四君子汤总多糖对大鼠小肠上皮株IEC-6细胞增殖的影响

目的:研究四君子汤总多糖对大鼠小肠上皮株IEC-6细胞增殖的影响。方法:以IEC-6细胞为研究对象,采 用MTT比色法,观察四君子汤总多糖时正常及消炎痛作用下该细胞增殖的影响。结果:四君子汤总多糖不同剂量于不同 的培养时间对IEC-6细胞的生长均有促进作用,当采用消炎痛造成IEC-6细胞生长抑制模型时,四君子汤总多糖可使其 恢复至正常水平。结论:四君子汤总多糖具有促进IEC-6细胞增殖的作用,它可能通过对小肠上皮细胞增殖的影响而发 挥对肠道黏膜吸收和免疫功能的调整作用。     

四君子汤多糖对IEC-6细胞迁移、钾通道蛋白及膜电位的影响

目的:观察四君子汤多糖对小肠上皮IEC-6细胞迁移及多胺调控信号通路钾通道蛋白和膜电位的影响,探讨四君子汤修复胃肠黏膜损伤的作用机制。方法:划痕法建立IEC-6细胞迁移模型,观察正常培养及α-二氧甲基乌氨酸(DFMO,多胺合成抑制剂)或4-氨基吡啶(4-AP,钾通道抑制剂)负荷下四君子汤多糖对IEC-6细胞迁移的影响;分别以荧光定量PCR法和Western blot法检测四君子汤多糖对IEC-6细胞钾通道蛋白kv1.1 mRNA和蛋白表达的影响;流式细胞仪检测四君子汤多糖对IEC-6细胞膜电位的影响。结果:与空白对照组比较,四君子汤多糖(40、80、160 mg/L)可促进IEC-6细胞迁移,提高IEC-6细胞kv1.1 mRNA和蛋白表达水平及细胞膜电位超极化水平(P0.05或P0.01);与DFMO模型组比较,四君子汤多糖(40、80、160 mg/L)可逆转DFMO所致细胞迁移数减少、kv1.1 mRNA和蛋白表达的降低以及细胞膜电位去极化(P0.05或P0.01);与4-AP模型组比较,四君子汤多糖(20、40、80 mg/L)可逆转4-AP所致细胞迁移的抑制、kv1.1 mRNA和蛋白表达的降低(P0.05或P0.01)。结论:四君子汤多糖可促进IEC-6细胞迁移,作用机制与影响多胺调控信号通路钾通道蛋白表达和细胞膜电位有关。     

四君子汤总多糖对大鼠小肠上皮细胞株IEC-6迁移的影响

目的:观察四君子汤总多糖(PPS)在黏膜损伤后对小肠上皮细胞修复的影响。方法:采用大鼠小肠上皮细胞株IEC-6制成细胞迁移模型,观察四君子汤PPS在造模后0 h8、h及24 h对细胞迁移面积的影响。结果:四君子汤在细胞迁移的8 h及24 h,对IEC-6的细胞迁移均有促进作用。而其最佳剂量集中于100~400μg/ml范围内。结论:四君子汤可促进胃肠道黏膜损伤的修复,其机制与促进细胞迁移有关。     

四君子汤总多糖对大鼠小肠上皮株IEC-6基因表达谱影响的研究

目的:本研究主要观察四君子汤总多糖(TPSJ)对大鼠小肠上皮细胞株基因表达谱的影响,以进一步了解四君子汤总多糖的作用机制。方法:采用基因芯片技术观察给予四君子汤总多糖前后大鼠小肠上皮细胞株IEC-6基因表达谱的变化情况。结果:在给予TPSJ后,大鼠IEC-6细胞株共有123条基因表达出现明显差异,基中55条基因表达上调,68条基因表达下调,分别涉及包括细胞发育、细胞生长增殖、粘附以及信号转导和免疫应答等方面的基因。结论:TPSJ可通过多种途径影响小肠上皮细胞功能,并有可能通过对小肠上皮细胞的调节作用而实现对全身的免疫调节。     

四君子汤含药血清上调c-Myc表达促进小肠上皮细胞迁移和增殖

目的:考察四君子汤含药血清(SJZ)对小肠上皮(IEC-6)细胞损伤后迁移、增殖及c-核蛋白类基因(c-Myc)mRNA和蛋白表达的影响,以探讨四君子汤促进胃肠黏膜损伤修复的作用机制。方法:采用大鼠制备四君子汤含药血清,Tips划痕法建立IEC-6细胞迁移模型,观察四君子汤药物血清对细胞迁移的影响;实时细胞分析仪(RTCA)检测四君子汤含药血清对IEC-6细胞增殖的影响;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法检测c-Myc mRNA表达;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测c-Myc蛋白表达。结果:中体积浓度(10%)和高体积浓度(20%)的四君子汤含药血清可促进IEC-6细胞迁移(P0.01);细胞损伤后12 h,中体积浓度(10%)和高体积浓度(20%)的四君子汤含药血清可促进IEC-6细胞增殖(P0.01);细胞损伤后24 h和36 h,低(5%),中(10%),高(20%)体积浓度的四君子汤含药血清均可促进IEC-6细胞增殖(P0.05,P0.01);进一步研究发现,中体积浓度(10%)和高体积浓度(20%)的四君子汤含药血清可提高与胃肠黏膜损伤修复密切相关的c-Myc mRNA和蛋白表达(P0.01)。结论:四君子汤修复胃肠黏膜屏障损伤,促进溃疡愈合的作用可能与其提高c-Myc mRNA和蛋白表达,促进黏膜上皮细胞的迁移和增殖有关。     

灵芝多糖对IEC-6细胞促增殖、迁移与分化作用

 目的通过灵芝多糖作用于体外培养的大鼠小肠隐窝细胞株IEC-6细胞,观察灵芝多糖对IEC-6细胞增殖、迁移与分化的影响。方法不同浓度的灵芝多糖作用于正常IEC-6细胞44h后,用噻唑蓝(MTT)法测细胞的增殖。灵芝多糖预作用IEC-6细胞46h后,用500μmol·L^{-12O₂刺激IEC-6细胞40min,以MTT法测细胞的增殖变化。采用IEC-6单层肠上皮细胞损伤重建模型,检测灵芝多糖对IEC-6细胞迁移的影响,并用ELISA方法检测培养细胞上清中TGF-β的含量以探讨迁移途径。对细胞进行HE染色来观察IEC-6细胞的分化情况。结果灵芝多糖对正常及受H₂O₂损伤后的IEC-6细胞均有促增殖作用,并呈量效关系;10mg·L-1灵芝多糖可促进受损IEC-6细胞的迁移,但对细胞上清中TGFβ含量无影响。在10mg·L-1灵芝多糖作用下,IEC-6细胞分化程度增高。结论灵芝多糖可以促进IEC-6细胞增殖、迁移与分化。其促迁移作用是非依赖TGFβ途径的。}     

白术多糖对IEC-6细胞迁移及细胞生长的影响

目的:观察3种白术多糖提取物对小肠上皮细胞(IEC-6)迁移及生长的影响,为研究调节细胞迁移药效物质基础提供参考。方法:从白术药材提取得到白术水提醇沉部位("白术多糖1"),去蛋白并经DEAE-纤维素柱层析得到"白术多糖2",再以Sephadex LH-20凝胶柱层析得到"白术多糖6"。在细胞迁移模型观察此3种样品调节IEC-6细胞迁移的活性;在实时细胞分析仪观察3种样品对IEC-6细胞生长的影响。结果:3种白术多糖样品(50μg/ml或100μg/ml或200μg/ml)能逆转DFMO(二氟甲基鸟氨酸)所致细胞迁移抑制,药效以"白术多糖6"最优。3种白术多糖样品需要更高剂量(200μg/ml或300μg/ml或400μg/ml)才有促进IEC-6细胞生长的作用。结论:调节细胞迁移是白术多糖的主要药效作用,其促进细胞生长的作用则相对较弱,实验结果为后续选择"白术多糖6"研究其结构表征提供了参考。     

四君子汤多糖分离纯化对IEC-6细胞迁移药效活性的影响

目的：本研究对四君子汤多糖进行提取和分离纯化,观察不同多糖样品对小肠上皮细胞（IEC?6）迁移的影响,从而进行多糖纯化过程的药效活性追踪,为探讨四君子汤多糖药效物质基础提供参考。方法：①四君子汤水提醇沉得到四君子汤多糖1;经Sevag法去蛋白得到四君子汤多糖2;经DEAE?52纤维素柱层析并超纯水洗脱得到四君子汤多糖3a;经Sephadex G?100葡聚糖凝胶柱层析并超纯水洗脱得到四君子汤多糖4a和多糖4b;并以苯酚?硫酸法检测各多糖样品糖含量（以葡萄糖计）。②凝胶渗透色谱法（GPC）检测四君子汤多糖3a、多糖4a和多糖4b纯度。③在IEC?6细胞迁移模型上,观察四君子汤多糖不同样品促进细胞迁移的药效活性。结果：4种多糖样品（四君子汤多糖1、2、3a、4b）糖含量分别为71.35%、75.45%、81.00% 和98.50%,其促进细胞迁移的最低有效剂量分别为200、100、50、30mg·L^?1;表明纯化步骤最多的多糖4b糖含量最高、药效最优,且GPC 法测得其为均一性多糖组分。结论：四君子汤多糖经不同纯化步骤后,糖含量和纯度提高,药效活性随之增强,研究结果为探讨四君子汤促进细胞迁移的药效物质基础研究提供参考。     

四君子汤复方总多糖口服和注射给药对免疫功能影响的对比研究

目的：研究四君子汤复方总多糖经口服和注射给药的免疫活性的差异。方法：采用环磷酰胺造成免疫抑制模型,观察四君子汤复方总多糖对小鼠免疫器官重量,溶血素生成反应和迟发型超敏反应的影响,同时观察对正常淋巴细胞增殖的影响。结果：四君子汤复方总多糖能够明显对抗由不磷酰胺诱导的免疫抑制,使小鼠免疫器官重量减轻,溶血素生成反应减弱和迟发型超敏反应降低明显改善,促进淋巴细胞增殖,且口服效果有优于注射的\趋势。结论：四群子汤复方总多糖对小鼠体液和细胞免疫功能具有促进作用,同时也提示多糖口服给药引起免疫效应有其独特性,文中还对口服多糖引起全身免疫反应的可能机理进行了探讨。     

黄芪多糖调控多胺介导的Ca~(2+)-RhoA通路促进小肠上皮细胞迁移研究

目的考察黄芪多糖对小肠上皮细胞(IEC-6)迁移及迁移过程细胞内多胺水平、细胞质游离钙离子([Ca2+]cyto)的量、细胞骨架蛋白Rho A表达的影响,探讨黄芪修复胃肠黏膜损伤的疗效机制。方法黄芪药材经水提醇沉、Sevage法去蛋白后得到黄芪粗多糖,运用DEAE纤维素柱分离得到黄芪多糖I、II、III、IV,黄芪多糖I以Sephadex LH-20凝胶柱色谱得到黄芪多糖V。Tips划痕法建立IEC-6细胞损伤迁移模型,柱前衍生高效液相色谱法测定多胺的量,流式细胞仪检测[Ca2+]cyto水平,Western blotting法检测Rho A蛋白表达。考察黄芪多糖对正常IEC-6细胞[未加α-二氟甲基鸟氨酸(DFMO)]和多胺耗竭IEC-6细胞(加入DFMO)迁移、多胺水平、[Ca2+]cyto的量及Rho A蛋白表达的影响。结果黄芪粗多糖、黄芪多糖I、黄芪多糖V(50、100、200 mg/L)均能促进IEC-6细胞迁移(P0.01),并且可逆转多胺合成抑制剂DFMO所致的细胞迁移抑制效果(P0.01);在正常(未加DFMO)或多胺耗竭情况(加DFMO),黄芪多糖V均可提高迁移过程细胞内多胺的量(P0.01);黄芪多糖V可提高细胞迁移过程[Ca2+]cyto水平(P0.01),并且可逆转DFMO所致的[Ca2+]cyto水平下降(P0.01);黄芪多糖V(100、200 mg/L)可明显提高Rho A蛋白表达,同时可逆转DFMO所导致的Rho A蛋白表达抑制作用。结论黄芪多糖可加速胃肠黏膜损伤早期修复过程,其机制可能与增加黏膜上皮细胞多胺的量,提升[Ca2+]cyto,从而提高Rho A蛋白表达,进而促进胃肠黏膜上皮细胞迁移有关。     

当归补血汤粗多糖及其单味药多糖对正常小鼠免疫功能的影响

目的 观察当归补血汤多糖及单味药多糖对正常小鼠免疫功能的影响。方法：用正常小鼠进行实验。结果：当归补血汤多糖及相应剂量的黄芪多糖可显著提高正常小鼠腹腔巨噬功能，促进溶血素及溶血空斑形成，促进淋巴细胞转化。结论：当归补血汤多糖及黄芪多糖有较好的免疫兴奋作用。     

IEC-6细胞迁移药理实验模型建立的研究(英文)

建立适合肠上皮整复研究的IEC-6细胞迁移药理实验模型,并观察黄芪糖复合物对细胞迁移的影响。方法:设立不同的细胞接种密度、划痕后观察时间、辅助材料Matrigel浓度、血清饥饿处理法、细胞迁移抑制剂DF-MO(二氟甲基鸟氨酸)浓度等以考察模型的建立条件,并在已建立的模型上观察受试药的效果。结果:①细胞宜以4×105/mL接种6孔板;②宜划痕后24 h观察细胞迁移数;③5%Matrigel为适宜浓度;④血清饥饿可造成细胞迁移数明显减少,应使用含血清的培养液。⑤DFMO 2.5~5 mmol/L为抑制细胞迁移适宜浓度。⑥黄芪糖复合物及阳性药精脒能促进细胞迁移。结论:建立了适宜药理实验的IEC-6细胞迁移模型,在此模型上可反映受试药对细胞正常迁移及迁移抑制的药效作用。     

白术、黄芪、党参促进IEC-6细胞损伤后的快速修复

目的研究白术、黄芪、党参提取物对体外胃肠黏膜上皮细胞损伤的快速修复作用。方法采用Tips划痕法建立小肠上皮(IEC-6)细胞迁移模型,首先考察不同的IEC-6细胞接种密度、划痕后修复时间、不同的血清浓度以建立稳定的迁移模型;接着采用表皮生长因子(EGF)及其阻断剂AG1478对迁移模型进行评价;最后考察三味中药对IEC-6细胞迁移的作用效果。结果 (1)细胞的最佳接种密度为1×105个/m L;(2)宜在划痕后8 h计算细胞迁移率;(3)1%血清浓度为最适宜浓度;(4)EGF明显促进了IEC-6细胞迁移,AG1478明显抑制了细胞迁移;(5)白术、黄芪、党参提取物均可促进IEC-6细胞迁移。结论益气健脾中药可促进胃肠黏膜损伤后的快速修复过程,其机制是否与影响EGFR信号通路有关有待进一步研究。     

四逆散及其各组成中药对实验性肝损伤的影响

目的：对四逆散进行初步拆方研究，探讨组成四逆散的各单味中药在全方中所起的作用。方法：运用CCl4体外致肝细胞损伤及2，4，6-三硝基氯苯(PCI)致迟发型变态反应(PCI-DTH)诱导肝损伤模型，ConA致淋转试验，LPS诱导巨噬细胞释放NO试验及活化脾细胞释放Ⅳ胶原酶能力试验，考察四逆散全方及各单味中药对肝细胞及免疫细胞的影响。结果：四逆散复方作用明显优于各单味中药；而各单味药分别作用于肝损伤过程的不同环节，柴胡主要通过保护肝细胞膜及促进肝保护因子。NO的产生而影响肝损伤过程的主要环节，白芍则主要抑制免疫细胞的活化及过度活化的免疫细胞的功能而发挥免疫调节作用，甘草具有保肝、促进NO产生及免疫调节作用。结论：四逆散全方作用优于各单味中药，系各单味中药对疾病过程中不同靶点综合效应的结果。     

四君子汤总多糖对小鼠肠道菌群及免疫功能的影响

目的:探讨四君子汤总多糖对小鼠肠道菌群及免疫功能的影响。方法:100只健康小鼠分为4组,每组25只。脾虚造模。正常对照组与模型对照组每天生理盐水灌胃,低剂量给药组每天每公斤体重1g四君子汤多糖灌胃,高剂量给药组每天每公斤体重2g灌胃。分析四君子汤总多糖对小鼠肠道菌群及免疫功能的影响。结果:低剂量给药组及高剂量给药组胸腺指数级派氏结显著高于造模对照组。肠道sIgA含量显著高于模型对照组;低剂量给药组T淋巴结比例显著高于模型对照组。造模对照组双歧杆菌、双歧杆菌、乳酸杆菌、大肠杆菌、脆弱拟杆菌水平均高于正常对照组。结论:四君子汤多糖能够纠正肠道菌群失调,恢复脾虚小鼠的免疫功能,并且有剂量依赖性。     

白术多糖调控钙离子以促进细胞迁移及E-钙黏蛋白表达的研究

目的观察白术多糖对大鼠小肠上皮细胞(IEC-6)钙离子水平、细胞迁移和E-钙黏蛋白表达的影响,探讨益气健脾中药白术促进胃肠黏膜损伤修复的作用机制。方法:流式细胞仪检测白术多糖对细胞游离钙离子水平([Ca~(2+)]cyt)的影响;划痕法复制细胞迁移模型,观察白术多糖对细胞迁移的影响;Western blot法和免疫荧光法检测白术多糖对细胞E-钙黏蛋白表达的影响。结果白术多糖(25,50,100 mg·L~(-1))可增加细胞[Ca~(2+)]cyt、促进细胞迁移、提高E-钙黏蛋白表达,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);可逆转多胺合成抑制剂α-二氟甲基鸟氨酸(DFMO)所致的[Ca~(2+)]cyt降低、细胞迁移抑制和E-钙黏蛋白表达减少,与DFMO组比较,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论白术多糖可通过提高细胞钙离子水平以促进细胞迁移和E-钙黏蛋白表达,为探讨益气健脾中药白术修复胃肠黏膜损伤的作用机制提供参考。     

党参、甘草皂苷和黄酮部位对IEC-6细胞迁移的影响

目的:观察党参、甘草的皂苷和黄酮提取部位对小肠上皮细胞(IEC-6)迁移的影响。方法:以回流提取法分别提取党参和甘草的皂苷、黄酮部位,并用D101大孔吸附树脂对各部位进行分离纯化,以分光光度法检测含量。IEC-6细胞种植于6孔板并培养24小时,划痕法造细胞迁移模型,划痕后加入各种受试药,24小时后观察细胞迁移情况。结果:党参和甘草黄酮含量(以芦丁计)分别为41.73%和50.98%;党参皂苷含量(以人参皂苷Re计)为40.57%;甘草皂苷含量(以甘草酸计)为57.01%。50mg/L的党参黄酮部位和甘草黄酮部位能促进细胞迁移(P<0.05);党参和甘草的皂苷部位对细胞迁移无明显影响。结论:党参、甘草黄酮部位有促进IEC-6细胞迁移作用,党参、甘草皂苷部位对IEC-6细胞迁移无明显影响。     

四君子汤对 IEC-6 细胞增殖相关指标及大鼠胃肠黏膜 c-Myc 表达的影响

目的观察四君子汤对IEC-6 细胞（大鼠小肠上皮细胞）增殖,多胺调控生长相关基因细胞周期检测点 激酶2（Checkpoint kinase 2,Chk2）、c-Myc 表达,以及对大鼠胃肠黏膜c-Myc 蛋白表达的影响。方法采用 SD 大鼠制备空白血清及四君子汤含药血清;无负荷细胞实验设空白对照组、腐胺组（10 μmol·L-1）及四君子汤 含药血清低、中、高（5%、10%、20%）剂量组;α-二氟甲基鸟氨酸（α-difluoromethylornithine,DFMO）负荷细 胞实验设空白对照组、DFMO 组（2.5 mmol·L-1）、腐胺组（10 μmol·L-1）及四君子汤含药血清低、中、高（5%、 10%、20%）剂量组;动物实验将SD 大鼠随机分为空白对照组、模型组（吲哚美辛组）及四君子汤低、高（5、 15 g·kg-1）剂量组。采用MTT 法检测IEC-6 细胞增殖情况;qPCR 法检测细胞Chk2、c-Myc mRNA 表达; Western Blot 法检测细胞Chk2、p-Chk2、c-Myc 蛋白表达和大鼠胃肠黏膜的c-Myc 蛋白表达。结果①细胞实 验：与空白对照组比较,10%、20% 四君子汤含药血清可促进给药24 h 后IEC-6 细胞的增殖（P＜0.01）,提高 p-Chk2 蛋白及c-Myc mRNA/蛋白表达水平（P＜0.05,P＜0.01）;5%、10%、20% 四君子汤含药血清可促进给 药48、72 h 后细胞增殖（P＜0.01）,促进Chk2 mRNA/蛋白表达（P＜0.05,P＜0.01）。与DFMO 组比较,5%、 10%、20% 四君子汤含药血清可促进给药48 h 后细胞增殖（P＜0.01）,提高c-Myc mRNA/蛋白表达（P＜0.05, P＜0.01）;10%、20% 四君子汤含药血清可促进给药72 h 后细胞增殖（P＜0.01）,促进Chk2 及p-Chk2 蛋白表 达（P＜0.05,P＜0.01）;20%四君子汤含药血清可促进Chk2 mRNA 表达（P＜0.05）。②动物实验：与模型组比 较,四君子汤5、15 g·kg-1 可上调模型大鼠胃黏膜及小肠黏膜c-Myc 蛋白表达（P＜0.05,P＜0.01）。结论 四君子汤可促进IEC-6 细胞增殖,其作用机制可能与影响多胺信号通路,上调生长相关基因Chk2、c-Myc 表达有关。四君子汤可提高胃肠黏膜损伤模型大鼠胃及小肠黏膜c-Myc 蛋白表达水平。     

党参黄酮提取部位对小肠上皮细胞迁移及多胺的影响

目的 观察党参黄酮提取部位对小肠上皮细胞（IEC-6）迁移及迁移过程细胞内多胺（精脒）含量的影响。方法 划痕法复制细胞迁移模型,观察在多胺合成抑制剂二氟甲基鸟氨酸（DFMO）及钾通道抑制剂4-氨基吡啶（4-AP）负荷下,党参黄酮提取部位对细胞迁移的影响;柱前衍生-高效液相色谱法检测给予党参黄酮提取部位12 h和24 h后细胞内精脒的含量。结果 党参黄酮提取部位可促进IEC-6细胞迁移,逆转DFMO或4-AP所致细胞迁移抑制;党参黄酮提取部位给药12 h和24 h后可提高细胞内精脒含量。结论 党参黄酮提取部位促进细胞迁移的作用与影响多胺调控信号通路有关。     

四君子汤总多糖对免疫抑制小鼠肠道sIgA的影响及其机制研究

目的初步探讨四君子汤总多糖对小鼠肠道黏膜体液免疫功能的影响。方法取NIH小鼠随机分为正常对照组、模型组、四君子汤总多糖(SJZPS)组和四君子汤去蛋白多糖(SJZFP)组,采用ELISA法检测小鼠小肠sIgA浓度,流式细胞(FCM)技术检测Peyer's结细胞表型,免疫组化法检测小鼠肠道TLR4的表达。结果模型组sIgA浓度小于正常对照组、SJZPS和SJZFP组,差异具有显著性(P0.01);模型组CD19+细胞比例下降,与正常对照组比较,具有非常显著性差异(P0.01),SJZPS和SJZFP组CD19+细胞比例上升,与模型组比较,具有非常显著性差异(P0.01);模型组肠黏膜TLR4蛋白表达明显低于正常对照组,SJZPS和SJZFP组,具有非常显著性差异(P0.01)。结论SJZPS和SJZFP可提高环磷酰胺抑制的体液免疫功能,具有肠道黏膜免疫调节作用。