表面氧化镍钛形状记忆合金的细胞毒性研究

目的：评价表面氧化镍钛形状记忆合金对细胞毒性的影响。方法：选择L-929细胞系作为细胞毒性的实验对象,将材料分为氧化组和非氧化组,用倒置相差显微镜观察L-929细胞在合金浸提液中的生长情况,通过MTT试验得出细胞在培养第24小时和第48小时的OD值和细胞相对增值率（RGR）,对表面氧化镍钛形状记忆合金做出细胞毒性评价。结果：氧化组合金的OD值高于非氧化组,两者之间有统计学差异。氧化组细胞生长旺盛,形态正常,细胞相对增值率高于非氧化组,细胞毒性分级为0级。结论：经过表面氧化处理的镍钛形状记忆合金的细胞毒性低于未处理的镍钛形状记忆合金材料,符合口腔正畸材料的临床应用的要求.     

细胞培养法评价自制镍铬烤瓷合金的细胞毒性

背景：具有良好抗腐蚀性能的镍铬铸造烤瓷合金正在临床广泛应用,但不容忽视的是其释放出的镍离子、铍离子具有明显的毒副作用。因此,改进合金的组成成分,提高其理化性能和生物相容性是目前研究的热点。 目的:检测自制镍铬烤瓷合金的体外细胞毒性,并与口腔科常用的镍铬合金、纯钛金属的细胞毒性进行比较。 设计、时间及地点：对比观察实验,于2006-05/12在中国医科大学中心实验室完成。 材料：细胞选用对数生长期的小鼠成纤维细胞 (L-929细胞)。自制镍铬烤瓷合金由中国科学院金属研究所提供,纯钛由日本松风公司提供,镍铬合金由贺利氏古莎齿科有限公司提供。 方法: 实验分为自制镍铬烤瓷合金、纯钛组、镍铬合金组,阳性对照组,阴性对照组。取96孔培养板,每板选出5组孔,每组重复孔12个,每孔中均加入浓度为1.0×108 L-1的细胞悬液100μL。在自制镍铬烤瓷合金、纯钛组、镍铬合金组孔中分别加入各种材料浸提液100μL,阳性对照组孔中加入铅浸提液100μL,使材料浸提液浓度最终为50%,在阴性对照组孔内加入RPMI 1640培养液100μL。 主要观察指标：分别于培养1,2,3,4, 5 d时采用四唑盐比色法测定各组吸光度值,计算相对增殖率。 结果: 3种金属材料组与阴性对照组之间的吸光度值差异均无显著性意义(P > 0.05),与阳性对照组之间的吸光度值差异有显著性意义(P < 0.05或P < 0.01)。纯钛组细胞增殖率>100%,细胞毒性为0级,自制镍铬烤瓷合金组和镍铬合金组的细胞增殖率为86.36%~99.49%,细胞毒性为1级,阳性对照组在培养3 d后细胞毒性增长至2级。 结论:自制镍铬烤瓷合金仅具有极微弱的细胞毒性,符合口腔材料临床应用的要求。 关键词：金属烤瓷合金;材料试验;MTT实验     

骨骼肌细胞线粒体通透性转换孔及bcl-2和bax mRNA表达与运动

背景：运动影响骨骼肌细胞的凋亡,而线粒体途径是介导细胞凋亡的一个重要途径。 目的：研究运动对大鼠骨骼肌线粒体通透性转换孔、凋亡调控基因bcl-2和bax表达的影响。 方法：将24只成年雄性SD大鼠随机分为3组：对照组正常饲养,6周游泳训练组进行6周的游泳训练,每周6次,一次性游泳力竭组于第6周进行一次力竭性游泳运动。应用紫外分光光度仪检测各组大鼠骨骼肌线粒体通透性转换孔的开放情况,应用RT-PCR测定大鼠骨骼肌bcl-2和bax mRNA的表达。 结果与结论：与对照组比较,6周游泳训练组大鼠骨骼肌线粒体通透性转换孔的开放程度变化不明显,bcl-2 mRNA的表达显著增加,bax mRNA的表达显著减少,bcl-2/bax mRNA比值显著增大(P < 0.01)。与对照组比较,一次性游泳力竭组大鼠骨骼肌线粒体通透性转换孔开放程度明显增加(P < 0.01),bcl-2 mRNA的表达显著减少,bax mRNA的表达显著增加,bcl-2/bax mRNA比值显著减小(P < 0.01)。说明运动训练可通过改变线粒体通透性转换孔的开放、调节bcl-2/bax表达,调控骨骼肌细胞凋亡。     

医用镍钛形状记忆合金羟基磷灰石涂层的制备及其生物活性

背景：目前多采用等离子喷涂技术在钛及其合金表面涂覆羟基磷灰石涂层,制备成复合材料。但由于羟基磷灰石与钛合金基体的热膨胀系数相差较大,涂层在冷却过程中易产生脱落。 目的：在医用镍钛形状记忆合金表面制备致密、均匀的羟基磷灰石生物陶瓷涂层,利用动物实验考查镍钛/羟基磷灰石涂层材料的生物相容性。 方法：利用阴极旋转法在低温条件下从含钙、磷离子的电解水溶液中在镍钛形状记忆合金表面沉积了磷酸钙涂层,经碱处理获得羟基磷灰石涂层。分析工艺参数对涂层结构的影响。利用动物植入实验对该复合材料的生物活性进行研究,并与镍钛/羟基磷灰石与Ca3(PO3)2•2H2O混合涂层复合材料、医用镍钛形状记忆合金、医用钛合金进行对比。 结果与结论：电化学沉积-碱处理方法适合在镍钛形状记忆合金表面制备羟基磷灰石生物活性陶瓷涂层,沉积电压、温度对涂层结构有强烈影响。4种不同材料植入动物体内后周围均出现不同程度的组织增生,在骨膜组织切片中都可见软骨细胞且有骨小梁形成,涂覆有羟基磷灰石涂层的植入材料组织反应较轻,相应的组织切片中所显示出的软骨细胞、骨小梁数量最多,分布均匀,表明羟基磷灰石涂层提高了医用镍钛形状记忆合金的生物活性。     

镍钛形状记忆合金表面改性后与成骨细胞的生物相容性

背景：尽管记忆合金在现代医学领域有着很广泛的应用(如骨科、牙科等),但不仅人的体液会对材料的稳定性造成影响,而且材料所释放的离子也对人体造成毒副作用。所以为了能够在临床更进一步使用这类记忆合金,对其进行表面改性是非常重要的。 目的：比较类金刚石镀膜形状记忆合金和非镀膜记忆合金与体外培养成骨细胞的生物相容性。 设计、时间及地点：对比观察,于2005-03/06在兰州大学第二医院骨科研究所完成。 材料：材料为规格为6 mm×7 mm×0.5 mm的类金刚石镀膜镍钛记忆合金和相同规格的非镀膜镍钛记忆合金各30片,由兰州大学材料学院提供。 方法: 将2种不同的镍钛合金分别加入12孔培养板中,将第3代成骨细胞悬液用DMEM培养基调节成10×108 L-1,等体积加入培养孔中,37 ℃、体积分数为5%CO2培养箱中培养。 主要观察指标：细胞的增殖情况;收集第1,2,3,4,5天的细胞培养液,测定其中的碱性磷酸酶活性和镍离子的含量。 结果：类金刚石镀膜镍钛记忆合金组的细胞增殖率及培养液中碱性磷酸酶活性明显高于非镀膜组;培养液中镍离子含量明显低于非镀膜组(P < 0.05)。 结论：类金刚石镀膜记忆合金的组织相容性明显优于非镀膜记忆合金。     

纯钛表面梯度生物活性涂层材料生物相容性研究

目的评价复合氧化及水热沉淀法制备纯钛表面梯度生物活性涂层材料生物相容性和骨诱导能力。方法通过对L929成纤维细胞和M373成骨细胞体外细胞培养进行细胞相容性实验和动物颅骨植入实验评价梯度羟基磷灰石(HA)涂层生物相容性和骨诱导能力。结果涂层表面L929成纤维细胞附着与增殖实验提示多孔的羟基磷灰石表面涂层对细胞的黏附生长有诱导作用,促进细胞在其表面繁殖。体外细胞毒性实验提示各组材料对M373成骨细胞的生长、增值、代谢无不良影响。在细胞接种后期HA试件组的细胞增殖数较其他组有显著增加。颅骨植入实验提示羟基磷灰石涂层组在诱导成骨反应方面优于其它组。结论复合氧化及水热沉淀法制备纯钛表面梯度生物活性涂层材料具有良好的生物相容性和骨诱导能力,值得作为新型颅骨修补材料。     

牙科四种烤瓷合金对人牙龈成纤维细胞P70S6K表达的影响

摘要 背景：研究已证实[1-3],部分烤瓷冠基底合金在体外具有抑制人牙龈成纤维细胞增殖作用。并诱导其凋亡,但烤瓷冠基底合金抑制细胞的具体机制尚不清楚。 目的：观察四种烤瓷冠基底合金在体外对人牙龈成纤维细胞p70s6k表达的影响,并借其来评价五种烤瓷基底冠合金的生物相容性。 设计、时间及地点：以各组人牙龈成纤维细胞p70s6k的表达量为观察对象,对比观察实验。于2009 07／10在辽宁医学院科技楼免疫组化及免疫印迹实验室完成 材料：取临床上12-18岁且无其他系统疾病的患者因正畸需拔除的健康的第一前磨牙的牙颈部的牙龈缘组织进行原代培养,取其5代对数期的细胞进行指标测定,牙龈组织取之于辽宁医学院附属二院的临床患者。镍铬、纯钛、金合金、钴铬合金由贺立氏古莎齿科有限公司提供。 方法：本实验分为5组,分别为镍铬、纯钛、金合金、钴铬合金四个实验组和一个对照组,对照组用未经合金处理的DMEM完全培养基孵育细胞,实验组即将镍铬、纯钛、金合金、钴铬合金加入DMEM中制备出合金浸提液,以10％ 浓度加入培养的人牙龈成纤维细胞培养液中,处理人牙龈成纤维细胞3天后,通过免疫印迹分析各组p70s6k的表达量。 主要观察指标： 各组合金浸提液干预72h对人牙龈成纤维细胞p70s6k表达量的影响 结果：1.细胞免疫组织化学染色,波形丝蛋白染色阳性、角蛋白染色阴性,证实细胞符合中胚层来源的成纤维细胞特点。 2.免疫印记结果显示,p70s6k表达的平均灰度值在对照组与金合金、钛合金组之间没有明显差异（P>0.05）,在金合金与钛合金组、镍铬与钴铬合金组之间也无明显差异（P>0.05）,而镍铬合金、钴铬合金与对照组、金合金、钛合金组之间均具有明显差异（P<0.01）。 结论：1.体外成功培养了人牙龈成纤维细胞 2.金合金、钛合金对人牙龈成纤维细胞p70s6k的表达无明显的影响,具有良好的生物相容性,与之相比,镍铬、钴铬合金的生物相容性则较差。 关键词：烤瓷合金;生物相容性;人牙龈成纤维细胞;核糖体S6蛋白激酶     

磁性附着体中铁素体不锈钢引起小鼠成纤维细胞L929的死亡模式*★

背景：作为自制磁性附着体外包裹材料的26-1超纯铁素体不锈钢在以往的实验中已初步证实其具有良好的生物学特性，但选用凋亡机制对其生物相容性进行深入研究和评价的报道较少。 目的：应用L929细胞从分子生物学水平探讨26-1超纯铁素体不锈钢引起细胞的死亡模式，评价26-1超纯铁素体不锈钢是否符合临床应用的生物相容性要求。 设计、时间及地点：分子生物学水平，对比观察实验，于2004-06/2005-06在中国医科大学中心实验室完成。 材料：26-1超纯铁素体不锈钢(超低碳，名义成分为Fe-26%Cr-1%Mo)，Tilite(含钛医用合金，名义成分为70%Ni-16%Cr-(4%~ 6%)Ti-其他合金元素)、Co-Cr合金(名义成分为Co-30%Cr-5%Mo)。利用蜡型铸造制备实验用材料，并将材料分别切割成直径12 mm的圆盘样品。 方法：①将3种材料与L929细胞联合培养，阴性对照组为RPMI1640正常培养细胞，孵育18 h和24 h后应用异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白结合碘化丙啶染色双参数技术对细胞死亡类型进行定量检测。②25%，50%，100%浓度的3种材料浸提液体外培养小鼠成纤维细胞L929 24 h后，采用流式细胞术碘化丙啶染色法检测L929细胞的凋亡率及细胞周期分布情况。 主要观察指标：①不同材料引起L929细胞凋亡和坏死的比例。②L929细胞凋亡率及细胞周期分布情况。 结果：各材料组均降低了L929细胞的生存率，其中细胞坏死水平在各材料组与阴性对照组之间差异无显著性意义，说明引起的致细胞病变效应主要是由细胞凋亡引起的，各材料组之间产生的效应差异无显著性意义。并且L929细胞凋亡具有明显的浓度依赖性及时间依赖性。3种实验用金属材料引起的L929细胞凋亡率在各浓度组间差异无显著性意义。 结论：26-1超纯铁素体不锈钢引起细胞的死亡方式主要是凋亡，符合临床应用材料的生物相容性要求。     

3种牙科金属材料对小鼠成纤维细胞凋亡的影响

背景：有关磁性附着体外包裹不锈钢材料引起的细胞凋亡,经检索CNKI数据库未见报道。 目的：观察磁性附着体的3种外包裹牙科金属材料钴铬合金、钛合金及奥氏体不锈钢对L-929细胞凋亡的影响。 设计、时间及地点：对比观察,实验于2007-06/12在中国医科大学中心实验室完成。 材料：选用对数生长期的小鼠成纤维细胞L-929,由中国医科大学附属第一医院肿瘤研究所提供。钴铬合金由贺立氏古莎齿科有限公司提供;钛合金由日本森田公司提供;奥氏体不锈钢由中国科学院金属研究所提供。 方法：将钛合金、奥氏体不锈钢和钴铬合金3种金属材料制成圆片形,放置于24孔板中,按浸提液体积与试件表面积比值为0.1 mL/cm2放入RPMI-1640培养液,即得到材料浸提液。实验分为5组：钛合金组、奥氏体不锈钢组和钴铬合金组分别将L-929细胞接种于含不同质量浓度(250,500 g/L,1 kg/L)钛金属、奥氏体不锈钢和钴铬金属的浸提液中;阴性对照组：RPMI 1640培养的L-929细胞;阳性对照组：100 mg/L丝列霉素处理的L-929细胞。 主要观察指标：流式细胞仪检测各组不同质量浓度浸提液干预24 h对L-929细胞凋亡的影响。 结果：除250 g/L质量浓度钛合金与阴性对照组之间细胞凋亡率无显著差异(P > 0.05)外,其他各组材料同一质量浓度或同一材料不同质量浓度之间细胞凋亡率相比,差异均有显著性意义(P < 0.01)。 结论：3种金属材料对细胞凋亡率均有显著影响,凋亡率大小依次为：钛合金组<奥氏体不锈钢组<钴铬合金组     

Bcl—2和Bax蛋白在人脑胶质瘤中的表达及意义

目的 探讨人脑胶质瘤细胞中bcl-2和bax蛋白的表达。方法 采用S－P免疫组化法,对63例人脑胶质瘤标本进行分析。结果 63例脑胶质瘤中,bcl-2阳性表达率53．97％,其表达率并随肿瘤恶性程度增加而增加。bax阳性表达率49．21％。5例正常脑组织两表达均阴性,在bcl-2阳性表达的肿瘤中,bax阳性表达率高于bcl-2阴性表达的肿瘤（P＜0．05）。8例复发性脑胶质瘤中,bcl-2阳性率87．50％,bax阳性率37．50％,bcl-2/bax比值增大。结论 bcl-2和bax均参与肿瘤凋亡调控,bcl-2表达与脑胶质瘤恶性程度呈正相关;bax表达可随bcl-2表达增加而增加;bcl-2强表达,bax弱表达,bcl-2/bax值增大可能是肿瘤复发的预示性指标。     

海藻糖对低温保存胸骨中bcl-2和bax基因表达的影响*

背景: 研究已经证实海藻糖对低温保存中的胸骨具有保护作用,但作用途径尚不清楚。 目的：观察海藻糖对低温保存胸骨bcl-2和bax基因表达的影响。 方法：新鲜配置4组保存液：低钾右旋糖酐组、低钾右旋糖酐+二甲基亚砜组、低钾右旋糖酐＋海藻糖组、低钾右旋糖酐＋二甲基亚砜组＋海藻糖组。切取SD大鼠胸骨后立即分别放入含上述4 种溶液的冻存管中低温保存。抽取新鲜大鼠胸骨组织和低温保存120 d的4组标本,采用RT-PCR方法检测不同保存液保存的胸骨及新鲜胸骨bcl-2和bax基因mRNA表达量。 结果与结论：低钾右旋糖酐+海藻糖组bcl-2表达量高于低钾右旋糖酐组、低钾右旋糖酐+二甲基亚砜组(P < 0.01),但bax表达量低于低钾右旋糖酐组、低钾右旋糖酐+二甲基亚砜组(P < 0.01);低钾右旋糖酐+二甲基亚砜组+海藻糖组bcl-2表达量最高,bax表达量最低,基本接近新鲜骨组织(P > 0.05)。结果提示海藻糖可能通过增强bcl-2基因、抑制bax基因的表达保护低温保存中的胸骨细胞活性,其与二甲基亚砜合用保护作用更好。     

高级氧化法改性镍钛合金表面后变形链球菌及白假丝酵母菌的黏附能力

摘要 背景：目前国内外对于镍钛合金改性的方法多种多样,目的就是根据镍钛合金的临床使用要求,通过各种方法不断提高镍钛合金的生物安全性、生物相容性和抗腐蚀性,以期在临床上获得更为广泛的应用前景。 目的：检测口腔医用镍钛合金高级氧化法改性前后,变形链球菌、白假丝酵母菌在材料表面黏附和定植的数量,分析高级氧化法改性对镍钛合金表面微生物黏附能力的影响。 方法：将抛光组和改性组放入含有变形链球菌(streptococcus mutans,C型,ATCC25175)和白假丝酵母菌(candida albicans,ATCC76615)的培养基中培养,在24,48,72 h 3个时间点将试件取出,标本原液进行10倍稀释,取稀释液 0.1 mL接种在相应培养基中,48 h后行菌落形成单位计数。 结果与结论：随着时间推移,抛光组和改性组中微生物的黏附量均增高;在同一个时间点,改性组表面微生物的黏附量少于抛光组(P < 0.01)。结果提示在唾液环境中,高级氧化法表面改性能够明显抑制镍钛合金表面对细菌的黏附能力。 关键词：镍钛合金;高级氧化;变形链球菌;白假丝酵母菌;黏附 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.42.018     

TiN/Ti纳米涂层修饰镍钛合金的体外腐蚀行为**

摘要 背景：拥有超弹性、形状记忆效应及良好抗疲劳性能的镍钛合金成为封堵器支架核心部分的最佳选择,但镍钛合金含50%的镍元素,其生物相容性仍有争议。 目的：通过体外浸泡实验和电化学实验测试用于治疗先天性心脏病的封堵器镍钛合金多弧离子镀改性前后的抗腐蚀性能。 方法：利用多弧离子镀在镍钛合金表面形成具有纳米梯度的TiN/Ti多层薄膜,通过镍钛合金在PBS中静态浸泡1个月,检测镍离子浓度;采用开路电位-时间曲线和极化曲线观察镀膜前后镍钛合金抗腐蚀性能。 结果与结论：在PBS静态浸泡中镍钛合金在1个月时释放量达到顶峰,而经过多弧离子镀改性后的镍钛合金没有镍离子的释放。开路电位-时间曲线和极化曲线表明改性后的镍钛合金的抗腐蚀性得到了很大提高。 关键词：纳米涂层;TiN/Ti;镍钛合金;腐蚀;镀膜 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2011.03.020     

高精度快速成型模型的制作精度及其体外细胞毒性

背景：快速成型技术在手术模拟与组织工程研究的应用日益广泛,而现场手术模拟和术前指导对模型的精度要求非常高,且在术中使用模型应要求其对人体无毒性。 目的：评估不同后处理方法快速成型模型的成型精度及其细胞毒性。 方法：采用选择性激光烧结技术制作标准圆柱体样品模型,并经浸蜡或树脂处理后,测量模型的高度和底面直径,评估其成型精度。然后采用噻唑蓝法研究不同后处理的模型件对小鼠成纤维细胞L929和小鼠前成骨细胞MC3T3-E1的毒性作用。实验分为石蜡处理组、树脂处理组、阴性对照组(未处理模型)、空白对照组(新鲜培养基)及阳性对照组(体积分数5%的DMSO),培养2 d后,490 nm处测量吸光度,并计算其相对增殖率和评价细胞毒性等级。 结果与结论：浸蜡、树脂处理后的模型以及模型原件的精度为95%~97%,误差为0.5~1 mm。模型浸提液培养L929和MC3T3-E1细胞2 d后,各实验组的细胞相对增殖率均大于80%,石蜡处理后的快速成型模型对L929和MC3T3-E1有较低的毒性作用,而树脂处理和未处理的模型对这两种细胞均无毒性作用,细胞毒性均为0~1级。     

Oxidative stress and Ca2+ influx upregulate calpain and induce apoptosis in PC12 cells

Calpain, a Ca2+-dependent cysteine protease, has previously been implicated in apoptosis or programmed cell death (PCD) in immune cells. Although oxidative stress and intracellular free Ca2+ are involved in neurodegenerative diseases, the mechanism of neuronal cell death in the central nervous system (CNS) due to these agents has not yet been defined. To explore a possible role for calpain in neuronal PCD under oxidative stress and Ca2+ influx, we examined the effects of H2O2 and A23187 on PC12 cells. Treatments caused PCD (light microscopy and TUNEL assay) with altered mRNA expression (RT-PCR) of bax (pro-apoptotic) and bcl-2 (anti-apoptotic) genes, resulting in a high bax/bcl-2 ratio. Control cells expressed 1.3-fold more microcalpain (requiring microM Ca2+) than mcalpain (requiring mM Ca2+). Expression of mcalpain was significantly increased following exposure to oxidative stress and Ca2+ influx. The mRNA levels of calpastatin (endogenous calpain inhibitor) and beta-actin (house-keeping) genes were not changed. Western analysis indicated degradation of 68 kDa neurofilament protein (NFP), a calpain substrate. Pretreatment of cells with MDL28170 (a cell permeable and selective inhibitor of calpain) prevented increase in bax/bcl-2 ratio, upregulation of calpain, degradation of 68 kDa NFP, and occurrence of PCD. These results suggest a role for calpain in PCD of PC12 cells due to oxidative stress and Ca2+ influx.     

bcl-2,bcl-x_L和bax mRNA在癫痫后DNA损伤诱导海马细胞凋亡中的作用

bcl-2及其同源基因bcl-xL的蛋白对DNA损伤诱导的细胞凋亡有保护作用，而另一有同源性的蛋白Bax是Bcl-2的拮抗物，促进细胞调亡。这些认识主要来自免疫系统的研究，但这组基因表达参与调节神经元生存与死亡的证据正在增加。方法：本研究通过鼠癫痫持续状态（SE）模型对海马细胞中这些基因的调节进行了检测。腹腔注射Bemegride诱导SD大鼠SE，摘记脑电图。以Northern杂交实验方法检测海马组织中bcl-2、bcl-XL和mRNA表达。结果：①中枢神经系统中有bcl-2、bcl-xL和baxmRNA表达；②SE后海马中bcl-2及bcl-xLmRNA升高，而baxmRNA略有降低。结论：海马bcl-2、bcl-xLmRNA增加及baXmRNA减少，表明bcl-2家族对SE后损伤的神经细胞起到调节作用。在其它涉及DNA损伤诱导调亡的神经疾病中也可能存在类似调节现象。     

Oxidative stress and Ca influx upregulate calpain and induce apoptosis in PC12 cells

Calpain, a Ca²⁺-dependent cysteine protease, has previously been implicated in apoptosis or programmed cell death (PCD) in immune cells. Although oxidative stress and intracellular free Ca²⁺ are involved in neurodegenerative diseases, the mechanism of neuronal cell death in the central nervous system (CNS) due to these agents has not yet been defined. To explore a possible role for calpain in neuronal PCD under oxidative stress and Ca²⁺ influx, we examined the effects of H₂O₂ and A23187 on PC12 cells. Treatments caused PCD (light microscopy and TUNEL assay) with altered mRNA expression (RT-PCR) of bax (pro-apoptotic) and bcl-2 (anti-apoptotic) genes, resulting in a high bax/bcl-2 ratio. Control cells expressed 1.3-fold more μcalpain (requiring μM Ca²⁺) than mcalpain (requiring mM Ca²⁺). Expression of mcalpain was significantly increased following exposure to oxidative stress and Ca²⁺ influx. The mRNA levels of calpastatin (endogenous calpain inhibitor) and β-actin (house-keeping) genes were not changed. Western analysis indicated degradation of 68 kDa neurofilament protein (NFP), a calpain substrate. Pretreatment of cells with MDL28170 (a cell permeable and selective inhibitor of calpain) prevented increase in bax/bcl-2 ratio, upregulation of calpain, degradation of 68 kDa NFP, and occurrence of PCD. These results suggest a role for calpain in PCD of PC12 cells due to oxidative stress and Ca²⁺ influx.