重复常压低氧预适应对慢性脑缺血大鼠脑白质损伤和认知功能障碍的影响

目的探讨重复常压低氧预适应(repetitive normobaric hypoxic preconditioning,RNHP)对慢性脑缺血大鼠脑白质损伤和认知功能障碍的影响。方法选择健康成年雄性SD大鼠24只,随机分为假手术组、模型组、RNHP组,每组8只。假手术组只分离而不结扎双侧颈总动脉,整个实验过程呼吸环境空气;模型组:结扎双侧颈总动脉,整个实验过程呼吸环境空气;RNHP组:结扎双侧颈总动脉,术前给予2周低氧预适应。Morris水迷宫实验评价大鼠认知功能,Klüver-Barrera染色评价脑白质损伤的严重程度,胶质纤维酸性蛋白抗体、Iba-1抗体、CNPase抗体分别用于免疫标记脑白质中星形胶质细胞、小胶质细胞和少突胶质细胞。结果与模型组比较,RNHP组和假手术组大鼠目标象限游泳时间百分比明显延长[(27.26±2.06)%、(29.06±1.72)%vs(20.58±2.23)%,P0.05,P0.01],胼胝体、尾壳核和前联合脑白质损伤评分明显降低,脑白质中星形胶质细胞、小胶质细胞明显减少,而少突胶质细胞明显增多,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论 RNHP可改善慢性脑缺血大鼠脑白质损伤和认知功能障碍。     

小鼠脑缺血后星形胶质细胞和小胶质细胞的活化规律比较

目的比较小鼠脑缺血后星形胶质细胞和小胶质细胞的活化规律。方法采用改良线栓法制备小鼠大脑中动脉阻塞再灌注局灶性脑缺血损伤模型。昆明小鼠48只,随机分为假手术组24只和脑缺血组24只。脑缺血组缺血3h后再分为再灌注1、3、7和14d,每个时间点6只。再灌注结束后,取脑作HE染色观察脑组织病理改变,免疫组织化学染色法检测星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和小胶质细胞离子钙接头蛋白1(Iba1)的表达。结果与缺血再灌注1d比较,脑缺血组缺血再灌注3、7、14d皮质缺血周边区的GFAP阳性产物显著增加[(699.22±160.82)μm2/HP,(1817.97±290.88)μm2/HP,(2831.64±481.38)μm2/HP vs(33.13±7.45)μm2/HP,P0.01]。脑缺血组缺血再灌注1d皮质缺血周边区出现以"分支状"为主的Iba1阳性小胶质细胞,3、7d活化的小胶质细胞显著增多并表现为"灌木样"细胞,14d后活化小胶质细胞呈现"阿米巴样"细胞。结论脑缺血再灌注损伤时,小胶质细胞和星形胶质细胞均出现活化,但小胶质细胞活化出现得更早;星形胶质细胞活化只出现在缺血周边区,而活化的小胶质细胞可从缺血周边区向缺血中央区迁移。     

阿魏酸钠对大鼠脑白质胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的探讨阿魏酸钠对大鼠前脑缺血再灌注（I/R）后白质胶质纤维酸性蛋白表达的影响。方法双侧颈总动脉夹闭法制备大鼠前脑I/R模型。雄性Wistar大鼠45只，随机分为假手术组（n=15），I/R组（n=15），I/R阿魏酸钠治疗组（n=15），每组按I/R2、4、6w3个时间点再分为3组（n=5）。模型制备免疫组化法检测I/R后2、4、6w胼胝体、内囊和脑室周围GFAP的表达。结果I/R后胼胝体、内囊和脑室周围GFAP的表达随时间延长逐渐增多，阿魏酸钠治疗组GFAP的表达较假手术组多，较缺血再灌注组减少，6w差异最显著（P〈0.05）。结论大鼠前脑缺血再灌注后白质GFAP表达增多，阿魏酸钠对脑白质缺血性损伤具有保护作用，其机制可能与调节星形胶质细胞活化状态，减轻内皮素对血管损伤有关。     

盐酸多奈哌齐对淀粉样蛋白致痴呆树鼩的治疗作用

目的探讨盐酸多奈哌齐对树鼩侧脑室内注射β-淀粉样蛋白(Aβ)后星形胶质细胞及成熟神经细胞的影响。方法采用GFAP和NeuN免疫组织化学方法检测各组树鼩大脑皮质和海马CA1、CA3、DG区星形胶质细胞和成熟神经元的表达。结果模型组树鼩额叶皮质和海马区GFAP阳性星形胶质细胞数明显高于对照组(P<0.01);治疗组海马(P<0.01)和皮质(P<0.05)GFAP阳性细胞数明显低于模型组。模型组树鼩额叶皮质和海马区NeuN阳性成熟神经元数明显少于对照组(P<0.01);治疗组树鼩海马CA1、CA3区(P<0.05)和额叶皮质(P<0.01)NeuN阳性成熟神经元明显多于模型组。结论盐酸多奈哌齐能抑制Aβ_(1~40)引起的树鼩星形胶质细胞的活化,减轻Aβ对成熟神经元的损伤。     

大鼠皮层星形胶质细胞原代培养、鉴定及氧糖剥夺模型的建立

目的 原代培养和鉴定大鼠皮层星形胶质细胞,并建立大鼠皮层星形胶质细胞氧糖剥夺(OGD)模型.方法 大鼠星形胶质细胞原代培养后,作胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫细胞化学染色鉴定,应用缺氧D-Hank液及缺氧培养罐行OGD后用台盼蓝染色及乳酸脱氢酶(LDH)漏出率检测细胞损伤程度.结果 星形胶质细胞培养至第9天, GFAP染色阳性细胞为98.54%±2.01%;星形胶质细胞经不同时间OGD处理后,台盼蓝染色呈现不同形态;OGD60 min时,星形胶质细胞LDH漏出率较对照组明显增加(P<0.05),并随时间递增.结论 成功完成大鼠皮层星形胶质细胞原代培养,星形胶质细胞在培养第9天可用于模型制备,成功建立星形胶质细胞OGD模型.     

窖蛋白1对大鼠星形胶质细胞糖氧剥夺损伤的影响

目的探讨糖氧剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)对体外培养的大鼠星形胶质细胞窖蛋白1(caveolin-1,Cav-1)的影响。方法原代培养出生24h内SD大鼠大脑皮质星形胶质细胞,分为对照组和OGD组(给予星形胶质细胞6h的OGD和24h的再灌注损伤,建立OGD损伤模型)。用多重免疫荧光的方法检测星形胶质细胞Cav-1表达,实时荧光定量PCR和Western blot的方法检测星形胶质细胞Cav-1表达的变化。根据小干扰RNA(siRNA)的原理,将Cav-1siRNA转染星形胶质细胞,采用CCK-8的方法检测星形胶质细胞活力。结果大鼠大脑皮质星形胶质细胞Cav-1普遍表达。与对照组比较,OGD组星形胶质细胞Cav-1mRNA和蛋白表达量下降(P<0.05)。siRNA转染后,与对照组比较,OGD组星形胶质细胞活力下降(P<0.05)。结论 SD大鼠大脑皮质星形胶质细胞Cav-1表达的下调,导致OGD后细胞损伤加重,提示Cav-1对星形胶质细胞具有保护作用。     

大鼠局灶脑缺血/再灌注星形胶质细胞的反应和NF-κBp65、ICAM-1在星形胶质细胞中的表达

目的 探讨星形胶质细胞在局灶脑缺血/再灌注后炎症反应中的作用。方法 健康雄性Wistar大鼠,随机分为正常对照组、假手术组、模型组、PDTC干预组、生理盐水组,采用大脑中动脉线栓法制备局灶脑缺血/再灌注模型,结合HE染色、原位杂交、免疫组化、荧光免疫组化双标,观察缺血侧星形胶质细胞的变化以及NF-κB p65、ICAM-1在星形胶质细胞的表达。结果 局灶脑缺血/再灌注24h脑梗死面积最大,PDTC干预组脑梗死面积明显减少；模型组GFAP和2种炎性介质的表达都强于其它组(p<0.05),PDTC干预组GFAP和2种炎性介质的表达均低于模型组(p<0.05)。结论 局灶脑缺血/再灌注后早期大量反应性星形胶质细胞出现在缺血区并表达NF-κB p65、ICAM-1,可能启动炎症级联反应,影响其它神经细胞的继发反应。     

苦参碱通过PKA/CREB信号通路对阿尔茨海默病大鼠认知障碍及神经炎症的调节作用

目的探讨苦参碱通过蛋白激酶A(PKA)/CAMP反应元件结合蛋白(CREB)信号通路对阿尔茨海默病(AD)认知障碍及神经炎症的调节作用。方法 48只SD雄性大鼠,随机分为假手术组、模型组、苦参碱组。处理7 d后,Morris水迷宫实验检测大鼠认知功能;放射免疫检测大鼠血清及海马组织中炎症因子白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6含量;Western印迹检测胶质细胞标记蛋白如离子钙结合蛋白(Iba)-1、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及PKA/CREB信号通路蛋白表达情况。结果与假手术组相比,模型组大鼠的逃避潜伏期明显延长,空间探索能力明显下降,Iba-1、GFAP的表达显著增高,炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6含量明显增多,p-PKA及p-CREB表达显著降低(均P<0.01)。与模型组相比,苦参碱组大鼠逃避潜伏期明显缩短,空间探索能力显著增强,Iba-1、GFAP的表达明显降低,炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6的含量明显下降,p-PKA及pCREB表达明显增强(均P<0.01)。与假手术组相比,苦参碱组各检测指标均无显著性差异(P>0.05)。结论苦参碱能显著改善AD大鼠认知障碍,抑制神经炎症,作用机制可能与PKA/CREB信号通路的活化有关。     

老龄与年轻大鼠脑出血后星形胶质细胞反应的比较

目的 观察年龄对脑出血后星形胶质细胞反应的影响.方法 年轻(3个月龄)和老龄(16个月龄)雄性SD大鼠脑内注入100 μl自体全血,观察与年龄相关的神经胶质细胞的反应.年轻、老龄模型组大鼠分别在脑内注血后6、12、24、72 h、7、14 d时间点处死动物(每组6只)进行GFAP免疫组化.假手术组作对照.观察GFAP染色的阳性细胞表达.结果 与年轻大鼠比较,老龄大鼠脑出血后3 d星形胶质细胞的反应较弱,GFAP阳性细胞数显著低于年轻大鼠,这种状况可持续到监测14 d(P<0.01).结论 老龄大鼠脑出血应答的星形胶质细胞反应较弱,老龄是影响脑出血后脑损伤的重要因素.     

降纤酶对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响

目的　探讨降纤酶对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响及其机制。方法　健康雄性Wistar大鼠 15 6只 ,随机分为降纤酶组和生理盐水组 ,采用大脑中动脉线栓模型 ,腹腔注射降纤酶 8U kg ,应用氯化三苯四氮唑染色、SP免疫组织化学检测胶质纤维酸性蛋白 (GFAP) ,观察缺血不同时间大鼠脑梗死体积比、神经元改变和星形胶质细胞数量、周长和积分光度值改变。结果　降纤酶治疗组大鼠脑梗死体积明显小于生理盐水组 ;反应性星形胶质细胞数量、周长、染色强度均明显高于生理盐水组 ;出血梗死明显少于生理盐水组。结论　降纤酶对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用 ,反应性星形胶质细胞增生 ,血管内皮细胞损伤的减轻是其脑保护机制之一     

Attenuation of brain damage and cognitive impairment by direct renin inhibition in mice with chronic cerebral hypoperfusion

The role of the renin-angiotensin system in cognitive impairment is unclear. This work was undertaken to test our hypothesis that renin-angiotensin system may contribute to cognitive decline and brain damage caused by chronic cerebral ischemia. C57BL/6J mice were subjected to bilateral common carotid artery stenosis with microcoil to prepare mice with chronic cerebral hypoperfusion, a model of subcortical vascular dementia. The effects of aliskiren, a direct renin inhibitor, or Tempol, a superoxide scavenger, on brain damage and working memory in these mice were examined. Chronic cerebral hypoperfusion significantly increased brain renin activity and angiotensinogen expression in C57BL/6J mice, which was attributed to the increased renin in activated astrocytes and microvessels and the increased angiotensinogen in activated astrocytes in white matter. Aliskiren pretreatment significantly inhibited brain renin activity and ameliorated brain p67(phox)-related NADPH oxidase activity, oxidative stress, glial activation, white matter lesion, and spatial working memory deficits in C57BL/6J mice with bilateral common carotid artery stenosis. To elucidate the role of oxidative stress in brain protective effects of aliskiren, we also examined the effect of Tempol in the same mice with bilateral common carotid artery stenosis. Tempol pretreatment mimicked the brain protective effects of aliskiren in this mouse model. Posttreatment of mice with aliskiren or Tempol after bilateral common carotid artery stenosis also prevented cognitive decline. In conclusion, chronic cerebral hypoperfusion induced the activation of the brain renin-angiotensin system. Aliskiren ameliorated brain damage and working memory deficits in the model of chronic cerebral ischemia through the attenuation of oxidative stress. Thus, direct renin inhibition seems to be a promising therapeutic strategy for subcortical vascular dementia.     

Rho激酶抑制剂对缺血性脑白质损伤的实验性干预研究

目的探讨Rho激酶对缺血性脑白质损害的影响及Rho激酶抑制剂对缺血性脑白质损害的干预效果。方法雄性Wistar大鼠60只,随机分为对照组、缺血组和治疗组,每组20只。缺血组和治疗组给予双侧颈总动脉结扎,对照组给予假手术处理;术后治疗组给予法舒地尔腹腔注射,对照组和缺血组给予生理盐水腹腔注射。手术1个月后评价测定各组大鼠脑深部白质纤维密度、星形胶质细胞数目以及Rho激酶mRNA表达水平。结果缺血组大鼠脑深部白质纤维密度较对照组明显降低,星形胶质细胞数目明显增多,Rho激酶mRNA表达水平明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组大鼠脑深部白质纤维密度较缺血组明显增高,星形胶质细胞数目明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Rho激酶异常活化与缺血性白质损害相关,Rho激酶抑制剂可改善慢性低灌注状态下大鼠脑白质损害。     

犬尿氨酸通路相关物质在大鼠慢性脑低灌注致认知障碍中的作用

目的观察慢性脑低灌注大鼠海马组织中干扰素-γ、TNF-α、诱导型NO合酶(iNOS)、吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)和犬尿氨酸(KYN)的表达,探讨慢性脑低灌注致认知功能损害大鼠海马组织中KYN通路相关代谢产物的变化特点。方法选择Wistar大鼠30只,随机分为假手术组15只和双侧颈总动脉永久性结扎组(2VO组)15只。制作慢性脑低灌注大鼠模型,Morris水迷宫检测2VO大鼠空间学习与记忆能力变化,免疫组织化学检测大鼠海马CA1区iNOS、干扰素-γ和TNF-α的表达,ELISA法检测IDO及KYN的水平。结果与假手术组比较,2VO组大鼠第3天开始逃避潜伏期明显延长,平台象限游泳距离百分比明显减少,iNOS、干扰素-γ及TNF-α阳性表达,IDO和KYN水平明显升高[(4.73±0.21)ng/ml vs(0.89±0.06)ng/ml和(1.55±0.12)ng/ml vs(0.19±0.02)ng/ml,P<0.05]。结论慢性脑灌注大鼠的病理生理过程包含着炎性反应,而炎性反应的发生很可能刺激了IDO和KYN的高表达,KYN和IDO的蓄积有可能参与其导致认知障碍的过程。     

解除颈动脉狭窄对慢性低灌注大鼠氧化损伤的影响

目的探讨解除颈动脉狭窄对慢性低灌注大鼠认知功能损伤的影响及其可能机制。方法选择雄性SD大鼠30只,将制模成功大鼠12只随机分为狭窄组和狭窄解除组,每组6只。另选6只大鼠为假手术组。采用分光光度法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛的含量。结果与假手术组比较,狭窄组大鼠SOD活性明显下降,丙二醛的含量明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);与狭窄组比较,狭窄解除组大鼠SOD活性明显升高,丙二醛含量明显下降,差异有统计学意义(P<0.01)。结论氧化损伤参与了重度颈动脉狭窄所致认知功能障碍的作用机制;且解除颈动脉狭窄改善认知功能障碍的作用机制可能与改善脑血流、抗氧化作用有关。     

慢性脑缺血对大鼠神经行为学和脑白质病理学变化的影响

目的观察慢性脑缺血及脑缺血合并高血压对大鼠脑白质行为学和病理学的变化的影响。方法5个月龄的正常Wistar雄性大鼠30只及自发性高血压Wistar雄性大鼠20只,随机分为单纯缺血组12只,假缺血组9只,空白对照组9只;高血压＋缺血组11只,单纯高血压组9只。采用双侧颈总动脉结扎法制作慢性前脑缺血模型。术后3个月用Morris水迷宫记录缺血前后大鼠空间记忆能力。免疫组化染色检测皮质下白质区髓鞘碱性蛋白（MBP）、高分子量神经丝蛋白（NF—H）和神经胶质酸性蛋白（GFAP）的表达情况。结果术后3个月结果：①单纯缺血组、单纯高血压组、高血压＋缺血组的逃避潜伏期均较假缺血组及空白对照组延长（P〈0．01）;单纯缺血组与单纯高血压组相比,差异无统计学意义;高血压＋缺血组比单纯缺血组及单纯高血压组逃避潜伏期延长趋势更明显。②与假缺血组比较,单纯缺血组、单纯高血压组、高血压＋缺血组皮质下白质GFAP阳性细胞数增多,MBP、NF—H阳性细胞数均减少,差异有统计学意义（P〈0．01）;单纯缺血组与单纯高血压组比较,差异无统计学意义。高血压＋缺血组GFAP阳性细胞增多、MBP、NF—H阳性细胞减少趋势均较单纯缺血组和单纯高血压组明显。结论慢性脑缺血可导致大鼠空间记忆能力下降;脑白质GFAP表达增多,MBP、NF—H表达减少可能参与其病理生理过程;高血压可以明显加重上述改变。     

银杏叶提取物对慢性脑低灌注大鼠认知功能的影响

目的观察银杏叶提取物(EGB)对慢性脑低灌注大鼠认知功能的影响,及对海马CA1区脑源性神经营养因子(BDNF)和N-甲基-D-门冬氨酸受体-2B(NMDAR-2B)表达的调节作用,探讨EGB保护认知功能的可能机制。方法将34只Wistar大鼠随机分为正常对照组(6只)、模型组(6只)、EGB高剂量组(8只)、EGB低剂量组(8只)和石杉碱甲组(6只)。采用Morris水迷宫系统检测各组大鼠学习记忆能力,采用免疫组织化学法观察大鼠海马CA1区BDNF和NMDAR-2B的表达。结果永久性结扎双侧颈总动脉术后第1个月时,各组大鼠学习记忆能力比较,差异无统计学意义(P0.05);术后第2个月时,与模型组比较,其他4组学习记忆能力明显下降,差异有统计学意义(P0.01),海马CA1区BDNF和NMDAR-2B表达明显增高,差异有统计学意义(P0.05)。结论海马CA1区BDNF和NMDAR-2B表达降低可能是大鼠认知功能障碍的诱因之一。EGB和石杉碱甲在改善慢性脑低灌注大鼠认知功能障碍方面具有同等效应。     

慢性脑缺血大鼠海马区Cdc42表达及其与认知功能障碍的相关性

目的研究慢性脑缺血大鼠海马组织中细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)表达的变化,探讨其在慢性脑缺血所致认知功能障碍中可能发挥的作用。方法大鼠40只,随机分为假手术组、持久性双侧颈总动脉结扎(2VO)8、10、12 w组,每组各10只。应用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,用免疫组织化学及Western印迹两种方法检测各组大鼠海马区Cdc42的表达。结果 Morris水迷宫显示手术组大鼠较假手术组大鼠逃避潜伏期明显延长(P<0.05);免疫组化及Western印迹均显示手术组大鼠海马区Cdc42表达明显低于假手术组(P<0.05)。结论 Cdc42表达量的降低可能参与了慢性脑缺血所致认知功能障碍的形成。     

Polychlorinated biphenyls exert selective effects on cellular composition of white matter in a manner inconsistent with thyroid hormone insufficiency

Developmental exposure to polychlorinated biphenyls (PCBs) is associated with a variety of cognitive deficits in humans, and recent evidence implicates white matter development as a potential target of PCBs. Because PCBs are suspected of interfering with thyroid hormone (TH) signaling in the developing brain, and because TH is important in oligodendrocyte development, we tested the hypothesis that PCB exposure affects the development of white matter tracts by disrupting TH signaling. Pregnant Sprague Dawley rats were exposed to the PCB mixture Aroclor 1254 (5 mg/kg), with or without cotreatment of goitrogens from gestational d 7 until postnatal d 15. Treatment effects on white matter development were determined by separately measuring the cellular density and proportion of myelin-associated glycoprotein (MAG)-positive, O4-positive, and glial fibrillary acidic protein (GFAP)-positive cells in the genu of the corpus callosum (CC) and in the anterior commissure (AC). Hypothyroidism decreased the total cell density of the CC and AC as measured by 4',6-diamidino-2-phenylindole dihydrochloride (DAPI) staining and produced a disproportionate decrease in MAG-positive oligodendrocyte density with a simultaneous increase in GFAP-positive astrocyte density. These data indicate that hypothyroidism reduces cellular density of CC and AC and fosters astrocyte development at the expense of oligodendrocyte density. In contrast, PCB exposure significantly reduced total cell density but did not disproportionately alter MAG-positive oligodendrocyte density or change the ratio of MAG-positive oligodendrocytes to GFAP-positive astrocytes. Thus, PCB exposure mimicked some, but not all, of the effects of hypothyroidism on white matter composition.     

老龄大鼠慢性脑灌注不足与认知功能障碍的研究

目的　探讨老龄大鼠慢性脑灌注脑损害和认知功能障碍及其机制。方法　 5 0只老龄大鼠用于实验 ,其中 2 0只接受环孢菌素A(CsA)胃灌治疗。用光镜和电镜观察组织学改变 ,免疫组织化学法检测免疫细胞的活动 ,采用微机控制穿梭箱双向主动回避反应实验系统检测大鼠认知功能。结果　大鼠持久性双侧颈总动脉结扎 (2VO)诱导的慢性脑灌注不足造成了脑组织广泛免疫细胞活动和进行性脑损害 ,导致了大鼠进行性学习和记忆能力下降。CsA治疗组大鼠脑内免疫细胞的活动明显减少 ,脑损害明显减轻 ,学习和记忆能力显著提高。结论　脑组织免疫细胞的活动贯穿于大鼠慢性脑灌注不足脑损害的病理过程 ,在脑损害和认知功能障碍的发生和发展中起重要作用 ;CsA可明显减轻脑内免疫细胞的活动 ,防治了大鼠的脑损害和认知功能障碍。     

慢性低灌注大鼠影像与病理对照研究

目的观察慢性低灌注大鼠影像学特征,确定头颅MRI特征、海马的容积测量与相对应的组织病理学改变之间的关系。方法雄性Wistar大鼠60只,随机分为缺血组(30只)和假手术组(30只)。利用Morris水迷宫方法检测术后1、2、3、4、5个月大鼠的记忆功能;分别行头颅MRI检查与海马容积测量,通过HE染色,光镜观察大鼠海马CA1区神经细胞的形态学变化。结果与假手术组比较,缺血组大鼠记忆功能障碍在造模后2个月即出现,逃避潜伏期明显延长,穿越平台次数明显减少(P0.01)。缺血1个月时海马CA1区可见神经元减少。双侧颈总动脉结扎术后3个月头颅MRI显示,长期慢性脑缺血后海马体积缩小。结论慢性低灌注大鼠认知功能降低,可能与海马缺血损害有关。海马的影像学改变相对滞后于病理改变。