外周血淋巴细胞穿孔素、颗粒酶B在大鼠肾移植急性排斥的表达及意义

目的:探讨大鼠同种异体肾移植外周血淋巴细胞(peripheralbloodlymphocyte,PBL)穿孔素、颗粒酶B的表达与急性排斥反应(acuterejection,AR)的关系。方法:实验组:异基因移植组(SD→Wister),对照组:同基因移植组(Wister→Wister)。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测移植肾和PBL穿孔素、颗粒酶B的表达,并以同基因肾移植为对照。结果:病理学检查结果显示实验组大鼠在术后第5、7、9、11天分别发生轻、中、重度排斥,对照组无明显排斥现象。RT-PCR结果显示急性排斥反应发生在肾移植术后3天,即急性排斥早期均表达穿孔素、颗粒酶B基因mRNA,4天后表达明显增强,并贯穿整个排斥反应全过程,而同基因对照组术后11天内均不表达两基因。外周血和肾组织中穿孔素、颗粒酶BmRNA的表达水平平均在急性排斥反应发生前3￣5天开始明显上升,其变化趋势早于血清肌酐。结论:穿孔素、颗粒酶B是一种有价值的AR标志物。定量RT-PCR测定外周血淋巴细胞中穿孔素、颗粒酶BmRNA表达可以较敏感预测肾移植急性排斥反应的发生,这一非侵入性检查方法可以为急性排斥反应的监测和诊断提供客观依据。     

移植肾急性排斥反应中外周血CD40、CD40L分子的表达及临床意义

目的 研究移植肾出现急性排斥反应时,受者外周血中白细胞CD40、CD40L分子的表达及临床意义.方法 将患者分成2组,急性排斥反应组15例,未出现排斥反应组(对照组)41例,采用流式细胞仪检测56例肾移植受者外周血CD40、CD40L在CD4 、CD8 T细胞表面的表达.结果 当发生急性排斥反应时,受者的外周血CD40、 L分子的表达均增强,排斥组与未排斥组间差异有显著性.结论 肾移植急性排斥反应的发生与CD40、CD40L共刺激通路的活化有十分密切关系,CD40、CD40L分子的表达随急性排斥反应的增加而显著上升.可作为临床上对急性排斥反应的无创性诊断方法之一.     

外周血白细胞淋巴细胞功能相关抗原-1表达对受者肾移植前后的作用

目的监测肾移植前后外周血白细胞淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)的表达水平,了解其变化规律,探讨其在移植排斥反应中的意义.方法应用单克隆抗体-流式细胞术荧光抗体技术监测肾移植受者外周血白细胞淋巴细胞LFA-1表达水平.结果肾移植术后LFA-1表达水平较术前显著降低,并维持在低水平,发生排斥反应时显著升高,排斥时LFA-1表达水平与术后无排斥时及排斥反应控制后LFA-1比较差异有显著性,与术前比较差异无显著性.结论LFA-1在白细胞淋巴细胞上表达与排斥反应密切相关,监测LFA-1的表达水平有助于肾移植排斥反应的诊断.     

排斥反应时肾移植受者移植肾组织及外周血中CD40的表达

【目的】检测排斥反应时移植肾组织内和外周血中CD40的表达情况。【方法】采取同种异体移植肾患者不同阶段的植肾活检组织和外周血，用免疫组化和流式细胞学方法检测活检组织中和外周血中CD40的表达情况。【结果】53例肾移植受体共行肾活检198次；CD40移植前表达阴性；移植后肾功能稳定期的穿刺标本中偶见弱阳性表达；急性排斥反应（AR）时CD40表达增加，内皮细胞、上皮细胞和炎性浸润细胞的阳性率分别为21％、39％和60％，抗排斥治疗后CD40表达转阴性；非急性排斥反应（N-AR）组中CD40阳性表达率显著低于急性排斥反应组。AR时外周血中CD40^＋和CD154^＋细胞比率显著高于术前水平，抗排斥治疗后恢复至术前水平。【结论】移植肾组织和外周血中CD40分子表达与排斥反应的发生密切相关。     

SYBR荧光实时定量PCR检测肝移植受者CD95和CD95L mRNA表达

目的 检测肝移植受者外周血淋巴细胞CD95和CD95L mRNA的表达,并探讨其在移植肝急性排斥反应中的意义。方法 采用SYBR荧光实时定量PCR法检测56例肝移植受者外周血淋巴细胞CD95和CD95L mRNA的表达。结果 CD95和CD95L mRNA在移植肝急性排斥患者外周血中的表达均显著升高（P〈0．011,时间上平均早于血肝功能酶谷丙转氨酶、谷草转氨酶升高2d。结论 CD95和CD95L与移植肝急性排斥反应密切相关,CD95和CD95LmRNA可作为移植肝急性排斥反应发生的预测和诊断指标之一。     

颗粒酶B基因mRNA在心脏移植急性排斥反应期的表达

目的 检测在大鼠心脏移植排斥反应过程中,心肌组织与外周血中的颗粒酶B基因mRNA的表达,以探讨其表达水平对心脏移植急性排斥反应的诊断价值.方法 建立Ono式大鼠腹腔异位心脏移植模型,设同系移植对照组、同种移植试验组,各组分别在术后1、3、5、7、9天采集移植心脏并抽取下腔静脉血进行半定量RT-PCR,检测颗粒酶B基因mRNA.结果 在同种移植试验组心肌组织及外周血中,各时间点均检测到了颗粒酶B基因mRNA的表达,其表达随着排斥反应程度的升高持续升高,至术后笫9天达到高蜂.结论 应用RT-PCR法检测心肌及外周血中颗粒酶B基因mRNA的表达可以对心脏急性排斥反应做出早期监测.     

肾移植后外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA的表达

目的:研究外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA表达水平与同种异体肾移植术后急性排斥反应及慢性移植肾肾病发生的关系。方法:应用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-PCR)的方法检测16例肾移植术后急性排斥患者、8例慢性移植肾肾病患者、8例移植后肾功能正常者、8例尿毒症患者和8例正常人的新鲜外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA的表达水平,比较各组的差异及其与急性排斥反应和慢性移植肾肾病发生的关系。结果:急性排斥反应患者外周血中Foxp3 mRNA表达水平低于慢性移植肾肾病患者,差异有统计学意义（P<0.01);慢性移植肾肾病患者外周血中Foxp3 mRNA表达水平明显低于正常人、终末期肾病患者和肾移植后肾功能正常患者,差异有统计学意义（P<0.01);正常人、终末期肾病患者和肾移植后肾功能正常患者之组间Foxp3 mRNA表达水平无显著差异（P>0.05)。结论:外周血中Foxp3 mRNA表达水平可以反应移植肾的功能状态,其可能成为早期诊断移植后急性排斥反应和慢性移植肾肾病的一个无创指标。     

转人CD59基因小鼠对人补体介导的免疫反应的保护作用

目的:探讨转基因小鼠血管内皮细胞特异性表达人CD59(hCD59)基因对人补体介导的免疫反应的保护作用。方法:通过显微注射方法建立转hCD59基因小鼠,采用PCR、Southernblot方法检测hCD59基因的整合,流式细胞仪检测hCD59蛋白的表达,人血清体外灌注转基因小鼠心脏、免疫组织化学染色补体C9及IgG评估排斥反应的情况。结果:转基因小鼠hCD59基因表达强度为人外周血白细胞的35%～120%,转基因小鼠体外灌注心脏存活时间明显延长(P<0.01),心脏补体C9沉积明显减少。结论:血管内皮细胞特异性表达hCD59可以减轻异种移植排斥反应,延长移植物的存活时间。     

TLR4mRNA在大鼠肾移植急性排斥反应中的表达及意义

目的探讨大鼠肾移植术后急性排斥反应时TLR4 mRNA的表达及意义。方法建立大鼠肾移植模型,将大鼠分为健康对照组(6例),同基因移植组(30例),异基因移植组(C组,30例),采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术分别于术后1、2、3、5及7 d检测受体大鼠血液及移植肾TLR4 mRNA的表达,同时检测其外周血肌酐,并在光镜下观察肾脏组织病理变化。结果异基因移植组TLR4mRNA的表达和血肌酐明显高于健康对照组和同基因移植组,且TLR4 mRNA表达在造模后第1天即明显升高,组织病理学也观察到排斥现象。结论 TLR4mRNA有助于早期诊断肾移植急性排斥反应的发生,可能作为一种新的监测标志物。     

异种肾移植超急性排斥反应时血液流变学的变化

采用猪-犬肾移植建立超急性排斥反应模型,分别在移植前、移植肾超急性排斥发生时和排斥肾切除后10～15min检测外周血的血液流变学参数变化.结果:异种肾移植发生超急性排斥时血小板聚集明显升高,纤     

大鼠心脏移植急性排斥反应过程中穿孔素及颗粒蛋白酶B mRNA的表达

目的通过动态监测大鼠异体异位心脏移植外周血（PB）中穿孔素（pedorin，P）和颗粒酶B（granryme B，OB）的表达水平，判断其与急性排斥反应的相关性。方法实验组（n=16），供受体分别为Wistar和SD大鼠；对照组（n=17），供受体均为SD大鼠，两组术后均未接受抗排斥治疗。于术前及术后不同的时间采血，同时进行活组织病理检查，应用荧光定量RT-PCR（FQ-PCR）的方法，测定P及GBmRNA的表达水平，并与同期的病理检查结果相对照。结果实验组于移植后24hP及GBmRNA的表达上调，术后72h的表达明显增加（P〈0．001），术后3—5d达峰值，7—11d维持高水平，其变化早于病理改变；而对照组P及GBmRNA的表达及病理改变，在同期的观察过程中均没有明显的变化（P〉0．05）。结论同种异体大鼠心脏移植的急性排斥反应过程中，外周血淋巴细胞的穿孔素与颗粒酶BmRNA的表达水平术后呈现递增性，早于病理改变，可以作为急性排斥反应的监测指标。     

环孢霉素A对大鼠心脏移植模型淋巴细胞分子表达与移植心脏病理学改变时相关系的影响

【目的】 通过环孢素A(CsA)干预的异体异位心脏移植动物模型的研究,对移植术后淋巴细胞分子表达?心肌组织淋巴细胞浸润能力和移植心脏病理改变时相进行比较,探讨环孢素A对其影响?【方法】 SD大鼠为移植心脏供体,Wistar大鼠为移植心脏受体?实验分为心脏移植对照组和环孢素A干预+心脏移植组实验组两组?在移植前及移植后24 h?3 d?7 d?10 d和12 d时间点免疫荧光测定淋巴细胞在心肌组织中浸润能力?实时定量PCR检测淋巴细胞编码基因CD4?CD8 和酪氨酸激酶P59 mRNA表达水平?心肌组织病理学检查判断排斥反应程度?【结果】 ①心脏移植后24 h内,外周血淋巴细胞基因的转录与表达为一过性降低;②心肌组织CD4+?CD8+ 淋巴细胞浸润和Ⅱ级排斥反应病理改变,主要出现于心脏移植后的d3 ~ d7;③环孢素A不能有效抑制移植后3 d内心肌组织CD4+?CD8+淋巴细胞浸润程度的快速增加,但可明显降低移植后d3 ~ d7的心肌组织CD4+ 淋巴细胞的浸润程度;④环孢素A不能完全阻断淋巴细胞P59基因的表达;⑤环孢素A不能有效抑制淋巴细胞CD4基因正调表达,但可抑制CD8基因的转录?【结论】环孢素A的移植排斥反应的抑制作用在大鼠移植后d3 ~ d7?淋巴细胞基因表达?心肌组织淋巴细胞浸润与排斥反应病理改变有关?这将有助于同种移植病人环孢素A的临床应用?     

Cy7.SE标记ICOS-Ab荧光示踪技术评估小鼠心脏移植术后急性排斥反应

目的 探讨以T细胞活化表达的可诱导共刺激分子(inducible co-stimulatory molecule, ICOS)为基础的荧光示踪技术无创诊断小鼠心脏移植后急性排斥反应的可行性。方法 以小鼠颈部异位心脏移植为模型,分为同系移植、同种移植、同种移植+他克莫司(tacrolimus,FK506)治疗(同种移植治疗组)及同种移植治疗后停药组,分别在移植术后1、3、5、7 d,采用荧光染料Cy7.SE标记抗小鼠ICOS抗体(Cy7.SE-ICOS-Ab)经尾静脉注入移植小鼠,用荧光实时显像仪观察移植物荧光图像变化;同时用流式细胞仪检测各组小鼠脾脏T细胞表面ICOS表达,H-E染色分析心脏移植物病理改变。结果 同系移植及同种移植治疗组小鼠移植术后各时间点基本不显影;同种移植术后1 d,移植物荧光图像无明显变化,但术后3、5、7 d荧光逐渐增强,术后7 d时荧光强度最明显;同种移植治疗后停药组停药3 d移植物荧光强度逐渐增强,停药5、7 d后强度明显增强。H-E染色表明:各时间点同系移植及同种移植治疗组小鼠心脏移植物无明显排斥反应;同种移植及同种移植治疗后停药组在术后(或停药后)1 d移植物无明显排斥反应,术后3、5、7 d排斥反应逐渐出现并加重。流式细胞仪检测显示:术后1 d,各组脾脏T细胞表达ICOS水平无明显差异;同系移植及同种移植治疗组在各时间点基本不表达ICOS,但同种移植及同种移植治疗后停药组在术后(或停药后)3、5、7 d ICOS表达逐渐增加(P<0.05)。结论 ICOS表达强度与心脏移植后排斥反应强度有关,荧光标记的ICOS抗体可能有助于无创评估移植术后急性排斥反应的发生及程度。     

外周血淋巴细胞LFA-1水平与肝移植急性排斥的关系

【目的】探讨大鼠原位肝脏移植(OLTx)后外周血淋巴细胞表面淋巴细胞功能相关抗原-1（LFA-1）与急性排斥的关系。【方法】实验动物分为两组,非排斥对照组供体、受体均为SD大鼠,各20只,排斥组供体为Wistar大鼠,受体为SD大鼠,各20只。受体大鼠分别于原位肝移植术前1天及术后第1、3、5、7天从尾静脉采血,经免疫荧光抗体-流式细胞术检测淋巴细胞表面LFA-1的表达。【结果】原位肝移植术后,受体大鼠外周血淋巴细胞LFA-1呈低水平表达,与术前相比差异具显著性意义（P<0.01）;受体大鼠发生急性排斥反应时,外周血淋巴细胞LFA-1水平显著增高,与对照组相比差异具显著性意义（P<0.01）。【结论】检测外周血淋巴细胞LFA-1表达水平有助于移植肝脏急性排斥的诊断。     

Simulect 和 Zenapax 应用于肾移植诱导治疗的5年临床观察

目的评价2剂Simulect和5剂Zenapax在肾移植中诱导治疗预防急性排斥反应(AR)的有效性、安全性以及对近、远期人/肾存活的影响。方法选择1999年4月~2001年4月首次肾移植患者102例,分成Simulect组(54例)和Zenapax组(48例),在三联免疫抑制剂基础上(环孢素A/FK506、骁悉、皮质激素)加用Simulect(术前2h和术后第4天分别予20mg静滴)或Zenapax(1mg.kg-1.d-1,最大剂量100mg,首剂术前2h,此后每2周1剂,共5剂)。观察术后3个月内肾功、AR、移植肾功能延迟恢复(DGF)、急性肾小管坏死情况;术后5年内肾功、排斥反应、并发症及人/肾存活情况。结果术后3个月内AR发生率明显降低(Simulect组:14.8%;Zenapax组:14.6%);首次AR发生时间延迟;激素治疗对大部分AR有效;5年内再次排斥反应发生率为9.3%(Simulect组)和6.3%(Zenapax组)。术后肾功能恢复明显加快,早期及远期肾功能良好。未出现细胞因子释放综合征,仅2例DGF。5年内,感染、糖尿病、高脂血症、恶性肿瘤等未见增加。5年人/肾存活良好,均达95%以上。结论2剂Simulect和5剂Zenapax预防肾移植术后AR的效果好、安全性高,有利于早期肾功能恢复和远期人/肾存活。     

外周血穿孔素和颗粒酶B mRNA检测对胰腺移植急性排斥反应早期诊断的价值

目的 研究胰腺移植术后外周血穿孔素和颗粒酶B的基因表达对急性排斥反应早期诊断的价值.方法 实验动物为杂种长白猪,分为3组(n=8):对照组,移植组.免疫抑制剂治疗组.移植手术为同种异体门静脉回流、肠内引流全胰十二指肠移植.免疫抑制剂治疗组在行同种异体胰十二指肠移植的同时应用环孢A 骁悉 甲强龙三联免疫抑制治疗.分别于术前1 d和术后1、3、5、7 d采集受者锁骨下静脉血,抽提总RNA,RT.PCR方法检测静脉血淋巴细胞中穿孔素和颗粒酶B的mRNA表达,检测受者血糖、胰岛素、胰高血糖素水平.在术后1、3、5、7d,开腹取胰腺组织进行常规病理学检查,与血液中穿孔素和颗粒酶B的mRNA表达水平进行比较分析.结果 ①对照组、移植组、免疫抑制剂组之间受体的血糖、胰岛素、胰高血糖素水平变化差异无统计学意义.②与移植组比较,免疫抑制剂组静脉血淋巴细胞中穿孔索和颗粒酶B的mRNA表达水平下降(P<0.05).③胰腺移植术后静脉血穿孔素、颗粒酶B mRNA表达变化比急性排斥反应病理学改变早2～d.结论 监测外周血淋巴细胞中穿孔素和颗粒酶B mRNA表达的变化,可以对胰腺急性排斥反应做出早期诊断.     

HO-1通过调节T细胞发挥对移植器官的保护作用

器官移植是器官疾病终末期治疗的有效途径,为患者提供再次生存的机会,但移植后免疫排斥又成为治疗成功的最大障碍,是移植界面临的首要难题。血红素氧化酶1(HO-1)是体内血红素代谢分解的限速酶,其在移植后的器官保护作用已被普遍认知。通过诱导HO-1在体内过度表达,促进Foxp3基因的表达,刺激scurfin蛋白表达,增加脾脏及外周血中Foxp3+T调节细胞(Foxp3+Treg)数量,增加CD4+CD25+T细胞,抑制CD4+、CD8+T细胞,从而达到抑制器官移植免疫排斥的目的,同时还能减轻移植物缺血/再灌注损伤、缓解细胞损伤,提高移植器官存活率,改善患者生活质量。     

Use of PCR and PCR-SSP for detection of urinary donor-origin DNA in renal transplant recipients with acute rejection

Objective To analyze the urine of renal recipients for the pressence of donor DNA in an attempt to establish an alternative diagnostic means of acute rejection.Methods Sixty-four renal transplant recipients were examined.Thirty-seven were normal after transplantation,while 22 others developed acute rejection,based on serum creatinine levels and/or needle biopsy findings of the graft.Five developed drug-induced renal dysfunction.In female recipients with a male graft,we examined urine for the presence of Ychromosome(SRY and DYZ-1) and in recipients receiving and HLA mismatched graft,we looked for HLA-DR gene(DRB1)using PCR.Results Among the 14 female recipients with male grafte demonstrating stable renal function,only one was positive for SRY and DYZ-1 on the Y chromosome.However,sry AND DYZ-1 were found in the urine of four female patients with acute rejection,but these DNA fragments were not detected in 3 of the 4 after anti-rejection therapy.The last patient was referred to hemodialysis.Of 23 recipients of a graft from HLA mismatch donors with stable renal function,DRB1 was negative in 21(91%).Of 18 patients with acute rejection,DRB1 was positive in 16(89%)and negative in 2.these ENA fragments were no longer found in 13 patients after anti-rejection therapy.In all patients with drug induced renal dysfunction,donor-derived DNA was negative.Conclusions Presence of door specific DNA in the urine of the recipient is strongly associated with acute rejection.Analysis of dna DNA derived from donor cells in urine was an effective and accurate method for the diagnosis of acute rejection of a renal transplant.     

Echocardiographical features during the rejection free period after heart transplantation: report of one case]

OBJECTIVE: To study the echocardiographic features during the period free of acute allograft rejection after heart transplantation by monitoring one patient within one year after heart transplantation. METHODS: The dimension of atrial and ventricular, interventricular septal and ventricular wall thickness, blood flow pattern through the mitral and tricuspid valves, left ventricular muscle weight (LVMW) and LVMW index during different periods were measured by echocardiography, and all these data were compared with those of the donor before operation. RESULTS: The patient recovered well without any signs of acute rejection. Echocardiography revealed that the dimension of right atrial, left and right ventriculars decreased significantly while left atrial showed significant increase, with obvious increase in the interventricular septal and ventricular wall thickness. LVMW and LVMW index were also significantly increased. The peaks E-and A.wave velocifies of the mitral and tricuspid E peak flow velocity decreased significantly, while the A peak flow velocity of the tricuspid did not undergo any significant changes. Mitral back flow occurred 4 months after the operation and tricuspid back flow persisted after operation. CONCLUSIONS: The changes of morphology, structure and function of the transplanted heart during periods without rejection are to some extent specific to this special phase, when some of these changes are similar to those during early acute rejection, and correct diagnosis relies on endo-myocardial biopsy.