骨桥蛋白在不同转移潜能肝癌细胞系及肝癌组织中表达意义

目的 研究不同转移潜能人肝癌细胞系及其肝癌组织中骨桥蛋白(OPN)表达情况,分析OPN表达与肝癌细胞侵袭转移潜能、肝癌术后复发转移的关系.方法 应用细胞免疫组化、半定量RT-PCR、Western Blot和ELISA检测不同转移潜能人肝癌细胞系SMMC-7721、MHCC97-L和HCCLM6 OPN表达情况.应用组织芯片、免疫组化检测200例肝癌组织中OPN表达.结果 OPN表达水平随着肝癌细胞侵袭转移潜能增加逐渐升高.肝癌组织中OPN表达与病人性别、年龄、血清AFP水平、肿瘤大小、有无包膜、细胞分化以及肝门淋巴结转移无明显相关性.而与肝癌TNM分期、门静脉癌栓和术后复发转移发生有明显相关(P<0.05).术后有复发转移病人的肝癌组织中66%表达OPN,而术后无复发转移病人的肝癌组织中仅37%表达OPN,两者比较差异具有显著性(P<0.05).结论 OPN表达与肝癌细胞细胞系侵袭转移潜能密切相关.肝癌组织中OPN表达可能是预测肝癌术后是否发生复发转移指标.     

OPN在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义

目的通过检测骨桥蛋白(osteopontin,OPN)在膀胱移行细胞癌(transitional cell carcinoma of the bladder,TCCB)组织及癌旁正常膀胱组织中的表达情况,探讨其在肿瘤组织中的表达与肿瘤的临床分期、病理分级之间的关系,为临床病理诊断及预后判断提供一定的理论依据。方法收集2010年1月至2015年9月在本院泌尿外科手术切除的TCCB组织标本65例,应用免疫组织化学S-P法对65例TCCB组织以及10例癌旁正常膀胱组织标本进行OPN的检测,结合这些患者的临床病历资料进行分析:(1)OPN在TCCB组织与癌旁正常膀胱组织中的表达差异;(2)OPN在TCCB组织中的异常表达与TCCB的临床分期、病理分级之间的关系。结果 OPN在TCCB组织中的阳性表达率为47.7%,在癌旁膀胱正常组织中不表达,其阳性表达率与TCCB的病理分级和临床分期密切相关(P0.05)。结论 OPN对TCCB的病理诊断有一定的意义,可能与TCCB的发生存在一定的关联,可作为TCCB病理诊断的标记物之一;同时,OPN可作为TCCB临床分期及病理分级的一项客观指标,可能与肿瘤的侵袭及转移密切相关,可以帮助判断患者的预后。     

肝癌复发转移的研究

目的：通过实验和临床研究为肝部根治性切除后复发转移提供预测指标和预防方法,方法：用组织块肝原位移植建立高转移人肝癌裸鼠模型,用该模型建立高转移潜能人肝癌细胞系,用分子生物学方法研究肝部侵袭性有关变化,并由此设计实验性干预治疗,开展预防复发转移的临床实验。结果：（1）建成在肺、肝和淋巴结高转移的人肝癌裸鼠模型LCI－D20,建成高转移潜能人肝癌细胞系MHCC97。（2）初步摸清与肝癌侵袭性呈正、负相关的分子水平变化。（3）发现染色体8p缺失与肝癌转移有关。（4）验血提示血栓调节蛋白与肝内播散呈负相关,细胞间粘附分子－1、纤溶酶原激活物受体的抑制剂（PAI－1）和血内皮生长因子（VEGF）水平与肝癌侵袭转移呈正相关。（5）用LCI－D20模型,证实TNP470、苏拉明、反义VEGF、突变型flk-1相基因转染、羧基胺基咪唑,Endostain、干扰素α等抗血管生成剂有抑制肝癌生长和转移作用。反义H-ras、BB94或肝素也有类似作用。（6）根治性切除后经动脉化学药物治疗（化疗）,化学药物栓塞合并干扰素或LAK细胞治疗使3年复发率有所降低。结论：肝癌侵袭性相关的分子水平变化与其他实体瘤相仿,小肝癌的生物学特性比大肝癌略好, 这些研究为复发转移的预测和预防提供了有潜在意义的线索。     

凋亡抑制蛋白FLIP在肝癌组织中的表达和意义

目的检测凋亡抑制蛋白FLIP在人肝癌不同分化组织中的表达并揭示其在肝癌发生发展中的意义。方法采用免疫组织化学技术，分析86例肝癌标本（采用经典的Edmondson四级分级法，Ⅰ级18例，Ⅱ级25例，Ⅲ级21例，Ⅳ级22例），肝癌Hepg2细胞系1株细胞爬片的10样本中FLIP蛋白的表达并进行统计学分析比较。结果凋亡抑制蛋白FLIP在86例肝癌标本中有72例阳性表达（83．72％），Ⅰ级13／18（72．22％），Ⅱ级20／25（80．00％），Ⅲ级18／21（85．71％），Ⅳ级21／22（95．45％）（P〈0．05）；在肝癌Hepg2细胞系细胞爬片10个样本中全部阳性表达（100％），（P〈0．01）。结论凋亡抑制蛋白FLIP在肝癌组织中呈阳性表达；不同分化的肝癌组织其表达阳性率不同，分化越差其阳性表达率越高；这可能为揭示肝脏恶性肿瘤的发生、发展提供新的理论依据，并为肝癌的有效治疗提供新的思路。     

骨桥蛋白在肝细胞癌中的表达与临床病理特征的关系

目的 研究骨桥蛋白在HCC中的表达与临床病理特征的关系.方法 选取48例HCC手术切除的新鲜肝癌和癌旁组织标本和10例正常肝组织,以10%福尔马林固定,常规石蜡包埋,每一个标本行连续切片,厚4 μm.应用SABC免疫组化法,以骨桥蛋白单克隆抗体对HCC组织切片进行染色.对骨桥蛋白在HCC中的表达及其临床病理特征的关系进行分析.结果 OPN在HCC组织中的阳性率为50.00%,明显高于癌旁及正常肝组织(P＜0.01).骨桥蛋白在高、中、低HCC中评分依次为0.67±1.63,2.14±1.81和2.20±1.74,低分化明显高于高分化(P＜0.05).骨桥蛋白在有转移与无转移HCC中的评分是2.64±1.84和1.25±1.74,有转移者明显高于无转移者(P＜0.01).骨桥蛋白与其他病理特征无明显关系.结论 骨桥蛋白在HCC癌组织中的表达明显升高,低中分化者和伴有转移者高于分化高和不伴转移者.提示骨桥蛋白可能促进了HCC的发展和转移.     

高转移潜能肝癌细胞株中凋亡相关蛋白的表达及意义

目的 探讨肝癌细胞转移潜能与凋亡敏感性之间的关系.方法 观察不同转移潜能的肝癌细胞株在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及依托泊苷(Etoposide)的作用下的凋亡发生率及Caspase3的活化,Western blot检测bcl-2及IAP家族蛋白在不同转移潜能肝癌细胞株中的表达.结果 TNF-α(10μg/L)作用后48 h,高转移潜能肝癌细胞株HCCLM3及转移能力最弱的肝癌细胞株SMMC-7721的凋亡率分别为(91.3±6.5)%及(58.8±2.3)%,MHCC97L细胞的凋亡率则位于两者之间(P≤0.01).Etoposide(250 μmol/L)作用后48 h,HCCLM3、MHCC97L及SMMC-772的凋亡发生率分别为(27.0±4.0)%、(34.6±3.8)%及(84.5±1.1)%(P≤0.01).3种细胞株中Caspase3的活性也有明显差异.bcl-2及IAP家族蛋白表达研究中发现XIAP的表达与肝癌细胞的转移潜能成梯度相关.结论 高转移潜能肝癌细胞株耐受多种凋亡刺激,可能与XIAP的过度表达相关.     

p16基因蛋白在肝癌中的表达及其意义

目的研究ｐ１６基因在肝细胞癌中的表达,探讨ｐ１６基因与肝细胞癌的关系。方法采用免疫组织化学方法,检测２５例肝细胞癌及癌旁组织中ｐ１６基因蛋白的表达。结果①ｐ１６蛋白在肝癌组织与癌周肝组织中的表达差异有显著意义（Ｐ＜０．０１）。②ｐ１６蛋白的表达与ＨＣＣ分化程度关系密切（Ｐ＜０．０５）,而与肿瘤大小、ＡＦＰ值无密切关系（Ｐ＞０．０５）。结论ｐ１６基因蛋白的表达与肝癌的恶性程度有非常密切的关系。ｐ１６基因在肝细胞癌变过程中起一定作用。     

Polo样激酶1在原发性肝癌组织中的表达及其意义

目的 观察Polo样激酶1(PLK1)在原发性肝癌细胞中的表达,探讨其与肝癌患者临床病理特点及预后的关系.方法 采用免疫组织化学技术观察PLK1在40例原发性肝癌组织石蜡切片中的表达.结果　癌栓、包膜侵犯、BCLC分期等因素和PLK1的阳性表达呈明显相关(P＜0.05);PLK1阳性组和阴性组的术前甲胎蛋白(AFP)差异有统计学意义(P＜0.05);秩和检验分析PLK1表达与患者肿瘤直径大小的关系发现PLK1阳性组和阴性组之间差异有统计学意义(P＜0.01).生存分析显示,PLK1的表达和患者的生存期无明显相关;Kaplan-Meier法分析原发性肝癌的预后的单因素相关因子显示与包膜侵犯、TNM分期、癌栓及转移与生存期明显相关(P＜0.05),与性别、乙肝、肝硬化、肿瘤数目BCLC分期及临床分期无明显相关;多因素Cox回归分析显示包膜侵犯、癌栓及转移3项指标反映肝癌预后(P＜0.05).结论 PLK1的表达与肝癌的发展及其临床生物学行为密切相关.

Abstract：

Objective To investigate the expression of Polo-like kinase 1 (PLK1) in patients with hepatocellular cancer (HCC), and find out its correlation with clinicopathological features and prognosis of HCC. Methods The expression of PLK1 in 40 patients with primary HCC was detected by using immunohistochemistry (IHC) and analyzed with SPSS13.0 software. Results Significant positive correlations were revealed between PLK1 expression and tumor thrombosis, envelope evasion and BCLC staging ( P ＜0. 05). Meanwhile, there were significant differences in preoperative alpha fetal protein (AFP) level and tumor diameter between PLK1 positive and negative groups ( P ＜ 0. 05). However, no significant correlation was observed between PLK1 expression and survival time of HCC. Factors, including envelope evasion, TNM staging, tumor thrombosis and metastasis, were significantly correlated with the survival time ( P ＜ 0. 05), while Cox regression analysis showed that envelope evasion, tumor thrombosis and metastasis were significantly correlated with HCC prognosis (P ＜ 0. 05). Conclusion PLK1 is closely correlated with the development and clinicobiological characteristics of HCC.     

骨桥蛋白促进人肝癌细胞株SMMC-7721肿瘤转移相关基因改变的研究

目的研究骨桥蛋白(OPN)促进肝癌转移的可能机制。方法经质粒转染、G418筛选获得稳定高表达OPN人肝癌细胞株SMMC-7721,以空质粒转染组为对照。比较两组细胞的肿瘤转移相关基因表达差异。选取其中3个肿瘤转移相关基因(MMP-2、MMP-9、uPA),用ELISA方法检测其细胞培养上清液的蛋白表达情况。结果经肿瘤转移基因芯片比较发现SMMC-7721高表达OPN后,有88个肿瘤转移相关基因表达上调,有6个肿瘤转移相关基因表达下调。高表达OPN SMMC- 7721上清液MMP-2、uPA水平明显高于对照组[(46．11±3．12)vs(19．66±3．69)μg/L,(5．36±0．94)vs(1．39±0．64)μg/L,而MMP-9表达水平差异无统计学意义[(7．97±2．42)vs(7．25±2．14)μg/L,]与基因芯片结果符合。结论在SMMC-7721肝癌细胞株中OPN高表达引起多个肿瘤转移相关基因改变。OPN可能通过上调MMP-2、uPA等基因表达促进肝癌转移。     

SIPA1基因在肝癌中的表达及其与肝癌预后的关系

目的研究SIPAI（signal-induced proliferation-associated gene 1）基因在肝细胞癌（HCC）中的表达情况及其临床意义。方法采用实时定量PCR检测30例新鲜HCC标本中SIPA1 mRNA相对含量。用免疫组织化学S-P法检测86例石蜡HCC标本和8例正常肝组织中SIPA1的表达情况,研究其与HCC临床病理学资料及预后的关系。结果与癌旁组织比较,在癌组织中SIPA1 mRNA表达下调（t=2.216,P=0.045）。86例HCC中,SIPA1在癌组织的阳性表达率和癌旁组织中阳性表达率分别为43.0%（37/86）和87.2%（75/86）（χ^2=36.96,P〈0.01）。有静脉侵袭的肝癌标本中癌旁组织SIPA1呈低表达（U=647.50,P=0.019）。SIPA1蛋白在癌旁组织中表达存在个体差异,低表达组术后复发率较高（P=0.000）,生存期较短（P=0.006）。结论SIPA1在HCC中可能发挥肿瘤抑制基因的作用,且对抑制HCC的复发转移有重要作用。     

高/低转移人肝癌细胞株MHCC97-H/L中侧群细胞分析

目的观察高／低转移人肝癌细胞株MHCC97-H／L是否存在侧群（SP）细胞并鉴定其致瘤性。方法MHCC97-H／L予Hoechst33342和羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）荧光染色；流式细胞分选MHCC97．H／L中SP细胞，分选后细胞皮下接种非肥胖性糖尿病联合免疫缺陷（NOD／SCID）小鼠，观察成瘤情况。结果Hoechst33342和CFSE染色结果显示，MHCC97-H／L中未染色细胞分别为（4．02±0．02）％／（1．02±0．01）％，流式细胞分选结果示MHCC97-H／L中sP细胞为（4．88±0．66）％／（0．88±0．36）％，比例差异有统计学意义（P〈0．05）。体内成瘤实验显示，SP细胞只需1×10。个即可在NOD／SCID小鼠皮下成瘤（5／6），而1×10^6个非SP细胞均未成瘤（0／6）。结论高／低转移人肝癌细胞株MHCC97-H／L中均存在SP细胞亚群，但前者比例显著高于后者。肝癌SP细胞具有极高的致瘤性，并可能和肝癌转移潜能相关。     

肿瘤转移抑制蛋白在肝癌中的表达及其意义

目的 探讨肿瘤转移抑制蛋白1(metastasis suppressor 1,MTSS1)在肝癌组织,肝硬化组织,正常肝组织中的表达及其意义.方法采用免疫组织化学检测MTSS1在肝癌组织,肝硬化组织,正常肝组织中的表达,并用单因素分析表达与临床病理因素的关系.用Spearman等级相关分析MTSSl表达水平与肝癌患者TNM分期的关系.对肝癌患者进行5年生存随访,采用Kaplan-Meier生存曲线分析.结果 肝癌组织MTSS1表达水平与正常肝组织比较,差异有统计学意义(U=168.000,P＜0.05);肝癌组织比肝硬化组织高,二者比较差异有统计学意义(U=106.000,P＜0.05);MTSS1表达水平与肝癌患者的TNM分期、有无血管侵袭和肿瘤包膜有关(分别U=259.000,258.500,202.000,均P＜0.05),与肝癌患者的年龄、性别、肿瘤大小、AFP水平、乙肝表面抗原无关(P＞0.05).MTSS1表达水平与临床TNM分级间呈负相关,即临床TNM分级越早期所对应的MTSS1表达水平越高(rs=-0.383,P＜0.05).MTSS1阳性表达患者5年生存率明显低于MTSS1阴性及弱阳性表达患者,差异有统计学意义(分别34.1%,52.3%,x2=6.386,P＜0.05).结论 MTSS1高表达可能在早期肝癌进展中发挥重要作用,预示预后不良.

Abstract：

Objective To explore the expression and significance of MTSS1 ( metastasis suppressor 1) in hepatocellular carcinoma.Methods MTSS1 expression was detected by immunohistochemistry in hepatocellular carcinoma, liver cirrhosis and normal liver tissues.Single-factor analysis was used to study the relationship with clinicopathological factor.Correlations between MTSS1 expression and TNM stage were analyzed with Spearman rank correlation analysis.Postoperative 5-year survival was evaluated using Kaplan-Meier survival curve analysis.Results The expression of MTSS1 in hepatocellular carcinoma was higher than normal liver tissue ( U = 168.000, P ＜ 0.05), and liver cirrhotic tissue ( U = 106.000, P ＜ 0.05); MTSS1 expression was correlated with TNM stage of hepatocellular carcinoma patients, lymph vascular invasion and tumor capsule ( separately U = 259.000, 258.500, 202.000, all P ＜ 0.05).MTSS1 expression in hepatocellular carcinoma was not correlated with patients age, gender, tumor size, AFP level, and hepatitis B surface antigen.MTSS1 expression and TNM stage of liver cancer patients was negatively correlated ( rs = - 0.383 , P ＜ 0.05 ).Postoperative 5-year survival of hepatocellular carcinoma patients with MTSS1 positive expression was significantly poorer than patients with negative and weakly positive expression (respectively 34.1% and 52.3% , x2 =6.386, P ＜ 0.05).Conclusions MTSS1 high expression may play an important role in the early hepatocellular carcinoma progression, indicating a poor prognosis.     

乙酰肝素酶mRNA在肝细胞癌中的表达及点突变研究

目的 探讨乙酰肝素酶（HPA）mRNA在肝细胞癌（HCC）中的表达及点突变的意义。方法 应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）技术检测33例HCC中HPA的表达，用T—A克隆测序法检测其扩增产物有无突变，并与HCC临床病理学指标分析。结果 有16例癌组织HPA表达阳性，阳性率（48．5％）显著高于癌周肝组织（P〈0．01）。术后转移复发组HPA阳性率显著高于无转移复发组（P〈0．01）。7例PCR产物测序发现有4例均存在2处点突变，其中一处为有义突变，突变率为57．1％。结论 HCC中HPAmRNA表达率增高，可作为HCC术后预测转移复发的一个重要指标。HPA基因点突变可能是其表达率增高的原因之一。     

绿色荧光高/低转移人肝癌细胞株MHCC97-HG/LG的建立及鉴定

目的建立稳定自发绿色荧光的高、低转移人肝癌细胞株并明确鉴定。方法脂质体转染法将绿色荧光蛋白(GFP)基因分别转染至高、低转移人肝癌细胞株MHCC97-H／L内,经 G418反复筛选并单克隆化,得到两株新细胞株MHCC97-HG／LG,对新细胞株GFP表达稳定性、生物学特性、体内外侵袭转移能力及肿瘤血管生成等进行鉴定。结果 MHCC97-HG／LG在体外培养或裸鼠体内接种36 d后均能稳定表达绿色荧光。MHCC97-HG肝、肺转移率均为100％,较 MHCC97-LG及其父系体内外侵袭转移能力显著增强(P<0．01),其原位肿瘤微血管密度较 MHCC97-LG显著增加[(121．0±15．9)／HP vs(87．0±14．2)／HP,P<0．01]。体视荧光显微镜可实时观察裸鼠体内MHCC97-HG／LG种植瘤生长、转移及血管形成情况。结论 MHCC97-HG／LG及其动物模型在肝癌转移机制、肿瘤血管生成等诸多研究领域可能有较广阔的应用前景。     

P27在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的　探讨P2 7的表达与肝细胞癌 (HCC)的发生、进展、转移和术后复发的关系及其临床意义。方法　用免疫组化S P法检测 10例正常肝组织和 86例肝细胞癌及其癌旁肝组织中P2 7蛋白的表达情况 ,用TUNEL法检测 86例肝细胞癌组织标本的细胞调亡水平。并结合各临床因素和随访资料进行分析。结果　 (1)肝细胞癌标本中P2 7蛋白阳性率为 37 2 % (32 / 86 ) ,明显低于正常肝组织 (80 % ,8/ 10 )和癌旁肝组织 (80 2 % ,6 9/ 86 )。 (2 )在肿瘤直径≤ 5cm、高分化和无门静脉侵犯或转移组的肝细胞癌中P2 7蛋白的阳性率明显高于肿瘤直径 >5cm、低分化和有门静脉侵犯或转移组。(3)P2 7蛋白阳性组的肝细胞癌组织中的凋亡指数 (AI)较高 ,而阴性组者较低 ,两者呈显著正相关。(4)Cox比例风险模型多因素分析发现P2 7蛋白是一种保护因素 ,可减低肝癌术后复发的危险度。(5 )Kaplan Meier生存分析发现 ,P2 7蛋白阴性组肝癌术后无复发生存时间明显短于P2 7蛋白阳性组。结论　P2 7蛋白能诱导肝癌细胞的凋亡 ;它的的减低与肝癌的发生、进展、转移和术后复发有密切关系。P2 7蛋白的表达水平可望成为一个预测原发性肝癌术后复发的指标。     

肺组织粗提物促进人原发性肝癌细胞移动侵袭的研究

目的　探讨宿主微环境与原发性肝癌器官特异性转移的关系。方法　利用Boyden小室侵袭实验 ,分别比较从 5只C5 7BL/6小鼠提取肺 ,肝 ,脾 ,肾组织粗提物诱导高低转移潜能的人原发性肝癌细胞株MHCC97 H、MHCC97 L移动和侵袭能力。结果　肺、肝、脾、肾组织粗提物诱导高转移细胞株MHCC97 H细胞移动侵袭的细胞数分别是 ( 18.0± 0 .9)个、( 1.7± 0 .3)个、( 1.1± 0 .3)个、( 8.6± 0 .6 )个。与肝、脾、肾组织粗提物相比 ,肺组织粗提物具有显著诱导高转移潜能的人原发性肝癌细胞株MHCC97 H移动侵袭能力 ,差异有非常显著性 (P <0 .0 0 1)。肺组织粗提物诱导人肝癌细胞株MHCC97 H、MHCC97 L移动和侵袭的细胞数分别为 ( 18.0± 0 .9)个、( 6 .0± 0 .9)个 ,差异有非常显著性 (P <0 .0 0 1)。结论　肺组织粗提物中存在某种可溶性因子促进人原发性肝癌细胞的移动侵袭能力 ,宿主微环境影响原发性肝癌器官特异性转移。     

凋亡及血管生成因子在肝细胞肝癌中的表达及意义

目的 研究部分凋亡及血管生成因子在肝细胞肝癌（肝癌）中的表达及其临床意义。方法 应用免疫组化方法检测90例肝癌标本中p53、Survivin、基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9及血管内皮生长因子（VEGF）的表达情况,并分析其与肝癌术后复发的关系。结果 p53、Survivin、MMP-2、MMP-9及VEGF的阳性率分别为33．3％、51．1％、60．0％、37．8％及76．7％。经相关性分析,VEGF与MMP-2、VEGF与MMP-9的表达呈正相关;MMP-2、MMP-9及VEGF与术后复发呈正相关（P〈0．05）。MMP-2阴性组的1、2、3年无瘤生存率分别显著高于MMP-2阳性组中的相应指标（P〈0．05）,MMP-9和VEGF中亦发现类似结果。多因素分析发现术前播散结节、镜下微转移灶、血清甲胎蛋白水平以及VEGF和MMP-9的表达水平是肝癌术后复发的独立危险因素。结论 p53和Survivin与肝癌术后复发无关;MMPs和VEGF与肝癌术后复发相关,可用于评价术后复发风险。     

上皮间质转化相关蛋白在肝细胞肝癌组织中的表达鉴定及其小分子RNA表达谱的研究

目的 检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)及其相应小分子RNA(miRNA)在原发性肝细胞肝癌(HCC)中的表达.方法 免疫组织化学检测32例HCC组织中E-cadherin和vimentin的表达,分析其与临床病理资料的关系.应用miRNA芯片筛选HCC转移相关差异表达miRNAs.选取部分差异表达miRNAs以实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法进行验证,利用在线靶基因预测软件对其靶基因进行预测.结果 E-cadherin在转移、低分化/未分化、大于3 cm组中的阳性表达率分别为25.0%(2/8)、35.7%(5/14)、52.9%(9/17),vimentin在上述三组的阳性表达率分别为87.5%(7/8)、71.4%(10/14)、52.9%(9/17).E-cadherin表达下调、vimentin表达上调与HCC分化(低分化/未分化)和转移明显相关(P＜0.05),而与其大小无关.miRNA芯片筛选获得36个HCC转移相关miRNAs(8个上调,28个下调).在E-cadherin(-)/vimentin(+)转移HCC中,miR-21、miR-221的表达(2.22±1.79、2.36±1.05)明显高于E-cadherin (+)/vimentin(-)无转移HCC(4.35±1.90、3.90±1.23,P＜0.05);miR-199a、miR-126的表达(4.42±0.61、3.62±0.54)明显低于E-cadherin(+)/vimentin(-)无转移HCC(2.43±0.85、2.54±1.10,P＜0.05).结论 E-cadherin(-)/vimentin(+)转移HCC与E-cadherin(+)/vimentin(-)无转移HCC的miRNA明显差异表达,其中部分差异表达miRNAs可能通过调控上皮间质转化相关分子的表达参与HCC的转移.

Abstract：

Objective To detect the expression of E-cadherin and vimentin, and their corresponding microRNAs (miRNAs) in primary heptocellular carcinoma (HCC). Methods The expression of E-cadherin and vimentin in 32 cases of HCC tissues was examined by using immunohistochemistry, and the relationship between the expression and clinicopathology was analyzed. miRNA array was used to investigate the differentially expressed miRNAs between E-cadherin ( - )/vimentin ( + ) metastasis HCC and E-cadherin ( + )/vimentin ( - ) no-metastasis HCC. Real-time polymerase chain reaction (PCR) was applied to verify the reliability of miRNA array results. We predicted target genes of the four miRNAs by combination anticipated algorithms. Results The positive rate of E-cadherin in the metastasis, poor/no differentiation, ＞3 cm groups was 25.0% (2/8), 35.7% (5/14), 52. 9% (9/17) respectively, and that of vimentin was 87.5% (7/8), 71.4% (10/14), 52.9% (9/17)respectively. The low expression of E-cadherin and high expression of vimentin in HCC was significantly correlated with metastasis and poor differentiation of HCC (P＜0. 05). miRNA array showed that 8 miRNAs were up-regulated and 28 miRNAs were down-regulated in E-cadherin ( - )/vimentin ( + ) metastasis HCC. The expression levels of miR-21 and miR-221 in E-cadherin ( - )/vimentin ( + ) metastasis HCC were 2. 22 ± 1.79 and 2. 36 ±1.05, significantly higher than those in E-cadherin ( + )/vimentin ( - ) no-metastasis HCC (4. 35 ±1.90, 3.90 ± 1.23,P＜0.05). The expression levels of miR-126 and miR-199a in E-cadherin (-)/vimentin ( + ) metastasis HCC were 4. 42 ± 0. 61 and 3.62 ± 0. 54, notably lower than those in E-cadherin ( +)/vimentin (-) no-metastasis HCC (2.43±0.85, 2.54±-1.10,P＜0.05). Conclusion miRNA differential expression profile of E-cadherin ( - )/vimentin ( + ) HCC was obtained, and some of miRNAs may play a role in metastasis of HCC by regulating epithelial to mesenchymal transition.