应用PCR技术对孕妇HCMV感染的前瞻性研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对１５６ 例孕妇尿中ＨＣＭＶ 进行检测,并追踪观察１１４ 例新生儿脐血中ＨＣＭＶ 垂直传播情况。结果表明：１１ 例孕妇尿ＨＣＭＶＤＮＡ 检测阳性,孕期感染率为７－０５％ ,有异常妊娠史孕妇感染率（１４－７１ ％ ）较正常孕妇（４－９２ ％） 明显升高。９ 例ＨＣＭＶ 阳性孕妇有４ 例观察新生儿脐血ＨＣＭＶＤＮＡ 阳性,占４４％ ,而ＨＣＭＶＤＮＡ阴性孕妇无１ 例新生儿脐血出现阳性结果。我们认为ＰＣＲ方法是检测ＨＣＭＶ宫内感染的可靠而灵敏的指标,对ＨＣＭＶＤＮＡ阳性的孕妇应进一步检查羊水,如羊水ＨＣＭＶＤＮＡ也阳性,应终止妊娠。     

急性白血病患儿脑脊液PCR扩增HCMV—DNA的研究

应用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）扩增和洋地黄深针杂交的方法，对５３例急性白血病（ＡＬ）患儿脑脊液（ＣＳＦ）样本进行了检测，经过ＰＣＲ扩增，可见明显的人巨细胞病毒ＤＮＡ（ＨＣＭＶ－ＤＮＡ）４００ｂｐ扩增带，经洋地黄探针特异性杂交鉴定，ＡＬ患儿ＣＳＦ标本ＰＣＲ扩增产生的ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性检出率为８３．０２％。本实验为ＡＬ病人ＣＳＦ的ＨＣＭＶ检测提供了一个简便方法。     

PCR方法检测献血员巨细胞病毒感染

ＰＣＲ方法检测献血员巨细胞病毒感染河北省人民医院遗传室（石家庄，０５００５１）郝玉宾，李洪云，郭文潮，张德峰，余小平血库刘甲俊指导朱俊真人巨细胞病毒是双链ＤＮＡ病毒，系疱疹病毒属。该病毒常与人体自身免疫和移植物排斥相关［１］。我们采用聚合酶链反应（Ｐ...     

使用PCR—SSP方法检测HLA—DR抗原

目的　采用顺序特异引物聚合酶链反应 (PCR -SSP)建立人类白细胞抗原DR位点的DNA分型方法 .方法　合成 2 9个特异性引物和 1对阳性对照引物 ,组成 2 0个PCR反应用于DR位点 ,建立一步法PCR -SSP .结果　所有样本PCR -SSP基因分型获得成功 ,分型结果经标准DNA ,限制性核酸内切酶分析证实符合 ,特异性和重复性 10 0 % .结论　PCR -SSP检测HLA -DR的方法具有快速、准确、特异性高等优点 ,适合临床应用 .     

HLA基因分型的最新进展

ＨＬＡ分型在人类学、法医学、疾病相关性及器官、细胞移植等研究中有重要的意义。以往，用于ＨＬＡ分型的方法主要是血清学和细胞学方法，由于其方法学上的缺点，分型有准确性较差，且不能进行亚型分析。最近几年，随着分子生物学的不断进步，特别是ＰＣＲ技术的广泛应用，ＨＬＡ基因分型技术得到了迅速的发展，各具特点的不同ＨＬＡ基因分型技术不断出现，在方法学上达到了稳定、准确、精细、简便、实用的程度，为其临床推广应用奠     

白血病患儿巨细胞病毒感染的PCR与抗原检测方法比较

目的 对不同种类标本应用ＰＣＲ检测巨细胞病毒（ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ,ＣＭＶ）ＤＮＡ,并与外周血白细胞ＣＭＶ抗体检测比较,以了解ＰＣＲ方法在诊断白血病患儿活动性ＣＭＶ感染时的意义。方法 实验组为３１例白血病患儿,对照组为３１例免疫功能正常儿童,两组儿童的年龄、性别无差异。应用ＰＣＲ方法检测血清、尿液和脑脊液ＣＭＶ ＤＮＡ,间接免疫荧光方法检测外周血白细胞ＣＭＶ抗原,ＥＬＩＳＡ方法检测血清抗     

用地高辛标记的PCR／SSO方法进行HLA—B27等位基因 …

建立检测ＨＬＡ－Ｂ２７等位基因的聚合酶链反应／顺序特异的寡核苷酸探针方法，并分析其实用性。方法 采用４对引物Ｅｒ０ｓ，Ｅ９０ａｓ；Ｅ９１ａｓ，Ｅ１３６ａｓ；Ｅ９１ｂｓ，Ｅ１８１ａｓ；Ｅ４０ｓ，Ｅ１３０ａｓ，分别扩增靶ＤＮＡ，用１０个探针ＣＬ－１－９和ＰＡＮ－Ｂ２７分别进行杂交，探针用地高辛系统标记和检测，可检定Ｂ２７０１－２７０８共８个等位基因。     

PCR／SSCP技术在检测HLA基因点突变中的应用

聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ／ＳＳＣＰ）是根据核苷酸序列不同的单链ＤＮＡ，可形成不同构象，从而在不含变性剂的聚丙烯酰胺凝胶中泳动速度不同的原理，分离鉴定等长ＤＮＡ单链的方法，本文应用ＰＣＲ／ＳＳＣＰ方法检测了６０例无亲属关系个体白细胞抗原Ⅱ类基因（ＨＬＡ－ＤＱＡ１）５－上游调控区的等位基因多态性，并以ＰＣＲ直接测序证明每种ＳＳＣＰ带型都与不同位置单个碱基取代相关联。     

PCR技术和血清抗体检测妊娠期巨细胞病毒感染价值的比较

将ＰＣＲ技术检测孕妇血白细胞中ＨＣＭＶ－ＤＮＡ和ＥＬＩＳＡ检测孕妇血清中ＨＣＭＶ特生ＩｇＭ和ＩｇＧ进行对比研究。结果：ＤＮＡＰＣＲ阳性率为４２．００％，与ＩｇＭ阳性率２５．５８％比较，Ｐ〈０．０５，与ＩｇＧ阳性率６２．７９％比较，Ｐ〈０．０１，说明ＤＮＡＰＣＲ较ＩｇＭ检测敏感，但不如ＩｇＧ。结论：ＤＮＡＰＣＲ更适用于论断先天性ＨＣＭＶ感染和一部分检测不出ＩｇＭ的ＣＭＶ复发感染者，对妊娠期ＣＭＶ感染     

原位PCR技术检测石蜡包埋脑组织中人巨细胞病毒DNA

应用原位聚合酶链反应（ＩＳＰＣＲ）技术检测了２５例尸检畸形胎儿石蜡包埋脑组织中人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ，并与普通ＰＣＲ及原位杂交（ＩＳＨ）进行了比较。ＩＳＰＣＲ、ＰＣＲ及ＩＳＨ检测阳性率分别为４４％，３６％及２０％。与ＩＳＨ相比较，ＩＳＰＣＲ不仅检出阳性率高，而且信号强度增强。研究结果提示，ＩＳ－ＰＣＲ是诊断ＨＣＭＶ感染的快速、敏感、特异的实用方法。     

HCMV抗原（pp65）血症检测技术诊断活动性HCMV感染

人类巨细胞病毒（ｈｕｍａｎｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ，ＨＣＭＶ）感染在人群中广泛存在，自从１９８８年ＨＣＭＶ抗原血症检测技术建立以来，该技术发展迅速，检测外周血ＰＭＮＬｓ中的ＨＣＭＶ晚期结构抗原ｐｐ６５是早期、快速、准确、定量诊断活动性ＨＣＭＶ感染的主要手段。本综述主要涉及ＨＣＭＶ抗原（ｐｐ６５）血症检测技术及其临床意义的研究近况。     

女性淋病患者宫颈HCMV和HSV—Ⅱ感染PCR诊断分析

采用聚合酶健反应（PCR）技术对387例女性淋病患者进行宫颈HCMVDNA和HSV－ⅡDNA检测，并对比观察156例孕女宫颈HCMV和HSV－Ⅱ感染情况。结果表明女性淋病患者宫颈HCMVDNA阳性率为25．06％，HSV－ⅡDNA阳性率为15．24％；孕妇宫颈HCMVDNA阳性率为7．05％，HSV－ⅡDNA阳性率为0．64％。提示女性淋病患者多有非婚性接触史而发生HcMV和HSV－－Ⅱ感染。     

婴儿持续性黄疸与巨细胞病毒PCR检测研究

本文应用ＰＣＲ技术对持续性黄疸婴儿进行巨细胞病毒检测，结果６８例患儿血清中巨细胞病毒（ＣＭＶ）３８例阳性，阳性率为５５．９％；尿中ＣＭＶ４５例阳性，阳性率为６６．２％。ＰＣＲ与病毒分离及其它血清学方法相比，既快速又敏感，尿标本用于ＰＣＲ检测ＣＭＶ－ＤＮＡ取材及处理简便，且较血标本检出率为高［１］。     

HLA高分辨等位基因与骨髓移植受者HCMV抗原血症研究

目的 分析HLA高分辨等位基因与骨髓移植术后HCMVpp65抗原血症的相关性.方法 选取2009年2月至2010年10月在我院行骨髓移植术患者48例;采用免疫组化方法检测患者HCMVpp65,采用直接测序分型方法（PCR-SBT）检测患者HLA-A＊1101、HLA-A＊0201、HLA-A＊2402、HLA-B＊4001、HLA-DRB1＊0901五个高分辨等位基因.结果 ①48例骨髓移植术后患者HCMV感染率100％;②HLA-A＊1101、HLA-A＊0201、HLA-A＊2402、HLA-B＊ 4001等位基因阳性率在pp65抗原血症12例低感染组和36例高感染组中比较没有统计学意义（P＞0.05）,其阳性率HLA-A＊1101为33.3％ （8/24）和20.8％ （15/72）、HLA-A＊0201为4.2％ （1/24）和13.9％ （10/72）、HLA-A＊ 2402为12.5％ （3/24）和19.4％ （14/72）、HLA-B＊ 4001 16.7％ （4/24）和12.5％ （9/72）;③HLA-DRB1＊0901等位基因阳性率在pp65抗原血症12例低感染组和36例高感染组中比较有统计学意义（P =0.048）,其阳性率为4.2％ （1/24）和19.4％ （14/72）;④HLA-DRB1＊0901组患者pp65抗原血症高于HLA-A＊2402组（P =0.007）和HLA-A＊1101组患者（P=0.028）,HLA-A＊0201组患者pp65抗原血症高于HLA-A＊2402组患者（P=0.02）,其他高分辨等位基因组之间pp65抗原血症差异没有统计学意义（P＞0.05）.结论 HLA-DRB1＊0901等位基因可能与骨髓移植术后患者发生高HCMVpp65抗原血症有关;HLA-A＊2402等位基因可能与骨髓移植术后患者发生低HCMVpp65抗原血症有关.     

晚期孕妇血清sIL-2R水平与先天性HCMV感染的相关性

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染的孕妇血清可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)水平与先天性HCMV感染的相关性.方法联合应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和逆转录PCR(RT-PCR)法筛检外周血HCMV-IgM和HC-MV晚期mRNA均阳性的妊娠晚期孕妇,再用套式PCR法(Nest-PCR)检测其新生儿脐血HCMV-DNA,然后随机选择新生儿HCMV-DNA阳性34例和阴性41例作为研究对象,应用ELISA法定量检测其相应孕母外周血血清sIL-2R水平.结果其新生儿脐血CMV-DNA阳性和阴性的孕妇血清sIL-2R平均水平分别为301.01±35.14U/ml和197.75±17.51U/ml(t=2.83,P＜0.01).结论活动性HCMV感染的妊娠晚期孕妇血清sIL-2R水平可能与先天性HCMV感染的发病机制相关.     

FQ—PCR血、尿、乳汁联合检测在小儿人巨细胞病毒感染中的临床研究

目的探讨用荧光定量聚合酶链反应（fluorescence quantitative PCR,FQ—PCR）法进行血、尿、母乳联合检测小儿人巨细胞病毒（HCMV）的临床意义。方法采用FQ—PCR法联合检测182例疑诊HCMV感染的患儿,对母乳喂养的阳性患儿补测母乳HCMV—DNA。结果血、尿及联合检测HCMV—DNA阳性率分别为15．93％、29．12％、39．01％。阳性患儿配对的母乳HCMV—DNA阳性率为45．00％,阴性患儿配对的母乳HCMV—DNA阳性率为18．60％,两组进行x^2检验,x^2=5．54,具有显著性差异（P〈0．02）。结论联合检测能提高HCMV—DNA检测阳性率,尿HCMV—DNA检测阳性率高于血HCMV—DNA检测,HCMV感染母乳是婴儿获得性感染的主要途径之一。     

PCR技术和ELISA法诊断HCMV宫内感染的敏感性与可靠性比较

用聚合酶链反应(PCR)技术.对78例妊娠早期孕妇进行外周血、尿中人巨细胞病毒(HCMV)DNA测定;用酶联免疫吸附法对78例妊娠早期孕妇进行外周血中人巨细胞病毒IgG、IgM测定.结果:PCR技术中外周血阳性率10%、尿中阳性率11.4%;ELISA反应中血IgG阳性率1.1%、IgM阳性率1.1%.统计结果表明在同一孕妇中HCMV阳性检出率PCR技术明显高于ELISA法,在PCR技术中,尿的阳性率又高于血的阳性率,这进一步证实了PCR技术是诊断宫内感染较理想的手段.