应用线性探针方法快速检测结核分枝杆菌耐药性的效果评价

目的评估线性探针方法快速检测结核分枝杆菌的耐药性效果。方法选取2013年-2014年江西省耐药监测点分离培养的阳性菌株,收集菌体,提取DNA,采用MTBDRplus试剂盒进行检测,以国际标准的比例法检测结果作为对照,评价其敏感度及特异度,并分析突变分布情况。结果检测利福平耐药的灵敏度为93.33%,特异度为98.35%;检测异烟肼的灵敏度为76.31%,特异度为98.83%。耐利福平基因突变频率最高的位点为rpo B H531L(57.89%),耐异烟肼基因突变频率最高的位点是kat G S315T1(60.61%)。结论可利用MTBDRplus快速检测利福平和异烟肼的耐药性,是快速发现耐药结核分枝杆菌的有效方法。     

MTBDR plus线性探针技术快速检测结核分枝杆菌耐药性的临床应用评价

目的评价线性探针杂交技术(简称HAIN技术)对耐药结核分枝杆菌的检测效果,评估其应用价值。方法利用传统罗氏培养及药敏试验和HAIN技术同时对开封市2010年4～10月份登记的453例涂阳肺结核患者进行耐多药检测,以传统罗氏培养及药敏试验为金标准对HAIN技术的检测效果进行评价。结果具有完整耐药检测结果的430例患者纳入分析。HAIN技术对新涂阳患者(P=0.589)和复治涂阳患者(P=1.000)耐药的检测效果与金标准差异无统计学意义。检测初治涂阳患者耐多药灵敏度为66.67%,Kappa值为0.56,阳性预测值为50.00%;检测复治涂阳患者耐多药的灵敏度为69.23%,Kappa值为0.61,阳性预测值为69.23%;所有检测结果的特异度均>91.00%,阴性预测值均>91.00%。结论 HAIN技术同传统方法检测涂阳肺结核患者耐药情况相比差异无统计学意义,但HAIN技术对初治涂阳患者耐多药的阳性预测值偏低,检测效果有一定局限性,可能会在实际应用中造成过度诊断。     

基因芯片技术对结核分枝杆菌耐药性检测的临床应用

目的评价基因芯片技术对结核分枝杆菌耐药性检测的效果。方法选取我院结核科2014年3月至2016年3月收治的涂片阳性的肺结核住院患者238例,取其痰标本,分别用基因芯片、传统的罗氏培养和药敏试验3种方法进行结核分枝杆菌的异烟肼耐药性检测和利福平耐药性检测;把罗氏培养和药敏试验的结果作为金标准,评价基因芯片技术的临床应用价值。结果基因芯片技术检测涂片阳性患者痰标本异烟肼耐药的情况与金标准无显著差异(P>0.05);利福平耐药的情况与金标准相比也无明显差异(P>0.05)。结论基因芯片能够快速、准确地检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药情况,是一种值得推广的临床实验室检测方法。     

线性探针技术在四川地区结核分枝杆菌耐药检测中的应用评价

目的评估线性探针技术(LPA)在四川地区结核分枝杆菌耐药检测中的应用价值。方法对2014-04收集的297例分枝杆菌分离培养物进行传统比例法药敏实验和线性探针检测,分析线性探针技术检测结核分枝杆菌对利福平、异烟肼耐药性及MDR-TB的灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值、一致性及Kappa值。结果以传统比例法药敏为金标准,线性探针技术检测利福平耐药情况的灵敏度为90.00%,特异度为96.08%,阳性预测值为78.26%,阴性预测值为98.39%,一致性为95.25%,Kappa值为0.81;检测异烟肼耐药情况的灵敏度为85.00%,特异度为97.87%,阳性预测值为91.07%,阴性预测值为96.23%,一致性为95.25%,Kappa值为0.85;检测MDR-TB的灵敏度为88.46%,特异度为97.40%,阳性预测值为76.67%,阴性预测值为98.87%,一致性为96.61%,Kappa值为0.80。利福平耐药菌株中,rpoB主要突变位点为531、526和516,异烟肼耐药菌株的主要突变位点为katG S315T1。结论线性探针技术能够快速准确的检测利福平、异烟肼的药物敏感性,有利于耐多药结核病的快速筛查和诊断。在基层应用时应加强管理和人员培训。     

临床分离结核分枝杆菌耐药性分析

目的：分析临床分离结核分枝杆菌的耐药特点。方法：用改良罗氏培养基间接药敏实验绝对浓度法检测结核分枝杆菌的耐药情况。结果：结核分枝杆菌总耐药率79．6％，耐多药率为58．2％。其中初治耐药率60．5％，初治耐多药率34.2％，复治耐药率91.7％，复治耐多药率80．0％。结论：耐药结核分枝杆菌感染是临床治疗结核病的一个严重问题。分析临床分离结核分枝杆菌菌株的耐药特点，对控制结核病传染及指导临床合理用药具有重要意义。     

基因芯片技术快速检测结核分枝杆菌耐药性的临床应用研究

目的研究基因芯片快速诊断技术检测结核病患者耐药性的临床应用效果。方法从2014年1月至2016年7月,在连云港市结核病定点医院(第四人民医院)连续纳入1 297例肺结核患者。按照结核病防治规划实施工作要求收集患者痰标本,分别进行基因芯片检测、传统固体罗氏培养和传统药物敏感试验。结果最终共有1 100例肺结核患者纳入最终的结果分析。以传统药敏结果为金标准,基因芯片检测利福平、异烟肼与耐多药的灵敏度与特异度分别为84.48%,98.18%;81.91%,97.42%;80.56%,99.15%。在rpo B的所有耐药基因位点上共检测到突变68例,以rpo B531位点突变率为主占36.76%。在kat G315与Inh A-15位点上共检测到突变103例,kat G315、Inh A-15突变率分别达到60.19%、33.01%。基因芯片技术共检出38例耐多药患者。结论基因芯片技术直接应用于痰标本检测利福平、异烟肼耐药性有较高的灵敏度和特异度,一致性较好,可用于耐多药结核病早期快速筛查和诊断,以弥补传统药敏试验的不足。     

结核分枝杆菌耐药性检测技术进展

结核病是全球关注的严重公共卫生问题之一,尤其是亚洲和非洲居民死亡的主要原因。WHO估计2006年全球有920万例新发结核病患者（139/10万）。亚洲（东南亚和西太平洋地区）占全球病例的55%,非洲31%。随着化疗药物的临床应用,结核病在全球范围内得到了有效控制,但是近年来由于药物应用的不合理和不规范,导致结核分枝杆菌耐药形势日益严重,给结核病的防治带来巨大挑战。耐药菌株的播散是结核病再次全球性流行的根本原因。耐药株引起的耐药性结核病甚至耐多药,已成为临床治疗中的难题。     

结核分枝杆菌耐药性检测技术研究进展

结核病是由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）感染引起的一种危害人类健康的慢性传染病,是我国面临的重要公共卫生问题之一。近年来,结核病在我国总体呈现稳步上升的态势,疾病负担日益增加。MTB耐药,尤其是多重耐药、广泛耐药,是结核病临床治疗面临的主要问题,MTB耐药性检测已成为结核病临床治疗、监测的关键性问题。目前MTB耐药检测方法主要有表型检测、分子检测以及新型检测技术。本研究对现有MTB耐药性检测的技术方法进行综述,为结核分枝杆菌耐药性检测新型技术的开发提供参考。     

结核分枝杆菌临床分离株耐药性分析

[目的]了解肺结核分枝杆菌耐药性特点,为临床用药提供参考。[方法]收集2003年9月～2006年5月门诊痰菌阳性标本,获取培养阳性标本136份,采用绝对浓度间接法试验对全部培养阳性标本进行4种抗结核药物(RFP、INH、SM、EMB)的耐药性测定。[结果]总耐药率62.5%(85),初始耐药率47.1%(40),初始耐多药率31.8%(27),获得性耐药率88.2%(45),获得性耐多药率58.8%(30)。耐药顺序为RFP﹥INH﹥SM﹥EMB,耐药率分别为:51.5%,48.5%,26.5%,19.9%。[结论]本地结核菌耐药率远远高于全国平均耐药率(46%),因此应加强抗结核药物的耐药性监测,根据药敏结果选择有效化疗方案,彻底治疗结核病人。     

结核分枝杆菌耐药性的研究

目的通过对锦州市传染病医院临床痰标本结核分枝杆菌耐药率的分析,了解锦州地区结核分枝杆菌的耐药状况指导合理用药。方法取锦州市传染病医院2012年7月-2013年7月抗酸杆菌培养阳性的菌株500株,采用绝对浓度法进行4种抗结核药物的敏感性试验。结果在500株结核分枝杆菌中,278株对4种抗结核药物皆敏感,222株至少对一种药物敏感,结核菌的总耐药率为44．4％（222／500）。仅对一种抗结核药物耐药的菌株56株,总的耐单药率为11．2％。结论锦州市地区结核分枝杆菌对4种一线抗结核药物的耐药情况严重,应当引起相关医疗部门重视。     

线性探针检测技术对痰标本中耐药结核分枝杆菌快速检测的应用评价

目的 评价线性探针检测技术(LPAs)直接从痰标本中检测结核分枝杆菌复合群及其对耐多药结核病的快速检测。方法 连续收取193例临床涂片抗酸染色阳性的痰标本,直接用LPAs法从痰标本中进行结核分枝杆菌复合群及其对利福平和异烟肼耐药性的检测,结果与MGIT 960系统药物敏感性试验以及利福平、异烟肼耐药相关基因rpoB、katG、inhA和ahpC的基因测序结果进行比较,评价线性探针检测技术从痰标本中检测耐药结核分枝杆菌的灵敏度、特异度和符合率。统计学分析采用kappa检验。结果 LPAs法对涂阳痰标本结核分枝杆菌复合群检测的灵敏度为100.0%,耐利福平、耐异烟肼和耐多药结核分枝杆菌复合群检测的灵敏度分别为96.0%(48/50)、92.8%(64/69)和90.0%(45/50),特异度分别为99.3%(142/143)、100.0%(124/124)和99.3%(142/143),符合率分别为98.4%(190/193)、97.4%(188/193)和96.9%(187/193)。结论 LPAs法能够直接从涂阳痰标本中检测耐多药结核分枝杆菌,对耐利福平和耐异烟肼菌株具有较高的灵敏度和特异度,与MGIT 960系统药物敏感性试验结果的一致性较好,能够明显缩短从样本接收到得到药物敏感性试验结果的报告周期,为临床准确、快速地诊断耐多药结核病提供可靠的实验室依据,有利于耐药结核病的早期诊断。     

鄞州区结核分枝杆菌耐药性研究

目的了解鄞州区肺结核患者结核分枝杆菌的耐药水平,为本区的结核病诊治提供参考依据。方法对鄞州区疾病预防控制中心2008—2009年收集的结核分枝杆菌用WHO推荐的比例法进行异烟肼(H)、利福平(R)、链霉素(S)和乙胺丁醇(E)的耐药性检测。结果 299例初复治患者的痰培养分离的结核分枝杆菌,总耐药率为30.77%,初始耐药率和获得性耐药率分别为27.48%和54.05%;耐多药率为6.69%,其中初始和获得性耐多药率分别为4.20%和24.32%。4种抗结核药物的耐药率由高到低分别为异烟肼(19.40%)、链霉素(16.05%)、利福平(9.36%)和乙胺丁醇(6.02%)。不同性别、年龄、户籍的耐药率差异无统计学意义。结论鄞州区结核病耐药形势依然严峻,应继续加强结核病的防治工作。     

非结核分枝杆菌耐药性的观察

近年来，结核病的发病率有上升趋势，难治、复治性结核有所增加。在难治、复治性结核病人中，有部分是非结核分枝杆菌引起的非结核分枝杆菌病，常常被人们疏忽。我们对我院1986—1996年的86例非结核分枝杆菌的耐药性进行了观察，现将结果报告如下：一、材料与方法1．标本来源均     

应用探针熔解分析法检测结核分枝杆菌rpoB基因突变

目的 研究结核分枝杆菌利福平耐药突变实时PCR检测试剂盒(探针熔解分析)的临床应用价值.方法 用37株非结核分枝杆菌考察该方法的特异性,用菌株H37Rv考察其检测限,并检测962份结核分枝杆菌培养标本的rpoB基因利福平耐药决定区突变,检测结果经测序验证.结果 37株非结核分枝杆菌中仅有3株出现耐药突变峰,检测限考察结果表明该方法每反应可重复检出30个菌.用该试剂盒检测962份标本,检出突变株186份,野生株751份,扩增失败标本25份.选取2009年11月以后的标本中试剂盒检出为突变的标本112份,并数字表法随机选取200份试剂盒检出为阴性的标本,进行测序验证,除5份测序失败其余107份标本的DNA序列分析结果与试剂盒检测结果一致.结论 该试剂盒准确快速,方便易行,是检测结核分枝杆菌rpoB基因突变的有力工具.

Abstract：

Objective To evaluate the clinical performance of a probe melting analysis ( PMA)-based real-time PCR detection kit in rapid detection of rifampin-resistant mutations in Mycobacterium tuberculosis (MTB). Methods The specificity of the assay was evaluated by detecting 37 non-tuberculous mycobacteria (NTM) ,and the detection limit of the method was evaluated by genomic DNA of a standard strain H37Rv. Finally, 962 clinical isolates were analyzed with the PMA assay by detecting mutations in rifampin resistance-determining region (RRDR) of rpoB gene, and results were verified with DNA sequencing. Results Among 37 NTM strains,three strains showed drug resistant mutation signals. The PMA method could detect down to 30 bacteria per reaction. Sample analysis showed that 186 of 962 isolates were mutants,751 isolates were wild type and 25 isolates failed to give amplification signals. Among the mutant samples detected, 112 samples from November 2009 to April 2010 were further analyzed by sequencing, as well as 200 wild-type samples. The results showed a complete agreement with the PMA assay except for 5 samples failed in sequence analysis. Conclusion The PMA assay is rapid, accurate and easy-to-use, and thus can be used for detection of rifampin-resistant in clinical isolate samples.     

反向斑点杂交技术在结核分枝杆菌耐药性检测中的应用研究

目的利用反向斑点杂交技术，建立结核分枝杆菌对利福平（RFP）、异烟肼（INH）、链霉素（SM）和乙胺丁醇（EMB）耐药相关基因突变的快速检测方法。方法根据结核分枝杆菌标准株H37Rv序列，自行设计针对rpoB、katG、inhA、rpsL和embB基因中常见耐药突变区的系列寡核苷酸探针，制成膜芯片，并对64例结核分枝杆菌临床株的基因突变情况进行检测。结果在36株RFP耐药菌中，有32株被检出在rpoB基因上发生突变，突变检出率为88．89％（32／36）；在39株INH耐药菌中，有30株被检出在katG或inhA基因上发生基因突变或缺失，检出率为76．92％（30／39）；在34株SM耐药菌中，有25株被检出在rpsL基因分析部位发生突变，检出率为73．5％（25／34）；在32株EMB耐’药菌中，有19株在embB基因分析部位发生突变，检出率为59．4％（19／32）。膜芯片检出的突变与基因测序结果一致。结论用膜芯片检测结核分枝杆菌对利福平（RFP）、异烟肼（INH）、链霉素（SM）和乙胺丁醇（EMB）四种主要一线抗结核药的耐药性，具有较高的特异性和敏感性，可作为常规药敏方法的补充，用于指导开展早期、有效的临床化疗。     

PCR-SSCP检测结核分枝杆菌利福平耐药性

目的:建立PCR-SSCP快速检测结核分枝杆菌利福平耐药相关基因rpoB突变。方法:用比例法筛选出70株耐利福平结核分枝杆菌临床分离株,用PCR-SSCP方法检测菌株ropB基因突变,并与比例法检测结果进行对比。结果:70株耐利福平菌株中,单耐利福平菌株为12株,同时耐福平和异烟肼菌株为58株。扩增菌株rpoB基因,70株结核分枝杆菌临床分离株ropB基因突变率为91.43%(64/70),其中,耐多药菌株ropB基因突变率为91.38%(53/58),单耐利福平菌株ropB基因突变率为91.67%(11/12)。结论:用PCR-SSCP技术检测结核分枝杆菌RFP耐药性所用时间大幅缩短,检测出的结果与传统方法一致率高,但结核分枝杆菌表型耐药菌株,存在rpoB基因位点无突变的现象,是否存在其他耐药位点或耐药机制,值得深入研究。     

云南省结核分枝杆菌耐药性监测研究

目的了解云南省耐药结核病人的分布情况及流行特征,为全省结核病控制及耐药监测提供依据。方法对7个监测点2004年2~11月所有痰涂片阳性的病人的痰液结核杆菌培养,并作四种抗结核药物药敏监测。结果1、初始耐药率27.27%,其中耐INH、耐SM、耐PFP、耐EMB分别为13.52%、10.82%、4.06%、4.06%。获得耐药率为43.75%,其中耐INH、耐PFP、耐EMB、耐SM分别为34.38%、34.38%、28.13%、21.87%。2、初始耐药肺结核病人16例,其中耐单药11例,耐多药5例;获得性耐药肺结核病人14例,其中耐单药3例,耐多药11例。结论本次结果初始耐药率接近全国水平,如果不加以重视,耐药菌的产生,不仅会造成结核病治疗的困难,而且将成为原发耐药的祸根,形成新的流行病学问题,     

线性探针耐药技术对两种方法培养的结核分枝杆菌药敏结果差异评价

目的比较BACTEC MGIT 960液体培养法和比例法培养出的结核分枝杆菌(MTB)对利福平(RFP)和异烟肼(INH)药敏结果的符合性,探讨不同方法下药敏结果不一致的原因和线性探针耐药技术对临床诊断的价值。方法从378例临床分离结核分枝杆菌中筛选出29株两种方法药敏结果不一致菌株,再用线性探针耐药检测技术检测MTB对RFP和INH耐药相关的rpoB、katG和inhA基因8个位点的基因突变判断其耐药性,比较三者结果的符合率。结果 BACTEC MGIT 960液体法和比例法药物敏感性试验检测MTB对RFP、INH耐药性符合率分别为89.1%和88.9%;线性探针耐药法和BACTEC MGIT 960液体法对RFP、INH耐药性符合率分别为100.00%和94.44%;线性探针耐药法和比例法和对RFP、INH耐药性符合率分别为87.5%和82.35%;线性探针耐药法分析29株MTB中发现有12株可能存在异质性耐药。结论线性探针耐药法和BACTEC MGIT 960液体法对RFP、INH耐药性符合率明显高于线性探针耐药法和比例法;线性探针耐药检测技术比表型耐药更具精确、快速、敏感性高的特点,对结核分枝杆菌的耐药监测和早期治疗方案的确立具有重要意义。     

131株结核分枝杆菌耐药性分析

结核病是目前严重威胁人类健康的重大传染性疾病之一，但只要早期诊断和合理用药，绝大多数的结核病人可以治愈。多年来，化学疗法在控制结核病的流行上发挥着巨大的作用，使约90％以上的初治肺结核病人获得治愈。但是由于抗结核化学药物的广泛应用，特别是在治疗过程中不规定用药，导致出现耐药结核分枝杆菌，尤其是多重耐药结核分枝杆菌，造成目前结核病疫情有所回升，成为结核病疫情较难控制的一个重要原因。2004～2005年对来我院进行治疗的痰涂片阳性肺结核病人分离的结核分枝杆菌进行耐药性检测，现将结果报告如下。