WTX 慢病毒载体及其稳转结肠癌细胞株Lovo/WTX-EGFP 的建立

目的：构建抑癌基因WTX慢病毒载体,建立稳定转导WTX的结肠癌Lovo/WTX-EGFP细胞株,为研究WTX在结肠癌中的作用机制提供有效工具。方法：通过Gateway技术构建WTX慢病毒载体pLV.Ex3d.null-EF1A>WTX>IRES/EGFP并通过菌落PCR筛选鉴定,将其与辅助质粒pLV/helper-SL3,PLV/helper-SL4,PLV/helper-SL5共转染293FT细胞包装慢病毒并在荧光显微镜下行滴度值测定。用WTX慢病毒载体转导结肠癌Lovo细胞株,并通过多次挑克隆培养建立稳定表达WTX的Lovo/WTX-EGFP细胞株。结果：Gateway技术构建的慢病毒载体pLV.Ex3d.null-EF1A>WTX>IRES/EGFP经鉴定完全正确;慢病毒包装48 h后视野下可见清晰绿色荧光表达,病毒滴度为5×107 TU/mL。慢病毒载体成功转导Lovo细胞,经qPCR及Western blot检测WTX表达水平明显升高;通过多次挑克隆培养成功建立了稳定转导WTX的Lovo/WTX-EGFP细胞株。结论：通过Gateway技术可成功构建WTX慢病毒载体并获稳定转导WTX的Lovo/WTX-EGFP细胞株,为研究WTX在结肠癌中的作用机制提供了实验基础。     

抑癌基因p16在结肠癌中表达及意义

探讨抑癌基因ｐ１６在结肠癌中表达及意义。方法 采用免疫组织ＳＰ方法标记５７例大肠癌组织中抑癌基因ｐ１６。结果 ５７例大肠癌中Ｐ１６基因的阳性率为８４．２％，其阳性率在肿瘤的临床分期，特别是病理分级等方面有显著性差异。     

抑癌基因PTEN在结肠直肠癌中表达的研究

目的：探讨PTEN蛋白在结肠直肠癌组织中的表达及其临床意义。方法：应用免疫组织化学技术检测1998年1月至1999年8月间于我院收治的122例结肠直肠癌组织标本中frrEN蛋白的表达。结果：在122例结肠直肠癌组织标本中有39例为阴性表达，正常结肠直肠黏膜组织、腺瘤组织均为阳性表达（P〈0．01）。无论阳性面积抑或强阳性面积，PTEN蛋白表达与结肠直肠癌病人的性别、年龄无显著相关性（P〉0．05）；而与结肠直肠癌周径、淋巴结转移、远处转移、肿瘤分化程度和Dukes分期存在显著相关（P〈0．01）。肿瘤分化各组两两比较显示，在阳性面积中除高分化与中分化腺癌、在强阳性面积中除低分化与未分化腺癌（P〉0．05）外，其余各组间统计学检验均存在显著性差异（P〈0．01）。Dukes分期各期两两比较，无论是阳性面积还是强阳性面积，除B期与C期（P〉0．05）外，其余各组间统计学检验均存在显著性差异（P〈0．01）。结论：PTEN抑癌基因的蛋白表达低下或丢失与结肠直肠的癌变有关，可能是结肠直肠的癌变过程中一种较晚发生的事件，是进展期结肠直肠癌的一种信号。     

抑癌候选基因NDRG2在结肠癌组织中的表达

目的分析抑癌候选基因NDRG2在人类结肠肿瘤组织中的表达情况。方法收集30例患者的结肠癌组织及其正常组织，提取总RNA，应用半定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测NDRG2 mRNA的表达水平。为进一步分析NDRG2蛋白质的表达水平，分别提取30例组织的总蛋白，应用蛋白质印迹和免疫组织化学（免疫组化）技术检测其NDRG2的蛋白表达水平。结果RT-PCR结果显示，30例结肠癌组织中，有12例的NDRG2 mRNA表达明显降低。蛋白印迹结果显示，30例结肠肿瘤组织中有12例NDRG2蛋白水平明显下降，与RT-PCR结果一致。免疫组化结果显示，正常组织及肿瘤组织中NDRG2阳性率分别为90．0％（27／30）和53．3％（16／30），组间阳性表达率差异有统计学意义（P〈0．05），NDRG2的表达与患者的年龄、性别、淋巴结转移、浸润深度、Dukes分期无明显相关关系（P〉0．05），而与肿瘤组织分化级别相关，高、中分化组NDRG2阳性表达率高于低分化组（P〈0．05）。结论NDRG2在某些结肠癌组织中呈低表达，而且其表达与结肠癌的分化程度有关，提示其可能对结肠癌的发生或发展有重要的作用。这为研究结肠癌的发病机制提供了进一步的线索。     

抑癌基因Merlin与干细胞标记物Nanog在肝细胞癌中表达的关系及意义

目的:探讨肝细胞癌(HCC)抑癌基因失活与肝癌干细胞(LCSC)的关系及其临床意义。方法:用免疫组化法检测116例HCC组织标本中抑癌基因Merlin与LCSC表面标记物Nanog的蛋白表达,分析两者的表达与HCC患者临床病理因素及预后间的关系。结果:按X-tile软件计算得出的Merlin与Nanog表达量的分界值,116例HCC中Merlin低表达者92例(79.3%),高表达者24例(20.7%);Nanog高表达者36例(31.0%),低表达者80例(69.0%)。单因素分析显示,分化较差,有卫星灶、静脉浸润、出血坏死的HCC组织中Merlin低表达,而Nanog高表达(均P0.05);多因素分析显示,Merlin低表达和Nanog高表达是HCC术后存活和复发的独立的预测指标(均P0.05)。将患者分为低危组(Merlin高表达并Nanog低表达)、中危组(Merlin高表达并Nanog高表达或Merlin低表达并Nanog低表达)、高危组(Merlin低表达并Nanog高表达)分析,3组患者的术后总体生存率(低危组中危组高危组)和复发率(低危组中危组高危组)差异均有统计学意义(均P0.05)。结论:抑癌基因Merlin失活与Nanog高表达有一定关系,两者的消长与HCC患者预后密切相关。     

TUSC3基因在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的:探讨TUSC3基因在肝细胞癌(HCC)中的表达及临床意义。方法:收集92例行肝切除术且术后病理证实为HCC患者的石蜡组织标本及其临床病理资料,用免疫组化法检测TUSC3在HCC组织及相对应癌旁组织中的表达,分析TUSC3的表达情况与HCC患者临床病理因素的关系;用qRT-PCR及Western blot方法检测20对冷冻HCC及癌旁组织中TUSC3 mRNA与蛋白的表达。结果:92例石蜡组织标本的免疫组化结果显示,56例(60.9%)HCC组织中TUSC3表达下调,癌旁组织中33例(35.9%)TUSC3表达下调,差异有统计学意义(P0.001);TUSC3在HCC组织中的低表达与肿瘤Edmondson分级(P=0.008)、TNM分期(P=0.031)、肿瘤直径有关(P=0.0 2 0)。20对新鲜标本的qRT-PCR与Western blot检测结果显示,肝癌组织中TUSC3的mRNA[(0.99±1.46)vs.(1.96±2.18)]与蛋白[(0.49±0.35)vs.(1.04±0.43)]相对表达量均明显低于癌旁组织(均P0.05)。结论:TUSC3基因在HCC中的表达下调,其低表达可能与HCC的恶性进程密切相关。     

抑癌基因DLC-1在肿瘤发生中的作用及其表达调控研究进展

DLC-1(frequently deleted in liver cancer 1)基因是一种肿瘤抑制基因,是从肝癌细胞系中首先分离报道的.DLC一1基因在许多肿瘤,如肝癌、非小细胞性肺癌、前列腺癌、乳腺癌等中均表达缺失或下调,而其表达的恢复能够抑制肿瘤细胞的增殖、生长和转移,证实该基因在肿瘤的发生发展过程中发挥重要的生物学作用.就DLC-1基因的结构、功能及其在肿瘤中的相关研究作一综述.     

抑癌基因RASSFlA在胰腺癌组织中表达的研究

目的 探讨抑癌基因RASSFlA在胰腺癌组织中的表达及其与胰腺癌发生、发展的关系.方法 采用免疫印迹方法检测48例胰腺癌组织及其癌旁(正常)组织RASSFlA基因蛋白的表达水平.结果 癌旁组织RASSFlA蛋白的表达量高于高分化腺癌组织的表达量(P<0.05);高分化腺癌组织RASSFlA蛋白的表达量高于中、低分化腺癌组织(P<0.05).FNM分期Ⅲ期RASSFlA蛋白的表达量低于Ⅰ,Ⅱ期(P<0.05).RASSFlA基因蛋白表达与性别、年龄,肿瘤发生部位无明显关系(P>0.05).结论 RASSFlA表达缺失或低下在胰腺癌的发生、发展中起重要作用.     

BC047440基因在肝细胞癌中的表达及其意义

目的:探讨肝癌相关的新基因BC047440在肝细胞癌(HCC)中的表达及其病理学意义。方法：采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测36例HCC及其相应的癌旁肝组织中BC047440 mRNA的表达，并将该基因在HCC中的表达分为过高表达组及较高表达组，分析其与肿瘤病理变化的关系。〖KG(*8〗结果：36例HCC中BC047440基因mRNA的表达较癌旁肝组织高,其平均光密度比值分别为0.2594±0.0928和0.0942±0.0443,差异有极显著性意义（P<0.01）;过高表达组与较高表达组相比较，前者肝癌直径较大，门静脉受侵较严重，差异有显著性（P<0.05）。结论：BC047440基因与HCC的发生、发展和侵袭转移有关。     

肝细胞癌中抑癌基因的甲基化现象

目的 了解肝细胞癌(HCC)中RASSF1A、DAPK、FHIT、RIZ1和p73基因的甲基化状况.方法 应用甲基化特异性PCR技术,检测40例HCC和4例正常肝组织中5种基因启动子区域的甲基化状况,并分析每种基因甲基化程度和临床参数之间的关系.结果 正常肝组织中无基因甲基化.癌组织中,RASSF1A、DAPK、FHIT、RIZ1和p73基因的甲基化率分别是:90%、77.5%、70%、30%和5%.相应癌旁组织中,RASSF1A、DAPK、FHIT、RIZ1和p73的甲基化率分别为77.5%、77.5%、62.5%、5%和0%.结论 HCC中多基因的启动子甲基化是一种普遍的事件.     

能稳定表达外源抑癌基因PTEN的胆管癌细胞系QBC939的建立

目的：为研究抑癌基因PTEN对胆管癌细胞生物学行为的影响，建立能稳定表达外源PTEN的胆管癌细胞系。方法：将野生型、突变型PTEN质粒和空载体质粒分别转化细菌，提取纯化后，脂质体介导法转染体外培养的胆管癌细胞系QBC939;嘌呤霉素筛选抗性克隆;Western blot 检测标签蛋白HA的表达;RT-PCR， Western blot和免疫细胞化学法分析目的基因PTEN的表达。结果：野生型、突变型PTEN和空载体转染细胞株均获得嘌呤霉素抗性;野生型和突变型PTEN转染细胞株均检测到ＨＡ的表达，而空载体转染细胞株和未转染细胞株均未检测到ＨＡ的表达;野生型及突变型PTEN转染细胞株中目的基因PTEN在mRNA和蛋白质表达水平上均较空载体转染细胞株和未转染细胞株增强。结论：成功构建了分别能稳定表达外源野生型PTEN，突变型PTEN或空载体pBP的胆管癌细胞系。     

抑癌基因CpG岛甲基化与结直肠癌关系的研究进展

CpG岛甲基化可导致抑癌基因的表观遗传学转录失活,在某些情况下可能是抑癌基因失活的惟一机制,直接导致肿瘤的发生.笔者对Syk,p15,hMLH1,APC,DCC,p16等抑癌基因CpG岛甲基化与结直肠癌的关系进行简要综述,并提出存在的问题和展望.     

转移抑制因子1在胆管细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨转移抑制因子1(MTSS1)在胆管细胞癌组织中的表达及临床意义。方法:前瞻性收集2012年1月—2014年1月收治的89例胆管细胞癌患者作为研究组,同时收集因胆结石行胆囊切除的患者89例作为对照组。比较两组患者病理组织中MTSS1表达的差异,并进一步分析MTSS1与胆囊癌患者临床病理因素及预后的关系。结果:与对照组比较,研究组患者MTSS1阳性率明显降低(20.22%vs.58.43%,P=0.000),MTSS1阳性细胞百分比显明降低(9.47%vs.43.95%,P=0.000)。与MTSS1阳性的胆管细胞癌患者比较,MTSS1阴性者肿瘤大小明显增加(3.84 cm vs.2.46 cm,P=0.000)、肿瘤分期为III或IV期的患者比例明显上升(70.42%vs.27.78%,P=0.001)、淋巴结转移率明显增加(77.46%vs.44.44%,P=0.028)、2年内病死率明显增高(42.25%vs.16.67%,P=0.045)、肿瘤细胞为低分化者明显增加(P=0.001)。Logistic回归分析显示MTSS1阴性是胆管细胞癌患者死亡的独立危险因素(P=0.000),Wilcoxon检验显示MTSS1阳性患者生存率明显高于MTSS1阴性的患者(P=0.041)。结论:MTSS1表达下降或缺失与胆管细胞癌的发生和发展密切相关。     

凋亡相关基因p53和PDCD5表达水平对结肠癌的分级和预后影响

目的考察凋亡相关基因p53和程序化死亡基因5(PDCD5)表达水平对结肠癌的分级和预后影响。方法采用免疫组织化学检测60例结肠癌组织、60例癌旁组织和30例正常组织中p53和PDCD5蛋白表达水平,并比较其表达水平和结肠癌分级、预后等病理参数关系。应用SPSS 20.0软件包进行数据分析,p53、PDCD5与结肠癌病理因素之间的分析应用χ~2检验。p53和PDCD5之间的相关性检验采用Spearman相关分析。以P0.05为检验标准。结果 p53表达率:分化程度越高的患者组织中表达越低(χ~2=8.695,P0.05);预后生存期33个月的患者组织p53表达率为66.7%,≥33个月的患者组织为30.0%,生存期越长的患者组织p53表达率越低(χ~2=8.076,P0.05)。PDCD5表达率:分化程度越高的组织表达率越高(χ~2=6.906,P0.05);有淋巴转移的患者组织中为8.3%,无淋巴转移的患者组织中为33.3%,(χ~2=5.031,P0.05);预后生存期33个月的患者组织中为10.0%,≥33个月的患者组织中为36.7%,生存期越长的患者组织PDCD5表达率越高(χ~2=5.963,P0.05)。以上比较差异具有统计学意义。p53和PDCD5表达水平负相关(r=-0.297,P0.05)。结论凋亡相关基因p53和PDCD5参与到了结肠癌的分级并因此影响了患者的预后。     

microRNA 与胆管癌关系的研究进展

microRNA（miRNA）是一组内源性的非编码RNA,其通过转录后水平调节靶基因的表达,在细胞增殖、分化、凋亡及肿瘤的发生、发展中起重要作用。笔者就近年来microRNA在胆管癌研究领域的最新进展进行综述,主要介绍miR-21,miR-370,let-7家族,miR-373,miR-200家族,miR-29b,miR-204,miR-320等与胆管癌的关系。     

miRNA-21、miRNA-135b、miRNA-141在结肠癌中的表达及其意义

目的：探讨miRNA-21、miRNA-135b和miRNA-141在结肠癌中的表达及其意义。 方法：用荧光实时定量PCR检测3种miRNA在结肠癌组织与癌旁正常结肠黏膜组织中的表达,以及在结肠癌患者和健康对照人群血浆中的表达。分析3种miRNA与结肠癌患者临床病理因素的关系。 结果：3种miRNA的表达水平在结肠癌组织中均高于癌旁正常肠黏膜组织、在结肠癌患者血浆中均明显高于健康对照人群（均P<0.05）;miRNA-21的表达水平与肿瘤分期及浸润深度有关,miRNA-135b的表达水平与肿瘤的分期及淋巴结转移有关,miRNA-141的表达水平与肿瘤的分期、浸润深度及淋巴结转移有关（均P<0.05）;miRNA-21在结肠癌组织和患者血浆中的表达水平无明显相关性（r=0.459,P=0.072）,miRNA-135b、miRNA-141在结肠癌组织和患者血浆中的表达水平成正相关（r=0.686,P=0.042;r=0.742,P=0.026）。 结论：miRNA-21、miRNA-135b和miRNA-141在结肠癌患者中表达上调,均可能与结肠癌的发生发展密切相关,且均可能为潜在的肿瘤标记物以及治疗靶点。     

CDX2基因干扰对人结肠癌细胞在裸鼠体内生长的影响

目的:探讨CDX2基因表达对结肠癌细胞生长的影响。方法:将体外转染CDX2-shRNA慢病毒、空慢病毒载体及无转染的人结肠癌细胞系SW480和HT29接种到裸鼠皮下,制备皮下移植瘤模型,观察各组移植瘤的生长情况,28d后处死裸鼠,剥取移植瘤称重,并分别用免疫组化、Westernblot检测各组移植瘤组织Ki-67与CDX2的表达。结果:与各自空白对照组(无转染的SW480或HT29细胞移植)比较,两个干扰组(转染CDX2-shRNA慢病毒的SW480或HT29细胞移植)移植瘤生长速度均明显加快、移植瘤质量明显增加(SW480:679.11mgvs.379.36mg;HT29:715.78mgvs.427.07mg),瘤组织Ki-67蛋白表达水平明显升高、CDX2蛋白表达明显下调(均P0.05)。两个阴性对照组(转染空慢病毒载体的SW480或HT29细胞移植)的各指标与各自空白对照组间均无明显差异(均P0.05)。结论:抑制CDX2基因的表达能促进人结肠癌细胞的裸鼠体内的生长,故CDX2可能是一种重要的抑癌基因。     

抑癌基因PTEN在人大肠癌中的表达及其意义

目的 阐明抑癌基因PTEN在大肠癌的发生发展及转移过程中的作用。方法 应用Nothern blot和免疫组化的方法检测47例人大肠癌及癌旁组织中PTEN mRNA和蛋白的表达，分析其与大肠癌的临床病理学分期、分级及其与大肠癌肝转移的关系。结果 PTEN mRNA在大肠癌组织内的表达水平显著低于相应的癌旁组织，在癌组织内，PTEN mRNA表达水平与大肠癌的恶性程度分级、Dukes分期及血清中癌胚抗原(CEA)水平呈显著负相关，PTEN蛋白在大肠癌旁组织中表达阳性率为100％，在大肠癌组织中表达阳性率为76．6％，PTEN在大肠癌组织中表达的降低与大肠癌的Dukes分期、淋巴结转移及血清中CEA水平呈显著负相关。结论 抑癌基因PTEN表达的降低在大肠癌的发生和转移过程中起重要作用。