两步法PCR-CTPP技术在单核苷酸多态性研究中的应用

目的建立两步法聚合酶链反应(PCR)-CTPP技术体系,研究在单核苷酸多态性(SNP)等位基因分型中的应用价值。方法采用两步法PCR-CTPP技术检测180名正常个体p73基因第二外显子G4C14-A4T14多态性,并以PCR-RFLP和DNA测序验证基因分型结果。结果通过两步法PCR-CTPP得到的基因分型结果与PCR-RFLP和DNA测序得到的基因分型结果完全一致。结论两步法PCR-CTPP技术省时,结果稳定可靠,对于SNP等位基因分型具有较高的应用价值。     

广西壮族和汉族人群HLA-G基因的单核苷酸多态性研究

目的探讨广西壮族和汉族人群人类细胞抗原G(HLA-G)基因单核苷酸多态性分布情况。方法对广西79名汉族人和37名壮族人,采用基于基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱技术检测了HLA-G基因单核苷酸多态性的分型,比较其差异。结果 rs1704,rs1736936,rs1632947,rs1736933,rs1233333,rs1063320位点,壮族和汉族基因频率分布差异有统计学意义(P<0.05)。结论广西壮族和汉族人群在HLA-G5’和3’非编码区SNP的基因频率分布存在差异。     

HMG-CoA还原酶基因单核苷酸多态性与冠心病的关联研究

目的探讨3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A(3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A,HMG-CoA)还原酶基因的BsuR I和ScrF I等2个限制性内切酶多态位点各等位基因与冠心病(CHD)易感性和冠心病患者血脂水平变化之间的关系。方法PCR扩增203例CHD患者和100例对照的2个多态位点相应的DNA片段,经限制性内切酶消化并电泳后确定基因型,用SPSS软件进行统计学分析。结果2个多态位点的等位基因频率和基因型频率在CHD患者组和对照组间无显著差异。ScrF I多态位点AA基因型的CHD患者其TC和LDL-C水平比aa基因型的CHD患者显著增高(P=0.031;P=0.028),且TC/HDL-C比值比较也有统计学意义(P=0.039)。结论ScrF I多态位点的A等位基因与CHD患者较高的TC和LDL-C水平以及较高的TC/HDL-C比值相关联,此点在寻找CHD的危险因素和易感个体的筛查等方面可能具有一定的参考意义。     

PCSK9基因单核苷酸多态性与冠心病的关联研究

目的:研究前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/西布曲明9a型(proprotein convertase subtilisin/kexin 9,PCSK9)基因多态性与冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary artery disease,CAD)的发病关系及对血脂水平、CAD病变严重程度和预后的影响.方法:对184例正常人和212例CAD患者采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法检测PCSK9基因多态性,检测CAD患者的病变支数及随防出院后心血管事件.结果:CAD组中G等位基因频率高于对照组(P=0.001),CAD组中GG基因型的总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白-胆同醇(low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)含量比AA基因型增高(P值分别为0.023、0.000、0.036),在CAD组中G等位基因携带者与AA基因型患者相比,出院后2年心血管事件增加(P=0.004,OR=2.013,95％CI∶1.225～3.018).结论:中国汉族人群基因多态性PCSK9基因E670G多态性可能与CAD发病相关;E670G基因多态性可能与CAD预后相关;PCSK9基因E670G多态性与冠脉狭窄程度无关.     

BDNF基因多态性与散发性阿尔茨海默病患者认知功能的相关性研究

目的探讨脑源性神经营养因子（BDNF）基因功能性多态（rs6265）与散发性阿尔茨海默病（SAD）发病的相关性。方法选取58例散发性阿尔茨海默患者（SAD组）与52例健康老年人（对照组）,用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术,对BDNF基因rs6265,进行基因型检测,同时利用酶联免疫吸附技术对两组患者的血清BDNF水平进行检测。结果在〈60岁的人群中,等位基因（χ^2=6.0595,P=0.013）及基因型（χ^2=6.0826,P=0.0478）在两组人群中的分布差异有统计学意义,并且SAD的AA基因型患者的血清BDNF水平最低[（14.32±4.21）ng/ml,F=7.2545,P=0.0016]。结论 BDNF基因功能性多态rs6265与SAD发病相关,并且影响其血清BDNF的表达。     

NPHS1基因多态性与微小病变肾病的关联研究

目的研究nephrin的编码基因NPHS1的单核苷酸多态性(SNP)与微小病变性肾病(MCNS)发病及其蛋白尿等的关系。方法720例外周血DNA样本,包括经肾脏活检证实的MCNS患者226例及地域匹配的正常对照494名。选择引起错义突变的NPHS1基因349G/A多态性位点,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法进行关联分析。同时收集患者的性别、年龄、高血压病史、蛋白尿、血尿、血清白蛋白、肌酐、病程及激素治疗等临床资料,分析SNP与患者临床表现的关系。结果①MCNS患者中NPHS1基因349G/A多态性位点的A等位基因(0.786 vs 0.705)与AA基因型(0.636 vs 0.530)的频率都显著升高(P<0.05)。②对NPHS1基因349G/A多态性分析显示,具有不同基因型患者之间性别、年龄、高血压病史、蛋白尿、血尿、血清白蛋白、肌酐、病程及激素治疗等差异均无统计学意义。结论NPHS1基因349G/A多态性与MCNS的发病相关。     

CASP7基因多态性与食管癌淋巴结转移易感性的关联研究

目的研究细胞凋亡通路相关基因caspase7(CASP7)单核苷酸多态性与中国汉族人群食管癌患者淋巴结转移风险的关系。方法采用SNPscanTM高通量基因分型技术分析380例食管癌患者有淋巴结转移组(n=85)和无淋巴结转移组(n=270)CASP7rs3127075G>C和CASP7rs7907519C>A这两个多态性位点的野生基因型、杂合基因型及突变纯合基因型频率,计算各种基因型的食管癌淋巴结转移风险及其95%可信区间。结果 Logistic回归分析中,调整性别、年龄、吸烟及饮酒因素后,以CASP7rs7907519CC基因型作为参照,CASP7rs7907519AA基因型能显著增加食管癌淋巴结转移风险(调整OR=3.08,95%CI=1.03-9.19)。在隐性模型中,相对于CC+CA基因型,CASP7rs7907519AA基因型与食管癌淋巴结转移风险显著相关(调整OR=3.23,95%CI=1.11⁹.43)。对CASP7rs3127075G>C多态性位点进行相同分析,没有发现其在食管癌淋巴结转移组和无淋巴结转移组间差异有统计学意义。结论 CASP7rs7907519AA基因型能显著增加食管癌淋巴结转移风险,提示CASP7rs7907519C>A可能作为预测食管癌患者淋巴结转移情况以及判断患者预后的重要分子生物学指标。     

AKT1基因多态性与阿尔茨海默病的相关性研究

目的本研究旨在探讨胰岛素信号转导通路相关基因AKT1多态性与阿尔茨海默病的关系,以期深入了解AKT1基因多态对阿尔茨海默病易感性的影响。方法以阿尔茨海默病患者为病例组研究对象,同时选取年龄及性别匹配的健康体检者为对照组研究对象。提取基因组DNA,应用PCR方法对AKT1基因6个位点进行基因测序。结果在AKT1基因位点rs2498786上,阿尔茨海默病组与对照组之间存在统计学差异(P0.05)。结论 AKT基因位点rs2498786的突变型等位基因C可能增加阿尔茨海默病的发病风险。AKT基因可能是阿尔茨海默病的易感基因,AKT基因位点rs2498786突变可能增加阿尔茨海默病的发病率,其他所研究的AKT基因位点虽与阿尔茨海默病无明显相关性,但是不排除是其微效基因,值得我们进一步研究。     

TP53基因单核苷酸多态性与原发性肝细胞癌预后的关系

目的 探讨TP53基因单核苷酸多态性（SNP）与原发性肝细胞癌患者预后的关系。方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术（PCR-RFLP）检测213例肝细胞癌术后患者TP53基因rs1625895、rs9895829、rs28934578位点的基因型。采用Log-rank检验法绘制肝癌术后患者的Kaplan-Meier生存曲线；采用多因素Cox比例风险回归分析探究肝癌患者术后预后的影响因素。结果 在共显性模型（HR=2.190,95%CI:1.142～4.201,P=0.018）和隐性模型（HR=2.275,95%CI:1.225～4.227,P=0.009）中，携带rs1625895 AA基因型的患者预后更差；Cox比例风险回归分析显示, rs1625895多态性（HR=2.169,95%CI:1.015～4.637,P=0.046）是肝细胞癌患者术后预后的危险因素。结论 TP53基因rs1625895多态性与肝细胞癌患者术后预后相关。     

ABCA1基因单核苷酸多态性的临床意义

ATP结合的盒转运子A1(ATP Banding cassette Transporter al，ABCA1)促进细胞内游离胆固醇和磷脂的流出，在胆固醇逆转运(RCT)和HDL生成的起始步骤起重要作用；同时ABCA1与动脉粥样硬化(AS)和冠心病的发生密切相关。ABCA1基因的单核苷酸多态性(SNP)广泛存在于普通人群及冠心病人群中，不同人种、不同SNP位点对ABCA1功能影响不同，同一SNP在不同人种其作用也不同，ABCAISNP与血浆HDL—C水平、炎症细胞因子及冠心病发生密切相关。因此，ABCAISNP可能是影响血浆HDL—C水平及冠心病发生的重要因素。     

候选基因单核苷酸多态性与胸主动脉夹层的遗传易感性分析

目的 探讨6个候选基因单核苷酸多态性位点与中国汉族人群胸主动脉夹层发病的相关性.方法 选取中国汉族人群的206例高血压合并胸主动脉夹层患者及180例原发性高血压病患者,收集样本外周血白细胞提取DNA,利用基质辅助激光解吸电离质谱方法对5个与甲硫氨酸代谢相关基因(RS819146、RS8003379、RS2853523、RS326118与RS3788205)及1个与细胞周期蛋白依赖酶抑制剂基因相关的单核苷酸多态性位点(RS1075727)进行基因分型.比较胸主动脉夹层组与高血压组之间基因多态性位点的基因型、等位基因频率.结果 胸主动脉夹层者组的男性比例要高于高血压组.RS819146、RS8003379、RS2853523、RS326118与RS3788205基因多态性位点其等位基因频率与基因型频率差异均无统计学意义.RS10757278的A等位基因频率在男性胸主动脉夹层患者中的比例(59.4％)要高于男性高血压组(47.2％),差异有统计学意义(P=0.010).此外,利用Logisitic回归校正心血管疾病发病相关危险因素(包括年龄、血压、糖尿病、血脂异常及吸烟),发现该基因多态性是男性胸主动脉夹层发病的独立危险因素[比值比(OR)=0.61,95％可信区间(CI) =0.42 ～0.89)].结论 与细胞周期蛋白依赖酶抑制剂基因相关的单核苷酸多态性位点A等位基因是中国男性汉族人群胸主动脉夹层发病的重要遗传易感因素.     

Graves病甲亢和CD40基因单核苷酸多态性的相关性

目的：探讨CD40基因5′非翻译区域C/T1态性和Graves病（GD）甲亢发病的相关性。方法：采用序列特异性聚合酶链式反应-限制性内切酶酶切长度多态性（PCR-RFLP）方法分析106例GD甲亢患者和106例正常对照者CD40基因5′非翻译区域C／T多态性。结果：GD甲亢患者CC基因型明显高于正常对照组（49．1％vs32．1％），C等位基因频率明显高于正常对照组（63．7％vs50．5％）。结论：CD40基因5′非翻译区域的C等位基因和GD甲亢相关。     

单核苷酸多态性与肿瘤易感性

人类基因组计划（human genome progect,HGP）研究成果表明,不同个体基因99．9％都是相同的,但在序列上有极小（0．1％）的遗传差异即遗传多态性（genetic polymorphism）,其中最主要的是单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）。SNP是指染色体基因组水平上单个核苷酸变异引起的DNA序列变化,呈现的多样性即多态性。     

中国汉族人孕烷X受体基因NR1I2的单核苷酸多态性

目的了解中国健康汉族人孕烷X受体基因NR1I2的单核苷酸多态性分布以明确种族差异。方法用PCR扩增后直接测序的方法,检测NR1I2基因2和4外显子及1,2,4和5内含子的单核苷酸突变。结果中国健康汉族人NR1I2基因2和4外显子均未发现已报道的单核苷酸突变,外显子1和内含子1,2,4和5检测到单核苷酸突变9种,分别为-24446C>A,-24381A>C,-24113G>A,252A>G,275A>G,4760G>A,7635G>A,7637C>T和7675C>T,等位基因频率分别为2.4%,20.8%,20.8%,33.3%,31.0%,68.5%,31.7%,1.6%和10.6%,其中7637C>T未见在任何文献和单核苷酸多态性数据库中报道,为新发现突变。结论中国健康汉族人NR1I2内含子1,2,4和5位置检测到9种单核苷酸突变,且突变频率较高,与白人和美国黑人比较,单核苷酸突变的发生位点和发生频率存在显著性差异。     

转化生长因子-β_1基因单核苷酸多态性与鼻咽癌易感性及复发的关系

目的探讨转化生长因子(TGF)-β1-869T/C,TGF-β_1-509C/T基因单核苷酸多态性(SNPs)与鼻咽癌易感性与复发的关系。方法采用病例对照研究,采集来自辽宁地区不同医院的鼻咽癌患者193例,同期就诊的非肿瘤患者231例静脉血,酚氯仿法提取基因,Taqman real-time聚合酶链反应(PCR)方法及SDS软件对TGF-β_1基因型进行分型。SPSS 13.0软件包进行数据分析,以χ~2检验比较SNPs基因型在病例与对照之间分布的差异,以单因素和多因素Logistic回归计算比值比(OR)及95%可信区间(CI)。结果单因素分析显示,TGF-β_1-869位点的各基因型与鼻咽癌易感性不相关,同样TGF-β_1-509位点的各基因型与鼻咽癌易感性也不相关,经校正年龄性别吸烟状态后显示仍与鼻咽癌易感性仍不相关。经单因素及多因素进一步分析后显示:TGF-β_1-869、TGF-β_1-509位点各基因型与鼻咽癌复发也不相关,差异无统计学意义。结论 TGF-β_1-869和TGF-β_1-509位点SNPs与鼻咽癌易感性及复发均不相关。     

Graves病甲亢肝损害与CD40基因C/T单核苷酸多态性相关性的研究

目的：探讨CD40基因5’非翻译区域-1位点C／T多态性和中国天津地区汉族人Graves病（GD）甲亢肝损害发病的相关性。方法：采用序列特异性聚合酶链式反应一限制性内切酶酶切长度多态性（PCR-RFLP）方法分析60例GD甲亢患者，60例GD甲亢肝损害患者CD40基因5’非翻译区域-1位点C／T多态性，并和106例正常对照组比较。结果：天津地区汉族人CD40基因5’非翻译区域-1位点基因型、等位基因型在正常对照组、GD甲亢肝功正常患者、GD甲亢肝功异常患者差异有统计学意义（P〈0．05），但在GD甲亢肝功正常患者与GD甲亢肝功异常患者差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：CD40基因可能是GD甲亢的一种易感基因，但并非GD甲亢肝损害的易感基因。     

系统性红斑狼疮易感基因单核苷酸多态性研究进展

系统性红斑狼疮(SLE)是临床上常见的自身免疫性疾病，其发病机制还不清楚，在其发病机理上，遗传和环境因素都起关键作用，但一般认为环境因素仅在一定的遗传背景下触发疾病。随着人类基因组计划的迅速发展及新的分析技术的应用，SLE遗传学研究有了很大的进展。近年来大量研究显示SLE具有很强的遗传倾向，其同胞患病率／一般人患病率(λs)达20，同卵双生子发病一致率为24％～65％，而异卵双生子发病一致率仅2％～9％。     

VDR基因启动子单核苷酸多态性与前列腺癌的关系

目的了解维生素D受体（vitamin D receptor,VDR）基因启动子上存在的单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）与前列腺癌的关系,进而探讨导致前列腺发病的遗传因素。方法提取60例前列腺癌及50例良性前列腺增生患者外周血标本中基因组DNA,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（polymerase chain reaction—restriction fragment length polyinorphisin,PCR—RFLP）检测并分析了VDR基因起始密码SNP在两组中的分布。常规病理方法分析前列腺癌的Gleason评分。对比分析VDR基因上存在的SNP与前列腺癌发生发展的相关性。结果前列腺癌组和前列腺增生组Fok Ⅰ等位基因多态性分布筹异有统计学意义（P〈0．05）,高危组和低危组前列腺癌中VDR基因SNP分布的的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论VDR基因起始密码SNP不同类型可能与前列腺癌的发生有相关性。不同SNP类型可能成为前列腺癌发展的危险因素。     

组织激肽释放酶基因调控序列多态性与高血压关系的初步分析

目的　初步探讨组织激肽释放酶基因调控序列启动子多态性与中国人原发性高血压 (EH)的相关性。方法　应用PCR技术结合等位基因特异寡核苷酸片段分析 (ASO)方法 ,对 40例EH患者和正常人的组织激肽释放酶基因用A、B两种探针检测 ,比较两组间的等位基因分布频率差异 ,初步分析该SNP位点与高血压的关系。结果　组织激肽释放酶基因A、B型在对照组中频率为 65 %、10 % ,在高血压组中频率为 60 %、10 % ,两组比较有差异 ,但无统计学意义。结论　在中国汉族人群中 ,该基因位点确实有多态性 ;A、B两型均有分布 ,以A型最广