BMP-2转染间充质干细胞上清对软骨的影响

[目的]观察从腺病毒-骨形态发生蛋白-2-绿色荧光蛋白(Ad-BMP-2-GFP)转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)获取的含有BMP-2的上清对软骨细胞体外凋亡和体内再生的影响。[方法]通过Ad-BMP-2-GFP转染BMSCs使BMP-2高表达,采用冰冻干燥法浓缩BMSCs细胞上清至10倍浓度,过滤后-20℃储存备用。体外实验:加入IL-1β(18 ng/ml)建立软骨细胞体外炎症环境,施加转染后和未转染浓缩上清,并以PBS处理为空白对照组,流式细胞术检测各处理组软骨细胞凋亡水平。体内实验:20只雄性新西兰大白兔随机分为4组,除假手术组外,其他3组建立兔膝关节软骨缺损模型,分别注射等量的纯生理盐水、转染组和未转染的培养上清。6周后取材,通过大体标本和番红O固绿染色观察关节软骨缺损修复效果。[结果]体外实验显示,转染上清组的软骨细胞凋亡水平较未转染上清组和空白对照组明显减弱(P0.05);体内实验显示,转染上清组对软骨缺损修复效果优于未转染上清组和单纯生理盐水组。[结论]通过Ad-BMP-2-GFP转染BMSCs,获取含有BMP-2的上清可以抑制体外炎症环境下软骨细胞凋亡,促进体内软骨缺损修复。     

神经生长因子基因转染间充质干细胞研究

神经生长因子（NGF）是一种具有感觉和运动神经元营养活性的因子，对神经细胞的生长、发育、分化、再生及功能发挥有重要调节作用的细胞因子，与神经系统的发育、功能维持和损伤修复有密切关系。间充质干细胞（MSCs）是一种主要存在于骨髓中的中胚层来源多能干细胞，在一定条件下有可能分化为神经元。将大量表达NGF的MSCs移植到受损的神经组织中，可以增加组织中NGF浓度，有利于残存神经元存活和组织修复，同时移植的MSCs还有可能实现神经元再生。本实验通过人神经生长因子8基因重组复制缺陷性重组腺病毒（Ad-hNGFβ）转染MSCs，以解决上述问题。     

C2基因对人胃癌细胞周期的影响

目的 探索新克隆的编码人蛋白翻译起始因子的全长基因（C2基因）对细胞周期的影响及与细胞凋亡的关系。方法 构建C2基因真核表达载体,转染人胃癌细胞系SGC7901,获得瞬时和稳定表达C2蛋白的人胃癌细胞株,应用流式细胞分析法检测C2蛋白在转染细胞上的表达和转染细胞细胞细胞周期的改变并在电镜下观察转染细胞超微结构的改变。结果 成功构建了C2基因真核表达载体;流式细胞分析法检测转染细胞C2蛋白表达率为32．3％,空白对照为0．9％;细胞周期检测提示瞬时和稳定转染了C2基因的细胞均发生凋亡;电镜下可见转染了C2基因的胃癌细胞发生凋亡。结论 C2基因转染可引起胃癌细胞发生凋亡,机制有待进一步研究。     

输注转染人IL-10基因的骨髓间充质干细胞减轻大鼠异种移植肝脏的细胞凋亡

目的 探讨转染人白细胞介素10(Hil-10)基因的骨髓间充质干细胞(MSC)对大鼠异种移植肝脏细胞凋亡的影响.方法 以携带Hil-10基因的慢病毒Hil-10/LOX-cwGFP转染豚鼠的MSC.以豚鼠为供者,Wistar大鼠为受者,利用两套管法行原位肝移植.空白对照组的受者分别于术前24 h和术后24 h经股静脉注射生理盐水2 ml+地塞米松0.5 ml(2 mg/ml)各1次;MSC组的受者分别于上述时间点自股静脉注射2.0×106/ml的MSC单细胞悬液2 ml+地塞米松0.5 ml(2mg/ml)各1次;Hil-10-MSC组的受者分别于上述时间点自股静脉注射2.0×106/ml的Hil-10-MSC单细胞悬液2 ml+地塞米松0.5 ml(2 mg/ml)各1次.术后12 h切取移植肝脏,观察移植肝组织学变化,测定肝组织中Hil-10、凋亡蛋白酶-3(Caspase-3)、Fas和FasL的表达,观察肝细胞的凋亡情况.结果 与空白对照组、MSC组相比,Hil-10-MSC组的病理改变最轻,IL-110表达明显增加,FasL明显减少.Hil-10-MSC组的Fas和Caspase-3的阳性区域面积分别为11.5%和25.1%,明显低于空白对照组的35.3%和70.8%(P＜0.05).Hil-10-MSC组的凋亡指数为32.5%,明显低于空白对照组的74.1%和MSC组的50.3%(P＜0.05).结论 Hil-10-MSC可明显减轻大鼠异种移植肝脏的细胞凋亡,其机制可能与其抑制Fas/FasL的表达有关.     

输注转染人IL-10基因的骨髓间充质干细胞减轻大鼠异种移植肝脏的细胞凋亡

Objective To observe the influence of hIL-10-MSCs on apoptosis of rats subject to discordant liver xenotransplantation. Methods The model of guinea pig to rat discordant liver xenotransplantation was set up. The orthotopic liver transplantation model was established by using modified two-cuff technique. Following groups were designed: control group, MSCs group and hIL-10MSCs group. Before and after operation, the recipients in control group were injected with normal sodium (2 ml) and decaesadril (0.5 ml) ;Those in MSCs group were injected with MSCs (4.0× 106/ml)and decaesadril (0.5 ml); Those in hIL-10-MSCs group were injected with hIL-10-MSCs (4.0 × 106/ ml)and decaesadril (0.5 ml). Twelve h after operation, the livers of recipient were observed by HE staining and electron microscope, and apoptosis of the livers was detected by using TUNEL. The expression levels of hIL-10, caspase-3, Fas and FasL were assayed by Western blot or immunohistochemistry. Results As compared with control group and MSCs group, the pathological changes was alleviated, the expression of IL-10 was significantly increased, the expression of FasL was significantly reduced in hIL-10-MSCs group. The positive area size of Fas and Caspase-3 in hIL-10MSCs group was 11.5 % and 25.1 %, respectively, significantly smaller than those in control group (35.3 % and 70.8 % respectively, P＜0.05. Apoptosis index in hIL-10-MSCs group was 32.5 %,which was significantly lower than in control group (74.1%) and MSCs group (50. 3 % ). ConclusionhIL-10-MSCs can notably decrease apoptosis of the transplanted liver probably by inhibiting theexpression of Fas/FasL.     

输注转染人IL-10基因的骨髓间充质干细胞减轻大鼠异种移植肝脏的细胞凋亡

Objective To observe the influence of hIL-10-MSCs on apoptosis of rats subject to discordant liver xenotransplantation. Methods The model of guinea pig to rat discordant liver xenotransplantation was set up. The orthotopic liver transplantation model was established by using modified two-cuff technique. Following groups were designed: control group, MSCs group and hIL-10MSCs group. Before and after operation, the recipients in control group were injected with normal sodium (2 ml) and decaesadril (0.5 ml) ;Those in MSCs group were injected with MSCs (4.0× 106/ml)and decaesadril (0.5 ml); Those in hIL-10-MSCs group were injected with hIL-10-MSCs (4.0 × 106/ ml)and decaesadril (0.5 ml). Twelve h after operation, the livers of recipient were observed by HE staining and electron microscope, and apoptosis of the livers was detected by using TUNEL. The expression levels of hIL-10, caspase-3, Fas and FasL were assayed by Western blot or immunohistochemistry. Results As compared with control group and MSCs group, the pathological changes was alleviated, the expression of IL-10 was significantly increased, the expression of FasL was significantly reduced in hIL-10-MSCs group. The positive area size of Fas and Caspase-3 in hIL-10MSCs group was 11.5 % and 25.1 %, respectively, significantly smaller than those in control group (35.3 % and 70.8 % respectively, P＜0.05. Apoptosis index in hIL-10-MSCs group was 32.5 %,which was significantly lower than in control group (74.1%) and MSCs group (50. 3 % ). ConclusionhIL-10-MSCs can notably decrease apoptosis of the transplanted liver probably by inhibiting theexpression of Fas/FasL.     

骨髓间充质干细胞基因转染应用的研究进展

<正>随着组织工程学研究和发展越来越深入,组织工程种子细胞越来越受到重视。骨髓间充质干细胞(BMSCs)是一种多能成体干细胞,已成为细胞治疗及组织工程修复的重要细胞来源[1]。骨髓间充质干细胞可分化为软骨细胞、脂肪细胞、心肌细胞、胸腺基质细胞和成纤维细胞等[2]。正由于BMSCs具有多向分化及自我更新的能力,目前利用基因转染技术在基因     

人血管内皮生长因子165基因转染人骨髓间充质干细胞的实验研究

Objective To establish an effective method of transfecting human marrow mesenchymal stem cells (MSC) with human vascular endothelial growth factor 165 ( VEGF 165) gene. Methods MSCs isolated and cultured in vitro were divided into transfection group (pShuttle-CMV/VEGF 165 plasmid was transfected into MSCs through liposome-mediating method), empty plasmid group (pShuttle-CMV vehi-cle was transfected into MSCs as control), liposome group (liposome was transfected into MSCs as control) and control group(normal culture). Expressions of Mrna and protein of MSCs were determined by RT-PCR, enzyme-linked immunosorbent assay and Western Blot. Sensitivity to MSCs on VEGF plasmid transfec-tion was detected by MTT test. Results Expression level of VEGF 165 gene Mrna in transfection group, empty plasmid group, liposome group, and control group was respectively 0.89 ± 0.03, 0. 34 ± 0.04, 0.40 ± 0.03, and 0.30 ± 0.03, and the difference between transfection group and the other three groups was statistically significant ( P <0. 01 ). Content of VEGF protein in transfection group, empty plasmid group, liposome group, and control group was respectively (778 ± 35 ), (543 ± 24), (561 ± 28), (571 ± 23) pg/Ml, and the difference between transfection group and the other three groups was statistically significant ( P <0.01 ). In the transfection group, expression level of VEGF protein peaked on 7th day after transfec-tion, which was decreased gradually later. In transfection group, expression level of V EGF 165 protein was obviously higher than that of the other three groups ( P <0. 01 ), and no inhibitory effect of VEGF plasmid transfection on MSCs proliferation was found. Conclusions The method for transfecting human VEGF 165 gene into MSCs is established in this research, through which target gene and protein can express effectively.     

低氧对脂肪间充质干细胞向雪旺细胞分化的影响

目的探讨低氧对脂肪间充质干细胞（ADMSCs）向雪旺细胞（SCs）分化能力的影响。方法分离培养SD大鼠ADMSCs并用流式细胞仪、茜素红染色、油红O染色鉴定。将成功分离的ADMSCs随机分为3组：常氧诱导组,在常氧条件下（5％CO2,21％O2,37℃）诱导;低氧处理＋常氧诱导组,低氧处理（5％CO2,0．5％O2,37℃）后在常氧条件下诱导;低氧诱导组,低氧条件下（5％CO2,0．5％O2,37℃）诱导。观察各组细胞形态,MTT法检测细胞增殖情况,免疫荧光染色和Westernblot检测SCs标志物GFAP和S-100的表达。结果细胞分离后,经流式细胞仪分析可见细胞表面CD44阳性、CD45阳性、CD90阳性,茜素红及油红O染色均为阳性。MTT法检测结果：低氧处理＋常氧诱导组A值为0．861±0．039,高于常氧诱导组0．837±0．017,差异具有统计学意义（P〈0．05）;低氧诱导组A值为0．931±0．041,均高于常氧诱导组和低氧处理＋常氧诱导组（P均〈0．05）。免疫荧光染色发现常氧诱导组和低氧处理＋常氧诱导组大量细胞GFAP和S-100表达阳性,低氧诱导组仅少量细胞S-100和GFAP表达阳性。Westernblot检测发现常氧诱导组S-100蛋白表达最高,低氧处理＋常氧诱导组GFAP蛋白表达最高,低氧诱导组S-100蛋白、GFAP蛋白表达均最低。结论低氧抑制ADMSCs向SCs的分化,低氧处理后的ADMSCs在常氧条件下仍可向SCs分化。     

低氧对人脐带间充质干细胞成脂肪分化的影响

目的：研究低氧（2%O2）对人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs）成脂肪分化的影响,为脂肪组织工程种子细胞的筛选提供实验依据。方法：培养条件有低氧（2%O2）、常氧（20%O2）、10%FBS完全培养基（GM）、10%FBS成脂培养基（DM）;将第3代hUCMSCs根据培养条件分为3组,对照组（常氧＋GM5天,常氧＋DM2周）、实验组1（低氧＋GM5天,低氧＋DM2周）、实验组2（低氧＋GM5天,常氧＋DM2周）;在诱导后2周分别进行油红O染色并观察其成脂效率。结果：与对照组相比,实验组1脂肪样细胞数量明显减少,实验组2脂肪样细胞数量明显增加。结论：将hUCMSCs预先进行低氧处理再转换为常氧培养可显著提高其成脂分化能力。     

红细胞生成素对模拟急性肾损伤微环境下培养骨髓间充质干细胞增殖的影响及机制探讨

目的 观察经红细胞生成素（EPO）干预后,体外模拟急性肾损伤（AKI）微环境下培养骨髓间充质干细胞（MSC）的分裂增殖情况,并探讨产生这种变化的可能机制。 方法 抽取C57BL/6小鼠的骨髓,经Percoll密度梯度离心联合贴壁培养法分离纯化出小鼠MSC（mMSC）,以流式细胞仪鉴定。夹闭雄性C57BL/6小鼠双侧肾蒂30 min再开放30 min的方法制作AKI鼠模型,即刻取双侧肾脏皮质制作缺血再灌注（IR）肾脏匀浆上清。取扩增第3代的mMSC分组培养：A组：含10%胎牛血清的低糖DMEM培养基;B组：含10%胎牛血清的低糖DMEM培养基＋IR肾脏匀浆上清,体外模拟AKI微环境干预mMSC;C组：含10%胎牛血清的低糖DMEM培养基＋IR肾脏匀浆上清+不同浓度EPO（1、5、10、50 U/ml）。培养1、3、5、7 d。CCK-8法检测各组培养mMSC的增殖,TUNEL法检测mMSC凋亡,Western印迹法检测mMSC表面EPO受体（EPOR）及增殖凋亡相关信号通路蛋白的表达。 结果 CCK-8法检测显示,经IR肾脏匀浆上清干预后,不同时间点mMSC的增殖效应显著减弱（P ＜ 0.01）,而TUNEL检测表明其胞核染色阳性细胞的百分比显著高于A组（P ＜ 0.01）;给予EPO干预后,mMSC的增殖能力增强,胞核染色阳性细胞百分比降低,具有浓度依赖效应。Western印迹结果显示,第3代mMSC表面存在EPOR表达,培养5 d后EPOR相对表达量为0.092±0.015。EPO以剂量和时间依赖性降低AKI微环境下凋亡相关蛋白caspase-3的表达,同时上调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达。用10 U/ml EPO干预5 d后,相对于B组,磷酸化蛋白酪氨酸激酶2及磷酸化信号转导和转录因子的表达均显著上调（均P < 0.01）。 结论 EPO能促进体外AKI微环境干预下培养mMSC的增殖,减轻其凋亡,该效应经EPOR介导,并与增殖凋亡相关信号通路蛋白有关。     

脂肪间质干细胞促进胰腺癌细胞活性的实验研究

目的 探讨脂肪间质干细胞(adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,ADSCs)对胰腺癌细胞增殖、侵袭的影响及其机制.方法 从腹腔脂肪分离纯化培养ADSCs,通过半透膜在6孔塑料培养板上建立胰腺癌细胞与ADSCs的双层培养体系,单独培养的胰腺癌细胞作为对照.通过cck-8比色法检测ADSCs对胰腺癌细胞增殖的影响;检测ADSCs对胰腺癌细胞侵袭的影响;ELISA法测定培养液中基质细胞源性因子(SDF-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMP-9)及转化生长因子(TGF-β1)的浓度;qRT-PCR法测定胰腺癌细胞及ADSCs中各细胞因子mRNA的表达;cck-8比色法检测AMD3100对ADSCs与胰腺癌细胞共培养的影响. 结果 成功分离ADSCs;ADSCs可促进各种胰腺癌细胞的增殖与侵袭(均P ＜0.05);与单独培养的胰腺癌细胞相比,ADSCs培养液中含有较多的SDF-1、VEGF、MMP-9,较少的TGF-β1(SDF-1:1100±100比0比0,F=389.134,P＜0.01;VEGF:140 ±4比99 ±5比93 ±4,F=174.102,P＜0.05;MMP-9:61.8±4.2比43.5 ±2.8比54.5 ±3.0,F=76.279,P＜0.05;TGF-β 1:20.6±3.0比35.6 ±2.6比41.3±5.5,F=79.338,P＜0.05);ADSCs促进了胰腺癌细胞中VEGF、MMP-9的表达(VEGF:63.7±5.9比50.6±4.1,t=7.536,P＜0.05;MMP-9:mRNA(55.8 ±3.6比42.7±3.1,t=8.279,P＜0.05).AMD3100能部分降低ADSCs对胰腺癌活性的影响(SW1990:1.539±0.140比1.361±0.066,t=2.835,P＜0.05;PANC-1:1.376 ±0.100比1.281 ±0.031,t=2.860,P＜0.05).结论 ADSCs可能促进胰腺癌细胞的增殖,侵袭.这种作用可能与ADSCs表达的细胞因子有关.     

应用聚集培养技术进行兔骨髓间充质干细胞体外成软骨诱导培养

目的观察离心管诱导培养条件下,兔骨髓间充质干细胞(MSCs)的成软骨分化,从而为应用该技术提供实验依据。方法分离扩增兔骨髓MSCs和关节软骨细胞,采用离心管内聚集培养技术诱导培养:MSCs,用含转化生长因子-β1的DMEM培养液换液,以相同培养条件下的软骨细胞为阳性对照组,以常规培养液换液的MSCs为阴性对照组;分别于培养1、2、3、4周后,收集培养物行苏木素-伊红(HE)染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色和图像分析。结果MSCs诱导培养1周后开始表达Ⅱ型胶原,随时间延长而表达增强,并逐渐产生细胞外基质,但4周内表达强度始终弱于软骨细胞组(P<0.01)。阴性对照组中部分MSCs死亡,培养物崩解。结论采用离心管诱导培养技术可以促进MSCs向软骨细胞表型分化;该技术方法操作简单、诱导确切,适宜于鉴定干细胞的软骨分化潜能。     

传代种植密度对人间充质干细胞增殖及成骨分化的影响

目的 :研究人间充质干细胞 (mesenchymalstemcells ,MSCs)传代培养时 ,细胞种植密度对MSCs增殖及成骨诱导分化影响。方法 :将第 2代MSCs以 8× 10 3 /cm2 、 3× 10 3/cm2 、 8× 10 2 /cm2 密度接种 ,分析其生长曲线 ,并扩增培养 18d ,记录细胞扩增数量 ,再分析扩增后细胞的生长曲线和成骨诱导能力。结果 :人骨髓MSCs阴性表达ALP、CD3 4;在 8× 10 3/cm2 种植密度下 ,细胞倍增时间 40h ,18d后细胞数量扩增 (5 1± 13 )倍 ;在 3× 10 3 /cm2 种植密度下 ,细胞扩增 (2 8± 6)倍 ;在 8× 10 2 /cm2 种植密度下 ,细胞总数仅增加 (5± 3 )倍。在低密度下获得的细胞增殖能力强于高密度组 ,两组细胞均具有成骨诱导能力。结论 :种植密度对MSCs增殖有明显影响 ,快速扩增MSCs作为骨组织工程种子细胞 ,宜选择 8× 10 3 /cm2 种植密度。     

人骨髓间质干细胞向表皮细胞分化的研究

目的探讨人骨髓间质干细胞（MSC）在体外培养条件下能否定向诱导分化为表皮细胞。方法抽取无造血系统恶性疾病的成人骨髓标本，采用Percoll细胞分离液（1．073g／ml）分离MSC，在体外传代培养至第3代，分为对照组和实验组。两组分别用普通L-DMEM培养基和含表皮生长因子、胰岛素、维甲酸、氯化钙的L-DMEM培养基诱导7d。在倒置相差显微镜下每天观察两组细胞的形态；采用免疫组织化学法检测P63和广谱细胞角蛋白（PCK）的表达情况。结果实验组细胞由长梭形逐渐转变为扁圆形或形态不规则，部分细胞P63和PCK呈阳性表达；对照组细胞持续呈长梭形，P63和PCK未见表达。结论人骨髓MSC在体外可诱导分化为表皮细胞。     

Differentiation of adult human bone marrow mesenchymal stem cells into Schwann-like cells in vitro

Bonemarrowmesenchymalstemcells, alsocalledbonemarrowstromalcells (BMSCs), areisolatedfrombonemarrow, andtheycanmultiplyinvitroanddifferentiateintoosteogeniccells,chondrocytes, adipocytes, musclecellsandneuralcells.1 5 RecentstudieshavedemonstratedthatBMSCsfromadultratscoulddifferentiateintoSchwann likecellsinspecificconditions.6, 7 BMSCsmayhavepotentialapplicationforautologousneuraltransplantation. Inthisstudy, wetrytoinvestigatethedifferentiativecapabilityofadulthumanBMSCsintoSchwann l…     

体外培养对骨髓间充质干细胞凋亡的影响

目的 :研究成人骨髓间充质干细胞在体外培养条件下 ,传代次数与细胞凋亡的关系。方法 :采用An nexinV/PI双染色法 ,在流式细胞仪上检测不同传代数的成人骨髓间充质干细胞的凋亡情况。结果 :传代次数越多 ,骨髓间充质干细胞的凋亡率及死亡率越高 ,存活的正常细胞越少。结论 :第 4代以内的细胞增殖能力强 ,凋亡率低 ,适宜于组织工程研究     

骨形成蛋白7真核表达质粒的构建及在骨髓间充质干细胞中的表达

目的 构建骨形成蛋白7(hBMP7)基因真核表达质粒,并使其在骨髓间充质干细胞中表达。方法 采用PCR技术扩增BMP7基因,将其插入真核表达载体pcDNA3．1中,利用梯度离心法分离培养骨髓间充质干细胞(MSCs),然后用构建的BMP7表达质粒转染MSCs,使其得到表达。结果 经过PCR及酶切鉴定证明获得了BMP7真核表达质粒pcDNA-BMP7,通过反转录PCR和免疫组化鉴定证明BMP7在转染后的骨髓间充质干细胞中得到了表达。结论 BMP7真核表达质粒的构建和在骨髓间充质干细胞中的表达,为BMP7基因治疗的研究奠定了坚实的基础,同时也为组织工程成骨和成软骨的研究提供了改良的种子细胞。     

骨髓间充质干细胞促进“创面”愈合的实验研究

目的：探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）促进创面愈合的作用和用于创面修复的可行性。方法：密度梯度离心法分离培养正常人骨髓间充质干细胞（hMSCs），流式细胞仪检测培养第二代细胞CD14、CD29、CD34、CD44、CD45和CD106抗原表达以鉴定MSCs。实验分3组：直接共培养组（n=8）为hMSCs（1×10^5/ml）与人表皮角质形成细胞（HEKa）直接接触共培养；间接共培养组（n=7）为在transwell透明聚碳酸酯膜上层加入hMSCs细胞悬液[（2-3）×10^5个细胞）]，下层接种HEKa，间接共培养；单纯HEKa培养组（n=7）单纯培养HEKa。在倒置显微镜下刮擦生长融合成片的HEKa细胞以制备宽度为100μm的“表皮创面”模型。模型制备后24、48、72h，倒置相差显微镜下计数每高倍视野越过创缘迁移到创面的HEKa数，并用SigmaScan Pro5软件计算创面愈合率，检测HEKa细胞吸收脱氧胸腺嘧啶核苷的放射活性，判定HEKa细胞的分裂增殖活性。结果：流式细胞仪检测第二代hMSCs CD29、CD44和CD106抗原阳性（分别为94.81%、95.38%、97.40%），CD14、CD34、CD45抗原阴性（分别为1.23%、3.05%、2.64%）；直接培养组、间接培养组和单纯HEKa培养组越过创缘进入创面的细胞伤后24h分别有（10.00±0.25）、（5.50±0.20）和（5.20±0.35）个/高倍视野；48h分别有（55.30±0.22）、（27.00±0.34）和（26.50±0.25）个/高倍视野；72h分别有（110.50±0.45）、（42.50±0.50）、（40.20±0.38）个/高倍视野。3组伤后72h创面愈合率分别为（60.00±0.04）%，（35.00±0.01）%、（33.00±0.05）%。脱氧胸腺嘧啶苷掺入培养基法表明hMSCs对体外共培养HEKa细胞的增殖作用分别为（1650±270）cpm/10^5 cell、（1240±210）cpm/10^5 cell、（1180±220）cpm/10^5 cell。上述各指标直接共培养组与单纯HEKa培养组比较，差异有显著性（P〈0.01），而间接培养组与单纯HEKa培养组间差异无显著性（P〉0.05）。     

成骨细胞特异性钙黏蛋白基因转染对人骨髓基质干细胞成骨分化影响的研究

目的 观测成骨细胞特异性钙黏蛋白(Cad-Ⅱ)基因转染对人骨髓基质干细胞(hBMSCs)成骨分化的影响. 方法把脂质体介导的Cad-Ⅱ cDNA转染体外分离培养的hBMSCs,检测Cad-Ⅱ蛋白表达变化,并对比观测转染组和单纯成骨诱导组在培养3,7、14、21 d时,hBMSCs碱性磷酸酶(ALP)和骨钙索的表达变化. 结果 转染组和成骨诱导组3 d后开始有ALP的阳性染色,呈棕黑色,7 d开始有骨钙索的阳性染色并随培养时间延长逐渐增多,但各时间点转染组ALP浓度(P=0.008)和骨钙素染色阳性数(P=0.023)均显著高于单纯成骨诱导组.转染组和成骨诱导组从14 d后开始有红色的刚件染色矿化结节出现,结节数目随时间推移而增多. 结论 Cad-Ⅱ基因转染可促进hBMSCs向成骨细胞的分化.