siRNA沉默NDRG2基因表达对卵巢癌细胞增殖的影响

目的构建N-myc下游调节基因2 (NDRG2) siRNA重组真核表达载体,研究NDRG2基因与卵巢癌转移、侵袭等生物学行为的关系。方法应用NDRG2 siRNA基因重组质粒载体感染卵巢癌细胞,从而实现NDRG2基因在卵巢癌细胞中的低表达,通过定量Q-PCR检测转染后细胞中NDRG2的表达情况;通过平板克隆形成实验、CCK8实验观察NDRG2基因低表达后对OVCAR-3、SKOV3、CAOV3等卵巢癌细胞生物学特性的影响。结果质粒转染后,Q-PCR检测NDRG2基因特异低表达。CCK8检测、平板克隆实验结果显示,沉默NDRG2基因对OVCAR-3、SKOV3、CAOV3细胞生长均有明显促进作用(P0. 05)。结论通过真核表达载体使细胞NDRG2基因的低表达,可以明显促进OVCAR-3、SKOV3、CAOV3细胞的生长和增殖。     

洛铂对卵巢癌细胞SKOV3增值抑制及对bax、bcl-2凋亡基因表达的影响

目的:研究洛泊作用于浆液性卵巢癌细胞SKOV3后其对凋亡基因bcl-2和bax表达的影响。方法:体外培养卵巢癌细胞SKOV3,用MTT比色法检测洛铂对SKOV3细胞株的增殖抑制作用,流式细胞仪检测凋亡相关蛋白bax、bcl-2的表达。结果:体外培养的卵巢癌SKOV3细胞经不同浓度的洛泊处理后细胞生长明显受到抑制,洛泊作用于卵巢癌SKOV3细胞可诱导细胞的凋亡,同时随着洛铂浓度的增加,bax基因的表达增加,而bcl-2表达减少。结论:卵巢癌SKOV3细胞对洛泊具有药物敏感性,洛泊可诱导卵巢癌细胞的凋亡,bax蛋白的表达增加和bcl-2蛋白表达的减少可能是洛泊诱导卵巢癌细胞的凋亡机制之一。     

NDRG2基因亚型对卵巢癌HO-8910细胞周期及凋亡的影响

目的构建表达N-myc下游调节基因2(NDRG2)两种亚型(NDRG2L,NDRG2S)的重组逆转录病毒载体,观察逆转录病毒介导的NDRG2基因对卵巢癌细胞HO-8910细胞周期及凋亡的影响。方法以携带人NDRG2基因的两种亚型逆转录病毒载体转染体外培养的卵巢癌细胞株HO-8910,采用Western-blot检测目的基因的表达,流式细胞术检测转染后对细胞周期和凋亡的影响。结果流式细胞仪检测显示,转染后G1期细胞明显减少,S期细胞明显增多(P0.05),但转染后对细胞凋亡无明显影响(P0.05)。结论通过逆转录病毒载体使细胞表达NDRG2基因,可以明显促进HO-8910细胞的增殖,但对细胞凋亡无明显影响。     

IEX-1基因转染对人卵巢癌细胞增殖活性及顺铂敏感性的影响

目的:探讨即刻早期反应基因-1(immediate early response gene X-1,IEX-1)转染人卵巢癌细胞SKOV3后,对顺铂药物敏感性的影响。方法:提取并鉴定重组质粒pEGFP-N1-IEX-1,采用脂质体介导将重组质粒转染到人卵巢癌细胞SKOV3,RT-PCR检测转染前后IEX-1mRNA和蛋白的表达情况,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测转染后卵巢癌细胞SKOV3增殖情况以及对顺铂敏感性的变化。结果:成功转染IEX-1基因后可检测到IEX-1mRNA的高表达;转染组细胞的增殖速度增快(P<0.05),但对顺铂的敏感性明显增强(P<0.05)。结论:IEX-1可增强卵巢癌细胞的体外增殖能力,并增强卵巢癌细胞体外对顺铂化疗的敏感性,为肿瘤的有效干预和治疗提供新的靶点。     

RI基因稳定转染的SKOV3细胞系的建立及其对细胞增殖的作用

目的:建立稳定表达RI基因的卵巢癌SKOV3细胞系,并观察外源基因对细胞体外增殖的作用。方法:以脂质体为介导,将携有RI基因的重组载体pLNCX-ri转染SKOV3细胞,实验分3组,RI基因转染组(SKOV3/RI组)、空质粒转染组(SKOV3/Neo组)和空白对照组(SKOV3组)。采用G-418筛选获得稳定转染的细胞系后,通过RT-PCR技术和免疫细胞化学染色方法鉴定各组细胞中RI基因的表达;通过MTT、细胞周期分析、细胞凋亡检测方法观察该基因对细胞生长的影响。结果:外源性RI基因已整合于细胞基因组中,并获得稳定表达。转染RI基因后的细胞生长速度减慢,明显低于对照组,差异有统计学意义。细胞周期分析显示,实验组G1期细胞增至69.23%,S期细胞降至24.34%,与另外两组相比差异有统计学意义(P<0.05)。细胞凋亡检测表明SKOV3/RI组细胞凋亡率为58.25%,与SKOV3组(17.97%)及SKOV3/Neo组(21.42%)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:通过脂质体介导,可以建立RI基因稳定表达的卵巢癌细胞系,且RI基因对SKOV3细胞的体外增殖有抑制作用。     

自噬基因Beclin1过表达诱导人卵巢癌细胞SKOV3自噬和凋亡的研究

目的:探讨自噬基因Beclin 1在人卵巢癌SKOV3细胞中过表达对其体外生长活性的影响。方法:构建自噬基因Beclin 1的真核表达载体pcDNA3.1/Beclin1,将其稳定转染SKOV3细胞,实现Beclin 1在SKOV3中的过表达;用MTT法分析Beclin1过表达对SKOV3增殖的影响,用流式细胞仪检测凋亡和自噬情况,电镜和荧光显微镜下观察自噬现象。结果:pcD-NA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后Beclin 1在mRNA和蛋白水平均高于空质粒pcDNA3.1转染组和未转染组。Beclin 1在SKOV3中的稳定过表达后G1期细胞明显增多,S期细胞比例明显减少,细胞增殖受到抑制,凋亡率为(21.26±3.89)%,高于空质粒pcDNA3.1转染组和未转染组,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后MDC标记的自噬囊泡平均荧光强度高于pcDNA3.1转染组和未转染组。pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后在电镜下可见大量自噬囊泡形成。在荧光显微镜下见pcDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3细胞中MDC标记的自噬囊泡明显增加。结论:自噬基因Beclin1过表达可诱导人卵巢癌细胞SKOV3自噬和凋亡,针对自噬基因Beclin1的卵巢癌基因治疗可能具有可行性。     

沉默lncRNA MAFG-AS1对人卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制

目的探讨沉默lncRNA MAFG-AS1对人卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法 qRT-PCR检测正常卵巢上皮细胞HOSE和3种卵巢癌细胞(SKOV3、HO8910、OVCAR3)中MAFG-AS1和miR-143-3p的表达。荧光素酶报告基因检测和qRT-PCR验证MAFG-AS1与miR-143-3p的靶向调控关系。以SKOV3细胞为研究对象,分别构建沉默MAFG-AS1或过表达miR-143-3p的卵巢癌细胞株。应用MTT法检测细胞活力,应用流式细胞术检测细胞凋亡情况,应用Western Blot检测增殖相关蛋白Cyclin D1和p21及凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的表达。结果与HOSE组比较,3种卵巢癌细胞中MAFG-AS1的表达显著上调,miR-143-3p的表达显著下调。pc DNA组、pc DNA-MAFG-AS1组、si-NC组、si-MAFG-AS1组miR-143-3p表达水平比较差异有统计学意义(P0.05)。miR-143-3p是MAFG-AS1的靶基因,MAFG-AS1可负性调控miR-143-3p的表达。沉默MAFG-AS1或过表达miR-143-3p均可抑制卵巢癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,抑制Cyclin D1和Bcl-2蛋白表达,促进p21和Bax蛋白表达。抑制miR-143-3p表达可逆转沉默MAFG-AS1对卵巢癌细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。结论沉默MAFGAS1通过上调miR-143-3p表达可抑制卵巢癌细胞的增殖,促进细胞凋亡。     

靶向H-ras基因的小干扰RNA对卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用

目的:探讨脂质体介导的靶向H-ras基因的小发夹状RNA重组质粒对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞增殖的抑制作用。方法:实验分4组:正常对照组(仅予脂质体处理)、转染psh RNA/H-ras处理24h组、48h组及72h组。分别于转染后不同时间进行MTT实验、软琼脂克隆形成实验、细胞周期检测和AO/EB双染实验,观察各组细胞增殖、凋亡及细胞周期的变化。结果:FCM显示转染psh RNA/H-ras 24h及48h后的SKOV3细胞均出现细胞周期的抑制,48h后SKOV3细胞有显著的凋亡发生;转染psh RNA/H-ras1和pshRNA/H-ras2对SKOV3细胞克隆形成的抑制率分别为51.5%(P<0.05)和63.3%(P<0.01);MTT检测转染psh RNA/H-ras1和psh RNA/H-ras 272h后对SKOV3细胞增殖抑制率分别为62.5%和64.5%。AO/EB实验显示48h细胞的凋亡率为29.3%(P<0.05)。结论:重组质粒psh RNA/H-ras在人卵巢癌SKOV3细胞中有明显抑制细胞增殖的作用,并介导肿瘤细胞的凋亡。     

羟苯维胺脂对卵巢癌细胞SKOV3的体外影响

目的探讨羟苯维胺脂(4-HPR)对卵巢癌细胞株SKOV3体外生长的影响.方法通过细胞生长曲线和MTT法观察4-HPR对卵巢癌细胞株SKOV3的生长抑制作用,通过流式细胞观察4-HPR对细胞周期的影响和诱导凋亡作用.结果5和10 μmol/L的4-HPR可显著抑制卵巢癌细胞株SKOV3的生长和增殖,MTT显示IC50为3.2μmol/L.流式细胞检测显示4-HPR可使S期和G2期的比例增加,可诱发卵巢癌细胞株SKOV3的凋亡,其诱导凋亡的作用呈时间和剂量依赖性.结论4-HPR可抑制卵巢癌细胞的增殖,促进细胞的凋亡,在卵巢癌的治疗上有临床应用前景.     

shSASH1基因对卵巢癌细胞SKOV3生物学功能的影响

目的 探讨SASH1对卵巢癌细胞SKOV3的增殖、凋亡与侵袭方面的影响.方法 标本组织来源于妇产科手术收集的50例卵巢癌组织.通过建立重组质粒pcDNA3.1-SASH1,并借助于脂质体2000转染到SKOV3,采用流式细胞计(FCM)分析实验和细胞侵袭实验,来探索SASH1对卵巢癌细胞SKOV3在细胞扩散、凋亡和侵袭中的影响.结果 pcDNA3.1-SASH1转染组中的s期细胞分值(％)低于正常(未转染的)对照组(x2=26.78,P＜0.01)或空载组(pcDNA3.1) (x2=25.12,P＜0.01).与空载组和正常(未转染的)对照组相比,pcDNA3.1-SASH1转染组中的SKOV3明显降低了癌细胞的生长、增殖和侵袭的能力(x2=31.25,P＜0.01),然而在空载组和正常(未转染的)对照组中没有明显的差异;pcDNA3.1-SASH1细胞组显示更多的凋亡细胞(x2=36.58,P＜0.01).结论 SASH1可抑制卵巢癌细胞SKOV3的生长、增殖和侵袭能力,并促进其凋亡.     

过表达PTEN对SKOV3和SKOV3-ADM细胞增殖的影响

目的:研究过表达PTEN对卵巢癌细胞SKOV3和卵巢癌耐药细胞株SKOV3-ADM增殖能力的影响。方法:构建PTEN真核表达载体,采用脂质体转染技术转染入SKOV3及SKOV3-ADM细胞,采用RT-PCR和Western-blot检测PTEN基因及蛋白表达水平的变化,判断转染效果;MTT法检测细胞增殖速率变化。结果:转染PTEN表达载体至SKOV3及SKOV3-ADM细胞后,RT-PCR及Western-Blot实验证实SKOV3和SKOV3-ADM细胞中PTEN基因及蛋白表达水平明显上调。MTT结果显示,上调PTEN表达后的SKOV3和SKOV3-ADM细胞相对于空白和阴性对照组,细胞的体外增殖能力明显减弱(P<0.01)。结论:PTEN蛋白在卵巢癌的发生发展过程中起着抑制作用,可能成为一种新的肿瘤分子治疗手段。     

NDRG2与卵巢癌细胞增殖及化疗耐药的相关性研究

目的研究负载人NDRG2 2种亚型(长短2种亚型分别命名为NDRG2L、NDRG2S)基因对HO-8910细胞裸鼠皮下成瘤的作用;探讨NDRG2对顺铂(DDP)诱导卵巢癌HO-8910细胞凋亡的作用。方法实验组与空载体组卵巢癌HO-8910细胞接种裸鼠皮下,观察裸鼠成瘤情况;DDP处理携带人NDRG2基因的卵巢癌细胞株HO-8910,流式细胞术检测细胞凋亡。结果 NDRG2促进HO-8910细胞裸鼠皮下成瘤;NDRG2促进HO-8910细胞株抗顺铂(DDP)诱导的细胞凋亡。结论通过检测负载NDRG2的HO-8910细胞裸鼠体内荷瘤试验,进一步证实NDRG2可以明显促进卵巢癌HO-8910细胞的增殖;通过检测转染NDRG2及空载体组卵巢癌细胞在DDP作用下的细胞凋亡情况,提示NDRG2基因可能通过减少DDP诱导的细胞凋亡而诱发化疗耐药。     

GRP78在蛋白酶体抑制剂诱导卵巢癌细胞凋亡中的作用

目的:探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在蛋白酶体抑制剂诱导卵巢癌细胞凋亡中的作用。方法:对3种卵巢癌细胞系SKOV3、A2870和CAOV3分别设空白对照组和不同蛋白酶体抑制剂处理组;对SKOV3细胞分别转染GRP78小干扰RNA(siRNA)和随机序列核酸siRNA组。利用蛋白酶体抑制剂MG132(5μmol/L)、PSI(20nmol/L)和EPOX(10nmol/L)作用3种细胞系,实时定量PCR和Western blot检测各组细胞GRP78 mRNA和蛋白表达。MTT和流式细胞术检测细胞活力和凋亡率。结果:各种蛋白酶体抑制剂均增加卵巢癌细胞中GRP78mRNA和蛋白表达水平。当GRP78siRNA靶向沉默GRP78表达后,蛋白酶体抑制剂作用后SKOV3细胞活力明显降低。结论:GRP78诱导表达干扰蛋白酶体抑制剂抗卵巢癌活性;沉默GRP78基因表达可提高蛋白酶体抑制剂对卵巢癌细胞的杀伤作用。     

RNA干扰沉默EZH2基因对人卵巢癌细胞增殖迁移的抑制作用

目的:探讨RNA干扰沉默EZH2基因对人卵巢癌细胞系A2780增殖和迁移的影响。方法:真核表达载体介导靶向沉默EZH2 shRNA的重组质粒转染A2780细胞,Real-time RT-PCR检测EZH2基因的沉默效果,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,Transwell小室检测细胞迁移。结果:EZH2shRNA转染明显下调EZH2的表达(P0.001)。重组质粒稳定转染至A2780细胞后,细胞增殖速度明显下降(P0.05),G0/G1期细胞增加(P0.01),体外迁移能力下降(P0.01),差异均有统计学意义。结论:EZH2基因沉默能有效抑制卵巢癌细胞的增殖和迁移能力,为卵巢癌的表观遗传学治疗提供新靶点。     

靶向p38反义寡核苷酸-脂质体复合物对人卵巢癌细胞株(CAOV3)增殖的影响

目的:探讨p38反义寡核苷酸(p38 anti-ODN)对卵巢癌细胞株(CAOV3)增殖的影响。方法:培养卵巢癌细胞株(CAOV3),以MTT比色法及克隆形成实验测定p38 anti-ODN抑制卵巢癌细胞株CAOV3增殖的作用。免疫印迹法测定p-p38、Cyclin D1及p21waf/cip1表达。免疫沉淀法纯化蛋白并p38试剂盒测定p38活性。结果:MTT实验及克隆分析法均显示p38 anti-ODN明显抑制CAOV3细胞增殖、p-p38表达、下调Cyclin D1表达,同时上调p21waf/cip1表达。结论:p38反义寡核苷酸可以抑制卵巢癌细胞株(CAOV3)增殖,其机制与影响p38通路及下游CyclinD1、p21waf/cip1表达有关;干预p38通路是基因治疗卵巢癌的重要途径之一。     

VEGF的RNAi对卵巢癌细胞SKOV3生物学活性的影响

目的检测靶向血管内皮生长因子(VEGF)的短发夹RNA(shRNA)质粒载体对卵巢癌细胞株SKOV3生物学活性的影响作用。方法构建携带有GFP报告基因的VEGF-shRNA质粒载体,脂质体转染方法转入卵巢癌细胞株SKOV3,通过流式细胞术检测细胞的转染效率,RT-PCR及Western blot检测转染细胞内VEGF-mRNA及蛋白的表达变化,MTT法检测细胞增殖抑制率,人工基底膜侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果VEGF-ShRNA稳定转染后,SKOV3细胞内VEGF-mRNA及蛋白表达水平显著下降;VEGF-ShRNA对SKOV3细胞具有明显的增殖抑制作用,其抑增殖效应呈时间依赖性;VEGF-CshRNA组可有效抑制SKOV3细胞的人工基底膜体外侵袭能力。结论VEGF在卵巢癌增殖、侵袭转移中发挥重要作用,通过RNA干扰技术实现VEGF沉默在卵巢癌的生物治疗中具有较好的应用前景。     

ERK1/2通路抑制剂PD98059影响卵巢癌细胞SKOV3增殖、侵袭能力的研究

目的:探讨MAPK/ERK信号传导通路抑制剂PD98059对卵巢癌细胞SKOV3的增殖、侵袭能力的影响。初步探讨阻断MAPK/ERK信号传导通路治疗卵巢癌的可能性。方法:体外培养人上皮性卵巢癌细胞SKOV3,采用CCK-8细胞增殖方法检测卵巢癌细胞SKOV3增殖情况,Western blot检测p-ERK蛋白表达,Transwell细胞侵袭实验检测SKOV3细胞的侵袭能力。结果:CCK-8法显示PD98059在一定范围内能够明显抑制卵巢癌细胞SKOV3的增殖,其作用具有时间依赖性及浓度依赖性,PD98059有效浓度为25μmol/L,在此有效浓度作用下有效时间为24h;Western blot法检测结果显示PD98059能够下调pERK1/2,即抑制ERK1/2磷酸化,从而使得ERK1/2信号传导途径失活;Transwell细胞侵袭实验结果显示PD98059在一定浓度范围内能抑制卵巢癌细胞SKOV3的侵袭与转移能力。结论:PD98059可以通过抑制ERK1/2信号途径,抑制人上皮性卵巢癌SKOV3细胞的增殖、侵袭转移。     

人参皂苷Rh2对人卵巢癌细胞的作用及其机制的研究

目的:研究人参皂苷Rh2(Ginsenoside Rh2)对人卵巢癌细胞的抑制作用,并初步探讨其抑制机制。方法:①人卵巢癌细胞SKOV3常规培养后,MTT法观察Rh2对SKOV3细胞增殖的抑制作用;②RT-PCR技术从分子水平检测SKOV3细胞Caspase3的mRNA表达,初步探讨其抑癌机制。结果:①MTT法检测结果显示:SKOV3细胞生长抑制率随Rh2浓度的增加而增大,与对照组比较,细胞增殖受到明显抑制(P<0.05)。②RT-PCR结果显示:实验组Caspase3的表达明显高于对照组。结论:①人参皂苷Rh2可抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖。②人参皂苷Rh2可能通上调caspase3的表达诱导卵巢细胞凋亡。     

LncRNA TUG1通过调控miR-196b-5p调控卵巢癌细胞凋亡和放射敏感性分子作用机制

目的 探讨LncRNA TUG1通过调控miR-196b-5p表达对卵巢癌细胞凋亡和放射敏感性的影响及其潜在的作用机制。方法 运用qRT-PCR和Western blot检测卵巢癌细胞株SKOV3、HO8910、OVCAR3和正常卵巢上皮细胞HOSE中miR-196b-5p和TUG1的表达水平。双荧光素酶报告基因分析法验证TUG1可能的靶基因。建立TUG1抑制表达、miR-196b-5p过表达及si-TUG1和anti-miR-196b-5p共转染的SKOV3细胞株,流式细胞术检测细胞凋亡率。采用克隆形成实验检测各组SKOV3细胞不同剂量X射线照射后的存活情况,曲线拟合计算不同剂量辐射后各放射生物学参数。结果 正常卵巢上皮细胞HOSE相比,卵巢癌细胞SKOV3、HO8910及OVCAR3中miR-196b-5p的表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),TUG1的表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-196b-5p是TUG1的靶基因。TUG1抑制表达或miR-196b-5p过表达均促进SKOV3细胞凋亡,差异有统计学意义(P<0.05)并增加其放射敏感性,差异有统计学意义(P<0.05)。抑制miR-196b-5p表达可部分逆转抑制TUG1表达对SKOV3细胞促进凋亡和增强放射敏感性作用。结论 TUG1可负性调控miR-196b-5p的表达,抑制TUG1表达,可促进卵巢癌细胞凋亡,增加细胞放射敏感性。