壳聚糖-明胶-磷酸三钙组织工程支架用于兔颅骨缺损的修复

目的探索壳聚糖-明胶-磷酸三钙作为骨组织工程支架用于骨缺损修复的可行性。方法采用二次冻干技术制备孔径200-400μmCS-Gel/TCP三维立体支架材料;新西兰兔12只随机分为两组,将兔骨髓基质细胞(MSC)进行体外培养、扩增、诱导为骨髓基质成骨细胞(MSO),并制备直径为15mm的颅骨全层圆形骨缺损。实验组与颅骨缺损处植入等大的MSO-支架复合体,对照组植入单纯支架,分别4、8周取材,组织切片与X线观察骨形成情况。结果MSO-支架复合体植入骨缺损区后,具有良好的骨修复效果,明显优于对照组。结论壳聚糖-明胶-磷酸三钙海绵状复合体是一种具有潜在临床应用价值的骨组织工程的支架材料组织工程。     

壳聚糖-明胶-磷酸三钙多孔复合体负载骨形成蛋白-2用于兔颅骨修复的实验研究

目的探索壳聚糖-明胶-磷酸三钙(CS-Gel/TCP)多孔复合体作为骨形成蛋白(BMP-2)缓释载体,用于兔颅骨修复的可行性。方法取细胞供体新西兰兔12只,随机分为两组,将兔骨髓基质细胞(MSC)进行体外培养、扩增、诱导为骨髓基质成骨细胞(MSO),同时采用相分离法制备CS-Gel/TCP支架负载BMP-2复合体材料,实验组与颅骨缺损处植入直径15mm,厚3mm的圆盘状的细胞-支架-BMP复合体,对照组植入同样大小形态细胞-支架,分别4、8周取材,观察骨形成情况。结果实验组骨修复的速度快且新生骨小梁数目多。结论CS-Gel/TCP多孔支架可以作为BMP-2缓释的载体,可以更好的促进骨的修复。     

羟基磷灰石/壳聚糖-明胶网络复合材料在模拟体内环境中的特性及对兔桡骨缺损的修复

目的：考察羟基磷灰石／壳聚糖-明胶网络复合材料在模拟体液中对微环境的影响及植入兔体内后对骨修复情况。方法：观察材料在模拟体液中的表面矿化及体系pH、Ca^2 浓度的变化；将材料植入兔桡骨节段性缺损部位，考察其生物相容性及对骨折愈合的作用。结果：羟基磷灰石／壳聚糖-明胶网络复合材料对机体微环境pH影响微小、表面矿化效果好，有良好的生物相容性和骨传导性。结论：羟基磷灰石／壳聚糖-明胶网络复合材料有望成为治疗长骨缺损的承力替代物。     

神经生长因子结合骨基质明胶修复兔颅骨缺损的实验研究

目的运用引导性骨再生技术,将结合神经生长因子的骨基质明胶与海藻酸钙膜联合使用,促进兔颅骨缺损的修复。方法将神经生长因子（NGF）与骨基质明胶（BMG）制成神经生长因子-骨基质明胶复合体（NGF-BMG）。48只新西兰兔的颅骨上制成双侧顶骨缺损,直径10mm,骨缺损区内外均覆盖海藻酸钙膜。随机分成A（NGF-BMG）组、B（BMG）组、C（NGF）组和D（空白）组4组。术后第4、8、12周作形态学观察、X线片图像分析、组织学观察及图像分析、生物力学检测及统计分析。结果术后4、8、12周,A组在新骨生成、X线片新生骨的灰度值、组织切片新生骨所占比例和三点抗弯强度方面,均优于B、C、D组,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 （1）NGF-BMG复合体具有良好的生物相容性,既能持续释放NGF,又具有良好的修复骨缺损的能力;（2）NGF具有促进骨再生的作用,但单独使用无法在骨折部位达到有效浓度。     

三种人工可降解材料上雪旺细胞培养的体外活性研究

目的 比较雪旺细胞在不同可降解组织工程支架材料上体外培养的生长活性.方法 选择bFGF胶原-壳聚糖海绵、可吸收明胶海绵,和PLGA三种可降解支架材料,把原代培养的雪旺细胞悬液接种在支架材料上,用MTT法测定细胞增殖能力和生长情况;流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡;环境扫描电镜观察细胞形态和材料结构,以此来评价雪旺细胞的生长活性.结果 雪旺细胞可在bFGF胶原-壳聚糖海绵、可吸收明胶海绵,和PLGA等支架材料上生长,但与bFGF胶原-壳聚糖海绵相容性最好.结论 bFGF胶原-壳聚糖海绵,更适合构建具有雪旺细胞活性的组织工程化人工神经支架材料.     

辛伐他汀组织工程骨材料的制备及性能研究

目的:探讨制备的辛伐他汀组织工程骨复合支架材料的理化性质及力学强度.方法:将同种异体骨、Ⅰ型胶原、辛伐他汀进行系列理化处理,制备成单纯组织工程骨材料、胶原组织工程骨材料、辛伐他汀组织工程骨复合材料.制备后的材料用扫描电镜观察其形貌特征,用X线衍射分析材料成分,并对材料的力学性能进行分析测定.结果:单纯组织工程骨材料具有天然骨的网状孔隙系统;胶原组织工程骨材料具有天然骨的网状孔隙系统,微孔表面覆盖胶原膜;辛伐他汀组织工程骨复合材料具有骨组织的天然网状孔隙系统,微孔表面可见胶原膜覆盖;单纯组织工程骨材料、胶原组织工程骨材料、辛伐他汀组织工程骨复合材料主要成分均为羟基磷灰石[HA,Ca10(OH)2(PO4)6],3种材料的孔径大小、空隙率、弯曲强度和压缩强度差异无统计学意义(P＞0.05).结论:辛伐他汀组织工程骨复合材料与其他2种材料理化性质和力学强度相同,可作为一种有效的天然组织工程骨支架材料.     

胶原-明胶海绵作为金葡液载体修复骨缺损的实验研究

目的初步探讨胶原-明胶海绵作为金葡液的载体修复骨缺损的可行性,为探索一种治疗骨缺损的新方法提供实验依据。方法选用Wistar大鼠30只,随机分为3组,每组10只。手术造成双侧股骨髁标准缺损后,A组左侧植入胶原-明胶海绵-金葡液复合物,右侧植入胶原-明胶海绵,B组左侧植入胶原-明胶海绵-金葡液复合物,右侧作为空白对照。C组左侧作为空白对照,右侧植入胶原-明胶海绵。于术后4周和6周行大体观察,X线拍片,组织学检查,灰重与湿重的测定。结果植入胶原-明胶海绵-金葡液侧具有高效的骨诱导活性,其成骨量也显著高于单纯植入胶原-明胶海绵侧和空白侧。结论胶原-明胶海绵作为金葡液的载体修复骨缺损,能减少金葡液局部注射的缺陷,提高其药物疗效,同时,胶原-明胶海绵能够阻挡周围软组织进入缺损区,为新骨生长提供空间。     

以珊瑚转化羟基磷灰石为支架材料构建组织工程骨的实验研究

目的:探讨珊瑚转化羟基磷灰石(CHA)作为骨组织工程支架材料的可行性,寻找最佳支架材料,为组织工程研究开辟新的途径.方法:取4周龄兔骨髓,分离骨髓基质细胞,体外培养,经诱导分化为成骨细胞,胰酶消化后离心收集细胞,接种至高温灭菌的CHA材料,无菌条件下植入裸鼠皮下组织中;对照组单纯植入CHA.分别于6、8周取材,行大体观察、X线摄影及组织学染色,观察新骨形成情况.结果:6周时X线片有高密度阻射影像,HE染色可见有新骨形成;8周时X线阻射影像密度更高,HE染色可见大量新骨形成并相互连接成骨梁样结构,骨细胞位于陷窝中.结论:CHA可以作为骨组织工程的支架材料,并具有广阔的应用前景.     

胎兔成骨细胞与bFGF-明胶海绵复合物的体外共建

目的探讨bFGF-明胶海绵复合物作为骨组织工程支架的可行性,为进一步的体内实验提供基础研究。方法取第二代培养的成骨细胞分别与bFGF-明胶海绵复合物及明胶海绵复合培养,进行一般与超微形态学观察,观察细胞生长情况并做成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)及微量蛋白含量的测定,比较细胞的粘附能力、增殖活力及成骨活性。结果bFGF-明胶海绵复合物、明胶海绵均可与成骨细胞复合生长,前者的细胞粘附能力、增殖活力及成骨活性均明显优于后者。结论bFGF-明胶海绵复合物能较好的发挥bF- GF作为信号因子的作用,并能提高明胶海绵的相容性,是构建组织工程骨的一种理想的支架材材。     

兔基质诱导软骨细胞移植修复早期股骨头缺血性坏死的观察

目的:观察和分析兔基质诱导软骨细胞移植修复早期股骨头缺血性坏死的效果。方法:选用30只新西兰大白兔作为研究对象,并随机分为观察组和对照组,观察组采用兔基质诱导软骨细胞移植的方法,对照组采用髓芯减压的方法进行治疗。对照组兔子钻孔后植入空白明胶海绵,观察组钻孔后植入复合有兔基质软骨细胞的明胶海绵,采用X线观察及组织学观察,并分析两组实验兔结果。结果:观察组患者骨密度值和毛细血管数明显高于对照组,观察组空骨馅窝率明显低于对照组,组间差异具有统计学意义(P0.05)。结论:兔基质诱导软骨细胞移植对早期股骨头缺血性坏死具有良好的修复作用,能够改善兔子的病情,使兔子逐渐恢复健康,具有一定的临床应用价值。     

可吸收生物膜对自体颅骨粉末修复颅骨缺损影响的大体标本和影像学观察

目的建立兔自体颅骨粉末移植修复颅骨缺损的动物模型,进行可吸收生物膜和不可吸收生物膜影响对比的研究,以更好地指导自体颅骨粉末移植修复颅骨缺损的临床工作。方法新西兰大白兔30只,每只大白兔的顶部人工形成2个直径为1cm的颅骨全层缺损,孔A、B。孔A作为实验组,移植人工形成缺损时收集的骨粉,并在移植的骨粉上面放置可吸收生物膜。孔B为对照组,在移植的骨粉上面放置不可吸收生物膜;术后2、6、12周各处死10只动物,并取材进行大体观察和影像学（CT和X线）分析。结果术后2周,孔A、B都迅速地以松质骨完全修复整个缺损。术后6周,移植的骨粉被逐步吸收,形成的松质骨生长、改建,形成新骨,部分骨性修复缺损;孔A与孔B形成的新生骨面积差异无统计学意义（P〉0.05）。术后12周,孔A、B均以较成熟的新生骨和部分纤维性骨痂完全修复整个缺损。孔A与孔B形成的新生骨面积差异无统计学意义（P〉0.05）。结论可吸收生物膜和不可吸收生物膜对自体颅骨粉末修复颅骨缺损的影响无明显差异,可替代使用。     

组织工程自体骨修复兔大块骨缺损

目的:研究组织工程自体骨的植入对大块骨缺损修复的影响。方法:培养兔的自体原代骨髓间充质干细胞,制备壳聚糖-明胶网络/羟基磷灰石多孔材料-重组人BMP2(CS-Gel/HA-rhBMP-2)复合材料。将骨髓间充质干细胞作为种子细胞与CS-Gel/HA-rhBMP-2进行复合。截去兔桡骨中段7mm长度的骨组织,建立骨缺损动物实验模型。实验组(每只兔的右侧)植入CS-Gel/HA-rhBMP-2-种子细胞复合材料,对照组(每只兔的左侧)植入CS-Gel/HA材料,2组均不做内外固定,逐层缝合伤口。分别在术后第4、8和12周对缺损处进行X线评分和组织学评分。结果:术后第4周实验组X线和组织学评分与对照组相比差别无统计学意义,8周和12周实验组X线和组织学评分均优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:实验中所用移植修复材料具有优异的骨传导性、骨诱导性,可以缩短骨缺损的修复时间。     

EH复合材料人工颅骨的动物实验研究

目的：通过动物实验研究，证实EH材料人工颅骨用于修补颅骨缺损的可行性。方法：将EH材料及硅橡胶人工颅骨分别植入狗颅骨，于术后3、6、12个月处死后取材，行病理学检查。结果：植入EH材料人工颅骨所有标本中，均未见排异反应，EH材料周围除骨组织外无其他组织生长，且新骨能长入EH材料表面的浅层内，EH材料及其表面HA颗粒均无吸收。而植入的硅橡胶人工颅骨与骨组织之间仅有纤维组织而无骨组织生长。结论：EH材料化学稳定，组织相容性好，具有骨传导作用，是良好的颅骨修补材料。     

以珊瑚转化羟基磷灰石为支架材料构建组织工程骨的实验研究

目的 :探讨珊瑚转化羟基磷灰石 (CHA)作为骨组织工程支架材料的可行性 ,寻找最佳支架材料 ,为组织工程研究开辟新的途径。方法 :取 4周龄兔骨髓 ,分离骨髓基质细胞 ,体外培养 ,经诱导分化为成骨细胞 ,胰酶消化后离心收集细胞 ,接种至高温灭菌的CHA材料 ,无菌条件下植入裸鼠皮下组织中 ;对照组单纯植入CHA。分别于 6、8周取材 ,行大体观察、X线摄影及组织学染色 ,观察新骨形成情况。结果 :6周时X线片有高密度阻射影像 ,HE染色可见有新骨形成 ;8周时X线阻射影像密度更高 ,HE染色可见大量新骨形成并相互连接成骨梁样结构 ,骨细胞位于陷窝中。结论 :CHA可以作为骨组织工程的支架材料 ,并具有广阔的应用前景     

明胶海绵复合重组人成骨蛋白-1的骨修复材料免疫原性及肌肉刺激性实验研究

目的考察以明胶海绵为载体的重组人成骨蛋白-1(rhOP-1)骨修复材料的免疫原性及肌肉刺激性。方法以明胶海绵为载体制备rhOP-1骨修复材料,间接ELISA方法观察该骨修复材料植入小鼠体内的免疫原性反应,病理切片观察其对周围肌肉的影响及形态变化。结果ELISA结果表明,此法制备的以明胶海绵为载体的rhOP-1骨修复材料未引起小鼠的特异性抗体产生。植入部位肌肉虽出现炎细胞浸润现象,但炎症反应呈可逆性,未发现肌肉组织的坏死,且组织钙化现象明显。结论明胶海绵复合rhOP-1的骨修复材料在免疫原性和肌肉刺激性方面安全可靠。     

组织工程化骨修复兔桡骨缺损的实验研究

目的 探讨骨髓基质干细胞(marrow stromal stem cells,MSCs)离体培养后与生物衍生骨(bio-derivcd bone,BDB)复合修复兔桡骨的节段性骨缺损的可行性.方法 将25只健康成年新西兰大白兔双侧桡骨制备成中段15mm的骨缺损,其中20只,将MSCs与生物衍生骨于体外复合培养后,通过手术将其植入右侧桡骨缺损处作为实验组;以单纯生物衍生骨植入左侧桡骨缺损处作为对照组:另5只为空白组不植入任何材料,在2、4、、8、12周各时间点分别行大体标本X线放射学检查、组织学观察,比较3组骨缺损修复的能力.结果 术后2、4、8、12周实验组与实验对照组放射学检查评价新骨生成,有显著性差异(P＜0.05).术后组织学检查新骨生成速度、生成量均有显著性差异(P＜0.05).空白对照组各时点均无新骨形成,最后缺损由纤维组织充填.结论 生物衍生骨能够与兔骨髓间充质干细胞体外复合培养,移植入异体新西兰大白兔后未见明显免疫排斥反应,是可以选择的细胞载体.MSCs/BDB复合物植入修复兔桡骨缺损能够加速新骨形成,修复能力明显优于单纯生物衍生骨植入.     

α-磷酸三钙骨水泥修复兔颅骨缺损实验研究

目的：研究α-磷酸三钙骨水泥的成骨原因及修复成骨特点。方法：在兔颅骨上制造贯通缺损,植入α-磷酸三钙骨水泥。于术后4周、8周、12周作组织学和X线照片观察。结果：4周时见新生骨长入人工骨内,形成钉突。8周时见新生骨与人工骨形成嵌合。12周时见人工骨内成骨。结论：α-磷酸三钙具有良好的生物相容性、骨引导性和可降解性,是骨重建的理想材料之一。     

自体骨瓣回植加颅骨锁钉固定治疗颅骨缺损临床报告

目的：探讨采用自体颅骨瓣回植外加颅骨锁钉固定进行颅骨修补术的可行性及临床经验。方法：对2003年7月～2010年1月收治的18例因急性颅脑损伤或高血压脑出血行去骨瓣减压术后患者采用自体颅骨瓣复位回植外加颅骨锁钉固定治疗颅骨缺损，对其疗效进行随访观察。结果：所有患者均一期愈合，无并发症，随访1～3年，X线及CT复查显示回植骨边缘吸收未超过颅骨锁钉范围，头颅外观及颅骨牢固度良好，部分患者有新生骨痂形成，所有患者临床症状均有不同程度改善。结论：自体骨瓣回植治疗颅骨缺损，方法简单、实用、经济，更好地恢复了颅腔解剖结构和头颅外观，外加颅骨锁钉固定可有效地防止回植骨松动、凹陷，是一种值得推广的方法。     

基于三维打印技术制作钛合金修复体修补兔颅骨缺损的研究

目的 通过三维(3D)打印技术协助新西兰兔个体化钛合金修复体进行预制行颅骨缺损修补,探讨3D技术在颅骨缺损重建中的运用价值。方法 选取健康雄性新西兰兔12只制作颅骨缺损模型成功后,螺旋64排CT薄层无间距逐层扫描获得断层数据后进行格式转换构建三维颅骨立体模型,利用3D打印机进行修复体的三维原型制造,结合模型利用钛合金修复体进行骨性缺损区域精准修补。结果 钛合金修复体与骨性缺损区域及边缘组织契合满意,术中一次固定到位,避免反复剪裁,操作阻力小,伤口均一期愈合,不良反应较少,未观察到颅内感染、头皮溃烂、钛合金外露、排出及移位等不良现象。术后颅骨外形与健侧相比更美观、功能修复满意,并邀请三位同行医师评估修复满意度,以100%为满意,取平均值,满意率为98.78%。结论 与颅骨缺损修补术相比,3D打印技术可快速、精准结合钛合金,对个体化修复颅骨缺损区尤其是复杂解剖形态“适形”可能更胜一筹,值得临床推广运用。     

胶原海绵联合地塞米松预防大鼠椎板切除后硬膜瘢痕粘连的研究

目的 评价不同硬膜外覆盖物以及局部应用类固醇激素对腰椎术后瘢痕形成的影响,并初步探讨其机制.方法 Wistar大鼠80只随机数字表法分为4组:胶原海绵十地塞米松组、胶原海绵组、明胶海绵组和对照组(无任何硬脊膜外覆盖物),每组实验动物20只,麻醉后在背部正中做切口行L1-L5全椎板切除,造成0.5 cm×1.0 cm骨性缺损,显露硬膜.胶原海绵十地塞米松组动物硬膜外放置胶原海绵并注射0.1 mL地塞米松,胶原海绵组动物硬膜外放置胶原海绵,明胶海绵组动物硬膜外放置明胶海绵,对照组直接缝合肌肉组织.手术后12周重新切开伤口,观察硬膜外瘢痕形成及与硬脊膜粘连情况.应用免疫组化和Western blot检测显示硬膜外瘢痕及周围组织中TGF-β1、VEGF表达情况,比较各组间差异.结果 肉眼及光镜观察胶原海绵十地塞米松组和胶原海绵组的硬膜外瘢痕粘连明显少于明胶海绵组和对照组,而胶原海绵十地塞米松组与胶原海绵组之间无显著差异,明胶海绵组与对照组间无显著差异;免疫组化及Western blot检测显示胶原海绵十地塞米松组和胶原海绵组硬膜外瘢痕及周围组织中TGF-β1、VEGF的表达显著少于明胶海绵组和对照组,而胶原海绵+地塞米松组与胶原海绵组之间、明胶海绵组与对照组之间均无明显差异.结论 胶原海绵可以显著降低实验大鼠腰椎术后硬膜周围瘢痕增生粘连的形成,同时加用局部注射地塞米松并没有加强这种作用;局部应用明胶海绵不能减少硬膜外瘢痕增生粘连的形成.胶原海绵应用后局部的TGF-β1和VEGF的低表达可能是减少硬膜外瘢痕增生粘连的重要机制之一.