组织因子途径抑制物

组织因子途径抑制物（ＴＥＰＩ）是一种新发现的依赖Ｘａ的Ⅶａ／组织因子复合物的抑制物，属Ｋｕｎｉｔｚ－类型丝氨酸蛋白酶抑制物家族成员。本文就ＴＥＰＩ的组成、结构、基因定位、合成、代谢、分布以及ＴＥＰＩ的作用机理、生理及病理意义等作一评述。     

胸腹水组织因子及组织因子途径抑制物的检测及其意义

目的研究三组疾病胸腹水组织因子(Tissue factor,TF)及组织因子途径抑制物(Tissue factor pathway inhibitor,TFPI)的表达及其鉴别诊断意义。方法TF和TFPI采用ELISA法测定抗原表达。结果胸腹水TF水平和TFPI水平,恶性肿瘤组(570.04±627.53)ng/L,(28.60±15.57)μg/L和结核病组(283.82±143.16)ng/L,(31.16±12.26)μg/L明显高于肝硬化组(60.83±66.87)ng/L,(7.84±5.45)μg/L,P<0.01。TF/TFPI比值则为恶性肿瘤组(32.17±44.19)明显高于结核病组(13.55±13.15)和肝硬化组(11.22±9.05,P<0.05)。在恶性肿瘤组中,胸腹水癌细胞阳性组的TF表达(1106.92±1244.28)ng/L高于阴性组(331.08±295.84)ng/L,P<0.05。而阳性组的TFPI水平(27.35±17.75)μg/L与阴性组(30.34±13.20)μg/L无明显差异(P>0.05)。TF/TFPI比值则为阳性组(59.59±65.10)明显高于阴性组(11.54±8.37,P<0.01)。结论检测胸腹水TF和TFPI并分析TF/TFPI比值可以作为临床实验室有鉴别诊断意义的辅助指标,同时还可了解疾病的某些病理机制,尤其是肿瘤的某些生物学行为。     

转染VEGF165基因抑制兔动脉损伤后内膜增生

目的：观察局部转染血管内皮生长因子165（VEGF165）基因对损伤动脉内膜增生的影响并探讨可能机制。 方法： 采用显微外科手术方法，建立兔右髂外动脉损伤模型。将105只新西兰大白兔随机分为3组，每组35只。A组为生理盐水对照组，B组为脂质体介导的pBudCE4.1转染组，C组为脂质体介导的pBudCE4.1/VEGF165转染组。用微注射器将各种转染液注入损伤的血管壁，每组按实验终点（术后2、3、7、14和28 d）分为5个亚组，每个亚组7只兔。于术后各实验终点，取损伤段的血管用于病理组织学检查、电镜观察、RT-PCR和免疫组化染色检查。 结果： 术后各时点C组血管内膜厚度和内膜面积均显著小于A组和B组（P<0.01），术后28 d时C组管腔狭窄率平均比A组和B组低51.6%和49.8％。术后各时点C组血管壁的VEGF165基因的mRNA表达量和血管壁VEGF165阳性细胞率明显高于A组和B组（P<0.01）。C组血管壁血管内皮细胞（VEC）修复和生长增殖速度明显快于A组和B组。A组和B组间无明显差异。 结论： 局部转染VEGF165基因可抑制血管新生内膜增生及血管再狭窄，为将来血管内膜增生的基因治疗奠定基础。     

tPA基因局部定位转染抑制兔动脉损伤后内膜增生的研究

目的: 观察局部转染组织型纤溶酶原激活物 (tPA)基因, 对手术损伤兔右髂外动脉后内膜增生的影响并探讨可能的机制。方法: 采用显微外科手术方法, 建立兔右髂外动脉损伤模型。将 105只新西兰大白兔随机分为 3组, 每组 35只。A组为生理盐水对照组, B组为脂质体介导的pBudCE4. 1转染组, C组为脂质体介导的pBudCE4. 1 /tPA转染组。用微注射器将各种转染液注入损伤的血管壁, 每组按实验终点(术后 2、3、7、14、28d)再分为 5个亚组, 每个亚组 7只兔。于术后各实验终点, 取损伤段的血管用于病理学检查、电镜观察、RT PCR和免疫组化染色检查。结果: 与A组和B组相比较, 术后各时间点C组血管内膜的厚度、内膜的面积和血管腔的狭窄率均显著减小 (P<0. 01)。术后 28d时, C组血管腔的狭窄率比A组和B组分别降低了 51. 5%和54. 2%。术后各时间点, C组血管壁的tPAmRNA的表达量明显高于A组和B组(P<0. 01), 在术后 7d到达高峰, 并持续到 28d。扫描电镜观察显示, C组的血管壁只见少量血小板附着, 未见血栓形成; 而A组和B组的血管壁可见大量血小板黏附聚集, 且有血栓形成。免疫组化染色显示, C组的血管壁血小板源性生长因子(PDGF)阳性细胞的百分率明显低于A组和B组(P<0. 01)。A组和B组之间相比较, 以上数据差异无显著性(P>     

粥样硬化斑块中组织因子和组织因子途径抑制物的表达

目的 观察股动脉粥样硬化斑块中组织因子TF和组织因子途径抑制物TFPI的表达、分布.方法 采用免疫组化、双染组化方法检测股动脉粥样硬化斑块中TF和TFPI的表达和分布,RT-PCR检测TF mRNA和TFPI mRNA的表达.脐动脉作为对照.结果 脐动脉外膜表达少量TF和TFPI蛋白及其mRNA,而动脉粥样硬化斑块血管增生内膜大量表达TF和TFPI蛋白及其mRNA.结论 增生内膜中所有细胞类型及细胞间质都表达TF和TFPI.     

组织因子途径抑制物调控细胞凋亡与冠心病

细胞凋亡是机体的一种适应性反应,生理性的细胞凋亡对于细胞生长、生存及维持人体内环境稳定至关重要.然而过度凋亡可能促进冠状动脉粥样硬化、心肌缺血/再灌注损伤以及缺血后心脏重塑等.组织因子途径抑制物(tissue factor pathway inhibitor,TFPI)除了可以抗凝、抗栓,还具有诱导细胞凋亡的作用.因此...     

冠心病患者血浆组织因子、组织因子途径抑制物水平及抗凝血酶-Ⅲ活性的研究

目的 :检测不同类型冠心病 (CHD)患者血浆组织因子 (TF)、组织因子途径抑制物 (TFPI)抗原水平及抗凝血酶 Ⅲ(AT Ⅲ)活性的变化并探讨其临床意义。方法 :TF抗原 (TF Ag)、TFPI抗原 (TFPI Ag)均采用双抗夹心ELISA法测定 ,AT Ⅲ活性采用发色底物法。结果 :急性心肌梗死 (AMI)组、不稳定型心绞痛 (UAP)组和稳定型心绞痛 (SAP)组TF抗原水平治疗前后均显著高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,陈旧性心肌梗死(OMI)组治疗前后与对照组水平接近 (P >0 .0 5 ) ;各组治疗前后TFPI抗原水平均高于对照组 (P <0 .0 5 ) ;各组治疗前AT Ⅲ活性均显著低于对照组 (P <0 .0 5 ) ,治疗后 ,AMI组和UAP组AT Ⅲ活性升高至对照组水平 (P >0 .0 5 ) ,SAP组和OMI组仍低于对照组 (P <0 .0 5 )。结论 :AMI及心绞痛患者发作期 ,外源性凝血途径被启动 ,TF过度表达 ,TFPI反馈性增高 ,AT Ⅲ活性因被过多拮抗和消耗而降低 ,血液处于高凝状态。     

葛根素减弱ox-LDL诱导HUVECs组织因子及其抑制物的表达

目的探讨葛根素(puerarin)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)组织因子(TF)和组织因子途径抑制物(TFPI)表达的影响。方法用不同浓度葛根素和50 mg/L ox-LDL共同孵育HUVECs,实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测TF和TFPI mRNA和蛋白表达。结果与对照组相比,ox-LDL明显诱导HUVECs TF mRNA和蛋白表达(P0.01);而明显抑制TFPI mRNA和蛋白表达(P0.01);50、100和200μmol/L葛根素呈剂量依赖性降低ox-LDL对TF mRNA和蛋白的诱导作用(P0.01),减弱ox-LDL对TFPI mRNA和蛋白的抑制作用(P0.01)。结论葛根素减轻了ox-LDL对HUVECs TF和TFPI mRNA及蛋白表达的诱导。     

内皮型一氧化氮合酶基因转染对血管损伤后新生内膜增生的影响

背景：一氧化氮能够抑制血管平滑肌细胞的迁移和增殖,而一氧化氮合酶是其合成的关键酶,有关一氧化氮合酶基因体内转染对平滑肌细胞及动脉粥样硬化血管损伤后内膜增生影响少有报道。 目的：观察内皮型一氧化氮合酶 (endothelial nitric oxide synthase,eNOS)基因体内局部转染对动脉粥样硬化大鼠血管损伤后新生内膜增生的抑制作用。 方法：建立动脉粥样硬化Wistar大鼠颈动脉球囊损伤模型,建模后随机分成空白对照组、AdCMV-lacz对照组和AdCMV-eNOS组,分别将PBS,AdCMV-lacz和AdCMV-eNOS体内转染至以上3组大鼠的损伤血管壁。转染2周后培养并鉴定损伤局部平滑肌细胞,并用RT-PCR法检测各组损伤及转染后血管平滑肌细胞eNOS mRNA的表达,同时观察转染后不同时期新生内膜增生的影响。 结果与结论：AdCMV-eNOS组的颈总动脉血管平滑肌细胞可表达eNOS mRNA。3组大鼠转染后1和3个月,AdCMV-eNOS组内膜/中膜面积比值低于空白对照组和AdCMV-lacz对照组(P < 0.01)。结果显示,eNOS基因体内转染损伤后血管可以抑制血管新生内膜增生,减少再狭窄发生率。     

丹参酮IIA纳米球对兔颈动脉球囊损伤后内膜增殖的抑制

制备丹参酮IIA纳米球,以用于观察局部灌注后对损伤血管内膜增殖的抑制。通过超声乳化法制备了PLGA包载的、载药量为1.55%±0.016%(mg/mg),平均粒径为119nm的丹参酮IIA纳米球,将其和空白纳米粒分别局部灌注于球囊损伤后的兔颈动脉内,对内膜增殖的情况进行分析。结果发现:28d丹参酮IIA纳米粒组与空白纳米粒组和动脉损伤模型组相比,内膜面积明显减少(P<0.01);空白纳米粒组与模型组的内膜面积比较,无明显变化(P=0.302);内膜面积/中膜面积作为内膜增殖指数的指标,丹参酮IIA纳米粒组比动脉损伤模型组减少了39.7%。本实验成功地研制了丹参酮IIA纳米粒,局部灌注于内膜剥脱后的血管内,不仅证实了其组织相容性,而且显示出良好的局部摄取,以及显著抑制损伤血管内膜增殖的效应。     

人组织因子途径抑制因子重组蛋白表达菌株的建立

组织因子途径抑制因子是机体凝血过程的主要抑制因子，在血栓形成性疾病的防治中具有广阔的应用前景。本研究采用pGEX—2T为表达载体、大肠杆菌细胞为表达宿主进行了人组织因子途径抑制因子重组蛋白的制备。制备的重组蛋白产量较高，纯化过程简单，且具有良好的抑制组织因子的功能。     

静脉留置针对兔耳缘静脉血栓形成及血浆组织因子与血管性假血友病因子水平的影响

目的:观察静脉留置针于兔耳缘静脉置管不同时间的血栓形成情况,同时检测血浆组织因子(TF)和血管性假血友病因子(vWF)水平变化,探讨留置针致静脉血栓形成的机制。方法:50只新西兰兔随机分成5组:即正常对照组、置管1天组、置管3天组、置管5天组、置管7天组。取兔右耳外侧耳缘静脉留置针置管输液,每日经留置针输入生理盐水20ml。于置管第2天、第4天、第6天和第8天分别取各组兔耳输液血管组织行HE染色,观察病理形态学变化和血管内血栓形成情况;同时经颈静脉取血,ELISA检测血浆TF和vWF水平变化。结果:正常对照组兔耳缘静脉血管壁完整,无血栓形成,但置管3天组、5天组、7天组血管壁完整性出现不同程度损害,有明显血栓形成,血栓形成率分别为30%、70%、80%。与正常对照组相比,置管3天组、5天组、7天组血浆TF和vWF水平显著升高(p0.05)。结论:静脉留置针置管3天以上可致部分实验动物血栓形成,其机制可能与其血浆TF和vWF水平升高有关。     

Tissue factor pathway inhibitor: structure, biology and involvement in disease

Tissue factor (TF)-initiated coagulation plays a significant role in the pathophysiology of many diseases, including cancer and inflammation. Tissue factor pathway inhibitor (TFPI) is a plasma Kunitz-type serine protease inhibitor, which modulates initiations of coagulation induced by TF. In a factor (F) Xa-dependent feedback system, TFPI binds directly and inhibits the TF-FVII/FVIIa complex. Normally, TFPI exists in plasma both as a full-length molecule and as variably carboxy-terminal truncated forms. TFPI also circulates in complex with plasma lipoproteins. The levels and the dual inhibitor effect of TFPI on FXa and TF-FVII/FVIIa complex offers insight into the mechanisms of various pathological conditions triggered by TF. The use of selective pharmacological inhibitors has become an indispensable tool in experimental haemostasis and thrombosis research. In vivo administration of recombinant TFPI (rTFPI) in an experimental animal model prevents thrombosis (and re-thrombosis after thrombolysis), reduces mortality from E. coli-induced-septic shock, prevents fibrin deposition on subendothelial human matrix and protects against disseminated intravascular coagulation (DIC). Thus, TFPI may play an important role in modulating TF-induced thrombogenesis and it may also provide a unique therapeutic approach for prophylaxis and/or treatment of various diseases. In this review, we consider structural and biochemical aspects of the TFPI molecule and detail its inhibitory mechanisms and therapeutic implications in various disease conditions.     

硫代磷酸酯寡核苷酸的合成及其对内皮细胞组织因子(Tissue factor,TF)基因表达及TF促凝活性的作用

为合成与 TF基因启动子区切应力反应元件 ( Shear stress responsive element,SSRE)形成三链 DNA的硫代磷酸酯寡核苷酸 ( Triple helix- forming phosphorothioate oligodeoxynucleotides,TFO- ps) ,探讨其对内皮细胞TF基因表达及 TF促凝活性的影响。我们设计反向 TFO ( T2 1GTa)序列 ,采用固相亚磷酰胺三酯固相法合成TFO。在 TFO的 3′末端进行硫代磷酸酯修饰。应用电泳迁移分析 ( Electrophoretic mobility shift assays,EMSA)观察寡核苷酸和硫代脱氧寡核苷酸的亲和性。在 ECV3 0 4内皮细胞株观察 γ- 32 P标记硫代磷酸酯 TFO的细胞摄取及其对 TF基因表达的影响。结果显示 ,TFO- ps( T2 1Gta- ps)与靶序列能形成三链 DNA,其 Kd值为 3 .6× 10 - 1 0 M。在内皮细胞株 ECV3 0 4细胞 ,TFO- ps( T2 1GTa- ps)的细胞吸收率为 11.65 % ,主要分布在核沉淀 ,约占吸收总量的77.2 5 % ,显著降低内皮细胞 TF基因 m RNA表达及 TF蛋白合成的平均光密度 ( AOD)值 ,显著降低 TF的促凝活性。以上结果表明 ,TFO- ps( T2 1GTa- ps)具有较好的抗凝活性 ,其机制与抑制 TF基因表达有关     

人TFPI基因转染对兔移植静脉血栓形成和近期通畅率的影响

目的： 为减少冠状动脉旁路移植术后血栓形成，探讨人组织因子途径抑制因子(TFPI)基因转染对兔移植静脉血栓生成的影响。方法：构建真核表达质粒pCMV-(Kozak)TFPI。采用阳离子脂质体和腔内加压灌注法，转染移植静脉内皮细胞。RT-PCR、Western blotting和免疫组化法检测外源基因在兔移植静脉中的表达。病理标本、扫描电镜观察移植静脉血栓形成情况，血管多普勒观测其通畅率。结果：移植静脉中有人TFPI基因和蛋白表达。静脉移植术后3 d，基因转染组、空载体和空白对照组分别有1条、8条和7条移植静脉发生血栓，术后30 d，以上各组分别有0条、5条和5条移植静脉完全闭塞，前者静脉血栓发生率和闭塞率均低于后两者(P<0.05)。扫描电镜显示两对照组内皮表面有红细胞和血小板黏附、聚集，而转染组基本正常。结论：人TFPI基因干预，减少了兔移植静脉血栓形成，提高了近期通畅率。     

Coordinate Regulation of Matrix Metalloproteinase-1 and Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-1 Expression in Human Vascular Smooth Muscle Cells

The expression of matrix metalloproteinases (MMPs) and their inhibitors (TIMPs) by human vascular smooth muscle cells (SMC) was monitored as a function of the phenotypic modulation in vitro. Cell phenotype was manipulated by varying serum concentration and cell density. Synthetic phenotype was characterized by a minimum expression of the contractile proteins and a maximal proliferation rate. Contractile phenotype was quiescent and expressed a maximal level of contractile proteins. Synthetic cells expressed the highest levels of both MMP-1 and TIMP-1 and displayed maximal collagenolytic activity. No significant change was detected in MMP-2 expression or catalytic activity. Enzyme immunoassays revealed that MMP-1 expression fell by 77 ± 2.4-95 ± 0.5%, and that of TIMP-1 by 34 ± 0.5-59 ± 1.9%, as the cells acquired a contractile phenotype. The level of the MMP-1/TIMP-1 complex was similarly reduced by 78 ± 2.9-85 ± 1.6%. These data demonstrate that the expression of MMP-1 and TIMP-1 are coordinately regulated with SMC phenotype.     

Apoptosis and Expression of the Proto-Oncogenes bcl-2 and p53 and the Proliferation Factor Ki-67 in Human Medullary Thyroid Carcinoma

Apoptosis and immunoreactivity forbcl-2, p53, and Ki-67 were studied in 21 patients with medullary thyroid carcinoma (MTC). The DNA nick end labeling method was used to assess apoptosis. The relationships between the different factors were analyzed, as were their relations to clinicopathological data, including survival. More than 80% of the tumors harbored apoptotic cells. Tumors in individuals who had died of the MTC disease had a higher percentage of apoptosis. All cases demonstrated immunoreactivity tobcl-2; disease-free individuals had a higher rate than those with recurrent disease. No obvious pattern could be discerned in the relation of p53 or Ki-67 to the outcome of the MTC disease. An inverse correlation betweenbcl-2 and apoptosis (r=−0.81;p<0.01) was demonstrated.bcl-2 was significantly (p=0.014) associated with apoptosis even after taking both p53 and Ki-67 into consideration, but these two factors were unrelated to apoptosis. None of the factors studied were correlated to crude survival, either in univariate or in multivariate analyses. This study established thatbcl-2 immunoreactivity is closely associated with apoptosis in MTC, suggesting that a downregulation of thebcl-2 protein is related to a more aggressive growth rate and might be a useful marker for the evaluation of MTC.