玻璃离子水门汀氟离子的释放和再吸收及重量减少

观察缺氧及再给氧对体外培养星形胶质细胞存活能力及谷氨酸摄取功能的影响。方法：取生后１～２ｄ新生昆明小鼠大脑皮层进行星形胶质细胞原代培养,培养 １周左右予以缺氧。缺氧时间分别为 １２、２４、４８ ｈ,并取缺氧２４ ｈ后再给氧０、１２、２４、４８ ｈ的细胞观察其形态、死亡细胞数目、乳酸脱氢酶活性及谷氨酸摄取能力的变化。结果：缺氧组及再给氧组星形胶质细胞死亡数较对照组无明显变化,缺氧前、后乳酸脱氢酶活性亦无明显改变,缺氧组谷氨酸摄取功能较对照组下降３０％～６０％,并随缺氧时间延长而明显下降（与对照组相比,Ｐ＜０．０１）,再给氧２４ ｈ内谷氨酸摄取能力有所恢复,但未达正常水平。结论：星形胶质细胞与神经元相比,对缺氧培养液较为耐受,缺氧对星形胶质细胞存活能力无明显影响,但细胞摄取谷氨酸能力有所改变。     

体外培养星形胶质细胞缺氧／再给氧后谷氨酸摄取功能的变化

观察缺氧及再给氧体外培养星形胶质细胞存活能力及谷氨酸摄取功能的影响。方法：取生后１－２ｄ新生昆明小鼠大脑皮层进行星形胶质细胞原代培养,培养１周左右予以缺氧。缺氧时间分别为１２,２４,４８ｈ,。并取缺氧２４ｈ后再给氧０,１２,２４,４８ｈ的细胞观察其形态,死亡细胞数目,乳酸脱氢酶活性及谷氨酸摄取能力的变化。     

缺氧对大鼠脑星形胶质细胞释放NO、PGI2、TXA2、ET-1的影响

目的观察缺氧和(或)谷氨酸对星形胶质细胞释放一氧化氮(NO)、前列腺环素(PGI2)、血栓素A2(TXA2)及内皮素-1(ET-1)的影响.方法新生Wistar大鼠大脑皮层星形胶质细胞原代、传代培养后,分为4组:对照组(c组),谷氨酸组(G组),缺氧组(H组)和缺氧 谷氨酸组(H G组).每组包括5个时相点:0、3、6、12、24 h(以缺氧后开始记时).G和H G组加入100μnol/L的L-谷氨酸.H和H G组用95%N2/5%CO2缺氧.到规定时间后,测培养上清中NO、6-酮-前列腺素F1α、TXB2、ET-1的含量.结果①培养上清中NO的含量,缺氧组、谷氨酸组及缺氧 谷氨酸组显著高于对照组,各组随时向延长(24 h内),培养上清中NO的含量上升.培养上清中NO升高的幅度,谷氨酸组、缺氧组、缺氧 谷氨酸组依次显著升高.②对照组及谷氨酸组星形胶质细胞PGl2的释放量无显著差异.缺氧组及缺氧 谷氧酸组星形胶质细胞PGI2的释放量显著高于对照组及谷氨酸组,且时间延长越长,增加越多(24h内).缺氧 谷氧酸组PGI2增高的幅度显著高于缺氧组.③缺氧和/或谷氨酸对各组各时相点星形胶质细胞释放TXA2及ET-1无显著影响.结论缺氧引起星形胶质细胞释放NO、PGI2增多,可能是缺氧脑血管舒张的机制之一.     

补阳还五汤含药血清对星形胶质细胞谷氨酸转运体1和谷氨酰胺合成酶的影响

【目的】观察补阳还五汤含药血清对体外缺氧缺糖后星形胶质细胞谷氨酸转运体1(GLT-1)及谷氨酰胺合成酶(GS)蛋白表达的影响。【方法】体外培养新生SD乳鼠大脑星形胶质细胞,采用抗神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)单克隆抗体确认星形胶质细胞。缺氧缺糖2 h后,应用Western blot法检测各组星形胶质细胞复氧复糖后各个时间点(12、24、48 h)GLT-1、GS蛋白表达的变化情况,采用谷氨酸试剂盒测定细胞外液谷氨酸浓度。【结果】与正常组比较,缺氧缺糖对照组各时间点星形胶质细胞GLT-1、GS蛋白表达均显著下降(P<0.05);补阳还五汤含药血清组于复氧复糖24 h后GLT-1、GS蛋白表达均显著上调达到最高水平,与缺氧缺糖对照血清组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);与此一致的是补阳还五汤含药血清组显著降低了24 h后细胞培养液中谷氨酸的浓度(P<0.05)。【结论】补阳还五汤可通过上调星形胶质细胞GLT-1、GS表达促进缺氧缺糖后谷氨酸的转运,进而降低谷氨酸的毒性作用。     

低(无)糖、缺氧和缺氧/复氧对培养鼠脑胶质细胞活力及致损的影响

目的 :研究氧、糖剥夺和缺氧 /复氧单一或联合因素对培养鼠脑星形胶质细胞活力和引起损伤的影响及其时效反应。方法 :培养的鼠脑星形胶质细胞分为 3组 :无糖组 (D Hanks液 )、低糖组 (DMEM中含 2 .75mmol葡萄糖 )和正常糖组 (DMEM中含 5 .4 9mmol葡萄糖 ) ,各组分别进行不同时间的缺氧和 /或缺氧 /复氧。通以 5 %CO2 +95 %N2 混合气造成缺氧 ,以乳酸脱氢酶 (LDH)漏出率作为细胞受损指标 ,噻唑蓝 (MTT)降解率评测细胞活力。结果 :①在正常氧培养 2 4h ,低糖和无糖培养的细胞LDH漏出率和MTT降解率并不出现明显变化 ;② 3组二项指标在缺氧培养的各时间点依次出现明显变化 ,无糖组为 8h(P <0 .0 5 ) ,低糖组和正常糖组为 12h(P <0 .0 5 ) ,2 4h(P <0 .0 1) ;③缺氧 /复氧引起 3组二项指标出现明显变化 ,其时间点分别为无糖组缺氧 4h +复氧 12h(P <0 .0 5 ) ;低糖组缺氧 8h +复氧 12h (P <0 .0 5 ) ;正常糖组缺氧 8h +复氧 2 4h (P <0 .0 5 ) ;④在同一缺氧和缺氧 /复氧时间点 ,指标值变化程度为无糖组 >低糖组 >正常糖组 ;且两项指标的变化具有时间依赖性 ,呈反变关系。结论 :①氧、糖剥夺和缺氧复氧能引起培养的鼠脑星形胶质细胞的损伤 ;②氧、糖剥夺和缺氧 /复氧联合作用时能增加对培养的鼠脑星形胶质细胞     

缺氧对体外培养的大鼠脑星形胶质细胞存活的影响

目的 研究缺氧对体外培养的大鼠星形胶质细胞活性及损伤的影响,确定星形胶质细胞体外培养的最佳缺氧时间点以对其进行深入研究。方法 体外培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞,纤维酸性蛋白免疫荧光染色鉴定。通以5%CO₂+95%N₂混合气体造成缺氧,分别观察缺氧不同时间段星形胶质细胞光镜下的形态变化,死亡细胞数目,培养上清液的氧分压、葡萄糖和乳酸盐的浓度及乳酸脱氢酶(LDH)活性的变化。结果 星形胶质细胞在缺氧条件下,随着时间延长,细胞逐渐出现肿胀、漂浮和坏死。与对照组相比,缺氧10h组死亡细胞数、葡萄糖和乳酸盐的浓度及乳酸脱氢酶(LDH)活性的变化均有明显差异(P<0.05),且与缺氧时间呈正相关,其中缺氧组细胞培养上清液中葡萄糖浓度比对照组明显降低,而乳酸盐浓度和LDH活性则明显升高,而缺氧8h组虽然葡萄糖和乳酸盐的浓度及LDH活性的变化明显,但星形胶质细胞保存着多突触的形态。结论 缺氧可致体外培养的鼠脑星形胶质细胞损伤甚至死亡,缺氧8h可作为以体外培养的鼠脑星形胶质细胞为研究对象的缺氧生物学研究的最佳时间点。     

N-乙酰半胱氨酸对糖氧剥夺大鼠皮层星形胶质细胞的保护作用

目的应用体外培养的大鼠脑皮层星形胶质细胞,观察抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸对糖氧剥夺导致细胞损伤的作用。方法采用第4代大鼠脑皮层星形胶质细胞,以连二亚硫酸钠和无糖Earle液造成化学性糖氧剥夺（OGD）模型,继而恢复完全培养基模拟体内脑缺血再灌注损伤,分别应用MTT法和乳酸脱氢酶（LDH）漏出法检测细胞存活率和细胞溶解程度;应用分光光度法测定星形胶质细胞内乳酸水平和Na⁺-K⁺ATP酶活性间接反映脑组织能量代谢变化。结果OGD损伤1h再恢复24h后,大鼠皮层星形胶质细胞存活率下降,细胞溶解增加,细胞能量代谢障碍。预先给予N-乙酰半胱氨酸可呈剂量相关性的逆转或减轻细胞损伤。结论N-乙酰半胱氨酸对糖氧剥夺/再恢复所致体外培养的大鼠脑皮层星形胶质细胞损伤具有保护作用。     

异丙酚对缺氧复氧大鼠海马胶质细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的:观察异丙酚对缺氧复氧大鼠海马胶质细胞凋亡及Bc l-2和Bax蛋白表达的影响。方法:取新生2~3 dW istar大鼠海马星形胶质细胞,原代纯化培养3周。将细胞分为正常对照组,乳剂对照组,缺氧4 h后复氧12h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h组,加异丙酚250μmol/L缺氧4 h后复氧12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h组。分别于各时间点检测每组细胞凋亡及Bc l-2和Bax蛋白表达变化。结果:与正常对照组比较,缺氧复氧组细胞随着时间延长凋亡不断增加,Bc l-2蛋白24 h时间点表达最高,随后逐渐降低,Bax蛋白24 h表达低,随着时间延长不断增加,72 h时间点最高,Bc l-2/Bax蛋白比值于24 h、48 h和72 h时间点分别为1.4、0.8和0.6。与缺氧复氧组比较,异丙酚处理组凋亡明显减少,Bax蛋白表达降低,Bc l-2蛋白24 h内表达升高达峰值,此后有所降低但仍维持较高水平,且Bc l-2蛋白表达持续高于Bax蛋白,Bc l-2/Bax蛋白比值保持在1.6~1.8之间。结论:异丙酚可抑制缺氧复氧后海马反应性星形胶质细胞表达Bc l-2和Bax蛋白的动态变化,使Bc l-2/Bax蛋白比值持续保持较高水平而发挥良好的保护作用。     

参麦注射液及人参皂苷Rb1、Rg1抗神经、血管内皮、星形胶质细胞缺氧/缺糖损伤的研究

目的研究参麦注射液及其成分人参皂苷Rb1、Rg1对神经、血管内皮、Ⅰ型星形胶质细胞缺氧/缺糖再给氧损伤的保护作用,揭示参麦注射液脑保护作用的细胞机制,并初步确定其主要效应成分.方法培养神经、血管内皮、星形胶质三种细胞,含连二亚硫酸钠的无糖Earle's液模拟造成缺氧/缺糖损伤,台盼蓝染色、MTT法、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率评价药效.结果参麦注射液及其成分人参皂苷Rb1、Rg1对正常培养的三种细胞均无明显毒性损伤;与缺氧/缺糖再给氧损伤模型组比较,参麦注射液及人参皂苷Rb1、Rg1各组的LDH漏出率、细胞死亡率显著下降(P<0.001),细胞存活率显著提高(P<0.001～P<0.05).结论参麦注射液的脑保护作用机制与其对神经、血管内皮、Ⅰ型星形胶质三种细胞缺氧/缺糖再给氧损伤的保护作用有关,人参皂苷Rb1、Rg1是其脑保护作用的主要效应成分;提示参麦注射液能够应用于中风病急性期的治疗.     

丁基苯酞对氧糖剥夺/复氧糖诱导的星形胶质细胞中caspase-3表达的影响

目的探讨丁基苯酞对氧糖剥夺/复氧糖诱导的星形胶质细胞中caspase-3表达的影响。方法将原代培养、鉴定的Sprague-Dawley大鼠星形胶质细胞随机分为对照组、模型组和实验组,各组细胞经高糖达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM)培养48 h,细胞贴壁并伸出突触后实验组及模型组更换DMEM无糖培养基进行氧糖剥夺,对照组仍使用DMEM高糖培养基培养,3组细胞放入培养箱中孵育6 h后,实验组更换为含100μmol·L~(-1)丁基苯酞的DMEM高糖培养基,模型组更换为DMEM高糖培养基进行氧糖剥夺/复氧糖,对照组更换新的DMEM高糖培养基,继续培养24 h。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞活力,免疫荧光及免疫印迹法检测星形胶质细胞中caspase-3表达,酶联免疫吸附试验检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)表达。结果 MTT法结果显示,对照组星形胶质细胞活力高于实验组和模型组(P<0.05),实验组星形胶质细胞活力显著高于模型组(P<0.05)。免疫荧光染色结果显示,对照组星形胶质细胞内荧光信号最弱;模型组星形胶质细胞内荧光信号最强;实验组星形胶质细胞内荧光信号强度较模型组降低,但高于对照组(P<0.05)。免疫印迹检测结果显示,模型组星形胶质细胞在氧糖剥夺/复氧糖后caspase-3表达相对最高,实验组次之,对照组最低,各组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。氧糖剥夺/复氧糖24 h后,实验组细胞培养液中LDH水平高于对照组(P<0.05),模型组细胞培养液中LDH水平显著高于实验组(P<0.05)。结论丁基苯酞可以改善氧糖剥夺/复氧糖引起的星形胶质细胞损伤。