丹参多酚酸盐对大鼠血管平滑肌细胞钙化的抑制作用

目的探讨丹参多酚酸盐对大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)钙化的抑制作用。方法实验分钙化组(β-磷酸甘油诱导培养大鼠VSMCs钙化),钙化+不同浓度的丹参多酚酸盐组和正常对照组(普通培养液)。通过细胞钙含量和碱性磷酸酶(ALP)活性测定,判断钙化程度;分别用real-time PCR方法和western blot方法检测细胞中骨形成蛋白BMP-2的mRNA水平和蛋白水平。结果钙化VSMCs的钙含量和ALP活性分别增加3.92倍和10.5倍(均P<0.01)。而丹参多酚酸盐呈剂量依赖的抑制钙化的VSMCs中的钙含量升高和ALP活性,其中10-8、10-7、10-6M的丹参多酚酸盐使钙化量分别减低32.3%、42.2%和60.9%(P<0.01),使ALP活性分别减低36.4%、48.8%和74.7%(P<0.01)。钙化的VSMCs中BMP-2 mRNA和蛋白水平较对照组均有显著增高,而丹参多酚酸盐呈剂量依赖的抑制钙化的VSMCs中BMP-2 mRNA表达和蛋白水平。结论丹参多酚酸盐可以抑制大鼠的VSMCs发生钙化,此效应可能与降低BMP-2表达有关。     

UV-C诱导体外血管平滑肌细胞凋亡模型的建立

应用UV-C垂直照射距离其10cm处的大鼠主动脉SMC,发现经照射后细胞可出现典型的凋亡形态学改变,如细胞变圆、染色质浓缩、细胞膜出泡、凋亡小体等;且提取细胞DNA,其琼脂糖凝胶电泳呈现梯状图谱,从形态学和生化指标方面证明了UV-C可诱导体外血管SMC凋亡。UV-C照射诱导体外SMC凋亡,可作为进一步深入研究SMC凋亡的内在调控机制的一个简便、稳定、可靠的模型。     

人胚胎干细胞的体外原代培养条件分析

目的 :探讨人胚胎干细胞 (embryonicstemcells,EScells)的体外原代培养条件及相关影响因素。方法 :分别从标本的取材、胰蛋白酶的浓度及消化时间、培养基中白血病抑制因子 (leukemiainhibitoryfactor,LIF)的浓度等方面来观察人ES细胞的原代培养条件 ,并对其进行碱性磷酸酶染色鉴定。结果 :药物流产且胎龄在 5～ 1 0周及人工流产且胎龄小于 5周者 ,其胚胎的完整率较高。采用 0 .1 2 5 %胰蛋白酶室温下消化 3～ 5min ,有较高的克隆形成率。为防止ES细胞过早分化 ,培养基中LIF的浓度应在 5～ 1 0ng·ml- 1 之间。结论 :人ES细胞原代培养的取材应以人工流产且胎龄在 5周以下、及药物流产且胎龄在 5～ 1 0周者为主 ,以 0 .1 2 5 %胰蛋白酶室温下消化胚胎组织 3～ 5min ,培养基中LIF的浓度应在 5～ 1 0ng·ml- 1 之间 ,这样有利于提高ES细胞培养的成功率并抑制其过早分化     

β-glycerophosphate促进血管平滑肌细胞体外钙化

本研究旨在观察β－ｇｌｙｃｅｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ对主动脉中膜体外钙化的促进作用，建立体外动脉钙化模型，并对血管异常钙化的机制进行初步探讨。１方法１．１平滑肌细胞的分离和培养分离家兔主动脉中膜，剪碎并接种于培养瓶中。贴壁后，加入含有２０％ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍｌ青霉素、１００μｇ／ｍｌ链霉素、２ｍｍｏｌ／Ｌ谷胺酰胺的ＤＭＥＭ，３７℃５％ＣＯ２培养。５～６代细胞按１．８×１０５／孔的密度接种于６孔培养板，７２ｈ后更换为添加有１０ｍｍｏｌ／Ｌβ－ｇｌｙｃｅｒｏ－ｐｈｏｓｐｈａｔｅ、５０μｇ／ｍｌ维生素…     

逼尿肌细胞的原代培养和鉴定

目的建立逼尿肌细胞的原代培养及鉴定方法。方法应用Ⅱ型胶原酶消化分离逼尿肌细胞,在含20%胎牛血清DMEM培养液中培养,观察细胞形态和扩增情况,用a-SM-Actin进行免疫组化鉴定细胞类型。结果 逼尿肌细胞在培养18 h后开始贴壁在瓶底,4~5 d后可见细胞融合,8~10 d后可见细胞覆盖瓶底80%以上。a-SM-Actin免疫组化染色鉴定,光镜下观察梭形细胞胞浆内见纵行排列的棕黄色丝状物。结论该方法简单、易于掌握,短期内可获得大量高纯度的逼尿肌细胞。     

急性酶解血管平滑肌及Genistein对其泡沫化的影响

目的 探讨大豆异黄酮(Genistein)对原代大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞(MASMC)泡沫化影响.方法 木瓜蛋白酶-胶原酶F消化法获取MASMC,与氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)共培养建立泡沫细胞模型,分为对照组、模型组、Genistein组、大豆苷元(Daidzein)组、酪氨酸激酶抑制剂(Tyrphostin)...     

人体皮肤Merkel细胞原代培养与鉴定

目的探索人体皮肤Merkel细胞体外培养方法,为进一步研究银屑病发病中Merkel细胞的神经内分泌调节作用积累基础资料。方法获取正常人皮肤组织,采用酶消化法分离细胞。设计专门的细胞体外培养系统,观察Merkel细胞在3种不同培养液中贴壁和增殖情况。采用Merkel细胞特异性标记抗体CK20标记Merkel细胞,采用免疫组化和流式细胞仪进行鉴定。结果人体皮肤Merkel细胞在3种培养液中均能顺利贴壁和增殖,并具有内分泌功能,但1号培养液[ Hamˊs-F12＋胎牛血清（10/100 ml）＋bFGF（20 ng/ml）]更有利于Merkel细胞生长。经流式细胞仪鉴定,Merkel细胞纯度可达90.11%。结论在本培养系统中,人体皮肤Merkel细胞能成功进行体外培养,并可获得较高纯度的Merkel细胞。     

血管成形术后血管外膜与平滑肌细胞的迁移

平滑肌细胞的迁移是血管成形术后血管再狭窄形成的重要机制之一。传统认为血管新生内膜来源于血管中膜平滑肌细胞的内向迁移，但最近国外有学者提出新的学说：血管外膜细胞内膜迁移造成血管再狭窄。这一学说将可能对血管成形术后血管再狭窄的研究和临床治疗产生重大影响。     

γ射线对培养的兔血管平滑肌细胞的抑制作用

目的 观察体外培养的兔动脉平滑肌细胞(SMCs）对7射线照射的剂量效应关系，探讨电离辐射抑制SMCs增殖的细胞生物学机理。方法 静止期SMCs分别给予γ射线2．5，5，10，20及30Gy一次性照射后继续培养4，24或72h。以^3H—TdR掺入法、流式细胞术分析、微核实验和电镜观察γ射线对SMCs的DNA合成、增殖周期和损伤的影响。结果 在2．5Gy以上剂量γ射线一次性照射时，SMCs增殖明显抑制，细胞G0／G1期阻滞，均呈剂量依赖性。2．5Gy以下剂量γ射线照射后24h左右可见细胞凋亡增加，2．5Gy以上剂量7射线照射可使SMCs发生坏死。结论 电离辐射能抑制SMCs增殖，使细胞产生G0／G1期阻滞，并呈剂量依赖关系。SMCs死亡方式与受照射剂量有关。     

血管成形术后血管外膜与平滑肌细胞的迁移

平滑肌细胞的迁移是血管成形术后血管再狭窄形成的重要机制之一。传统认为血管新生内膜来源于血管中膜平滑肌细胞的内向迁移，但最近国外有学者提出新的学说：血管外膜细胞内膜迁移造成血管再狭窄。这一学说将可能对血管成形术后血管再狭窄的研究和临床治疗产生重大影响。     

体外血管平滑肌细胞培养方法的应用及改进

动脉粥样硬化(AS)的发生发展与动脉中膜SMC的大量聚集和异常增生密切相关。参照传统的主动脉SMC培养方法并加以改进,采取从内剥离中膜法和组织块反复接种法,培养的细胞呈现典型的“峰与谷”结构,免疫组织化学染色显示细胞内SM-Actin表达阳性。此培养方法可作为研究血管SMC生物学行为和AS内在机制的有效模型。     

氧化低密度脂蛋白诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡的细胞周期分析

目的 :研究氧化低密度脂蛋白 (0x -LDL)引起血管平滑肌细胞 (VSMCs)凋亡的效应及其凋亡细胞周期分析。方法 :采用电镜、流式细胞仪等观察Ox -LDL诱导VSMCs凋亡的细胞形态学改变及细胞周期变化。结果 :VSMCs在Ox -LDL(2 0mg/L)作用下 ,电镜下见凋亡细胞呈现核固缩凋亡小体的形态学特征。流式细胞仪检测发现Ox -LDL(2 0mg/L)引起细胞凋亡指数明显高于N -LDL(10倍 )。细胞增殖周期分析可见 ,Ox -LDL处理VSMCs 2 4h ,随着浓度的增加 ,G1期细胞百分率逐渐下降 ,而G2 /M期细胞百分率逐渐升高 ,提示Ox-LDL能将细胞阻滞在G2 /M期。结论　OX -LDL能诱导VSMCs凋亡 ,VSMCs的凋亡与细胞分裂期阻滞密切相关。     

半胱氨酸对人血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察半胱氨酸（Cys）对人血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖和凋亡的影响。方法采用组织贴块法体外培养人VSMCs,用不同浓度的Cys培养液孵育细胞24h,用MTT法检测VSMCs增殖,流式细胞术检测VSMCs凋亡,RT-PCR法检测bax mRNA的表达。结果体外培养的人VSMCs在终浓度为100、200、500和1000μmol/LCys的培养液中孵育24h后的吸光度（A）值均高于对照组（P〈0.05）,表明Cys可诱导人VSMCs增殖;但同时,VSMCs凋亡细胞数明显高于对照组（P〈0.05）,bax的表达增强,表明Cys亦诱导了人VSMCs凋亡。结论浓度较高时半胱氨酸可同时诱导VSMCs增殖和凋亡。     

X线造影剂对人血管平滑肌细胞的损伤及对其增殖的影响

目的观察Ｘ线造影剂（ＲＣＭ）对人血管平滑肌细胞的损伤及对其增殖的影响。方法（１）人血管平滑肌细胞种于２４孔培养板上至长满培养孔，暴露于２５０ｍｇＩ／ｍｌ泛影葡胺、低渗显影葡胺、优维显、伊索显及饱和甘露醇溶液１５或６０分钟，收集细胞并用台盼蓝染色鉴定细胞活性。（２）人血管平滑肌细胞暴露于２５０ｍｇＩ／ｍｌ泛影葡胺、低渗显影葡胺、优维显、伊索显、饱和甘露醇溶液及１０％胎牛血清（ＦＣＳ）培养液１５或６０分钟后，用１０％ＦＣＳ培养液刺激细胞增殖，增殖开始前及增殖１４天后作细胞计数。结果（１）暴露于２５０ｍｇＩ／ｍｌ优维显、伊索显、饱和甘露醇溶液６０分钟及２５０ｍｇＩ／ｍｌ泛影葡胺、低渗显影葡胺１５分钟后，细胞活性无改变，暴露于２５０ｍｇＩ／ｍｌ泛影葡胺、低渗显影葡胺６０分钟后分别出现１６．５％±６．６％及９．２％±７．８％的死细胞。（２）２５０ｍｇＩ／ｍｌ泛影葡胺、低渗显影葡胺及饱和甘露醇溶液抑制血管平滑肌细胞增殖，优维显及伊索显对血管平滑肌细胞增殖无影响。结论（１）高浓度离子型ＲＣＭ有细胞毒性；（２）ＲＣＭ对人血管平滑肌细胞的增殖无直接刺激作用；（３）ＲＣＭ对细胞增殖的抑制作用与其高渗性和化学结构均有关     

Effect of contrast media on vascular smooth muscle cells

Purpose: In order to alleviate the adverse effects of contrast media (CMs) on the vascular system, the role of Ca²⁺ in the viability of vascular smooth muscle cells (VSMCs) was investigated.

Material and Methods: VSMCs were obtained from swine thoracic aorta. The number of VSMCs was counted under a microscope using the trypan blue dye-exclusion method 24 h after culture in RPMI containing physiological saline (SAL) as control, iothalamate (IOT), or iohexol (IOH) at 10% by volume with CaCl₂ added at 0 to 2.0 mmol/l. Free Ca²⁺ in the above media was measured using an ion-selective electrode.

Results: Free Ca²⁺ was 0.4 to 1.5 mmol/l with ionic IOT and 0.4 to 1.8 mmol/l with non-ionic IOH as well as with control. The ratio of viable cells grown in the presence of CMs to those grown in the control was optimal at approximately 0.60 near 1 mmol/l Ca²⁺ and decreased markedly to 0.00 at 1.5 mmol/l Ca²⁺ in the presence of IOT and to 0.39 at 1.8 mmol/l Ca²⁺ in the presence of IOH, while the ratios decreased gradually to 0.28 in the presence of IOT and 0.53 in the presence of IOH at 0.4 mmol/l Ca²⁺.

Conclusion: Ionic IOT is more cytotoxic to VSMCs than non-ionic IOH. However, the cytotoxicity was minimal and similar between both CMs at 1 mmol/l Ca²⁺ in accordance with the sodium-calcium balance.     

UV-C诱导的凋亡SMC内Actin蛋白的表达

目的 :观察经UV -C照射诱导的体外凋亡动脉中膜平滑肌细胞 (SMC)内Actin表达的变化。方法 :应用免疫组织化学技术和图象分析技术检测凋亡SMC内Actin的表达。结果 :UV -C照射可诱导SMC发生凋亡 ,凋亡细胞内Actin表达较正常大大增强 ,并出现从胞周向核周、从胞浆向核内的迁移和再分布。结论 :Actin表达的改变可能是参与UV -C诱导的SMC凋亡的信号传递过程中的重要因素之一。     

血管紧张素Ⅱ在血管平滑肌中的信号转导

血管紧张素Ⅱ是一个影响血管平滑肌细胞收缩和生长的多功能激素,通过作用于ＡＴ１受体引发一系列复杂的胞内信号转导而产生效应。该文综述了血管平滑肌中血管紧张素Ⅱ主要的信号转导途径。阐明这些途径对于理解ＡＴ１受体功能是肾素－血管紧张素系统的终效应器是相当重要的。     

高同型半胱氨酸血症致血管平滑肌细胞增殖的机制初探

 目的 探讨高同型半胱氨酸血症(hyperhomocysteinemia, HHcy)致血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMC)增殖在动脉粥样硬化发病中的机制.方法 整体水平实验:82例研究对象分为动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)组54例,对照组28例.荧光生化法检测血浆总同型半胱氨酸(total homocysteine, tHcy)水平,甲基化特异的 PCR(Methy-specific PCR,MSP)法检测雌激素受体α(estrogen receptor-α ,ER-α)启动子区CpG岛的甲基化状态.细胞水平实验:体外培养的人脐动脉VSMC,用不同浓度同型半胱氨酸(homocy steioe, Hcy)处理,MTT法观察Hcy对平滑肌细胞生长的影响,MS-PCR法和Rt-PCR法检测ER-α基因启动子区甲基化程度及mRNA的表达.结果 整体水平实验中,AS患者中甲基化率为70.4%,对照组甲基化率为28.6%,差异具有统计学意义(P<0.05).细胞水平实验中,MTT结果显示Hcy对VSMC具有明显促增殖效应.Hcy显著增加ER-α基因启动区的甲基化修饰,并使ER-αmRNA的表达进行性减少.结论 Hcy通过干扰DNA的甲基化修饰,使ER-а基因高甲基化可能是高同型半胱氨酸血症促使VSMC增殖,并引起动脉粥样硬化的重要机制.