新生儿血清CPK活力测定及DMD的早期诊断

本工作测定了4118例男性新生儿脐带血血清CPK活力,平均值为27.5U/ml(SD.18.6)。在测定的4118例新生儿中,有一例CPK活力明显升高,即进行了基因分析及家系各成员的DMD基因RFLP分析,表明该例为DMD患儿。     

应用荧光定量PCR检测缺失型DMD携带者的研究

目的建立荧光定量PCR技术检测缺失型DMD携带者.方法应用9对引物扩增抗肌萎缩蛋白缺失热点区域,检测出常见的缺失型DMD患儿17例.用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR技术对缺失型DMD患儿家系中21例女性亲属进行检测.结果1例肯定携带者、11例可疑携带者和3例可能携带者证实为携带者;5例可疑携带者和1例可能携带者被排除.结论SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR技术是一种检测缺失型DMD携带者的准确、快速、简便的方法.     

MLPA联合FISH在DMD基因突变产前诊断中的价值探讨

目的:分别采用多重连接探针扩增技术(MLPA)与荧光原位杂交技术(FISH)针对外周血及羊水标本分析杜氏/贝氏肌营养不良(DMD/BMD)患者DMD基因缺失/重复突变的类型。分析在DMD/BMD产前诊断中两者联合应用的诊断价值。方法:对2009年1月-2010年1月在我院行基因诊断的3个DMD/BMD家系共5位先证者及其15位女性亲属采用MLPA进行DMD基因的分析,获得缺失/重复片段范围,再通过BAC克隆制备相应区段的直标型FISH探针,并用X染色体着丝粒探针作为对照。分别采取MLPA和FISH技术对羊水标本进行检测,与分娩后取样的MLPA检测结果进行对照。结果:MLPA与FISH技术检测效果在外周血中完全一致,但3例羊水标本中采用MLPA进行检测有1例无法满足分析要求,1例出现假阳性结果,另1例为真阴性结果,MLPA联合用FISH检测结果均正确。结论:MLPA和FISH检测DMD基因缺失/重复在外周血中都能够获得准确的结果,但对于羊水标本MLPA联合FISH进行检测的准确性更高。     

非缺失型DMD/BMD家系中基因携带者的短串联重复序列多态性连锁分析

目的 准确检出非缺失型杜氏／贝氏进行性肌营养不良症（Duchenne/Becker muscular dystrophy,DMD/BMD)家系中女性携带者，为产前基因诊断提供信息。方法 利用dystrophin基因中5个短串联重复序列多态位点（STR－44，STR－45，STR－49，STR－50和5'-DysⅡ）的特异寡核苷酸引物进行PCR扩增，经聚丙烯酰烯酰胺凝胶电泳分离，DNA片段的多态性用连锁分析其家系中各成员的基因单体型。结果 连锁分析了8个家中26名女性亲属基因型，检出16名女性DMD／BMD携带者和10名非携带者。结论 5个短串联重复序列多态位点的联合连锁分析，可较准确而简便地检出DMD／BMD家系中的女性携带者。     

应用PCR技术对DMD患者基因缺失及携带者检测

本文采用１８对引物，Ａ、Ｇ两套ＰＣＲ多重反应体系，对我院３７例进行性肌营养不良（ＤＭＤ）患者进行基因缺失检测，其中１９例患者有不同区域的缺失。其缺失区域售在４５－５２号外显子，最高峰在４８号外显子，与国外文献报道基本一致。另外应用６对重复双核苷酸序列多态性引物采用ＰＣＲ方法对４个非缺失型家系，进行扩增片段长度多态性分析发现，所有４个家系，均具有２个以上多态性标高。对这些家系通过连锁分析，可对非缺失     

杜氏肌营养不良新生儿筛查及诊断策略研究

目的:探究将肌型肌酸激酶同工酶(MM isoenzyme of creatine kinase,CK-MM)检测用于筛查新生儿杜氏肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy,DMD)的可行性。方法:对10 252例男性新生儿干血斑的CK-MM含量进行测定,将结果按孕周、采血时间、实验间隔时间分...     

DMD模型鼠基因型鉴定及其肌组织病理学与超微结构研究

目的:探讨DMD动物模型dko小鼠的基因型鉴定方法及其肌组织的病理学与超微结构情况。方法:运用序列特异性引物PCR-SSP技术鉴定杂合子种鼠的子代基因型,并对子代dko小鼠的骨骼肌组织冰冻切片进行HE染色和dystrophin/utrophin的SABC-Cy3荧光免疫组织化学检测以及肌组织的透射电镜观察。结果:112只子代鼠中,mdx小鼠28只,dko小鼠26只,杂合子鼠58只,按百分比计算,分别占25.0%、23.2%、51.8%,基因型鉴定结果符合孟德尔遗传规律;dko小鼠肌组织HE染色显示细胞大小形态不均,轮廓变圆,核中移,肌间隙变宽,有炎症细胞浸润与结缔组织增生现象;免疫荧光检测肌膜未见有dystrophin/utrophin表达;电镜观察有肌膜断裂不完整、膜与膜下组织分离并水肿、肌原纤维结构松散、结缔组织增生及炎症细胞浸润等现象。结论:PCR-SSP技术鉴定子代鼠基因型快捷准确;dko小鼠的病理生理学表现与DMD极为相像,是DMD临床治疗研究的理想疾病动物模型。     

联合应用MLPA技术和基因测序技术检测DMD基因单个外显子缺失突变

目的 提高检测DMD基因单个外显子缺突变失的准确率,为DMD家系成员的遗传咨询和产前基因诊断提供准确的依据.方法 收集2009-2010年送本实验室进行DMD基因检测的血样185例,提取外周血DNA,以美国病理学家协会提供的DNA质控品分别为阴性和阳性对照,联合应用MLPA技术、PCR技术和基因测序技术,分析其DMD...     

DMD的基因治疗研究进展

Duchenne肌营养不良(DMD)为X连锁隐性遗传性肌病,目前临床无有效治疗手段,基因治疗最具前景。近几年里,基因治疗的研究取得了较大的进展,尤其表现在出现了一些新的基因治疗手段,同时病毒载体的改进也使治疗基因的表达效率有了明显提高,这些进展必将有助于基因治疗的临床实验早日开展。     

DMD基因分子遗传学研究进展

ＤＭＤ基因分子遗传学研究进展广州市第二人民医院，广州市妇产科研究所（５１０１５０）胡冬贵，黎青假肥大型肌营养不良症（Ｄｕｃｈｅｎｅ＇ｓｍｕｓｃｕｌａｒｄｙｓｔｒｏｐｈｙ．ＤＭＤ）是原发于横纹肌的一种Ｘ－连锁隐性致死性遗传病，以进行性加重的肌萎缩和肌无...     

抗肌萎缩蛋白的疏水结构与DMD／BMD的关系

用Ｇｅｎｅｐｒｏ程序在计算机上分析抗肌萎缩蛋白的疏水性和亲水性，首次发现该蛋白存在４个疏水肽段，分别位于第９５～１２０，１９９０～２０１０，２４３８～２４９３和３１５０～３３００位氨基酸。其中第３疏水肽段（２４３８～２４９３位氨基酸）的疏水性最强，由抗肌萎缩蛋白基因第５１号外显子碥码，称之为缺失热区疏水肽段。通过对６５例整码缺失的ＤＭＤ和１３６例整码缺失的ＢＭＤ病例分析，７５％（４９例）的ＤＭＤ患者缺失热区疏水肽段消失，９８％（１３３例）的ＢＭＤ患者缺失热区疏水肽段存在。提示缺失热区疏水肽段是抗肌萎缩蛋白的一个重要结构功能区。     

DMD基因突变检测技术的回顾与展望

DMD是一类发病率较高的X连锁隐性遗传病。DMD基因突变机制复杂,探索更直接,简便,准确的基因突变检测技术是目前对DMD研究的热点。随着分子生物学的发展,DMD基因诊断技术取得了一定的进展,本探讨了各项技术的优势与缺陷,并展望了生物芯片等新技术的应用前景。     

25例DMD患者的PCR检测及遗传学分析

采用ＰＣＲ方法对２５例有家族史Ｄａｃｈｅｎｎｅ肌营养不良患者及７例健康对照者进行外周血检测。结果表明：（１）ＤＭＤ患者多为男性,说明此病为性连锁隐性遗传;（２）２５例ＤＭＤ患者有１８例发现ＤＭＤ基因ｅｘｏｎ４８附近有缺失,支持ｅｘｏｎ４８附近是ＤＭＤ基因发生缺失的“热点”的看法。     

应用多重PCR检测DMD患者的基因缺失

为探讨ＤＭＤ基因缺失突变的模型,应用９对寡核苷酸引物多重扩增ＣＤＭＤ基因９个不同的外显了区域,对２例ＤＭＤ患者进行了基因缺失分析。结果发现１１例有至少一个基因片段的缺失,且缺失热点区域集中在外显子４５．５１,提示多重ＰＣＲ可用于ＤＭＤ的基因诊断。     

内含子或外显子缺失DMD家系女性携带者的基因诊断

目的对内含子和(或)外显子缺失的Duchenne型肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy,DMD)家系女性成员进行致病基因携带者的诊断,为进一步行产前诊断或植入前遗传学诊断提供准确的信息。方法利用dystrophin基因5个微卫星位点(STR-44、45、49、40、5′DysⅡ)的多态性连锁分析,同时结合半定量PCR对1个内含子和外显子均缺失的DMD家系(家系5)和1个仅内含子缺失的DMD家系(家系4)的女性成员进行携带者基因诊断。结果家系5的Ⅱ2的STR-50位点基因型为245/245,不是DMD基因携带者。家系4的Ⅱ6、Ⅱ8的STR-45位点基因型为del/172,Ⅲ19为del/178,均为DMD基因携带者。结论STR-PCR多态性分析结合内含子半定量PCR可获得更多诊断信息,更准确地检出内含子缺失的女性携带者,提高诊断率。     

直接定量PCR对缺失型DMD基因携带者的诊断

直接定量ＰＣＲ对缺失型ＤＭＤ基因携带者的诊断李洵桦刘焯霖梁秀龄Ｄｕｃｈｅｎｎｅ型肌营养不良症（ＤＭＤ）的发病机理与抗肌萎缩蛋白（ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ）基因突变有关。作为突变基因携带者的女性一般不患病，但检出携带者对预防本病患儿出生有重要意义。我们利用...     

Duchenne肌营养不良（DMD）的基因诊断和产前基因诊断

Ｄｕｃｈｅｎｎｅ型肌营养不良（Ｄｕｃｈｅｎｎｅｍｕｓｃｕｌａｒｄｙｓｔｒｏｐｈｙ，ＤＭＤ）是临床上常见的一种进行性致死性骨骼肌萎缩的遗传病，呈Ｘ连锁隐性遗传，发病率高达出生男婴的１／３５００，目前尚无有效的治疗方法，产前基因诊断是预防本病家庭中再发的...     

DMD的基因治疗研究进展

Duchenne肌营养不良(DMD)为X连锁隐性遗传性肌病，目前临床无有效治疗手段，基因治疗最具前景。近几年里，基因治疗的研究取得了较大的进展，尤其表现在出现了一些新的基因治疗手段，同时病毒载体的改进也使治疗基因的表达效率有了明显提高，这些进展必将有助于基因治疗的临床实验早日开展。