MG132诱导人血管内皮细胞凋亡及对p53表达的影响

目的观察蛋白酶体抑制剂MG132对人血管脐静脉内皮细胞(ECV-304)细胞的致凋亡作用及其对凋亡相关基因p53表达的影响。方法采用两个浓度(2μmol/L,5μmol/L)的蛋白酶体抑制剂MG132处理ECV-304细胞24 h;DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫细胞化学检测p53蛋白表达。结果对照组ECV-304细胞凋亡率低于5%,在2μmol/L MG132作用下,凋亡率为11.3%±1.2%,MG132浓度升至5μmol/L时,细胞凋亡率增至44.5%±5.3%;免疫组化检测p53蛋白表达水平升高。结论蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导血管内皮细胞凋亡,其机制可能与MG132上调p53基因表达有关。     

蛋白酶体抑制剂MG132对Raji细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨蛋白酶体抑制剂MG132对人Burkitt’s淋巴瘤Raji细胞体外增殖和凋亡的影响。方法：不同浓度（0．5、1．0、5．0、10．0和50．0μmol／L）的MG132处理Raji细胞24h和48h,MTT法检测细胞增殖情况;5．0μmol／LMG132处理Raji细胞24h,流式细胞术进行细胞凋亡率及细胞周期分析。结果：浓度为1．0、5．0、10．O、50．0μmol／L的MG132作用于Raji细胞24h和48h后,细胞增殖OD（A490nm）值均显著低于对照组（P〈0．05）,增殖抑制率（20．60±10．28）％～（60．40±2．75）％,随MG132浓度的增加和作用时间的延长细胞增殖抑制率增高,抑制作用呈现剂量和时间依赖性;5．0μmoL／L的MG132作用Raji细胞24h后,实验组细胞凋亡率为25．86％,对照组为0．06％,实验组s期细胞比率（51．70％）较对照组（39．83％）上升,而G0／G1期细胞比率（33．54％）较对照组（46．04％）下降。结论：蛋白酶体抑制剂MG132可显著抑制Raji细胞的增殖并诱导其发生凋亡和G2／M期阻滞。     

蛋白酶体抑制剂MG132对Raji细胞凋亡、细胞周期及UBE1基因表达的影响

 【目的】 探讨蛋白酶体抑制剂MG132对人Burkitt's淋巴瘤Raji细胞凋亡、细胞周期及泛素活化酶(UBE1)基因表达的影响。【方法】 5 μmol/L的MG132处理Raji细胞24 h,形态学观察细胞生长情况;流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法分析细胞凋亡、PI单染法分析细胞周期;荧光定量RT-PCR检测UBE1 基因mRNA表达, Western blot 检测UBE1 蛋白表达。【结果】 MG132处理组细胞生长缓慢,死亡及凋亡多见,细胞凋亡率(26.06 ± 1.10)% 较对照组(0.30 ± 0.26)%上升(P < 0.05),G2/M期细胞比率(33.2 ± 1.2)%较对照组(12.5 ± 1.1)%升高(P < 0.05);MG132处理组UBE1 mRNA表达量(0.35 ± 0.05)较对照组(1.00 ± 0.08)下降(P < 0.05),抑制率为65%; UBE1蛋白表达量(0.93 ± 0.07)较对照组(1.62 ± 0.22)下调(P < 0.05),蛋白表达率为(58 ± 6)%。【结论】蛋白酶体抑制剂MG132可诱导Raji细胞发生凋亡和G2/M期阻滞,同时抑制UBE1的mRNA和蛋白表达,机制仍待深入研究。     

蛋白酶体抑制剂MG132对PC12细胞的增殖抑制作用

目的:了解蛋白酶体抑制剂MG132对多巴胺能细胞PC12增殖和凋亡的影响. 方法:用不同浓度的MG132处理PC12细胞3 d,通过3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)微量比色法检测MG132对PC12细胞增殖的影响,通过姬姆萨染色法和流式细胞术检测MG132对PC12细胞凋亡的影响. 结果:在作用时间相同(3 d)的条件下,随着MG132浓度的增高(0, 1, 2.5, 5, 10, 20 μmol/L),对PC12细胞增殖的抑制作用逐渐增强. 当MG132浓度达到2.5 μmol/L时,对PC12细胞的抑制率超过40%, IC50＝3.78 μmol/L. 同时,MG132能够明显诱导PC12细胞凋亡:姬姆萨染色显示,浓度为2.5 μmol/L的MG132作用3 d,细胞凋亡率为24.7%,而对照为1.3%;流式细胞术分析结果表明,浓度为2.5 μmol/L的MG132作用3 d,细胞凋亡率为25.6%,而对照为0%. 结论:蛋白酶体抑制剂MG132能够抑制多巴胺能细胞PC12的增殖并诱导细胞凋亡,蛋白酶体活性的丧失可能影响到多巴胺能细胞的生存.     

蛋白酶体抑制剂MG-132诱导K562细胞株凋亡的时程效应

目的研究不同时间蛋白酶体抑制剂MG-132对人慢性粒细胞白血病急性红白血病变细胞株K562的干预作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测16μmol／LMG-132作用不同时间（0、24、48、72、96h5个时间点）对K562细胞株增殖的影响,免疫细胞组织化学法检测MG-132作用不同时间后核因子-κB（NF—κB）及糖皮质激素受体（GR）的表达,采用流式细胞术检测MG-132不同作用时间对凋亡的影响。结果MTT：MG-132干预K562细胞株不同时间后K562细胞株的抑制率表现为对时间的依赖性,实验组明显高于对照组（P均〈0．05）,以干预72h时抑制率最高,为（63．33±1．52）％。免疫细胞组织化学法：MG-132干预K562细胞不同时间后,K562细胞株中的NF—κB、GR的表达水平均表现为对时间的依赖性;对于NF—κB,实验组明显低于对照组（均P〈0．05）,以干预96h时表达最低,为51．15±1．64;对于GR,以干预72h时表达最高,为89．21±3．49。流式细胞术：MG-132干预K562细胞株不同时间后K562细胞株的凋亡率表现为对时间的依赖性,实验组明显高于对照组（P均〈0．05）,以干预72h时,凋亡率最高,为（17．57±1．45）％。结论MG-132可能是通过下调NF—κB、上凋GR的表达诱导了K562细胞的凋亡和抑制,并表现出对时间的依赖性。     

泛素-蛋白酶体抑制剂对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖、迁移是动脉粥样硬化(As)、高血压和冠状动脉成形术后再狭窄的主要病理表现。而As也是导致心脑血管疾病的重要原因。泛素-蛋白酶体系统是真核细胞内主要的细胞降解系统,而泛素-蛋白酶体抑制剂可以抑制VSMC的增殖及迁移。     

α-synuclein增加细胞对蛋白酶体抑制剂毒性的易感性

帕金森病（PD）是临床上常见的神经系统变性疾病之一,主要病理特征是黑质多巴胺能神经元变性缺失和细胞内出现特征性包涵体Lewy小体。近年来发现,α-synuclein基因突变可引起家族性PD,而α-synuclein蛋白是Lewy小体的主要成分,因此α-synuclein在PD发病机制中可能起重要作用。α-synuclein的基因突变及结构改变是PD的病因之一,α-synuclein蛋白代谢障碍亦可能与PD的发病密切相关。有研究表明,野生型和突变型α-synuclein均可通过泛素-蛋白酶体途径降解,可引起家族性PD的另两个基因Parkin和UCHL-1均与泛素-蛋白酶体系统（UPS）有关,在Lewy小体中亦有泛素和一些蛋白酶体成分聚集。因此,α-synuclein与蛋白酶体功能的关系及其在Lewy小体形成和多巴胺能神经元变性过程中的作用成为关注的热点。     

蛋白酶体抑制剂MG132对肿瘤恶病质的改善作用

目的研究不同剂量蛋白酶体抑制剂MG132对肿瘤恶病质的预防和治疗作用。方法采用小鼠结肠腺癌C26细胞接种BALB/c小鼠诱导的肿瘤恶病质模型。分为对照组(HC),肿瘤恶病质组(CC),MG132预防的低浓度组(PL),中浓度组(PM)和高浓度组(PH),MG132治疗的低浓度组(TL)、中浓度组(TM)和高浓度组(TH)。每天监测小鼠体质量、饮食量和肿瘤体积,预防组和治疗组分别于接种后第5、12天开始每天腹腔注射MG132(0.01、0.1、0.5 mg/kg)。第19天各组处死8只小鼠,称量肿瘤、左侧腓肠肌和附睾脂肪组织质量,检测血清葡萄糖(Glu)、甘油三酯(TG)、总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)水平。CC、PM和TM组剩余8只小鼠继续原治疗至其死亡,观察生存时间。结果与CC组相比,MG132预防和治疗组小鼠自发活动量、去瘤体质量、腓肠肌纤维横切面积、腓肠肌和附睾脂肪质量增加,Glu和ALB水平升高,TG水平降低,生存时间延长,均以PM和TM组效果最好,且两组间以上指标差异均有统计学意义(P<0.05);PH组最显著地抑制了肿瘤生长(P<0.05)。结论 MG132的中浓度剂量能较好地改善恶病质,延长生存时间,且预防效果更明显。     

子痫前期血清诱发血管内皮细胞凋亡机制的实验研究

目的：探讨子痫前期患者血清对体外生长血管内皮细胞凋亡情况的影响及发生机制.方法：对血管内皮细胞进行体外培养,分别加入正常孕妇血清和重度子痫前期患者血清,采用流式细胞术检测血管内皮细胞凋亡率、半胱天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）活性,并在培养体系中加入阳离子染料JC-1后检测血管内皮细胞线粒体跨膜电位变化.结果：①子痫前期血清组诱导血管内皮细胞早期凋亡阳性率与晚期细胞凋亡阳性率分别为（10.8±3.2）％与（6.8±1.8）％,明显高于正常孕妇血清组的早期凋亡阳性率与晚期细胞凋亡阳性率（4.2±1.7）％与（3.3±1.1）％（P＜0.05）;②子痫前期血清组诱导血管内皮细胞Caspase-3阳性率为（8.3±1.2）％,明显高于正常孕妇血清组诱导血管内皮细胞Caspase-3阳性率（3.6±1.1）％（P＜0.05）：③子痫前期血清组诱导血管内皮细胞其线粒体损伤率为（8.9±2.1）％,明显高于正常孕妇血清组诱导血管内皮细胞的线粒体损伤率（3.0±0.8）％（P＜0.05）.结论：子痫前期患者血清可促进体外生长血管内皮细胞的凋亡,Caspase-3和线粒体凋亡在子痫前期患者血清促血管内皮细胞凋亡中可能起重要作用.     

蛋白酶体抑制剂MG-132对高氧肺损伤的影响及其机制

目的 探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对高氧肺损伤的影响及作用机制.方法 (1)30只SD大鼠随机分为空气对照组、高氧组和高氧+MG-132组.(2)建立高氧肺损伤大鼠模型.(3)进行肺损伤病理评分、肺湿/干重比例测定.检测泛素肺组织泛素化蛋白及NF-κBp65的表达.检测蛋白酶体20S及肺组织匀浆髓过氧化物酶(MPO)活性,检测肺组织TNF-α、IL-6表达.结果 (1)高氧组肺损伤明显,肺湿/干重比例、肺损伤病理评分均增高(P<0.01),MG-132能使肺湿/干重比例、肺损伤病理评分降低(P<0.01).(2)免疫组化和Westernblotting结果均显示高氧组泛素化蛋白表达增强(P<0.01),MG-132增强其表达(P<0.01).(3)高氧组蛋白酶体20S活性较空气对照组明显升高(P<0.01),MG-132抑制其活性(P<0.01).(4)高氧组MPO活性、NF-κB表达均较空气组增强(P<0.01),同时TNF-α、IL-6表达也增强(P<0.01).而高氧+MG-132组均降低(P<0.01).结论 (1)MG-132可以减轻高氧引起的肺损伤.(2)MG-132可能通过抑制NF-κB/炎性因子通路而实现保护作用.     

金黄色葡萄球菌肠毒素B对脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的观察金黄色葡萄球菌肠毒素B（SEB）诱导脐静脉内皮细胞的凋亡效应。方法用不同浓度SEB感染脐静脉内皮细胞（HUVEC）2、4、8与12h后,用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果SEB各浓度均可诱导HUVEC发生凋亡,与对照组比较差异有高度统计学意义（P〈0.01）。当SEB浓度为5μg/ml时诱导细胞凋亡的能力最强;5μg/mlSEB作用HUVEC细胞2h后,即可诱导细胞产生明显的凋亡,且随着作用时间的延长,细胞凋亡率逐渐增加（P〈0.01）。结论SEB可以诱导脐静脉内皮细胞凋亡,并表现出明显的时间、剂量效应关系,这可能与金葡菌L型垂直感染影响宫内胎儿发育的机制有关。     

血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞增殖的分子机制

目的:探讨AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞增殖的分子机制.方法:体外培养人脐静脉内皮细胞株,分为AngⅡ处理组、NAC干预组和正常对照组.采用各种生物化学方法观察不同浓度AngⅡ在不同时间对人脐静脉内皮细胞的增殖率和细胞产生ROS(·OH)的量.应用基因芯片技术检测人脐静脉内皮细胞增殖作用的相关基因表达谱.结果:一定浓度的AngⅡ作用12h时人脐静脉内皮细胞增殖率增加(P<0·05);ROS(·OH)的含量与人脐静脉内皮细胞增殖率呈显著负相关;NAC可以减少人脐静脉内皮细胞ROS(·OH)的含量,明显抑制AngⅡ对人脐静脉内皮细胞的增殖作用;0·0625μmol/LAngⅡ作用人脐静脉内皮细胞12h时,与细胞增殖相关的ERK、CDK、CCN、PCNA等25个基因普遍上调,而与细胞凋亡相关的DR6、Caspas-es6、BAK1、PDCD8等12个基因普遍下调,在1μmol/LAngⅡ作用12h时,呈相反结果.结论:AngⅡ可诱导人脐静脉内皮细胞产生ROS(·OH),引起多种与人脐静脉内皮细胞增殖相关的靶基因表达;ROS(·OH)可能是AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞增殖的主要信号转导分子和基因表达调节分子.     

山莨菪碱对缺氧复氧损伤血管内皮细胞凋亡的影响

目的探讨山莨菪碱(anisodamine,Ani)对缺氧复氧损伤血管内皮细胞凋亡的影响。方法采用人脐静脉内皮细胞缺氧复氧方法观察血管内皮细胞凋亡的变化,实验分5组:对照组、生理盐水组、肾上腺素组、Ani组、肾上腺素+Ani组。采用流式细胞术检测细胞凋亡,采用RT-PCR法检测血管内皮细胞B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)mRNA表达水平。结果 5组血管内皮细胞复氧12 h、24 h的细胞凋亡率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。其中生理盐水组复氧12 h、24 h细胞凋亡率与肾上腺素组、Ani组、肾上腺素+Ani组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。肾上腺素组与Ani组复氧12 h、24 h细胞凋亡率比较,差异均无统计学意义(P>0.05);而这两组与肾上腺素+Ani组复氧12 h、24 h的细胞凋亡率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。复氧12 h、24 h后5组的Bcl-2 mRNA表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。肾上腺素+Ani组Bcl-2 mRNA表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Ani可以降低缺氧血管内皮细胞的凋亡。Ani干预缺氧所...     

平阳霉素诱导人脐静脉血管内皮细胞HUVEC凋亡的作用机制

目的 检测不同浓度平阳霉素(pingyangmycin,PYM)作用24h对人脐静脉血管内皮细胞HUVEC细胞的生长抑制及凋亡的影响,探讨平阳霉素诱导HUVEC细胞凋亡最佳浓度及有关作用机制。方法 用不同浓度的平阳霉素作用HUVEC细胞24h,以细胞增殖-毒性8检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测比较0.1、10、100、1000μg/ml平阳霉素作用24h后对HUVEC细胞的抑制作用,用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶细胞凋亡检测试剂盒(Annexin-VFITC/PIapoptosis kit)检测不同浓度PYM对HUVEC细胞凋亡作用的影响,蛋白印迹法(Western blot)检测不同浓度平阳霉素作用HUVEC细胞后内质网应激蛋白GRP78和CHOP的表达。结果 CCK-8结果显示随平阳霉素浓度的升高,对HUVEC细胞的抑制作用越明显(P<0.05);然平阳霉素药物浓度100μg/ml和1000μg/ml组相比,差异无显著性统计学意义(P>0.05)。流式细胞检测显示0.1、1、10、100μg/ml平阳霉素作用24h后细胞凋亡率分别为5.37%±1.63%、12.70%±1.57%、24.70%±6.99%、23.60%±0.80%,坏死率分别为4.87%±2.09%、7.32%±3.88%、39.10%±6.18%、66.30%±0.40%,随药物浓度增加而增高,过高浓度细胞坏死占主导,和对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);Western blot法结果显示,平阳霉素各浓度作用24h后促进内质网应激蛋白GRP78和CHOP的表达。结论 平阳霉素在体外能明显抑制HUVEC细胞生长并促进其凋亡,当平阳霉素浓度达到100μg/ml时,细胞以坏死为主;平阳霉素可能通过内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)途径诱导HUVEC细胞凋亡。     

LOX-1介导oxLDL诱导的人脐静脉内皮细胞高通透性反应

目的 探讨凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1（lectin like oxidized low density lipoprotein receptor 1,LOX-1）在氧化低密度脂蛋白（oxLDL）诱导的血管内皮高通透性反应中的作用。方法 采用Transwell单层细胞模型系统和油红O染色,观察oxLDL或和LOX-1阻断抗体对单层血管内皮细胞LDL通透性的影响以及下室THP-1巨噬细胞内脂质的蓄积情况;用Western blot法和激光扫描共聚焦显微镜检测oxLDL或和LOX-1阻断抗体对桥粒芯糖蛋白1 （DSG1） 在人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中表达和分布的改变。结果 oxLDL可以增加单层内皮细胞对LDL的通透性和下室THP-1巨噬细胞脂质的蓄积,同时降低DSG1的表达及其在细胞间分布的连续性,而抑制LOX-1可以减弱内皮细胞的高通透性反应和巨噬细胞脂质蓄积。结论 oxLDL可能是通过降低桥粒蛋白表达使内皮细胞构型改变来诱导内皮高通透性,从而促进内皮下巨噬细胞内的脂质蓄积,其机制可能涉及LOX-1的介导。     

苯丁酸钠联合奥沙利铂对结肠癌细胞HT29的凋亡作用

目的:探讨苯丁酸钠(SPB)联合奥沙利铂(L-OHP)诱导HT29细胞的凋亡作用及其机制。方法:结肠癌HT29细胞分为空白对照组、奥沙利铂组、苯丁酸钠(1 mmoL/L)+奥沙利铂组、苯丁酸钠(2 mmoL/L)+奥沙利铂组,MTT法测定各组细胞存活率,流式细胞仪检测凋亡率;Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白Caspase-3和核转录因子NK-κB的表达。结果:苯丁酸钠能降低奥沙利铂诱导的HT29细胞存活率,随着其浓度增高,细胞凋亡率逐渐升高(P<0.01),细胞中Caspase-3蛋白和NK-κB蛋白表达则逐渐降低(P<0.05),均呈浓度依赖性。结论:苯丁酸钠(SPB)联合奥沙利铂(L-OHP)可诱导HT29细胞凋亡,其机制可能与抑制Caspase-3和NK-κB信号传导通路有关。     

Exendin-4减轻衣霉素诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

目的探讨Exendin-4对衣霉素诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响。方法原代培养HUVECs,不同浓度衣霉素(0～20μg/mL)处理HUVECs 16～24h,或用衣霉素(10μg/mL)干预18h后加用不同浓度Exendin-4(5～150nmol/L)预处理24h,MTT比色法检测细胞存活率,Hoechst/PI双染色荧光显微镜观察细胞凋亡率。结果随着衣霉素作用浓度的增加和时间的延长,HUVECs的存活率逐渐下降,呈现一定的量效和时效关系;Hoechst/PI双染色荧光显微镜观察也证实衣霉素能够诱导HUVECs凋亡;加用不同浓度Exendin-4预处理,内皮细胞存活率较单独衣霉素处理组逐渐升高;Hoechst/PI双染色荧光显微镜观察结果显示,100nmol/L的Exendin-4预处理HUVECs后,细胞凋亡率较衣霉素单独处理组减少40%(P<0.01)。结论衣霉素能诱导HUVECs凋亡,而Exendin-4可减少衣霉素诱导的HUVECs凋亡。