肺部疾病患者痰液中脱落细胞端粒酶活性的检测

端粒酶是一种特殊的逆转录酶,以端粒末端富含鸟嘌呤单链为引物,自身RNA组分为模 板合 成端粒序列。大量研究表明：端粒酶激活与肿瘤的发生密切相关,因此,端粒酶活性可作为 诊断肿瘤的参考指标。我们对肺癌与肺部良性疾病患者痰液中脱落细胞进行了端粒酶活性比 较。 材料和方法 　　一、检测对象和样本采集　肺癌患者(均经病理检查确诊),45例,男33例,女12例,平均年龄59.4(31～78岁)。非肺癌患者(肺部良性疾病组)26例,男17例,女9例,平均年 龄59岁(25～85岁)。分别取患者痰液1 ml,置于无菌容器内,-38℃储存备用。 　　二、试剂和仪器　端粒酶端粒重复扩增程序-杂交-酶免疫(TRAP-Hyb-EIA)试 剂盒(华美生物工程公司)、Wescan MK-2酶标仪、HSC-20R低温冷冻离心机、Sanyo微量高 速离心机、MJ-150扩增仪。     

肺部疾病患者痰液中脱落细胞端粒酶活性的检测

端粒酶是一种特殊的逆转录酶 ,以端粒末端富含鸟嘌呤单链为引物 ,自身 RNA组分为模板合成端粒序列。大量研究表明 :端粒酶激活与肿瘤的发生密切相关 ,因此 ,端粒酶活性可作为诊断肿瘤的参考指标。我们对肺癌与肺部良性疾病患者痰液中脱落细胞进行了端粒酶活性比较。材料和方法一、检测对象和样本采集　肺癌患者 (均经病理检查确诊 ) ,45例 ,男 33例 ,女 1 2例 ,平均年龄59.4( 31～ 78岁 )。非肺癌患者 (肺部良性疾病组 ) 2 6例 ,男 1 7例 ,女 9例 ,平均年龄 59岁 ( 2 5～ 85岁 )。分别取患者痰液 1 ml,置于无菌容器内 ,- 38℃储存备用。二…     

乳头溢液脱落细胞端粒酶活性检测

目的探讨乳头溢液脱落细胞端粒酶活性检测在临床诊断中的应用。方法采用ＴＲＡＰ－ＰＣＲ银染定性法及ＴＲＡＰ－ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ定量法对５０例溢乳进行脱落细胞端粒酶活性分析。结果５０例溢乳脱落细胞端粒酶阳性率高达７８％（３９／５０）,随着年龄的增大,端粒酶阳性率呈逐步下降趋势,而同期送检的细胞病理诊断则无１例找到癌细胞。结论溢乳脱落细胞端粒酶阳性检出率明显增高。随着疾病的发展,端粒酶阳性患者易发生恶变的可能性是否大于端粒酶阴性患者需进一步研究。     

PCR—ELISA检测体液脱落细胞端粒酶活性及临床意义

端粒酶是近年来发现的与肿瘤发生发展密切相关的一种逆转录酶,已成为肿瘤研究的热点。目前国内外对实体瘤的端粒酶活性进行了广泛的研究,但对体液脱落细胞中端粒酶的活性的研究尚较少。我们应用ＰＣＲＥＬＩＳＡ方法检测体液脱落细胞的端粒酶活性,旨在探讨该方法在肿瘤的早期诊     

膀胱癌患者尿液脱落细胞端粒酶活性测定

端粒酶主要由蛋白质和RNA组成,是一种反转录酶,能以其自身所携带的RNA为模板,不断合成新的端粒DNA序列添加到染色体末端,阻止端粒的缩短,使细胞成为永生性细胞或癌细胞[1].近年来,大量科学研究证实端粒酶活性表达与肿瘤发生密切相关,它在恶性肿瘤组织中及相关脱落细胞中检出率很高,可作为肿瘤早期诊断的生物学指标[2,3].据此,我们对58例膀胱移行上皮细胞癌患者尿液中脱落细胞端粒酶活性进行了测定,以探讨一种敏感、特异、非侵入性的诊断和随访膀胱肿瘤的方法.     

膀胱癌患者尿液脱落细胞端粒酶活性测定

端粒酶主要由蛋白质和RNA组成,是一种反转录酶,能以其自身所携带的RNA为模板,不断合成新的端粒DNA序列添加到染色体末端,阻止端粒的缩短,使细胞成为永生性细胞或癌细胞[1]。近年来,大量科学研究证实端粒酶活性表达与肿瘤发生密切相关,它在恶性肿瘤组织中及相关脱落细胞中检出率很高,可作为肿瘤早期诊断的生物学指标[2,3]。据此,我们对58例膀胱移行上皮细胞癌患者尿液中脱落细胞端粒酶活性进行了测定,以探讨一种敏感、特异、非侵入性的诊断和随访膀胱肿瘤的方法。材料和方法一、检测对象　肿瘤组为本院经确诊的膀胱移行细胞癌患者58例,男…     

PCR-ELISA检测尿液中脱落细胞端粒酶活性及临床意义

为探讨尿液中脱落细胞端粒酶活性检测对膀胱癌的诊断与术后跟踪随访的意义,以PCR-ELISA方法检测膀胱癌组织和自然排尿中膀胱癌脱落细胞端粒酶活性,以巴氏染色法对脱落细胞进行细胞学检查.62例膀胱癌患者中,有59例肿瘤组织表达端粒酶活性(95.2%);47例尿脱落细胞表达端粒酶活性(75.8%),24例尿脱落细胞中发现癌细胞(38.7%),脱落细胞的端粒酶活性检测明显高于细胞学检查(P＜0.005),随着肿瘤分化程度和临床病理分期的增加,阳性率明显增高(P＜0.05).结果表明自然排尿端粒酶活性的检测,操作简单、灵敏、特异性强,可望成为诊断膀胱癌的首选方法.     

尿液中膀胱癌脱落细胞端粒酶活性检测的临床意义

为探讨尿液中膀胱癌脱落细胞端粒酶活性检测对膀胱癌诊断和术后随访的意义。以ＴＲＡＰ－银染法检测膀胱癌组织和自然排尿中膀胱癌脱落细胞端粒酶活性，以巴氏染色法对脱落细胞进行细胞学检查。４５例膀胱癌患者中，４４例肿瘤组织表达端粒酶活性（９７．８％）；２９例尿脱落细胞表达端粒酶活性（６４．４％），１４例尿脱落细胞中发现癌细胞（３１．１％），脱落细胞的端粒酶活性检测明显优于细胞学检查（Ｐ〈０．００５），且随着     

端粒酶活性检测与非小细胞肺癌的相关性研究

目的探讨端粒酶活性在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达,以了解其临床意义。方法采用端粒重复序列扩增法一酶联免疫(PCR-TRAP)检测70例肺癌手术患者癌组织中的端粒酶活性,并与70例肺部良性疾病患者对照组的检测结果进行比较。结果端粒酶活性在肺癌组中的阳性率明显高于对照组的阳性率,差异有显著性(P<0.01);Ⅲ期的阳性率明显高于Ⅰ期和Ⅱ期的阳性率,差异有显著性(P<0.05)。结论端粒酶活性检测对NSCLC的诊断具有鉴别意义,有一定的临床辅助价值。     

TRAP—PCR ELISA及银染法检测肺刷落细胞中端粒酶活性

以非同位素法检测肺刷落细胞中端粒酶活性及在肺癌中的诊断价值。方法采用端粒酶重复放大程序ＴＲＡＰ（ＴｅｌｏｍｅｒａｓｅＲｅｐｅａｔＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎＰｒｏｔｏｃｏｌ）ＰＣＲＥＬＩＳＡ法及聚丙烯酸胺凝胶电泳一银染法,对８０例支气管肺刷落细胞样本进行定性及定量端粒酶活性检测。结果肺癌患者患侧端粒酶定性检测阳性率为８８．６％,其对侧部位为２２．７％,肺炎阳性率为１１．８％。定量法检测肺癌病人的端粒酶活性水平（中位ＯＤ值：０．０８９）明显高于其对侧肺部（中位ＯＤ值：０．０２８）及肺炎组（中位ＯＤ值：０．０１４）。另外病理发现不典型增生者６例中有５例端粒酶阳性。结论应用该方法对肺刷落细胞中端粒酶活性的测定可以作为肺部恶性肿瘤诊断有效而敏感的手段之一。     

端粒酶活性检测的方法及研究现状

近年来的研究结果表明,端粒酶的激活和端粒长度的稳定为肿瘤细胞永生化所必需有约90%的恶性肿瘤及永生化细胞中可检测到端粒酶活性,端粒酶活性表达的多少可以做为恶性肿瘤发展程度的衡量指标,对于恶生肿瘤的早期诊断具有十分重要的意义,正因为如此,端粒酶活性检测就显得尤为重要了。     

乳腺癌的端粒酶活性检测

目的探讨端粒酶活性与乳腺癌的相关性、端粒酶活性检测在乳腺肿瘤诊断和判断预后中的意义。方法运用端粒重复扩增法（ＴｅｌｏｍｅｒｉｃＲｅｐｅａｔＡｍｐｌｉｆｉｅａｔｉｏｎＰｒｏｔｏｃｏｌ,ＴＲＡＰ）检测了３０树新鲜冰冻乳腺癌标本,以及２０例良性乳腺肿瘤组织和３０例癌旁正常乳腺组织。结果在新鲜乳腺癌标本３０例中２７例阳性,阳性率９０％,其中伴有淋巴结转移的１９例,阳性率１００％;３０例癌旁正常乳腺组织中有１例阳性,阳性率为３％;２０例良性乳腺肿瘤组织中均未检测出端粒酶活性。结论乳腺癌发生与端粒酶活性相关。提示在乳腺癌发生发展中可能存在着端粒酶活性的再激活,使乳腺癌细胞获得永生,端粒酶活性检测对于乳腺肿瘤的良、恶性鉴别具有十分重要的意义。端粒酶活性的抑制剂可能对乳腺癌的治疗有一定的作用。     

抗端粒酶反义寡核苷酸对人胃癌细胞增殖的影响

目的：观察抗端粒酶反义寡脱氧核苷酸（ASODN）对人胃癌细胞系端粒酶活性的抑制作用及其对癌细胞增殖的影响。方法：合成与人类端粒酶RNA模板区碱基序列互补的ASODN，并用阳离子脂质体转染剂DOSPER介导，作用于人胃癌细胞系FGC85，空白组和正义寡脱氧核苷酸（SODN）作为对照，用以PCR为基础的端粒重复序列扩增法（TRAP）结合ELISA方法检测胃癌细胞的端粒酶活性，台盼蓝拒染法细胞计数，噻唑蓝（MTT）试验观察癌细胞增殖情况，免疫组化方法检测细胞增生抗原Ki-67。结果：脂质体介导的抗端粒酶ASODN对胃癌细胞的端粒酶活性具有抑制作用；细胞坟数和MTT试验显示胃癌细胞增殖速度明显减慢；细胞Ki-67染色阳性率显著降低。结论：特异性抗端粒酶ASODN可运用于抗肿瘤实验性治疗和相关研究。     

脑胶质瘤端粒酶活性表达的研究

目的：探讨端粒酶在脑胶质瘤发生、发展中的作用，并研究端粒酶活性是否与其恶性程度相关。方法：应用端粒重复序列扩增技术(TRAP)对48例胶质瘤标本和8例正常脑组织的端粒酶活性进行检测。结果：8例正常脑组织端粒酶活性均为阴性表达，48例胶质瘤标本中23例为表达阳性(47．92％)，低度恶性组与高度恶性组胶质瘤之间端粒酶活性阳性率有明显差异(P=0．001)。结论：端粒酶活性与胶质瘤恶性程度明显相关，端粒酶在胶质瘤发生发展过程中可能具有重要作用。     

端粒酶活性与膀胱癌T24细胞生长

目的 :研究端粒酶逆转录酶基因 (h TERT)反义寡核苷酸 (ASODN)对膀胱癌 T2 4细胞生长的影响。方法 :用脂质体介导技术 ,将 h TERT基因 ASODN转染入膀胱癌 T2 4细胞中应用端粒酶 PCR- EL ISA法检测端粒酶活性变化 ,MTT法测定细胞生长变化 ,并用流式细胞术观察其对 T2 4细胞周期的影响。结果 :h TERT基因 ASODN能显著地抑膀胱癌 T2 4细胞端粒酶活性 ,癌细胞生长增殖受限 ,同时抑制具有序列特异性和剂量依赖性 ,并出现细胞凋亡现象 ,其凋亡率 (15 .8% )明显高于 SODN转染组 (0 )和空白对照组 (1.9% ,P<0 .0 5 )。结论 :h TERT基因 ASODN能特异性抑制膀胱癌 T2 4细胞端粒酶活性和生长 ,促进其细胞凋亡。     

肺癌刷落细胞、活检组织及痰液细胞端粒酶的活性研究

目的探讨支气管镜下肺刷落细胞、活检细胞及痰液细胞的端粒酶活性检测对诊断肺癌的价值。方法采用TPAP结合银染色定性法 ,对 46例肺部疾病患者支气管镜下肺刷落细胞、活检组织及其新鲜痰液细胞的端粒酶活性进行分析。结果32例肺癌患者 ,其活检组织、肺刷落细胞及痰液细胞端粒酶阳性率分别为 90 .6 %、87.5 %、5 3 .1% ,显著高于肺炎性、良性增生组 ;与病理学检查结果相比 ,肺刷落细胞及痰液细胞的端粒酶阳性率明显高于其细胞涂片中的癌细胞检出阳性率。结论痰液细胞及支气管镜下肺刷落细胞、活检组织的端粒酶活性检测 ,可作为肺癌诊断的有效而灵敏的指标 ,能提高肺癌的检出率。     

骨髓增生异常综合征患者的骨髓细胞端粒酶活性研究

为了研究骨髓增生异常综合征(MDS)患者的骨髓单个核细胞中端粒酶的表达特点,并与正常骨髓和急性白血病骨髓进行比较,用PCR-ELISA法对20例正常骨髓、21例骨髓增生异常综合征和32例急性白血病骨髓单个核细胞的端粒酶活性进行了半定量检测.结果发现正常骨髓细胞端粒酶表达范围0-0.30 U,平均(0.11±0.08)U,其中仅有3例阳性.急性白血病骨髓细胞端粒酶表达范围0-0.96 U,平均(0.42±0.26)U,阳性率78.1%,与正常骨髓相比,有显著性差异(P＜0.01).MDS骨髓细胞端粒酶的表达范围0-0.97 U,平均为(0.27±0.19)U,阳性率为66.7%.与正常相比,端粒酶表达均值之间的差别有显著性(P＜0.05),其中高风险组端粒酶表达较高(P＜0.05).按IPPS评分等级分为INT-1,INT-2和HIGH组的MDS骨髓细胞端粒酶活性水平之间有显著性差异(P＜0.05).端粒酶活性与染色体异常程度无明显关系.结论提示,正常骨髓细胞具有临界水平的端粒酶活性,急性白血病骨髓细胞端粒酶活性显著升高,而MDS骨髓细胞端粒酶活性则介于正常与急性白血病骨髓细胞端粒酶活性之间,其中高风险组、按IPPS评分预后差的MDS端粒酶活性较高.     

纤支镜检查联合痰液肿瘤标志物检测对肺癌的诊断价值

目的：探讨纤维支气管镜检查联合痰液肿瘤标志物检测对肺癌的诊断价值。方法：对52例肺癌患者和46例肺部良性病变患者行纤维支气管镜检查,并采用化学发光免疫分析法检测其痰液中的肿瘤标志物。结果：52例肺癌患者痰液中癌胚抗原（CEA）、糖类抗原125（CA125）、糖尿抗原19-9（CA199）和细胞角蛋白19片段21-1（CYFRA21-1）的阳性率分别为42.3%、46.2%、36.5%和51.9%;46例肺部良性病变患者的阳性率分别为13.0%、15.2%、10.7%和17.4%。比较2组阳性率差异有统计学意义（P〈0.05）。52例肺癌患者中纤维支气管镜检查确诊30例,敏感度为57.7%,特异度和准确度分别为100.0%和77.6%。鳞癌患者痰液CYFRA21-1阳性率较CEA、CA125、CA199升高更显著（P=0.028）。Ⅲ期＋Ⅳ期肺癌患者痰液CA125的阳性率较Ⅰ~Ⅱ期高（P=0.023）。纤维支气管镜检查联合痰液肿瘤标志物检测的敏感度为94.2%,特异度和准确度分别为87.0%和90.8%。结论：纤维支气管镜检查联合痰液肿瘤标志物检测可以提高肺癌的诊断水平。     

痰消化集菌法用于结核分枝杆菌检测的可行性研究

目的探讨痰消化集菌法进行痰标本结核分枝杆菌检测的临床价值。方法收集2012年3—10月门诊和住院疑似肺结核225例的痰标本,分别采用直接涂片法和消化集菌法检测结核分枝杆菌并比较。结果 225例痰标本采用消化集菌法检测结核分枝杆菌阳性率为38.67%,直接涂片法25.78%,消化集菌法检出阳性率高于直接涂片法(P0.05)。镜下检出痰液标本结核分枝杆菌不同数量时的阳性率消化集菌法明显高于直接涂片法,尤以结核分枝杆菌在(++++)时最明显,此时消化集菌法阳性率35.63%,直接涂片法12.07%,组间比较差异有统计学意义(P0.05)。结论痰消化集菌法用于痰标本结核分枝杆菌检测具有操作简便、检出阳性率高及实验室安全等优点。