鱼藤酮对PC12细胞毒性作用的机制

目的：探讨鱼藤酮诱导PC12细胞毒性作用的可能机制，为神经防护药物的研发提供理论基础。方法：将培养的PC12细胞分为正常对照组和0.5μmol•L^-1鱼藤酮实验组，持续作用72 h，MTT法检测细胞存活率；Hoechst 33342检测细胞凋亡；提取实验组和对照组细胞的总蛋白，应用荧光差异凝胶电泳系统（DIGE）获得差异蛋白点的表达信息；通过MALDI-TOF 质谱鉴定差异蛋白点。结果：MTT法显示鱼藤酮实验组较正常对照组细胞存活率明显降低（P<0.01）；Hoechst 33342荧光染色显示鱼藤酮实验组可见较多凋亡细胞，表现为核边集、核固缩、核碎裂等特征性凋亡改变，其凋亡率明显高于对照组（P<0.01）。DIGE分析软件提示实验组点298的表达量高于对照组（P=0.004），点447的表达量低于对照组（P=0.009 5）。通过质谱分析和数据库检索，鉴定为纽蛋白和线粒体顺乌头酸酶。结论：纽蛋白和线粒体顺乌头酸酶参与细胞损伤，可能成为神经防护药物作用的靶点。     

甲基苯丙胺对PC12细胞的毒性损伤作用

目的探讨甲基苯丙胺(METH)对PC12细胞的毒性损伤作用,为进一步研究METH神经毒性作用机制提供基础。方法采用已分化PC12细胞为体外神经元模型,分别用浓度0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mmol/L的METH处理PC12细胞24 h,倒置显微镜下观察细胞形态改变;MTT法检测细胞存活率;流式细胞术分析细胞凋亡率;硝酸还原酶法检测细胞培养液NO含量。结果以0 mmol/L为对照组,经0.5~2.5 mmol/L METH处理的PC12细胞,24h倒置显微镜下可见PC12细胞胞体变圆,神经突起变短、断裂至消失,神经网络逐渐消失,细胞边缘不清,可呈毛刺样;MTT法检测PC12细胞活力随METH浓度的升高而逐渐下降,与对照组相比均有显著性差异(P<0.01);细胞凋亡率在0.5~1.5 mmol/L浓度范围内逐渐升高,至2.0 mmol/L时凋亡率较前下降,但与对照组相比均升高,且与对照组相比有显著性差异(P=0.000);细胞培养液NO含量随METH浓度增加逐渐升高。结论一定浓度的METH能导致PC12细胞毒性损伤,使细胞活力下降,细胞凋亡率增加,细胞NO生成增加,细胞凋亡及NO过量参与了METH对PC12细胞的毒性损伤。     

荔枝核皂苷对正常PC12细胞的毒性及其抑制Aβ细胞毒性的有效浓度测定

目的：测定荔枝核皂苷（LSS）对正常PC12细胞最大安全药物浓度,评价其体外细胞毒性,并测定其抑制Aβ25-35诱导PC12损伤的有效浓度。方法：CCK8法测定PC12细胞活性;6级毒性分类法评价荔枝核皂苷的细胞毒性;LOGIT法计算Aβ25-35抑制PC12细胞活性的半抑制浓度（IC50）。结果：15mg.L^-1及其以上浓度荔枝核皂苷组OD值与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,PC12细胞相对增殖百分率（RGR）〈75%,细胞毒性在2级以上;7.5mg.L^-1及其以下浓度荔枝核皂苷组OD值与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）,RGR〉75%,细胞毒性在0～1级之间。Aβ25-35抑制PC12细胞活性的IC50为23.74μmol.L^-1;0.94～7.50mg.L^-1荔枝核皂苷预处理组OD值较Aβ25-35组明显升高（P〈0.05）,OD值依次为7.50mg.L^-1〉3.75 mg.L^-1〉1.88 mg.L^-1〉0.94 mg.L^-1 LSS预处理组。结论：小于或等于7.5mg.L^-1荔枝核皂苷对体外培养的PC12细胞无毒性,即LSS的最大安全浓度为7.5mg.L^-1;荔枝核皂苷抑制Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤的有效浓度为0.94～7.50mg.L^-1。在此终浓度范围内,研究荔枝核皂苷抑制Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的作用及机制安全可靠。     

葡萄籽原花青素单组分对PC12细胞的毒性研究

目的:探讨葡萄籽原花青素单体在体外对PC12细胞的毒性。方法:分别用MTT和Western blot法检测药物对PC12细胞增殖和凋亡相关Bcl-2蛋白家族中的Bcl-2、Bax表达量的影响。结果:不同浓度的葡萄籽原花青素单聚体儿茶素(C),表儿茶素(EC)和二聚体原花青素B1(B1),原花青素B2(B2)分别孵育PC12细胞24 h,48 h和72 h,发现高浓度的C和EC(100μg/mL)长时间作用可促进细胞增殖,而B1和B2(100μg/mL)长时间作用有抑制细胞增殖的趋势。100μg/mL的B2可显著抑制PC12细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论:单聚体C和EC对PC12细胞没有毒性;而高浓度的二聚体B1和B2随着作用时间延长,会抑制细胞增殖,这与抗凋亡蛋白Bcl-2的表达降低有关。     

葡萄籽提取物对PC12神经元毒性的研究

目的:考察葡萄籽提取物(grape seed extract,GSE)在体外对高分化的PC12神经元增殖的影响及机制。方法:采用MTT法考察GSE对PC12神经元增殖的影响,Western blot法检测GSE对PC12神经元中与凋亡相关的蛋白Bcl-2、Bax表达量的影响。结果:实验结果表明,低浓度的GSE(2.5μg/m L,5μg/m L)长时间作用72 h可促进PC12细胞增殖,10μg/m L GSE对PC12细胞增殖无影响,20μg/m L GSE作用48 h出现细胞毒性,30μg/m L,50μg/m L和100μg/m L GSE作用24 h即可抑制细胞增殖。GSE显著抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,对促凋亡蛋白Bax表达无影响。结论:20μg/m L以上浓度的GSE作用于PC12神经元会显著抑制其增殖,作用机制为减少了细胞抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。     

原儿茶酸对β淀粉样蛋白_(1-42)诱导PC12细胞毒性的保护作用及机制

【目的】探讨原儿茶酸(PCA)在阿尔茨海默病(AD)细胞模型中的保护作用及机制。【方法】采用免疫荧光法鉴定β淀粉样蛋白(Aβ_(1-42))纤维聚体,将Aβ_(1-42)作用于PC12细胞,并于不同时间点(0、3、6、9、12、24 h)观察细胞形态,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率以确定造模条件,并用MTT法检测原儿茶酸对PC12细胞的毒性条件。采用预保护的给药方式,检测不同浓度的原儿茶酸对PC12细胞的干预作用。采用Western-blot法检测自噬相关标记蛋白Beclin1的表达水平,以探究原儿茶酸的保护作用机制。【结果】显微镜下观察到12、24 h时,Aβ_(1-42)白色团块聚集基本稳定,无明显差异,MTT检测细胞损伤率均达40%,由此确定12 h和24 h均可做为AD的造模条件。原儿茶酸在200~800μmol/L浓度作用24 h的条件下,细胞活力显著上升(P0.01)。Western-blot结果显示:原儿茶酸可显著增加Beclin1的表达水平。【结论】原儿茶酸有助于改善Aβ_(1-42)诱导的PC12细胞毒性,其机制可能与增加自噬水平有关。     

MPP+对PC12细胞体外生长增殖的毒性作用

目的: 研究不同剂量1-甲基-4苯基-吡啶离子(MPP )对大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞生长增殖的抑制作用,探讨MPP 多巴胺能神经毒性机制. 方法: PC12细胞体外培养,以100～700 μmol/L MPP 进行染毒. MTT法测算MPP 作用1～7 d对PC12细胞的抑制情况并绘制生长曲线;取4 d为作用时间,细胞计数法观察MPP 对细胞的抑制率;透射电镜观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期改变情况. 结果: 细胞生长曲线的改变证实MPP 对PC12细胞的生长增殖有显著抑制作用,而且呈时间-剂量-效应关系. 细胞生长抑制试验结果显示100～700 μmol/L MPP 对细胞的抑制率为0.22～0.66 (P<0.01);透射电镜观察发现MPP 可诱导PC12细胞发生凋亡的形态学改变,同时伴有线粒体肿胀;流式细胞仪检测显示100, 300 μmol/L MPP 作用后,细胞总凋亡率比对照组分别增加0.51和0.62 (P<0.01). 结论: MPP 对PC12细胞的生长增殖有明显的抑制作用,而诱导细胞凋亡可能是MPP 产生多巴胺能神经毒性的重要机制之一.     

多巴胺诱导PC12细胞凋亡的机制

目的　探讨多巴胺 (DA)诱导大鼠嗜铬细胞瘤细胞株 (PC12 )细胞凋亡的机制。　方法　采用 PC12细胞为模型 ,以 0 .45 mmol/ L的 DA来诱导细胞凋亡的发生 ,用流式细胞仪检测 PC12细胞的亚二倍体峰 ,按 Griess法测定 NO代谢产物 NO2 -的浓度 ,用 Ac- DEVD- AMC为酶作用底物 ,在荧光分光光度计下检测 CPP32活力。　结果　 DA处理组的凋亡率为 5 4.49%± 1.6 0 % ,与阴性对照组 (1.6 1%± 0 .18% )比较差异有显著性 (P<0 .0 1) ;NO2 -浓度的升高和 CPP32活化程度与阴性对照组比较差异亦有显著性 (P<0 .0 1)。　结论　 CPP32的激活是 DA诱导 PC12细胞凋亡的重要通路 ,而合成增多的 NO可能是 DA激活 CPP32的信号传递分子。     

PC12细胞诱导分化成神经元样细胞的培养机制研究

目的：研究适宜PC12细胞的培养方法及其在神经生长因子（NGF）作用下的分化效果.方法：PC12细胞培养于F12K培养基中,传代时直接将细胞吹打下来,并用注射器吹散成单细胞悬液;PC12细胞接种于6孔培养板中,并用含NGF 50μg/L的无血清培养基进行诱导分化5d,倒置显微镜下观察细胞的形态特征,Image J软件进行图像分析.结果：PC12细胞生长状态良好,且经NGF作用5d后,细胞体积显著增大,突起增多增长,细胞分化率达（72.60±3.61）％.结论：本实验中对PC12细胞培养的方法简单易行,适用于PC12细胞的培养;NGF能够诱导PC12细胞分化成神经元样细胞,可为神经退行性疾病的研究奠定基础.     

PC12细胞缺氧培养后细胞凋亡及其机制的研究

目的　探讨PC12细胞缺氧后细胞凋亡及其发生机制。方法　采用末端标记法 ,结合流式细胞术观察PC12细胞缺氧培养不同时间点细胞凋亡现象 ,以及DNA损伤相关基因表达的改变。结果　在缺氧 0 .5h开始出现凋亡细胞 ,p5 3、p2 1wafl/cipl蛋白表达也开始增高。至缺氧 1h凋亡细胞达高峰 ,p5 3、p2 1蛋白表达亦最高 (P <0 .0 1) ,缺氧 6～ 12h ,则以坏死为主 ,以上基因的表达均减弱。结论　缺氧后PC12细胞凋亡部分是由于DNA损伤严重、损伤不能及时得到修复所致。     

Phloretin对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的影响及其机制

目的:探讨Aβ25-35(β-amyloid)诱导PC12细胞凋亡过程中氯通道阻断剂Phloretin的保护作用及其机制.方法:采用MTT比色,LDH(lactate dehydrogenase)活力检测、Hoechst33258染色和琼脂糖凝胶电泳比较正常对照组、Aβ25-35损伤组和Aβ25-35 PMoretin组的PC12细胞存活与凋亡;Western Blot印迹检测3组的JNK,P-JNK蛋白表达.结果:10 mmol/L Phloretin可明显抑制Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡,提高细胞存活率,减少LDH释放,减少PC12细胞核固缩、碎裂,降低P-JNK蛋白的表达(P<0.01).结论:小剂量氯通道阻断剂Phloretin对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡具有保护性抑制作用,其机制与下调JNK的磷酸化激活有关.     

齐墩果酸对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的影响及机制研究

目的 研究琐琐葡萄提取物齐墩果酸(oleanolic acid,OA)对β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导PC12细胞凋亡的保护作用及其机制.方法 采用20μmol/L Aβ25-35诱导PC12细胞损伤构建阿尔茨海默病(AD)细胞模型,20、40和80μg/mL OA干预,CCK-8法检测各组细胞的存活率,乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞膜通透性及完整性,Annexin V-FITC流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测细胞凋亡相关基因bcl-2和bax表达.结果 与模型组比较,20、40和80μg/mL OA预处理可有效提高PC12细胞存活率,减少乳酸脱氢酶渗漏,降低细胞凋亡率,下调bax mRNA表达(P＜0.05),40、80μg/mL OA预处理上调bcl-2 mRNA表达(P＜0.05).结论 OA对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡损伤具有明显的保护作用,其机制可能与OA通过调节细胞凋亡相关基因表达,从而抑制凋亡有关.     

谷氨酸毒性对培养PC12细胞钙内流与游离钙的影响

Ｃａ2 + 作为细胞内一种重要的第二信使 ,参与神经细胞的一系列活动 ,对神经细胞的代谢和功能产生广泛的影响 ,细胞内钙超载被称为细胞损伤的“最后共同通路”。谷氨酸是中枢神经系统内含量最多的兴奋性氨基酸 ,有神经兴奋毒性 ,它作用于ＮＭＤＡ受体 ,引起钙内流 ,在神经细胞的继发性损害中谷氨酸释放占重要地位[1 ,2 ] 。ＰＣ12细胞是一种从鼠嗜铬细胞瘤分离的克隆细胞 ,因其在神经生长因子 (Ｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ ,ＮＧＦ)存在下 ,细胞形态、结构和功能皆类似于交感神经细胞 ,因而成为近年来神经科学工作者研究神经细胞递…     

丁苯酞对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡的作用及其机制

目的 探讨丁苯酞(NBP)对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其机制.方法 不同浓度的NBP(0.1、1.0、10、100 μmol/L)作用到经Aβ诱导或未经诱导的PC12细胞上,然后分别采用细胞存活率检测(MTT)及PI单染、透射电镜方法检测细胞凋亡,采用western印迹法检测Bcl-2和Cyt-C蛋白的表达,进而观察NBP对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡的保护作用.结果 MTT显示不同浓度(0.1、1.0、10、100 μmol/L)NBP组细胞存活率分别为76.5%±1.1%、84.2%±1.3%、89.5%±1.3%、81.9%±1.9%,明显高于模型组(71.7%±1.4%),其中10 μmol/LNBP组最明显,差异有统计学意义(P＜0.05);流式细胞学结果显示10 μmol/L NBP组细胞凋亡率明显低于模型组(P＜0.05);电镜下模型组细胞凋亡特征明显,10 μtmol/L NBP组细胞形态接近正常;Western印迹显示:10 μmol/L NBP组Bcl-2蛋白表达增加,而模型组Bcl-2表达明显减少(P＜0.05);模型组胞质Cyt-C表达最强,而10μmol/L NBP组有较弱的Cyt-C表达(P＜0.05).结论 NBP对Aβ诱导的PC12细胞凋亡有保护作用,其机制可能和NBP增加Bcl-2蛋白水平,抑制Cyt-C从线粒体的释放有关.     

利多卡因对帕金森模型PC12细胞的保护作用及其机制

探讨利多卡因在1-甲基-4苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）诱导的帕金森病（PD）模型PC12细胞的保护作用,并阐明其可能的分子机制。     

Aβ诱导PC—12细胞凋亡建立阿尔茨海默病细胞模型

目的 用β－淀粉样蛋白（Aβ25－35）诱导PC－12细胞凋亡以建立阿尔茨海默病细胞模型。方法 体外培养大鼠嗜铬细胞瘤PC－12细胞，以不同浓度Aβ25－35诱导并于不同时间收获细胞，应用MTT法观察细胞活力，Fura-2/AM荧光分析法检测细胞内游离Ca^2 浓度，Hoechst 33258及碘化丙啶复染分析细胞凋亡。结果 Aβ25－35作用于PC－12细胞后，细胞活力逐渐下降，并呈时间和剂量依赖性；同时细胞内Ca^2 浓度显著上升；不同浓度Aβ25-35作用后，PC－12细胞于不同时间出现凋 的典型形态学特征，该时间比Ca^2 浓度上升约晚6－12h。结论 Aβ25－35诱导后PC－12细胞活力下降、细胞内Ca^2 浓度上升及细胞凋亡，可作为较理想的阿尔茨海默病细胞模型。     

二甲基亚砜对PC12细胞形态学影响

目的观察二甲基亚砜(DMSO)对PC12细胞形态学的影响。方法不同浓度的DMSO处理PC12细胞,应用倒置相差显微镜观察细胞形态的改变。结果0.5%,1.0%DMSO处理的PC12细胞形态没有明显的改变。经2.0%,3.0%和4.0%DMSO处理后,随时间延长,PC12细胞出现凋亡改变,细胞体积缩小变圆,凋亡小体形成。结论低于1.0%的DMSO对PC12细胞生长没有明显的毒性作用,形态结构没有明显改变。     

齐留通减轻小鼠小胶质细胞介导的鱼藤酮对PC12细胞的毒性作用

目的：观察5 脂氧酶选择性抑制剂齐留通对小胶质细胞介导的鱼藤酮神经毒性的影响。方法：以鱼藤酮预处理的小鼠小胶质BV2细胞条件培养液培养PC12细胞,通过MTT法和乳酸脱氢酶（LDH）释放分析PC12细胞损伤和活性变化,Hoechst/碘化丙啶荧光双染检测PC12细胞死亡,并评估齐留通对小胶质细胞介导细胞毒性的作用。结果：1、3、10 nmol/L鱼藤酮对PC12细胞无直接毒性,但是其预处理的BV2细胞条件培养液间接诱导PC12细胞形态改变、活性下降,LDH释放和细胞死亡明显增加;001、1 μmol/L齐留通能有效减轻小胶质细胞介导的鱼藤酮细胞毒性作用。结论：5 脂氧酶抑制剂齐留通能减轻小胶质细胞介导的鱼藤酮神经毒性,提示5 脂氧酶通路在小胶质细胞炎症诱导的神经细胞死亡中有重要作用。     

多奈哌齐对PC12细胞凋亡抑制作用机制的研究

目的:研究多奈哌齐对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用。方法:以Aβ诱导PC12细胞损伤作为细胞模型,采用TUNEL、免疫细胞化学等方法,观察不同浓度的Aβ对PC12细胞的损伤作用和多奈哌齐干预对PC12细胞凋亡的保护作用,以及Bc l-2、Caspase-3在Aβ损伤组、多奈哌齐干预组的表达及意义。结果:锥虫蓝拒染法染色结果显示,Aβ作用后,PC12细胞较正常对照组增殖缓慢。提前12 h给予多奈哌齐,TUNEL结果示PC12细胞凋亡指数为(17.29±0.83)%,较单纯Aβ损伤组(32.28±1.64)%显著降低(P<0.01);Bc l-2表达阳性率为(60.00±2.30)%,较损伤组(39.94±1.83)%显著增高(P<0.01),Caspase-3表达阳性率为(26.46±2.87)%,较损伤组(49.23±1.73)%显著降低(P<0.01)。滞后1 h给予多奈哌齐组与Aβ损伤组相比无显著差异(P>0.05)。结论:多奈哌齐预干预对Aβ诱导的PC12细胞具有保护作用,其机制可能通过调节凋亡相关蛋白Caspase-3、Bc l-2来实现。