miR-377对子痫前期胎盘滋养层细胞HTR-8/SVneo凋亡和氧化应激的影响及MAPK/ERK信号通路在其中的作用

目的探讨miR-377对子痫前期胎盘滋养层细胞HTR-8/SVneo凋亡和氧化应激的影响,分析MAPK/ERK信号通路在其中的作用。方法将培养的HTR-8/SVneo细胞分为4组,分别为对照组、过氧化氢(H_(2)O_(2))组、miR-377模拟物组和miR-377+U0126组。对照组不进行转染;H_(2)O_(2)组以250μmol/L的H_(2)O_(2)作用24 h;miR-377模拟物组和miR-377+U0126组通过脂质体Lipo-fectamine3000将H_(2)O_(2)作用24 h后的HTR-8/SVneo细胞转染miR-377模拟物,miR-377+U0126组转染miR-377模拟物前1 h,加入浓度为20μmol/L的U0126处理HTR-8/SVneo细胞,转染48 h后进行后续实验。应用实时荧光定量PCR检测miR-377的表达,应用CCK-8实验检测HTR-8/SVneo细胞增殖情况,应用比色法检测HTR-8/SVneo细胞中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量,应用酶标法检测HTR-8/SVneo细胞中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,应用Transwell法检测HTR-8/SVneo细胞迁移数量,应用流式细胞仪检测HTR-8/SVneo细胞凋亡情况,应用Western blot检测MEK1/2、ERK1/2、P-MEK1/2、P-ERK1/2蛋白表达。结果miR-377在H_(2)O_(2)组和对照组中的表达量分别为(1.02±0.09)和(0.31±0.04),H_(2)O_(2)组中miR-377的表达量显著低于对照组(t=19.073,P<0.05)。48、72、96 h时,3组HTR-8/SVneo细胞增殖能力比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。H_(2)O_(2)组和miR-377模拟物组HTR-8/SVneo细胞增殖、迁移能力明显低于对照组(均P<0.05),miR-377模拟物组HTR-8/SVneo细胞增殖、迁移能力明显高于H_(2)O_(2)组(均P<0.05);H_(2)O_(2)组和miR-377模拟物组HTR-8/SVneo细胞凋亡率明显高于对照组(均P<0.05),miR-377模拟物组HTR-8/SVneo细胞凋亡率明显低于H_(2)O_(2)组(P<0.05);H_(2)O_(2)组和miR-377模拟物组HTR-8/SVneo细胞中MDA水平明显高于对照组(均P<0.05),miR-377模拟物组HTR-8/SVneo细胞中MDA水平明显低于H_(2)O_(2)组(P<0.05);H_(2)O_(2)组和miR-377模拟物组HTR-8/SVneo细胞中SOD和GSH-Px水平明显低于对照组(均P<0.05),miR-377模拟物组HTR-8/SVneo细胞中SOD和GSH-Px水平均显著高于H_(2)O_(2)组(均P<0.05);H_(2)O_(2)组和miR-377模拟物组HTR-8/SVneo细胞中MEK1/2和ERK1/2磷酸化水平明显低于对照组(均P<0.05),miR-377模拟物组HTR-8/SVneo细胞中MEK1/2和ERK1/2磷酸化水平显著高于H_(2)O_(2)组(均P<0.05);与miR-377模拟物组相比,miR-377+U0126组中HTR-8/SVneo细胞迁移能力显著降低,凋亡率和MDA水平显著升高,SOD和GSH-Px水平显著降低(均P<0.05)。结论miR-377通过激活MAPK/ERK信号通路减弱了子痫前期HTR-8/SVneo细胞的凋亡和氧化应激。     

miR-30c-5p通过调节Notch1的表达抑制人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo的迁移、侵袭和管状形成

目的：探讨miR-30c-5p通过调节Notch1表达对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭和管状形成调控的机制,确定其在子痫前期发病中的潜在作用。方法：在体外对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo进行培养,慢病毒系统构建miR-30c-5p过表达及敲低稳转HTR-8/SVneo细胞系。分为对照组、导入miR-30c-5p过表达质粒组和导入miR-30c-5p敲低质粒组。通过荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-30c-5p和Notch1基因的表达量,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中Notch1蛋白的表达量,划痕愈合实验、Transwell侵袭实验和管状形成实验分别检测各组细胞的迁移、侵袭和管状形成能力。结果：与对照组比较,miR-30c-5p过表达质粒组中细胞的miR-30c-5p基因表达水平升高(P<0.0001),细胞Notch1蛋白表达水平下降(P<0.01),细胞迁移(P<0.01)、侵袭(P<0.001)和管状形成能力(P<0.05)均受到抑制。反之,miR-30c-5p敲低质粒组中细...     

miR-494通过抑制SIRT1表达调节人宫颈癌Hela细胞系增殖和迁移

目的观察宫颈癌组织中miR-494的表达情况及其对宫颈癌细胞系Hela增殖和迁移的影响,并对其相关机制进行初步的分析。方法 RT-PCR方法检测miR-494在宫颈癌组织和宫颈癌细胞系中的表达情况。克隆形成实验检测miR-494对宫颈癌细胞系Hela增殖能力的影响;划痕实验检测miR-494对宫颈癌细胞系Hela迁移能力的影响。Target Scans软件预测miR-494可能的靶基因,并采用荧光素酶报告基因实验验证预测的靶基因。Western blot方法检测miR-494对预测靶基因表达的影响。结果 miR-494在宫颈癌组织和宫颈癌细胞系中的表达较正常组织相比显著降低(P0.01)。转染miR-494可显著抑制Hela细胞的增殖和迁移能力(P0.01),而转染anti-miR-494可增加Hela细胞的增殖和迁移能力(P0.01)。Targetsscan软件预测miR-494可能的靶基因为去乙酰化酶1(sirtuin 1,SIRT1),且得到荧光素报告实验结果证实。Western blot结果显示转染miR-494可显著抑制Hela细胞中SIRT1的表达(P0.01),而转染anti-miR-494可增加Hela细胞中SIRT1的表达(P0.01)。结论 miR-494可通过调节SIRT1的表达而发挥宫颈癌抑制作用。     

miR-335-3p通过靶向FOXD1发挥对骨肉瘤细胞肿瘤生物学行为的抑制作用

目的 探讨miR-335-3p通过靶向调控FOXD1基因抑制骨肉瘤(osteosarcoma, OS)细胞的增殖和迁移的作用及机制。方法 使用RT-PCR法评估miR-335-3p在OS组织和临近组织，正常人成骨细胞系(hFOB1.19f)和OS细胞系(SAOS2、U2OS、MG63)中的表达；使用细胞增殖实验测定研究miR-335-3p过表达对U2OS、MG63的活力的影响；EDU染色和DAPI染色评估miR-335-3p过表达对U2OS、MG63迁移和侵袭的影响；荧光素酶报告基因测定法确定miR-335-3p靶向调控FOXD1编码基因发挥作用；蛋白质免疫印迹法检测OS细胞中FOXD1蛋白表达；pcDNA-FOXD1转染OS细胞，并评估细胞增殖、迁移和侵袭的水平。结果 miR-335-3p在OS癌组织和细胞中低表达；利用miR-335-33p mimic转染细胞后，可在体外抑制肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭；miR-335-3p通过直接结合FOXD1 mRNA的3′-UTR发挥抑制作用，从而负面调节FOXD1的表达；miR-335-3p通过靶向调节FOXD1的表达，进而抑制OS癌细胞的增殖...     

miR-218对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

目的探讨上调miR-218基因表达对子宫内膜癌细胞活力、凋亡的影响及机制。方法以Lipofectamine TM2000为载体,将miR-218模拟物(mimics)及阴性对照(Scramble)转染人子宫内膜癌HEC-1B细胞,未转染的细胞作为空白组,转染48 h,qRT-PCR检测miR-218 mRNA表达; MTT法及流式细胞术分别检测细胞活力和凋亡率; Western blotting检测HMGB1、β-catenin、cyclin D1、Bax蛋白表达。以转染miR-218 mimics后的HMGB1表达及双荧光素酶报告实验验证HMGB1与miR-218的靶向关系。结果转染miR-218 mimics的HEC-1B细胞miR-218 mRNA表达明显高于空白组,差异有统计学意义(P0. 05)。miR-218 mimics组与空白组比较细胞活力降低,凋亡率升高,HMGB1、β-catenin和cyclin D1表达降低,Bax表达升高,差异均有统计学意义(P0. 05)。miR-218 mimics可明显抑制野生型HMGB1-3'UTR质粒转染后的细胞荧光素酶活性,而对突变型HMGB1-3'UTR质粒转染后的细胞荧光素酶活性无影响。结论 miR-218可能通过靶向HMGB1抑制Wnt/β-catenin信号降低子宫内膜癌细胞活力,诱导细胞凋亡。     

微小RNA-195靶向趋化因子5抑制滋养细胞增殖、迁移和侵袭及其机制研究

目的 探讨微小RNA(miR)-195通过靶向调控趋化因子(CCL)5对胎盘滋养细胞增殖、侵袭的影响及其分子机制。方法 采用随机数字表法,选取2018年8月至2019年8月在徐州市中心医院定期产前检查的70例孕妇,按照是否合并子痫前期(PE),将其分为PE组(n=40)和对照组(n=30)。选取2组受试者分娩时自胎盘母-胎界面组织中分离的滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞为研究对象,针对PE组胎盘滋养层细胞分别转染miR-195及RNA阴性对照序列。根据转染结果,将PE组胎盘滋养层细胞分为miR-195 mimics亚组、miR-NC亚组、miR-195+pcDNA亚组、miR-195+pcDNA-CCL5亚组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测研究组与对照组胎盘组织中miR-195、CCL5 mRNA相对表达水平;MTT实验检测各亚组滋养细胞增殖能力,Transwell侵袭实验观察细胞侵袭能力,细胞划痕实验观察各亚组滋养细胞迁移能力,Western blotting法检测CCL5、PI3K及AKT蛋白相对表达水平;Pearson相关性分析对miR-195及CCL5表...     

miR-7在心肌细胞缺氧复氧模型中的表达及对心肌细胞凋亡的影响

目的探讨miR-7在心肌细胞缺氧复氧模型中的表达及对心肌细胞凋亡的影响。方法构建心肌细胞缺氧复氧模型,RT-PCR检测心肌细胞中miR-7的表达水平。心肌细胞转染miR-7模拟物和抑制物,RT-PCR检测转染效果。流式细胞术检测miR-7模拟物和抑制物对缺氧复氧心肌细胞凋亡的影响,试剂盒检测细胞中乳酸盐脱氢酶(LDH)水平,Western blot检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白水平。结果缺氧复氧心肌细胞模型中miR-7的表达水平明显高于正常培养的心肌细胞(P<0.01)。miR-7模拟物能够提高心肌细胞中miR-7的表达水平,而miR-7抑制物能够抑制心肌细胞中miR-7的表达。miR-7模拟物能够降低缺氧复氧心肌细胞的凋亡率和细胞中cleaved caspase-3表达,抑制心肌细胞分泌LDH,促进细胞中p-Akt的表达。miR-7抑制物能够促进缺氧复氧心肌细胞凋亡和细胞中cleaved caspase-3表达,促进心肌细胞分泌LDH,抑制细胞中p-Akt的表达。结论 miR-7在心肌细胞缺氧复氧模型中表达升高。miR-7能够降低缺氧复氧心肌细胞凋亡,干扰miR-7表达能够促进缺氧复氧心肌细胞凋亡,作用机制可能与Akt信号通路有关。     

二苯甲酮-3对绒毛外滋养层细胞的增殖及miR-17-92基因簇表达的影响

目的研究二苯甲酮-3(benzophenone-3,BP-3)对绒毛外滋养层(HTR-8/Svneo)细胞的增殖及miR-17-92基因簇表达的影响。方法将HTR-8/Svneo细胞分别暴露于含终浓度0(溶剂对照)、0.01、0.1、1 mg/L BP-3的培养基中培养24 h。采用CCK-8法检测细胞活性,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,采用Real-time PCR方法检测细胞miR-17-92基因簇的表达水平。结果与溶剂对照组相比,1 mg/L BP-3染毒组HTR-8/Svneo细胞的存活率和miR-17、miR-19a mRNA的表达水平均降低,差异有统计学意义(P0.05);而各剂量BP-3染毒组HTR-8/Svneo细胞的凋亡率及miR-18a、miR-19b、miR-20a、miR-92a mRNA的表达水平均无明显变化。且随着BP-3染毒剂量的升高,HTR-8/Svneo细胞的存活率呈下降趋势,凋亡率呈上升趋势。与抑制剂对照组相比,抑制miR-17和miR-19a表达后HTR-8/Svneo细胞存活率均降低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 BP-3可通过抑制miR-17-92簇中miR-17、miR-19a的表达,抑制HTR-8/Svneo细胞增殖。     

干扰miR-21靶向调控PDCD4、PTEN和TPM1抑制肝癌细胞增殖和侵袭能力

目的运用构建好的重组慢病毒载体系统PLVX-MIR21-RNAi分别感染高、低侵袭性肝癌细胞HCCLM3和HepG2,并观察miR-21下调对其生长增殖和侵袭转移特性的影响及其分子机制研究。方法采用qPCR、CCK-8、Transwell肿瘤侵袭和Western blot实验分别检测干扰miR-21表达对HCCLM3和HepG2细胞miR-21表达量、增殖抑制率、侵袭转移特性和PTEN、PDCD4和TPM1蛋白的表达量影响。结果 HCCLM3转染组miR-21的表达量低于HepG2转染组(P0.05);24 h、36 h、48 h时,HCCLM3未处理组增殖能力均明显高于HepG2未处理组(P0.01),而HCCLM3转染组增殖抑制率均高于HepG2转染组(P0.05);HCCLM3转染组细胞侵袭抑制率高于HepG2转染组(P0.05);HCCLM3未处理组PTEN、PDCD4和TPM1蛋白表达低于HepG2未处理组(P0.01)。此外,下调miR-21后,HCCLM3转染组PTEN、PDCD4和TPM1蛋白表达水平均高于HepG2转染组(P0.01)。结论 miR-21下调能有效抑制HCCLM3和HepG2细胞生长增殖和侵袭转移能力,且与其靶向调控PDCD4、PTEN、TPM1基因有关。     

miR-181b靶向鼠双微体-2对宫颈癌Caski细胞侵袭、迁移的影响及机制

目的探讨miR-181b靶向鼠双微体-2 (MDM2)对宫颈癌Caski细胞侵袭、迁移的影响及机制。方法应用RTPCR检测宫颈癌组织miR-181b mRNA表达,RT-PCR及免疫组化法检测MDM2表达。用miRcramble、miR-181b mimics、阴性对照siRNA (NC组)及靶向抑制MDM2的si NRA (si-MDM2)转染人宫颈鳞癌Caski细胞,通过转染miR-181b mimics后MDM2表达及转染si-MDM2后miR-181b表达检测初步证实miR-181b与MDM2的靶向关系,miR-NC、Wt-MDM2+miR-181b mimics和Mut-MDM2+miR-181b mimics共转染后双荧光素酶活性检测确定MDM2是否为miR-181b的靶基因。应用Transwell小室检测过表达miR-181b或抑制MDM2表达后Caski细胞侵袭及迁移能力,应用Western blotting检测MDM2、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)、STAT3及p-STAT3的蛋白表达。结果 miR-181b在宫颈癌中的表达显著低于正常宫颈组织(P0. 05),MDM2在宫颈癌中的表达显著高于正常宫颈组织(P0. 05)。MDM2是miR-181b的靶基因。miR-181b mimics和si-MDM2均可抑制Caski细胞侵袭及迁移能力,下调MMP-2、MMP-9和p-STAT3的蛋白表达(P0. 05)。结论 miR-181b可靶向MDM2抑制宫颈癌Caski细胞侵袭及迁移能力,机制与下调STAT3信号有关。     

miR-548c-3p通过调控TRIM59表达对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的研究miR-548c-3p对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响和潜在的分子机制。方法 qRT-PCR检测TRIM59 mRNA和miR-548c-3p的表达,Western blot检测TRIM59、增殖相关蛋白CyclinD1和p21,及迁移侵袭相关蛋白MMP2和MMP9的表达水平,MTT法测定HepG2细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告系统验证miR-548c-3p与TRIM59的调控关系。结果与正常肝细胞L02相比,在肝癌细胞HepG2、SMMC-7721和BEL-7402组中TRIM59的mRNA和蛋白表达量均显著升高(P<0.05),miR-548c-3p的表达量则均显著降低(P<0.05);过表达miR-548c-3p和抑制TRIM59表达均可抑制HepG2细胞增殖、迁移和侵袭;双荧光素酶报告系统结果表明,miR-548c-3p靶向负调控TRIM59的表达;过表达TRIM59逆转了过表达miR-548c-3p对HepG2细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-548c-3p通过靶向TRIM59基因抑制HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭,miR-548c-3p是肝癌的潜在治疗靶点。     

miR-125b对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨miR-125b对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响。方法培养乳腺癌MCF-7细胞,用miR-125b模拟物和miR-125b抑制物转染乳腺癌MCF-7细胞,检测miR-125b表达,乳腺癌MCF-7细胞活力、凋亡情况、细胞周期及Cyclin A1、Cyclin D1、Bcl-2及Bax蛋白表达水平。结果 miR-125b模拟物和miR-125b抑制物转染乳腺癌MCF-7细胞1、2、3、4 d后,乳腺癌MCF-7细胞活性均显著降低(均P0. 05)。miR-125b模拟物组乳腺癌MCF-7细胞凋亡率均显著低于miR-125b抑制物组(均P0. 05); miR-125b抑制物组细胞周期G1期显著长于miR-125b模拟物组(P0. 05)。两组Cyclin A1、Cyclin D1、Bax及Bcl-2表达水平比较,差异均有统计学意义(均P0. 05)。结论 miR-125b抑制剂可显著抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

miR-140通过下调Pin1抑制乳腺癌BT549细胞上皮细胞-间充质转化

目的用miR-140模拟物转染三阴型乳腺癌BT549细胞,检测Pin1在乳腺癌细胞系BT549中的表达情况,研究在BT549细胞中miR-140如何通过Pin1发挥对上皮细胞-间充质转化(EMT)的抑制作用。方法用miR-140模拟物(miR-140模拟物组)、miR-140阴性对照(阴性对照组)转染BT549细胞,同时设置未处理组为空白对照组。利用实时PCR法检测不同组BT549细胞中的Pin1 mRNA表达水平;利用Western Blot检测E-钙黏蛋白及Pin1蛋白的表达水平;利用划痕试验研究转染miR-140对BT549侵袭能力的影响。结果划痕后24 h,miR-140模拟物组、阴性对照组和空白对照组划痕宽度相对0 h变化的比例分别为23.4%、41.4%和53.1%。与阴性对照组和空白对照组相比,miR-140模拟物组BT549细胞迁移能力明显降低(χ~2=5.550,P0.05;χ~2=6.995,P0.05)。miR-140模拟物组、阴性对照组和空白对照组Pin1 mRNA表达水平分别为(0.55±0.02)、(0.89±0.06)和(1.05±0.06)。miR-140模拟物组Pin1 mRNA表达水平显著低于阴性对照组和空白对照组(t=8.823,P0.05;t=11.480,P0.05)。miR-140模拟物组、阴性对照组和空白对照组E-钙黏蛋白表达水平分别为(0.98±0.11)、(0.68±0.07)和(0.38±0.04)。miR-140模拟物组E-钙黏蛋白表达水平显著高于阴性对照组和空白对照组(t=7.990,P0.05;t=21.348,P0.05)。miR-140模拟物组、阴性对照组和空白对照组Pin1蛋白表达水平分别为(0.57±0.12)、(0.78±0.08)和(1.08±0.21)。miR-140模拟物组Pin1蛋白表达水平显著低于阴性对照组和空白对照组(t=8.921,P0.05;t=18.657,P0.05)。结论 miR-140可以抑制Pin1 mRNA转录,进而降低Pin1蛋白的表达水平,抑制EMT的发生。     

多肽PFHCG对胎盘滋养层细胞增殖及迁移的影响研究

目的 探讨多肽PFHCG对滋养层细胞功能的影响及其可能参与子痫前期的作用机制。方法 用0.5、1、5、10、20、40μM浓度的多肽PFHCG处理HTR-8/SVneo细胞,观察其对细胞增殖及迁移功能的影响。使用测序技术检测多肽对细胞基因表达水平的影响。结果 多肽PFHCG在高浓度时(10、20、40μM)可显著抑制HTR-8/SVneo细胞增殖及迁移能力,低浓度时(0.5、1、5μM)可促进细胞迁移。基因测序共检测到322个差异表达的基因,KEGG通路分析显示PFHCG可能通过MAPK通路发挥作用。结论 多肽PFHCG高浓度时可抑制HTR-8/SVneo细胞的增殖与迁移能力,低浓度时可促进细胞迁移,且可能通过MAPK通路发挥作用。     

miR-203a-3p靶向调控VEGF-C表达对卵巢癌恶性生物学特征的影响

目的 探究miR-203a-3p通过靶向调控血管内皮生长因子C(VEGF-C)表达影响卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制.方法 收集2019年2月至10月在清华大学第一附属医院就诊的20例卵巢癌患者手术切除的癌组织及对应癌旁组织.使用实时荧光定量聚合酶链式反应检测20例手术切除的卵巢癌组织及对应癌旁组织中miR-203a-3p的表达.体外培养SKOV3细胞,将miR-203a-3p和pc-VEGF-C单独或者共同转染于SKOV3细胞,实验分为:Control组、miR-203a-3p组、pc-VEGF-C组和miR-203a-3p+pc-VEGF-C组.在miRNA靶向数据库TargetScanHuman中,对miR-203a-3p与VEGF-C的靶向关系进行预测,并利用双荧光素酶报告基因实验对其靶向关系进行验证;利用克隆形成实验检测各组SKOV3细胞的克隆形成率以观察其体外增殖活性,并利用Western blot实验检测增殖标志蛋白PCNA相对表达水平;利用划痕实验检测各组24h内划痕愈合率以观察其迁移能力;Transwell实验检测侵袭能力;Western blot检测侵袭、迁移相关蛋白表达.结果 卵巢癌组织中miR-203a-3p表达(0.47±0.10)较正常癌旁组织中miR-203a-3p表达(0.99±0.09)显著下调(t=17.112,P<0.05).miR-203a-3p与VEGF-C存在可结合的位点,相比Control组,miR-203a-3p组VEGF-C蛋白相对表达水平、荧光素酶活性显著降低(q值分别为12.430、5.047,P<0.05);miR-203a-3p组卵巢癌细胞克隆形成率、PCNA蛋白相对表达水平均显著降低(q值分别为11.773、12.246,P<0.05);miR-203a-3p组单位面积细胞侵袭数和细胞愈合率均显著降低(q值分别为6.258、5.325,P<0.05);miR-203a-3p组E-cadherin表达显著升高,Vimentin、N-cadherin表达均显著降低(q值分别为4.082、7.746、7.570,P<0.05).结论 miR-203a-3p可以通过靶向调控V EG F-C表达抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移,其机制可能与抑制增殖相关蛋白和调控上皮间质化过程相关.     

miR-15-5p靶向调控SMAD5表达抑制子宫内膜腺癌细胞上皮间质转化的研究

目的探讨miR-15-5p抑制人子宫内膜腺癌细胞(HEC-1-A)上皮间质转化(EMT)的机制。方法构建SMAD53'-UTR-荧光素酶报告载体,通过双荧光素酶报告基因检测,观察miR-15-5p对SMAD53'-UTR荧光素酶活性的影响,鉴定SMAD5是否为miR-15-5p的靶基因。将miR-15-5p模拟物(agomir)与miR-15-5p抑制物(antagomir)及其对应的对照组分别转染至HEC-1-A细胞中,并进行EMT诱导培养,分别采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western Blot检测各组细胞SMAD5在mRNA及蛋白水平的相对表达量;了解miR-15-5p对EMT标志物的表达影响。结果双荧光素酶报告基因实验结果表明,miR-15-5p可以结合在SMAD5的3'-UTR区域,而不能结合在SMAD3的3'-UTR区域,表明miR-15-5p的靶基因应为SMAD5。正常HEC-1-A细胞转染miR-15-5p的模拟物或抑制物后,SMAD5表达显著下调或上调,也表明miR-15-5p的靶基因是SMAD5。结论SMAD5是miR-15-5p的靶基因,miR-15-5p可通过靶向调控SMAD5的表达抑制人子宫内膜腺癌HEC-1-A细胞的EMT。     

miR-369-3p和COL11A1对卵巢癌细胞增殖 迁移及侵袭的影响

目的探讨miR-369-3p和COL11A1对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响,并分析其分子机制。方法实时定量PCR(qRT-PCR)检测正常卵巢上皮细胞IOSE80和卵巢癌细胞SKOV-3中miR-369-3p、COL11A1 mRNA的水平,在卵巢癌SKOV-3细胞中转染miR-369-3p模拟物和pcDNA-COL11A1以过表达miR-369-3p、COL11A1,CCK8法和Transwell实验分别检测卵巢癌SKOV-3细胞增殖、迁移及侵袭能力,蛋白印迹实验(Western blot)检测细胞中COL11A1、Cyclin D1、p21、MMP-2及MMP-9蛋白水平,双荧光素酶报告系统验证miR-369-3p与COL11A1的调控关系。结果与正常卵巢上皮细胞IOSE80(1.00±0.05、1.01±0.08及0.28±0.03)相比,卵巢癌细胞SKOV-3中的miR-369-3p水平(0.41±0.04)显著降低,COL11A1 mRNA(3.26±0.31)和蛋白(0.64±0.06)水平显著升高,差异均有统计学意义(t=21.083、27.643及16.100,P0.05)。过表达miR-369-3p可降低Cyclin D1、MMP-2及MMP-9蛋白表达量,提高p21表达量,降低细胞OD值、迁移及侵袭细胞个数;miR-369-3p靶向负调控COL11A1的表达;过表达COL11A1可逆转miR-369-3p过表达对SKOV-3细胞增殖、侵袭及迁移的影响。结论 miR-369-3p通过靶向COL11A1调控SKOV-3细胞增殖、迁移及侵袭。miR-369-3p是卵巢癌潜在分子靶点。     

miR-377在宫颈癌中的表达及其对宫颈癌细胞增殖、侵袭和EMT的影响

目的 观察miR-377在宫颈癌组织和细胞中的表达,探讨miR-377对宫颈癌发展的影响。方法 检测miR-377在宫颈癌组织和Hela、SiHa和Caski细胞、H8细胞中的表达;过表达或下调miR-377后,CCK-8、细胞侵袭实验、Western blot和细胞划痕愈合实验分别检测miR-377对Hela细胞增殖、侵袭、上皮间质转化(EMT)和迁移能力的影响。下调CUL4A表达后,检测Hela细胞增殖、侵袭、迁移和EMT;Western blot检测过表达CUL4A对cAMP/PKA通路的影响。结果 miR-377在宫颈癌组织的表达(0.58±0.24)低于癌旁正常组织(1.05±0.35),miR-377在宫颈癌Hela、Siha和Caski细胞中的表达(0.36±0.09、0.72±0.18、0.75±0.37)低于H8细胞(1.43±0.28),差异均有统计学意义(P<0.01)。过表达miR-377抑制了Hela细胞增殖、侵袭、迁移与EMT,下调miR-377则起到相反作用。miR-377靶向和负调控CUL4A,下调CUL4A抑制了Hela细胞发展;过表达CUL4A...     

异丙酚调控miR-212-5p/TRPV6轴对卵巢癌细胞增殖 迁移及侵袭影响的机制研究

目的探讨异丙酚通过调控miR-212-5p/TRPV6轴对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭影响和机制,为临床诊治卵巢癌奠定理论基础。方法不同浓度的异丙酚[(0μM (μmol/L)、0.125μM、0.25μM、0.5μM和1.0μM]作用SKOV3细胞48 h后,MTT实验检测细胞活力,Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力,qRT-PCR和Western blot检测miR-212-5p、TRPV6、Cyclin D1、MMP2和MMP9蛋白的表达变化。同时,构建抑制miR-212-5p表达的SKOV3细胞株,进行上述实验检测相应指标。双荧光素酶实验和Western blot验证miR-212-5p和TRPV6的靶向关系。结果异丙酚呈浓度依赖性地抑制SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制TRPV6、Cyclin D1、MMP2和MMP9蛋白的表达,促进miR-212-5p的表达。抑制miR-212-5p表达可减轻异丙酚处理对SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭的抑制作用。TRPV6是miR-212-5p的靶基因,miR-212-5p可负性调控TRPV6的表达。沉默TRPV6可部分逆转抑制miR-212-5p表达对异丙酚处理的卵巢癌细胞SKOV3增殖、迁移和侵袭的影响。结论异丙酚通过上调miR-212-5p表达,抑制TRPV6表达,从而抑制卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

miR-495通过靶向FAM83D抑制结肠癌细胞的增殖和迁移

目的探讨miR-495通过靶向FAM83D抑制结肠癌细胞的增殖和迁移行为及其作用机制。方法 qPCR检测结肠癌和癌旁正常组织、不同结肠癌细胞株中miR-495的表达情况;CCK-8细胞增殖实验检测miR-495对结肠癌细胞增殖能力的影响;流式细胞术实验检测miR-495对结肠癌细胞周期的影响;双荧光素酶报告基因检测miR-495与FAM83D的相互作用;Transwell侵袭实验检测miR-495对结肠癌细胞侵袭能力的影响。结果与癌旁正常组织相比,结肠癌组织中miR-495表达明显增高;结肠癌细胞HT29中miR-495的表达水平最高;抑制miR-495的表达后结肠癌细胞增殖能力减弱,促进其凋亡行为;miR-495能与FAM83D的3’UTR特异性结合,调控FAM83D的表达活性;抑制miR-495的表达后,HT29细胞的侵袭能力受到相应的抑制。结论 miR-495在结肠癌的发生发展过程中起重要作用,可以通过靶向调节FAM83D的表达影响结肠癌细胞的增殖和迁移。