糖痛方及其有效成分对高糖培养的施万细胞增殖的影响

目的 探讨中药糖痛方含药血清及其主要有效成分川芎嗪、黄芪多糖对高糖培养的施万细胞增殖的影响.方法 利用CCK-8细胞增殖试剂观察不同浓度的糖痛方含药血清、川芎嗪单体、黄芪多糖单体及川芎嗪和黄芪多糖混合物在24～96h之间对高糖培养的施万细胞增殖的影响.结果 高糖培养下施万细胞增长受抑制,而不同浓度的糖痛方含药血清、川芎嗪单体、黄芪多糖单体及川芎嗪和黄芪多糖混合物在96h内均可促进高糖培养的施万细胞增殖;不同浓度的糖痛方含药血清对施万细胞增殖作用明显优于川芎嗪单体、黄芪多糖单体及川芎嗪和黄芪多糖混合物(P＜0.05).结论 糖痛方含药血清可以减轻高糖对施万细胞增殖的抑制作用,且中药复方的作用明显优于中药单体.     

MicroRNA-1对施万细胞增殖的调节作用

目的:探讨microRNA-1(miR-1)对施万细胞增殖的影响及其作用的靶基因。方法:采用Edu染色法检测miR-1对原代培养的施万细胞增殖能力的影响,用双荧光素酶报告基因系统确定miR-1的靶基因。结果:miR-1能够抑制原代培养的施万细胞的增殖,并可直接作用于Edn1基因的3′UTR。结论:miR-1可以直接靶向Edn1的3′UTR,从而通过下调靶基因Edn1的表达抑制施万细胞的增殖。     

微环境中β-连环蛋白对毛囊干细胞增殖分化的影响

近年来对毛囊干细胞的研究不断深入,其中干细胞所处的微环境在细胞增殖、分化中的作用更是备受关注.微环境调控干细胞增殖与分化是通过细胞与细胞、细胞与细胞外基质、细胞因子及细胞微环境中信号分子之间的相互作用实现的.     

双向电泳技术分析大鼠感觉神经施万细胞与运动神经施万细胞蛋白表达差异

目的:建立正常大鼠感觉神经施万细胞(sensory nerve Schwann cell,snSc)与运动神经施万细胞(mo-tor nerve Schwann cell,mnSc)蛋白质分离的双向电泳(2-DE)技术体系,探讨运动神经施万细胞与感觉神经施万细胞存在的蛋白表达差异。方法:正常SD大鼠(180±20g)深度麻醉后打开椎管,取出运动神经和感觉神经,分别分离感觉与运动的施万细胞总蛋白,进行二维电泳和PDQuest软件分析。对其中表达有差异的蛋白质点,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间-串联质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)鉴定。结果:建立了正常大鼠感觉神经施万细胞与运动神经施万细胞的蛋白质二维凝胶电泳图像,通过PD Quest软件分析发现有12个表达差异的蛋白质点,利用MALDI-TOF/TOF-MS成功鉴定了其中3个蛋白质。     

MicroRNA-34a通过靶基因c-Met抑制施万细胞增殖

目的:探讨坐骨神经横断后,microRNA-34a(miR-34a)对c-Met(肝细胞生长因子受体)的调控作用及对施万细胞增殖的影响。方法:采用Real-time PCR检测miR-34a和c-Met在坐骨神经横断后近侧端的表达变化;Edu染色法检测miR-34a对原代培养的施万细胞增殖能力的影响;双荧光素酶报告基因系统检测miR-34a对c-Met 3’UTR的直接靶向作用。结果:miR-34a与c-Met在坐骨神经横断后近侧端的表达呈负相关,能够抑制原代培养的施万细胞的增殖,并可直接作用于c-Met基因的3’UTR。结论:miR-34a可以直接靶向c-Met的3’UTR,从而通过下调靶基因c-Met的表达抑制施万细胞的增殖。     

施万细胞培养与纯化研究进展

施万细胞是组织工程修复损伤神经的种子细胞,获得大量且高纯度的施万细胞对组织工程学至关重要。施万细胞的培养纯化技术日趋完善,近年来出现了三维培养,纯化方法为免疫选择法、抗有丝分裂法、神经刺激因子法等,最近比较新的提纯方法有磁性活细胞纯化法、条件培养基纯化法、层粘连蛋白纯化法等。施万细胞的培养和提纯方法已取得初步进展,目前尚有许多问题有待解决,如周期长、细胞活性低、在传代培养中细胞生物学特性不稳定等。     

适度低氧微环境对体外培养脑胶质瘤干细胞生长的影响

目的 探讨低氧微环境对脑胶质瘤干细胞(GSCs)凋亡及增殖的影响.方法 原代培养脑胶质瘤干细胞,特殊培养基筛选;将GSCs分常氧组(21％02)和低氧组(3％02),给予不同的氧浓度,倒置显微镜下观察细胞形态、荧光显微镜及流式细胞仪检测细胞凋亡、MTT法检测细胞增殖情况.结果 倒置显微镜下可见低氧组细胞较常氧组生长更好;荧光显微镜下2组细胞的胞核形态完好,无凋亡像;流式细胞仪检测,与常氧组相比,低氧组细胞凋亡率无差异(P＞0.05);MTT示:于72 h、96 h及120 h时低氧组较常氧组明显增殖(P＜0.05).结论 适度低氧不会诱导脑胶质瘤干细胞凋亡;适度低氧微环境对胶质瘤干细胞有促增殖作用.     

大鼠脂肪源性干细胞来源的施万样细胞的增殖能力

目的：通过检测大鼠脂肪源性干细胞（ADSCs）来源的施万样细胞的增殖能力,探讨其在神经修复再生领域的应用及其意义。方法：取大鼠附睾旁脂肪组织进行ADSCs的分离与培养;将第4代ADSCs在β-巯基乙醇（β-ME）、反式维甲酸（ATRA）、血小板衍生因子AA（PDGF-AA）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、腺苷酸环化酶激活剂（Forskolin）和Heregulin-β的联合作用下诱导分化为施万样细胞。采用免疫荧光法、Western blotting法和Real-time PCR法检测施万细胞（SCs）标记物S-100β、P75和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达水平;采用MTT法检测施万样细胞的增殖能力,观察其有丝分裂增殖现象。结果：诱导分化后的施万样细胞呈梭形、栅栏样排列。S-100β、P75和GFAP蛋白免疫荧光为Cy3/FITC标记,阳性产物位于细胞浆及其突起。Western blotting和Real-time PCR法检测,施万样细胞中S-100β、P75和GFAP蛋白和mRNA表达水平明显高于ADSCs（P<0.01）。MTT法检测,施万样细胞有较强的有丝分裂增殖能力。结论：ADSCs能够成功被诱导分化为施万样细胞,并表达SCs标记物;施万样细胞有较强的有丝分裂增殖能力,可作为神经组织工程理想的种子细胞。     

不同方法诱导脂肪干细胞分化为类施万细胞

目的寻求一种有效的方法将脂肪干细胞在体外诱导分化为类施万细胞。方法采用2种不同的诱导剂使用方法诱导大鼠脂肪干细胞,从形态学、抗S-100、抗GFAP免疫细胞化学染色阳性率、染色灰度值,MTT法细胞活性测定来比较其效果的不同。结果2种方法均可有效地诱导大鼠脂肪干细胞分化为类施万细胞,改良法诱导的细胞在形态上更接近施万细胞,抗S-100、抗GFAP阳性率、染色灰度值均优于传统法;MTT细胞活性测定显示改良法对细胞活性影响较小。结论改良法体外诱导大鼠脂肪干细胞的效果优于传统法。     

失神经骨骼肌提取液对雪旺细胞体外增殖的作用

目的：观察去神经支配骨骼肌粗提液在体外培养条件下对雪旺细胞（Schwann cells,SCs)增殖的作用,了解外周神经损伤后SCs大量增殖的机理。方法：将新生大鼠SCs培养标本分为加正常骨骼肌提取液组,加失神经支配骨骼肌提取液组和正常对照组,每组10个标本。通过活细胞计数和S－100免疫细胞化学染色证实,观察两种肌肉提取液对SCs增倍时间的影响。结果：对照组SCs增倍时间为8天,正常骨骼肌提取液组为7天,而去神经支配骨骼肌提取液组为5．5天。结论：周围神经损伤后SCs可能受失神经支配骨骼肌产生的某些物质的刺激而增殖加快。     

被动吸烟与甲醛及通风不良对小白鼠影响的实验观察

目的分析三种有害室内因素:被动吸烟、甲醛及通风不良对小白鼠机体的影响。方法将32只小白鼠随机分为4组:被动吸烟组、甲醛组、通风不良组和空白对照组,每组8只,对前三组分别进行通香烟、通甲醛、不通风处理,空白组处于通风正常环境,实验持续4小时,过程中每隔1小时所有小鼠进行独木桥和通电迷宫试验及耐缺氧试验。结果t检验和方差分析显示,被动吸烟组过独木桥和穿行迷宫的时间比其他组显著延长,p<0.05,具有统计学意义。结论被动吸烟对中枢神经系统有严重的毒性作用。甲醛对中枢神经也有一定损伤作用。通风不良的环境,导致脑供氧不足而影响精神状态及平衡感下降。     

低氧对鼠雪旺氏细胞增殖的影响

目的观察低氧对鼠雪旺氏细胞体外增殖的影响,为雪旺氏细胞扩增培养探索新方法。方法原代分离培养雪旺氏细胞并鉴定,将培养至第三代的细胞分为3组,分别为对照组,10%02组和3%O2组。对各组细胞记数;测定培养液中氧含量和乳酸浓度及各组细胞的增殖指数。结果随着环境氧浓度的下降,细胞培养液中的氧含量也逐渐下降(P<0.05),而乳酸浓度逐渐升高(P<0.05)。低氧组雪旺氏细胞数目比常氧组明显增加,尤以10%O2组更为明显(P<0.05),3%O2组在低氧1d和2d时增殖指数低于常氧组,低氧4时,增殖指数增加;而10%O2组增殖指数一直高于常氧组(P<0.05)。结论轻中度低氧有利于鼠雪旺氏细胞的体外增殖。     

大鼠雪旺细胞和成骨细胞联合培养的实验研究

目的观察大鼠雪旺细胞与成骨细胞体外联合培养条件下,成骨细胞的生长和增殖情况。方法日龄3 d的SD大鼠,采用混合酶消化法体外分散培养雪旺细胞和成骨细胞,并用Millicell小室实现雪旺细胞与成骨细胞的联合培养。待细胞生长稳定后,用倒置相差显微镜观察细胞的形态学特征,MTT法检测成骨细胞的增殖情况。结果对照组成骨细胞于10 d左右可以铺满培养板底,此时细胞体积增大、数量增多,形态以多角形为主,细胞之间出现重叠生长,联系密切。共培养组成骨细胞生长速度增快,7 d左右即可铺满培养板底,逐渐形成铺路石状,其中心部位的细胞较密集,可以出现散在的钙化结节。MTT结果显示共培养组成骨细胞增殖明显。结论雪旺细胞对成骨细胞的生长、增殖具有一定的促进作用。但是,关于该作用是否是通过FGFs实现的还有待于进一步的研究。     

新生大鼠雪旺细胞的体外培养和纯化

目的:探索简单有效获取大量高纯度雪旺细胞的新方法。方法:分离出生3d的新生SD大鼠坐骨神经,使用胰蛋白酶及I型胶原酶混合消化,结合差速贴壁法和G418纯化。四氮唑盐(MTT)比色法测定细胞的生长增殖情况,免疫细胞化学方法计算雪旺细胞的纯度。结果:胰酶和胶原酶混合消化后的活细胞率为94.6±3.4%,纯化后的雪旺细胞纯度为95.6±2.5%。结论:胰酶和胶原酶混合消化结合差速贴壁和G418纯化是获取大量高纯度雪旺细胞的简单有效方法。     

新生大鼠雪旺细胞体外培养及纯化的方法比较

目的：比较体外培养及纯化雪旺细胞的两种方法。方法：用显微镜观察摄像及S－100免疫细胞化学染色的方法对Ara-c杀灭纯化培养法及分级沉淀培养法细胞的生长态势和纯化率作一比较，结果：分级沉淀培养及纯化SC细胞，生长态势良好且纯化率可达85％－90％，总体效果优于Ara-C杀灭纯化培养法。结论：分级沉淀培养SC可以达到SC体外扩增的目的且可达到一定的纯化率，如要提升纯化率，可再结合Ara-c 杀灭纯化方法或其它方法。     

骨髓基质干细胞与施万细胞联合移植对周围神经缺损的修复作用

目的探讨骨髓基质干细胞（BMSCs）与施万细胞（SCs）联合移植对周围神经损伤的修复作用。方法雌性SD大鼠48只随机分为A、B、C、D 4组,每组各12只;制作右下肢长10 mm坐骨神经缺损模型后,A组注入全贴壁法培养的BMSCs与差速贴壁结合阿糖胞苷法培养的SCs,B组仅注入BMSCs,C组仅注入SCs,D组注入磷酸盐缓冲液（PBS）作为阴性对照。分别于4、8周观察动物一般状态,测定坐骨神经功能指数（SFI）、神经传导速度（NCV）以及免疫组化检测表皮生长因子（EGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的表达水平。结果 4周时,SFI绝对值A组（53.07±5.36）优于B组（62.73±7.63）、C组（67.17±8.06）、D组（77.56±2.79）,差异有统计学意义（P〈0.05）;A组损伤侧NCV[（20.38±3.13）m/s]优于B组[（16.54±2.18）m/s]、C组[（17.74±0.93）m/s]、D组[（8.25±1.73）m/s],差异有统计学意义（P〈0.05）。8周时,SFI值A组（35.43±4.5）优于B组（48.25±3.62）、C组（51.48±3.93）、D组（70.53±5.48）,差异有统计学意义（P〈0.05）;A组损伤侧NCV值[（25.67±2.18）m/s]优于B组[（19.69±4.07）m/s]、C组[（21.37±3.17）m/s]、D组[（10.93±1.59）m/s],差异有统计学意义（P〈0.05）。4、8周时A、B、C组EGF和bFGF表达平均光密度值（AOD）与D组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 BMSCs与SCs联合移植能够促进损伤轴突的再生,恢复神经功能,对周围神经损伤具有明显的修复作用。     

PDGFRA在肺癌细胞系中的表达及其对细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:明确血小板源性生长因子受体A(platelet-derived growth factor receptor alpha,PDGFRA)对肺癌细胞增殖和侵袭能力的影响.方法:在8种肺癌细胞系以及正常肺细胞HBE中通过RT-PCR方法检测PDGFRA的基本表达水平,分别选取PDGFRA表达高的两组肺癌细胞系(A549)通过慢病毒转染构建稳定knock down和过表达PDGFRA细胞系,再进一步通过MTS,划痕实验,transwell实验以及western-blot实验明确PDGFRA对肺癌细胞增殖和侵袭能力的影响.结果:与对照组相比,过表达PDGFRA后,细胞增殖以及侵袭能力显著增加,同时与侵袭能力相关的细胞黏附分子E-cadherin和细胞骨架蛋白Vimentin表达上调,划痕实验和transwell实验结果表明PDGFRA能够促进细胞侵袭能力.在knock down PDGFRA细胞系中,细胞增值能力降低,细胞黏附分子E-cadherin和细胞骨架蛋白Vimentin表达下调,与对照组相比,细胞侵袭能力下降.结论:PDGFRA能够促进肺癌细胞增殖并有助于肺癌细胞的侵袭转移.     

肿瘤坏死因子和干扰素对体外培养乳鼠雪旺氏细胞的增殖影响

目的 :探讨肿瘤坏死因子 (TNF -α)与干扰素 (IFN -γ)联合应用对体外乳鼠雪旺氏细胞增殖的抑制作用。方法 :建立体外乳鼠雪旺氏细胞培养体系 ;经分离、纯化、传代的雪旺氏细胞通过免疫组化、电镜鉴定后 ,纯度达到90 %以上后进行实验。实验分为空白组、对照组、TNF -α组、IFN -γ组及TNF -α +IFN -γ组 ,分别作用 72h后 ,应用四氮唑蓝 (MTT)比色法测定各组的OD值 ,计算其抑制率。结果 :TNF -α和IFN -γ对乳鼠雪旺氏细胞生长增殖均有直接抑制作用 ,其中TNF -α在 10 0～ 2 0 0 0U/ml浓度范围内对正常雪旺氏细胞增殖有抑制作用 ,呈剂量依赖关系 ,在10 0 0U/ml抑制率达到最大。联合用药能明显提高TNF -α对乳鼠雪旺氏细胞生长增殖的抑制效应。结论 :TNF -α对乳鼠雪旺氏细胞生长增殖起抑制作用 ,并呈剂量依赖性。IFN -γ与TNF -α联合用药有明显的协同抑制效应。