HSP70-PC肽复合物与树突状细胞成熟关系的实验研究

目的探讨HSP70-PC肽复合物与人外周血来源的树突状细胞DC成熟之间的关系。方法采用GM—CSF、IL-4刺激培养人外周血单个核细胞，增殖产生大量DCS；从肺癌细胞中获取肽复合物，通过细胞因子检测试剂盒进行检测。结果发现HSP70-PC肽复合物修饰的DDC大量分泌IL-12、TNF-α等细胞因子。结论HSP70-PC肽复合物可诱导DC成熟，体外产生特异性反应。     

HSP70-肿瘤肽对小鼠肝癌的抗肿瘤免疫效应

目的：观察HSP70肿瘤肽介导的非MHCⅠ限制性抗肿瘤免疫效应。方法：通过主动免疫和继承性免疫保护试验，观察从热休克小鼠肝癌HCaF细胞纯化的HSP70肿瘤肽对HCaF（MHCⅠ类分子表达阴性）的抗肿瘤免疫效果。结果：用源自HCaF细胞的HSP70肿瘤肽主动免疫小鼠，可获得对HCaF细胞攻击的主动免疫保护效果，雌性组明显优于雄性组。转输HSP70肿瘤肽免疫后抗HCaF细胞攻击的小鼠脾细胞，能产生良好的过继性免疫保护效果，可耐受HCaF细胞反复攻击，以1×107个活瘤细胞攻击亦未致瘤。转输HSP70肿瘤肽体外致敏的脾细胞，也能使宿主产生一定的抗HCaF免疫效果。结论：从HCaF细胞纯化的HSP70肿瘤肽可激发宿主产生非MHCⅠ限制性抗肿瘤免疫保护效应，其强度可藉反复攻击而增强，并可通过免疫脾细胞继承性传递。     

HSP70的肿瘤免疫作用及其基因表达调节

热休克蛋白70能够与肿瘤特异性抗原多肽结合,形成热休克蛋白70-多肽复合物,它本身没有抗原性,其抗原性由它结合的多肽所决定,而它是作为"分子伴侣"参与肿瘤免疫作用过程.将这一特性加以应用,可能为肿瘤的治疗和消灭开辟新的途径.     

细胞外HSP70与肿瘤的研究现状

目的：探讨细胞外热休克蛋白70（heatshock protein 70。HSP70）的释放、功能、免疫学机制以及在肿瘤免疫治疗中的应用。方法：应用Medline、PubMed及CNKI期刊全文数据库检索系统．以“细胞外热休克蛋白70的释放、肿瘤免疫、应用”为关键词,检索2002—2013年的相关文献。纳入标准：1）细胞外热休克蛋白的功能;2）细胞外热休克蛋白的释放机制;3）细胞外热休克蛋白与肿瘤免疫。根据纳入标准符合分析的文献28篇。结果：HSP70不仅在细胞内发挥重要的作用,还可以通过其特有机制释放到细胞外。细胞外HSP70有重要的生物学功能．存在于细胞外的HSP70能够发挥抗肿瘤免疫作用。应用细胞外HSP70／HSP70-PCs制成特异性抗肿瘤疫苗,为肿瘤的治疗提供新的思路。结论：细胞外HSP70的肿瘤免疫作用及在肿瘤疫苗方面的应用,将有望成为肿瘤治疗的新方法。     

热休克蛋白70-多肽复合物在肿瘤免疫领域的研究进展

热休克蛋白(Heat Shock Proteins，HSPs)是一组广泛存在于细胞内的可溶性蛋白，在应激(如热休克、高温、感染、缺氧、氧化应激、异常代谢物积聚等)条件下高效表达。主要参与胞内新生肽的结合、折叠、装配、降解与跨膜转运，在维持细胞的正常结构和功能方面起着重要作用。根据其分子量的大小分为4个家族，即HSP90(83～90kD)家族、HSP70(66～78kD)家族、HSP60家族及小HSP家族。此外还有分子量为100～110kD而特性不同于上述家族的大分子HSP。     

亚高温盆腔区域热疗对原位大鼠膀胱肿瘤形态学影响的研究

 目的 研究亚高温盆腔区域热疗致大鼠膀胱肿瘤形态学改变。方法 制备原位的大鼠膀胱肿瘤动物模型，用内生场热疗系统从体外加热大鼠盆腔至41 ℃，热疗后对肿瘤进行病理研究。结果电镜观察短期组有早期凋亡细胞出现；长期组凋亡细胞和凋亡小体多见。肿瘤细胞HSP70表达率短期组中热疗组均高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.01），而长期组中差异无统计学意义。PCNA LI热疗组均低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）。AI热疗组均高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）。结论亚高温盆腔区域热疗抑制肿瘤细胞增生，诱导凋亡，长期热疗未导致热耐受。     

反义 HSP70对人乳腺癌细胞的抑瘤效应

目的：观察反义热休克蛋白70（heat shock protein 70,HSP70)RNA对人乳腺癌细胞学特性的影响,探讨其抗肿瘤作用。方法：将逆转录病毒真核表达载体介导的反义HSP70重组质粒pX-AHSP70和空载体pLXSN-neo转染至MCF7／Adr人乳腺癌细胞,通过细胞生长曲线和软琼脂集落实验以及裸鼠移植瘤实验观察转染反义HSP70重组质粒细胞的体内外抑瘤作用。结果：建立了稳定表达反义HSP70 RNA的MAp70细胞,与空载体细胞相比,HSP70蛋白的表达下降了48％。细胞群体生长速度明显减慢,软琼脂集落形成率和抑制率分别为6．08％和62．14％,裸鼠皮下接种的平均出瘤时间为15天,最终平均瘤重为108mg,以上参数与空载体细胞相比,均有显著差异。结论：反义HSP70RNA能够有效地抑制HSP70表达,进而抑制乳腺癌细胞的体外增殖和体内移植瘤的形成与发展。     

肿瘤HSP70活化的CIK细胞杀瘤作用研究

[目的]比较分析人大肠癌细胞HSP70活化CIK细胞和普通CIK细胞的杀瘤活性,为该类CIK的临床应用提供有重要参考价值的实验依据.[方法]用液相色谱法提纯人大肠癌细胞中的HSP70.取健康人外周血单核细胞,用CD3单克隆抗体、IFN-Υ、IL-1α、IL-2等细胞因子对其诱导、培养获取CIK细胞;运用GM-CSF、IL-4、TNF-α等细胞因子对其诱导、培养获取DCs,HSP70诱导活化DCs,按HSP70活化的DC∶CIK=1∶3混合培养1周.用MTT法进行杀瘤活性试验.[结果]人大肠癌细胞HSP70活化的CIK细胞和普通CIK细胞的杀瘤活性相比较,在效靶比例为10∶1、20∶1、40∶1时,杀伤活性差异均具有统计学意义(P＜0.01).[结论]与普通的CIK细胞相比,肿瘤细胞HSP70活化的CIK细胞具有更强的杀瘤活性.     

热休克蛋白—肽复合物肿瘤疫苗

近年发现，肿瘤组织中的热休克蛋白－肽复合物含有多种肿瘤相关肽，可在体内诱导多个肿瘤特异ＣＴＬ克隆，特异杀伤肿瘤细胞，这种作用在同种间不受ＭＨＣ Ｉ类抗原限制，具有良好的临床应用前景，本文综述了这一领域的研究现状。     

热休克蛋白70与肿瘤的关系

热休克蛋白（ＨｅａｔＳｈｏｃｋＰｒｏｔｅｉｎ,ＨＳＰ）是由Ｒｉｔｏｓｓａ在１９６２年研究果蝇唾液腺染色体时发现的,将２５℃培养的果蝇幼虫置于３０～３２℃的环境中,发现其巨大的唾液腺染色体上出新的膨突。继后正常蛋白质的合成被抑制,却合成了一组特殊的蛋白质,由于是在热刺激下产生的一组蛋白质,故称其为热休克蛋白（ＨＳＰ）。后来,人们发现除高温外的各种刺激如缺血、缺氧、重金属、病毒感染、恶性变等均可诱导ＨＳＰ的合成,并关闭正常蛋白的合成,故也有人称其为应激蛋白［１～４］。在ＨＳＰ家庭中ＨＳＰ７０是功能最广研究最…     

Dynamics and mechanism of HSP70 translocation induced by photodynamic therapy treatment

Heat shock protein 70 (HSP70) is involved in nearly all intracellular compartments. It has been recently shown to be expressed on the outer cellular membrane under photodynamic therapy (PDT) treatment. However, the mechanism and function of HSP70 translocation to the cell surface during PDT treatment are not well understood. In this study, the dynamics and mechanism of HSP70 translocation onto the cell surface and its relationship with several key intracellular events after PDT treatment were investigated using confocal microscopy. HeLa and ASTC-a-1 tumor cells were treated by PDT using different doses. In the case of PDT-induced apoptosis, cytoplasmic HSP70 rapidly translocated to the cell surface after treatment, but it was not released into the medium. Such translocation was found to be dependent on the PDT dose. Moreover, during apoptosis, the translocation of HSP70 was closely related to the changes of mitochondrial transmembrane potential (DeltaPsim). Under non-lethal PDT induced surface stress, HSP70 also translocated to the cell surface, but with a slower rate and a lower final surface concentration. These findings reaffirm the HSP70 translocation onto the cell surface under PDT treatment in living cells. Our results also indicate that the function of the surface expression of HSP70, either initiated by mitochondrial disruption or direct surface stress, is to stabilize the plasma membrane integrity, although such function failed to prevent apoptosis induced by lethal PDT treatment, as evidenced in our study.     

来源于人膀胱癌细胞株EJ的HSP70负载的DC所激发的特异性CTL细胞的体外应答效应

Objective: To investigate whether human dendritic cells (DC) derived from peripheral blood mononuclear cells (PBMC), which were pulsed by heat shock protein 70 (HSP70) isolated from human bladder tumor cell lines of EJ, were able to induce peptide specific cytotoxic T-lymphocytes (CTL) response in vitro and give the experimental foundation for the future clinical trials of immunotherapy in bladder tumor. Methods: The EJ-derived HSP70 co-cultured with DC from the healthy volunteers' PBMC, along with the crude lysate (the supernatant before HSP70 purification) from EJ cells were used as the experimental groups and DC not pulsed by any tumor cells antigen were the blank control. The autologous T-lymphocytes were added into the above various DC groups, and after incubation, the stimulation indexes (SI) and interferon-γ (IFN-γ) were detected to evaluate the immune activities of various DC groups. The killing effects of CTL to target cells, EJ and Hela cells, were determined with 51Cr releasing test. Results: Both DC/HSP70 and DC/the crude lysate could effectively activate CTL in vitro and kill target cells EJ. The killing effect of DC/HSP70 to EJ was much stronger than DC/the crude lysate (the supernatant before HSP70 purification) (P < 0.05). DC without any tumor cell antigens had a lower killing power to EJ. Meanwhile, DC/ HSP70 had little killing power to Hela non-relevant to bladder tumor histopathologically as compared with EJ cells (P < 0.05). Conclusion: The DC pulsed by HSP70 derived from the autologous tumor cells could induce a peptide complexes specific CTL response to tumor cells, and the CTL response induced by the DC/HSP70 was stronger, which display the basis of the possible clinical application of DC/HSP70 for bladder tumor.     

人肺癌组织热休克蛋白70-肿瘤肽纯化方法比较

目的 从人体肺癌组织分离纯化热休克蛋白70-肿瘤肽（HSP70-肿瘤肽）,比较两种层析系统分离纯化的结果。方法 采用快速蛋白液相层析（FPLC）自动系统及简单离子交换层析系统,运用亲和层析、离子交换层析、SDS—PAGE、Western-blot方法从肺癌病人手术切除肿瘤组织分离纯化HSP70-肿瘤肽。结果收集两种方法所纯化蛋白洗脱液,经电泳显示于70KD处有一纯蛋白带,定性鉴定该蛋白确系HSP70肽蛋白。结论两种层析系统均能够纯化出纯度较高的热休克蛋白70-肿瘤肽,两种方法均切实可行,实验室可根据自身条件选择应用。     

HSP70-Id复合物修饰的树突状细胞体外诱导特异性抗肿瘤作用

目的观察人慢性B淋巴细胞性白血病（B-CLL）细胞的独特型抗原Id-ScFv与热休克蛋白70（HSP70）形成复合物修饰的树突状细胞（DC）体外诱导特异性抗肿瘤作用,并初步探讨其机制。方法将HSP70与Id-ScFv体外结合形成复合物HSP70-Id,修饰自人外周血单核细胞获取的DC。倒置相差显微镜观察DC的形态特征;流式细胞仪检测修饰前后DC的表型变化,酶联免疫吸咐试验（ELISA）检测DC分泌的白细胞介素12（IL-12）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测修饰的DC对自身淋巴细胞的激活和增殖作用,流式细胞仪检测激活的自身淋巴细胞T细胞亚群的变化,台盼蓝染色法检测其对Daudi、K562和HepG2等细胞的杀伤作用。结果DC体外诱导培养成功,HSP70-Id复合物可使DC成熟,镜下可见典型的DC形态,其CD1a表达率为20％-30％,CD83表达率〉72％,CD86和HLA-DR表达显著增加（P〈0．05）,上清中IL-12、TNF-α亦显著高于DC对照组（P〈0．01）。HSP70-Id复合物修饰的DC激活自身淋巴细胞,对Daudi细胞的杀伤率为71．24％,而对K562细胞杀伤作用较弱,对HepG2细胞无明显作用。其淋巴细胞亚群中,CD4^＋T细胞、CD8^＋T细胞的比例均显著增加,分别为56．51％和70．21％,CD4^＋T细胞／CD8^＋T细胞比值由空白对照组的1．49倒置为0．81。结论HSP70-Id复合物修饰的DC生物学活性增强,经其刺激后,传代培养的淋巴细胞可产生高效而特异性的抗肿瘤免疫效应,可能是CD4^＋T细胞、CD8^＋T细胞及DC协同作用的结果。     

TFF1和HSP70在结肠癌中的表达及临床意义

目的 探讨TFF1和HSP70在结肠癌中表达及临床意义。方法 用免疫组化S-P法检测71例结肠癌术后组织和15例正常组织TFF1和HSP70表达。结果 结肠癌组织TFF1和HSP70表达率分别为57．7％和70．4％，高于正常组织（26．7％和40％；P=0．03；0．04）。TFF1表达与Dukes分期和分化程度有关（P=0．025；0．005）。HSP70表达与Dllkes分期和分化程度有关（P=0．032；0．031）。TFF1和HSP70均与性别、年龄、肿瘤浸润深度、生长方式、淋巴结转移和预后无关。TFF1和HSP70在结肠癌中表达呈正相关（r=0．306，P=0．1309）。结论 本实验首次研究TFF1与HSP70在结肠癌中的表达相关性，提示两者在肿瘤发生中可能存在相互作用。TFF1和HSP70在结肠癌高表达，可能参与肿瘤的发生发展过程。     

兔肺VX2肿瘤经皮射频消融术前后HSP70表达的改变

目的　明确肺肿瘤经皮射频消融 (PRFA)术前后热休克蛋白 70 (HSP70 )表达的差异 ,探讨肺肿瘤PRFA治疗与机体免疫功能变化的关系。方法　采用VX 2肿瘤细胞悬液种植法建立兔肺肿瘤模型 ,进行PRFA后 ,观察原发灶及肿瘤的转移情况 ,并将肿瘤组织进行免疫组化染色 ,观察PRFA前后HSP70表达的变化。结果　PRFA后的VX 2肿瘤原发灶生长缓慢 ,腹腔淋巴结转移率低于对照组 ,7天时VX2肿瘤HSP70表达较对照组增加 ( 61.3 6%± 9.5 8%vs2 2 .13 %± 8.92 % ,P <0 .0 5 )。结论　PRFA后 ,肺VX 2肿瘤组织HSP70表达增加 ,可能增强递呈肿瘤特异性抗原而激活机体的抗肿瘤免疫     

HeLa细胞HSP-70多肽体外诱导免疫活性细胞及其抗瘤机理

[目的]探讨用HeLa细胞HSP 70多肽诱导免疫活性细胞 (immunecompetentcells ,ICC)的特异性抗肿瘤机制。[方法]用热休克处理的HeLa细胞提取的HSP 70多肽剌激正常人外周血单个核细胞 ,在剌激扩增前后测定T淋巴细胞表型 ,并测定扩增的免疫活性细胞对HeLa细胞的杀瘤活性。[结果]在扩增的细胞中CD3+、CD8+淋巴细胞百分率明显增高 (P<0.01)。该免疫活性细胞对Hela细胞和来源于病人的宫颈癌细胞都具有较高的杀伤活性 ,而对经HSP 70单抗封闭后的HeLa细胞的杀伤率则明显下降。[结论]HeLa细胞HSP 70多肽能有效刺激PBMCs诱导活化免疫活性细胞 ,该免疫活性细胞具有特异性抗肿瘤作用     

As2O3对小鼠膀胱癌作用的实验研究

 目的　探讨瘤体局部注射As₂O₃ 治疗膀胱源性实体肿瘤的可行性并探讨可能的作用机制。方法　通过在小鼠局部接种肿瘤细胞建立小鼠异位移植膀胱癌 ,在瘤体局部注射As2 O3 1mmol/L 0 .2ml,连续 7d后取瘤体及肝、肾行病理检查。采用原位末端转移酶标记技术检测瘤体内肿瘤细胞的凋亡情况。结果　不同时间开始的砷剂治疗均可以使肿瘤体积缩小 ,重量减轻与对照组比较有显著差异 (P <0 .0 5 )。与对照组相比治疗组瘤体内的肿瘤细胞发生明显凋亡。结论　瘤体局部注射As2 O3 可以有效地抑制膀胱源性实体癌瘤的生长 ,其机制可能于促使肿瘤细胞凋亡有关。     

热疗降低胶质瘤侵袭性及与HSP70和iNOS表达的关系

目的 探讨热疗与热休克蛋白70（heat shock protein70, HSP70）及诱导型一氧化氮合酶（induced nitric oxide synthase, iNOS）表达的关系,阐明热疗降低胶质瘤侵袭性的作用及其可能机制。方法 热处理C6胶质瘤细胞后,酶联免疫吸附法和Western blot法动态检测胶质瘤细胞中HSP70抗体滴度和iNOS的表达水平;Griess法测定胶质瘤细胞中NO浓度;结晶紫染色法检测胶质瘤侵袭性的改变。结果 C6细胞经热疗后,HSP70抗体滴度增加,于30 min时最多（86.52 ng/L）。C6细胞内iNOS的表达水平也在热疗后明显增加,并于热疗60 min达高峰（IDV=228.31）后逐渐减少。热疗后胶质瘤细胞内NO浓度于热疗120 min时达高峰（OD=168.42）,且NO浓度越高,胶质瘤侵袭性越低（n=8.21×10⁶）。结论 胶质瘤细胞经热疗后HSP70表达水平增加,增加的HSP70可能通过某种机制提高了iNOS的表达水平,进而增加了胶质瘤细胞内的NO浓度而引起胶质瘤侵袭性的下降。