆CD62P含量增加,且表达水平与肺癌的进展程度相关,血小板源性CD40/CD40L系统在肺癌的发病中具有重要作用。（2）检测血小板源性CD40L、CD62P表达水平对研究肺癌的临床分期、预后判断有一定的参考价值。     

系统性红斑狼疮患者CD40-CD40L的检测及临床意义

目的探讨CD40-CD40L在系统性红斑狼疮(SLE)患者淋巴细胞上的表达及意义.方法采用流式细胞术检测SLE患者淋巴细胞CD40及CD40L的表达,并与对照组比较.结果SLE患者淋巴细胞及CD4+T淋巴细胞CD40L的表达显著高于对照组(P＜0.05),而CD40在淋巴细胞及CD3-淋巴细胞上的表达,两组无显著性差异(P＞0.05).结论CD40-CD40L共刺激分子途径在SLE发病机制中起重要作用,以CD40L表达上调为重要特点.     

血液透析患者血浆中可溶性CD40及CD4+T细胞上CD154水平的变化

目的 探讨CD40-CD40配体(CD154)相互作用在血液透析患者免疫异常及肾脏损伤中的可能作用。方法 慢性肾功能衰竭进行血液透析患者22名,透析前采静脉血,正常对照10名,非空腹采静脉血;sCD40的测定采用ELISA法,CD4+T细胞上CD154的测定采用双色流式细胞仪。结果 sCD40在正常对照血浆中水平为(30.28±11.09)pg/ml,而血液透析患者为(781.22±203.03)pg/ml,显著高于正常对照(P<0.01)。外周血CD4+T细胞上CD154在正常对照的水平为(29.24±3.99)％,而血液透析患者为(41.41±5.54)％,也明显高于正常对照(P<0.05);说明在血液透析患者,其CD40-CD154相互作用处于过度活跃状态。结论 CD40-CD154可能通过影响免疫功能及加速肾脏损伤参与了尿毒症的发生发展,阻断CD40-CD154相互作用可能有助于延缓疾病进程。     

急性冠脉综合征患者外周血CD40L表达增高

目的检测急性冠脉综合征(ACS)患者CD4 T细胞CD40L的表达率、血清可溶性CD40配体(sCD40L)的水平,探讨CD40/CD40L在ACS发病中的作用及可能途径。方法ACS患者42例,包括稳定型心绞痛(SAP)12例、不稳定型心绞痛(UAP)14例、急性心肌梗死(AMI)16例;健康对照者13例。流式细胞分析术检测CD4 T细胞表达CD40L的阳性细胞率,ELISA法检测血清sCD40L水平。结果AMI、UAP、SAP、对照组CD4 T细胞中表达CD40L的阳性细胞率分别为(8.67±3.31)%、(3.24±1.13)%、(2.29±1.93)%、(0.57±0.19)%,AMI组显著高于其他三组(P均<0.05),UAP组亦显著高于对照组(P<0.05);四组血清sCD40L水平分别为(14.53±8.08)ng/mL、(8.06±6.96)ng/mL、(7.37±3.59)ng/mL、(4.45±1.48)ng/mL,AMI组显著高于其他三组(P均<0.05)。结论ACS患者CD4 T细胞CD40L的表达率和血清sCD40L水平增高,在ACS发病过程中起重要作用;CD40L和sCD40L有望作为冠心病危险性的预测因子。     

急性冠脉综合征患者高表达的CD40L和炎症因子相关性

目的 检测急性冠脉综合征(ACS)患者CD4+T细胞CINOL的表达率、其血清可溶性CD40配体(sCD40L)和高敏C反应蛋白(hsCRP)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的浓度,分析CD40L(sCD40L)与炎症因子的相关性,探讨CD40/CD40L在ACS发病中的作用及可能途径.方法 采用前瞻性研究方法,选取2006.10-2007.4中山大学附属第一医院急诊科、心血管医学部冠心病患者32例,包括稳定性心绞痛(SAP)7例、不稳定性心绞痛(UAP)14例、急性心肌梗死(AMI)11例.正常对照组(CON)为与患者年龄、性别相匹配的健康志愿者8例.所有受试者均排除感染、肿瘤、风湿、肝肾功能不全,未使用类固醇和免疫抑制剂等.流式细胞分析术(FCM)检测CD4+T细胞表达CD40L的阳性细胞率,ELISA法检测血清sCD40L、ICAM-1和VCAM-1浓度,免疫比浊法检测血清hsCRP浓度.所有资料使用SPSS 11.0进行统计学分析.结果 ANI、UAP、SAP、CON组CD4+T细胞中表达CD40L的阳性细胞率(%)分别为8.60±3.02、3.24±1.13、2.18±1.80、0.59±0.18,AMI组显著高于其他3组(P＜0.05),UAP组亦显著高于CON组(P＜0.05);4组血清sCD40L浓度分别为14.47±8.00、8.06±6.96、7.32±3.58、4.48±1.49(ng/mL),ANI组明显高于其他3组(P＜0.05);4组血清:hsCRP浓度分别为20.30±7.57、14.04±8.03、3.78±4.99、O.93±0.77(mg/L),AMI组显著高于其他3组(P＜0.05),UAP组亦显著高于SAP组与CON组(P＜0.05);4组血清ICAM-1浓度分别为418.09±222.19、212.86±128.43、165.04±32.12、108.62±62.27(ng/mL),AMI组显著高于其他3组(均P＜O.05),UAP组亦高于CON组(P＜0.05);4组血清VCAM-1浓度分别为5540.02±2614.65、3760.95±1915.01、4167.27±2084.48、2405.65±870.45(ng/mL),AMI组显著高于CON组(P＜0.01);AMI组CD4+T细胞中表达CD40L的阳性细胞率与VCAM-1呈明显正相关性(r=0.730,P=0.011),其血清sCD40L与hsCRP、ICAM-1、VCAN-1呈明显正相关性(r=0.677,P=0.011;r:0.901,P=0.000;r=0.714,P=0.014).结论 急性冠脉综合征患者CD4+T细胞CINOL的表达率和血清sCINOL浓度升高,且与血清hsCRP、ICAN-1、VCAM-1呈明显正相关;在ACS发生中起作用,此和hsCRP、ICAM-1、VCAN-1等有关,而CD40L/sCD40L可望作为冠心病危险性的预测因子.