地黄梓醇对椎间盘髓核细胞NLRP3炎性体的调控作用

目的研究地黄梓醇对椎间盘髓核细胞NLRP3炎性体的调控作用。方法采用H2O2刺激大鼠原代椎间盘髓核细胞建立细胞模型,地黄梓醇预给药。CCK8法测定细胞活力,流式细胞仪检测髓核细胞凋亡,ELISA测定细胞上清液T-SOD、MDA、IL-1β水平,实时荧光定量PCR测定TXNIP、NLRP3、caspase-1、IL-1β mRNA表达,Western blot检测TXNIP、NLRP3、caspase-1、IL-1β、NF-κB p65蛋白表达,免疫荧光法检测TXNIP、NLRP3表达。结果地黄梓醇(5、10μmol/L)能上调细胞上清液T-SOD水平,下调MDA、IL-1β水平(P<0.05),抑制H2O2诱导髓核细胞凋亡(P<0.05),降低髓核细胞TXNIP、NLRP3、caspase-1、IL-1β mRNA及蛋白表达(P<0.05,P<0.01),并且10μmol/L地黄梓醇能抑制NF-κB p65蛋白表达(P<0.05)。结论地黄梓醇可有效抑制H2O2导致的髓核细胞凋亡,可能与调控ROS/NLRP3/IL-1β通路轴有关。     

基于ox-LDL信号通路探讨桑芪滋阴补肾汤对人脐静脉血管内皮细胞的影响及其作用机制

目的:探讨桑芪滋阴补肾汤对高血压颈动脉粥样硬化发生和发展的影响及其作用机制。方法:采用ox-LDL诱导HUVEC细胞建立血管内皮细胞损伤模型，分为空白对照组、模型组、高浓度桑芪滋阴补肾汤组、中浓度桑芪滋阴补肾汤组、低浓度桑芪滋阴补肾汤组和阳性药(阿托伐他汀)组。采用CCK8法检测各组细胞存活率；采用RT-PCR法检测各组细胞中VEGFA的mRNA表达水平；采用WB法检测各组细胞中NLRP3和Caspase-1的蛋白表达情况；采用ELISA法检测肺泡灌洗液中IL-6和TNF-α水平。结果:与空白对照组比较，模型组细胞存活率降低，细胞中VEGFA的mRNA表达水平降低，NLRP3和Caspase-1的蛋白表达水平升高，细胞上清液中IL-6、TNF-α的含量升高(P<0.05);与模型组比较，低、中、高浓度桑芪滋阴补肾汤组细胞存活率升高，细胞中VEGFA的mRNA表达水平升高，NLRP3和Caspase-1的蛋白表达水平降低，细胞上清液中IL-6、TNF-α的含量降低，升高或降低水平与药物浓度呈正相关，差异具有统计学意义(P<0.05);与阳性药组比较，高浓度桑芪滋阴补肾汤组细胞...     

委陵菜酸对幽门螺杆菌诱导GES-1细胞损伤的保护作用

目的探索委陵菜酸对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)诱导人胃黏膜上皮细胞GES-1损伤的影响。方法 GES-1细胞与Hp共培养,给予委陵菜酸和NOD样受体家族3 (NOD-like receptor family 3,NLRP3)抑制剂MCC950,考察各组细胞存活率、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放率、集落形成、凋亡率、线粒体膜电位和活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)变化;采用ELISA法检测各组细胞上清液中单核细胞趋化蛋白-1 (monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)、角质细胞趋化因子(keratinocyte chemokines,KC)、肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-Iβ (interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-18、IL-4和IL-10水平;采用试剂盒检测各组细胞谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;采用 qRT-PCR 检测各组细胞 Toll 样受体 4 (toll-like receptor 4,TLR4)、髓样分化因子 88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、Bcl-2、Bcl-xl、Bax和BadmRNA表达情况;采用 Western blotting 法检测各组细胞TLR4/NLRP3/核因子-κB (nuclear factor-κB,NF-κB)和线粒体凋亡信号通路相关蛋白表达情况。结果委陵菜酸显著抑制Hp诱导的GES-1细胞LDH释放率(P0.05、0.01),促进细胞集落形成(P0.05、0.01),抑制细胞凋亡(P0.05、0.01);升高细胞线粒体膜电位(P0.01),降低ROS水平(P0.01);降低上清液中MCP-1、KC、TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-18水平(P0.01),升高IL-4和IL-10水平(P0.01);升高细胞GSH-Px、SOD和CAT活性(P0.01),降低MDA含量(P0.01);降低细胞TLR4、MyD88、Bax、Bad mRNA表达水平(P0.01),升高Bcl-2、Bcl-xl mRNA表达水平和Bcl-2/Bax、Bcl-xl/Bad (P0.01);下调细胞 TLR4、MyD88、磷酸化 IκB激酶β (phosphorylated inhibitor kappa B kinase β,p-IKKβ)、p-IκBα、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein,ASC)、半胱氨酸蛋白酶-1 前体(pro-Caspase-1)、Caspase-1、硫氧还蛋白互作蛋白(thioredoxin-interacting protein,TXNIP)、pro-IL-lβ、pro-IL-18、Bax、Bad、细胞色素 C、凋亡酶激活因子-1 (apoptotic protease activating factor-1,Apaf-1)、剪切型 Caspase-9 (cleaved Caspase-9)、cleaved Caspase-3 和胞核 p65 蛋白表达水平(P0.01),上调 Bcl-2、Bcl-xl、pro-Caspase-9、pro-Caspase-3 和胞质 p65 蛋白表达水平(P0.01)。结论委陵菜酸对Hp诱导的GES-1细胞损伤具有明显保护作用,其作用机制可能与增强内源性抗氧化系统功能、抑制氧化应激、炎性反应及TLR4/NF-κB/NLRP3炎症小体信号通路激活,从而减少线粒体介导的凋亡密切相关。     

参莲提取物通过调控Nrf2/Keap1信号通路减轻TNF-α诱导的ECV304损伤

探讨参莲提取物对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的血管内皮细胞(ECV304)损伤的干预作用及可能的作用机制。以TNF-α诱导ECV304细胞损伤模型,噻唑蓝(MTT)法检测细胞生存活力;采用流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平;生化法和酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量;通过Western blot法检测Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、醌氧化还原酶(NQO1)、血红素加氧酶1(HO-1)、半胱天冬酶3(caspase-3)、半胱天冬酶9(caspase-9)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平。结果显示,与对照组相比,50μg·L~(-1)的TNF-α能够导致ECV304细胞活力显著下降(P0.01),引起ECV304细胞ROS产生增加,SOD活性降低,MDA、NO、ET-1、IL-1β含量显著增加(P0.01),Keap1、caspase-9、Bax蛋白表达显著上调,NQO1、Bcl-2蛋白表达显著降低(P0.05);与模型组比较,参莲提取物可以提高ECV304细胞存活率,抑制细胞ROS产生,提高SOD活性,降低MDA、NO、ET-1、IL-1β含量(P0.01或P0.05),下调Keap1、caspase-3、caspase-9、Bax蛋白表达水平,提高Nrf2、NQO1、HO-1、Bcl-2蛋白表达(P0.01或P0.05)。提示参莲提取物可能通过调控Nrf2/Keap1信号通路降低TNF-α诱导的ECV304细胞氧化应激损伤,减少炎症反应和细胞凋亡。     

熊果酸减轻Aβ_(25-35)诱导的神经细胞氧化应激和细胞凋亡

目的探讨熊果酸对Aβ_(25-35)诱导的神经细胞氧化应激及凋亡的影响及机制。方法 Aβ_(25-35)处理PC12细胞建立阿尔茨海默病模型,使用不同浓度的熊果酸处理PC12细胞;MTT检测细胞增殖水平;流式细胞术检测凋亡率水平;采用DCFH-DA荧光探针检测活性氧(ROS)水平,硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)水平,黄嘌呤氧化法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性;qRT-PCR检测长链非编码RNA(LncRNA)SNHG14及微小RNA-105(miR-105)表达;双荧光素酶报告实验验证SNHG14与miR-105的靶向关系;观察沉默SNHG14表达、SNHG14过表达、miR-105过表达及干扰miR-105表达对PC12细胞增殖、凋亡及氧化应激的影响。Western blot检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase-3)的表达。结果熊果酸作用后,Aβ_(25-35)处理的细胞存活率水平升高,细胞凋亡率水平降低,Cleaved caspase-3蛋白表达降低,MDA、ROS水平降低,SOD活性升高,SNHG14的表达降低,miR-105的表达升高(P0.05);双荧光素酶报告实验证实SNHG14能够靶向结合miR-105;沉默SNHG14表达或miR-105过表达后,细胞存活率水平升高,细胞凋亡率水平降低,Cleaved caspase-3蛋白表达降低,MDA、ROS水平降低,SOD活性升高(P0.05);SNHG14过表达或干扰miR-105表达可降低熊果酸对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞的保护作用。结论熊果酸可能通过调控SNHG14/miR-105分子轴从而抑制Aβ_(25-35)诱导PC12细胞凋亡,并可减轻细胞氧化损伤。     

小檗碱通过下调miR-1290缓解高糖诱导的足细胞损伤研究

目的探究小檗碱对高糖诱导的足细胞损伤的影响及其对miR-1290的调控作用。方法采用高糖诱导小鼠肾足细胞MPC5建立细胞损伤模型,给予不同浓度(1.0、2.5、5.0μmol/L)小檗碱进行干预,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用Western blotting法检测细胞B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)蛋白表达情况;采用ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;采用qRT-PCR法检测miR-1290 mRNA表达情况。将阴性对照(mi R-NC)和mi R-1290模拟物(miR-1290mimics)分别转染至MPC5细胞,给予5μmol/L小檗碱进行干预,考察miR-1290对小檗碱抑制高糖诱导的细胞凋亡及炎性因子分泌的影响。结果与对照组比较,模型组细胞凋亡率显著升高(P0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.05),Bax蛋白表达水平显著升高(P0.05),上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α水平显著升高(P0.05),miR-1290mRNA表达水平显著升高(P0.05)。与模型组比较,小檗碱组细胞凋亡率显著降低(P0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.05),Bax蛋白表达水平显著降低(P0.05),上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α水平显著降低(P0.05),miR-1290mRNA表达水平显著降低(P0.05)。与小檗碱+miR-NC组比较,小檗碱+miR-1290 mimics组细胞凋亡率显著升高(P0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.05),Bax蛋白表达水平显著升高(P0.05),上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α水平显著升高(P0.05)。结论小檗碱能够通过下调mi R-1290表达抑制高糖诱导的足细胞凋亡及炎性反应,从而减轻细胞损伤。     

麦冬皂苷D对脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞保护作用的研究

目的研究麦冬皂苷D对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7的保护作用及其作用机制。方法培养小鼠巨噬细胞RAW264.7, 按随机数字表法分为正常对照组、模型组和麦冬皂苷D预处理组。采用CCK-8法检测麦冬皂苷D对RAW264.7细胞活性的影响;采用ELISA法检测细胞上清液TNF-α、IL-1β、IL-6、活性氧自由基(ROS)、MDA、SOD水平;Western Blot检测细胞NF-κB、TLR4、核因子E2相关因子(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达。结果与模型组比较, 麦冬皂苷D组细胞上清液TNF-α、IL-1β、IL-6、ROS、MDA水平降低(P<0.05), SOD水平升高(P<0.05), NF-κB[(0.76±0.10)比(2.26±0.17)]、TLR4[(0.98±0.09)比(1.74±0.19)]蛋白表达降低(P<0.05), Nrf2[(0.85±0.03)比(0.54±0.03)]、HO-1[(0.97±0.11)比(0.37±0.04)]蛋白表达升高(P<0.05)。结论麦冬皂苷D可能通过抑制TLR4/...     

6-姜酚对马兜铃酸A诱导的HK-2肾小管上皮细胞损伤的保护作用

目的研究6-姜酚对马兜铃酸A诱导的HK-2肾小管上皮细胞损伤的保护作用。方法细胞分为正常组、马兜铃酸A组、6-姜酚+马兜铃酸A共处理组,用CCK-8法及FDA活细胞荧光染色法检测细胞存活和形态,Hoechst法观察细胞凋亡,比色法检测细胞上清液SOD、 MDA、GSH、GSH-Px水平,Western blot检测NF-κB p65、p-NF-κB p65、caspase-3及cleaved-capase-3蛋白的表达。结果与马兜铃酸A组相比,6-姜酚+马兜铃酸A组能够升高HK-2细胞存活率,改善细胞形态,减少细胞凋亡数目,降低细胞上清液中MDA、GSH-Px的水平,并增强SOD、GSH水平,降低HK-2细胞内p-NF-κB p65、cleaved-capase-3蛋白表达。结论 6-姜酚对马兜铃酸A诱导的HK-2细胞损伤具有保护作用。     

木瓜总三萜对幽门螺杆菌诱导小鼠胃炎的保护作用研究

观察木瓜总三萜对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)诱导小鼠胃炎保护作用,探寻其可能作用机制。将慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis, CAG)模型制作成功小鼠随机分为模型组、木瓜总三萜不同剂量(50、100 mg·kg~(-1))组和三联疗法组,另取未感染Hp C57BL/6J小鼠作为正常组;治疗组小鼠分别给予相应的药物,每日1次,连续4周。然后取血和胃组织进行血液中活性氧自由基(reactive oxygen species, ROS)、单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein 1, MCP-1)、角质细胞趋化因子(keratinocyte chemokines, KC)、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18、IL-4、IL-10含量,胃组织中LDH、MPO、SOD、GSH-Px、CAT和MDA活性和含量及血液、胃组织和溶酶体中β-葡萄糖醛酸酶、β-半乳糖苷酶、组织蛋白酶B和D活性的检测,HE染色法观察胃组织形态学改变;实时定量PCR法测定胃组织中Toll样受体4(Toll like receptor 4, TLR4)、髓样分化因子(myeloid differentiation factor 88, MyD88)、Bcl-2、Bcl-xl、Bax、Bad mRNA表达,Western blot法测定胃组织中TLR4、MyD88、p-IKKβ、p-IκBα、NOD样受体家族3(NOD-like receptor family 3, NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein, ASC)、pro-caspase-1、caspase-1、硫氧还蛋白互作蛋白(thioredoxin-interacting protein, TXNIP)、pro-IL-1β、pro-IL-18、Bcl-2、Bcl-xl、Bax、Bad、cytochrome C、凋亡酶激活因子(apoptotic protease activating factor-1, Apaf-1)、pro-caspase-9、pro-caspase-3、cleaved-caspase-9、cleaved-caspase-3、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1 [poly(ADP-ribose) polymerase 1, PARP-1]、cleaved-PARP-1及胞浆和胞核中NF-κB p65蛋白表达。结果显示,木瓜总三萜可显著抑制Hp增殖,减轻胃黏膜损伤,改善淋巴细胞浸润和腺体萎缩;降低血液、胃组织中β-葡萄糖醛酸酶、β-半乳糖苷酶、组织蛋白酶B和D活性及溶酶体细胞器胞质中β-葡萄糖醛酸酶、组织蛋白酶D的活性,升高溶酶体细胞器溶酶体中β-葡萄糖醛酸酶、组织蛋白酶D活性;降低血液中ROS、MCP-1、KC、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18和胃组织中MDA含量及MPO、LDH活性,升高血液中IL-4、IL-10含量和胃组织中SOD、CAT和GSH-Px活性;下调胃组织中TLR4、MyD88、Bax、Bad mRNA和蛋白表达,下调胃组织中p-IKKβ、p-IκBα、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1、TXNIP、pro-IL-1β、pro-IL-18、cytochrome C、Apaf-1、cleaved-caspase-9、cleaved-caspase-3、cleaved-PARP-1和胞核中NF-κB p65蛋白表达,降低p-IKKβ/IKKβ和p-IκBα/IκBα比值;上调胃组织中Bcl-2、Bcl-xl mRNA和蛋白表达,升高Bcl-2/Bax和Bcl-xl/Bad比值,上调胃组织中pro-caspase-9、pro-caspase-3和胞浆中NF-κB p65蛋白表达。以上研究表明木瓜总三萜对Hp诱导小鼠CAG有显著保护作用,其机制可能与增强内源性抗氧化系统功能、抑制Hp诱导CAG小鼠氧化应激、炎症反应、纠正溶酶体功能障碍及TLR4/NF-κB/NLRP3炎症小体信号通路炎性激活,进而抑制线粒体介导的细胞凋亡有关。     

芩百清肺浓缩丸含药血清对肺炎支原体感染RAW264.7细胞NLRP3炎性体表达的影响

目的:观察芩百清肺浓缩丸含药血清对肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)感染RAW264.7细胞NLRP3炎性体及IL-1β的影响。方法:试验分为空白对照组、模型组和芩百清肺浓缩丸含药血清组。常规培养RAW264.7细胞、肺炎支原体菌株,制备芩百清肺浓缩丸含药血清,用10 MOI MP感染RAW264.7细胞,分别于8、16、24 h收集细胞。FQ-PCR检测NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA表达;Western-blot检测NLRP3、ASC、Caspase-1 p20蛋白表达;ELISA检测细胞上清液IL-1β含量。结果:与空白对照组比较,MP感染RAW264.7细胞后8、16、24 h NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA表达显著上调(P0.05或P0.01);感染后16、24 h NLRP3、ASC、Caspase-1 p20蛋白表达显著上调(P0.05或P0.01);感染后24 h细胞上清液IL-1β含量显著升高(P0.01)。与模型组比较,芩百清肺浓缩丸含药血清可显著下调MP感染RAW264.7细胞16、24 h NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA的表达(P0.05或P0.01);显著降低感染后24 h NLRP3、ASC、Caspase-1p20蛋白表达和细胞上清液IL-1β的分泌(P0.05或P0.01)。结论:芩百清肺浓缩丸抗肺炎支原体作用的机制可能与下调NLRP3炎性体表达有关。     

金银花提取物对重症急性胰腺炎肺损伤大鼠ROS-NLRP3炎症小体信号通路的影响

目的观察金银花提取物(HFE)对重症急性胰腺炎大鼠肺组织的保护作用,并初步探究可能的作用机制。方法将大鼠分为假手术组、模型组及银花提取物低、中、高剂量组、地塞米松组,每组16只。评估大鼠生存状态;测定大鼠肺组织湿/干重比率(W/D)、动脉血氧分压;HE染色观察大鼠胰腺、肺组织病理形态学变化;酶联免疫法检测BALF中白细胞介素-1β(IL-1β)\白细胞介素-18(IL-18)水平,血细胞计数仪分析总细胞数量和多形核白细胞数量;氮蓝四唑光还原法检测肺组织匀浆超氧化物歧化酶(SOD)水平,比妥酸法检测丙二醛(MDA)水平,二氢乙啶(DHE)法检测活性氧(ROS);免疫印迹法检测肺组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱天冬酶(Caspase-1)、IL-1β蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组生存状况评分降低,胰腺、肺组织病理评分降低,动脉血二氧化碳分压、胰腺、肺组织W/D升高,血氧分压降低;BALF中IL-1β、IL-18、总细胞数量、多形核白细胞数量升高;肺组织SOD水平降低,MDA、ROS水平升高,肺组织中NLRP3、ASC、IL-1β、Caspase-1蛋白表达升高(P 0.05)。与模型组相比,金银花提取物各组以及地塞米松组生存状况评分升高,胰腺、肺组织病理评分升高,动脉血二氧化碳分压、胰腺、肺组织W/D降低,血氧分压升高,BALF中IL-1β、IL-18、总细胞数量、多形核白细胞数量降低,肺组织SOD水平升高,MDA,ROS水平降低,肺组织中NLRP3、ASC、IL-1β、Caspase-1蛋白表达降低(P 0.05)。结论金银花提取物对重症急性胰腺炎大鼠的肺损伤具有保护作用,且这种作用可能通过抑制ROS产生,进而抑制NLRP3炎症小体通路介导的促炎因子IL-1β和IL-18的释放,缓解肺组织炎症损伤。     

赶黄草3种提取物对小鼠内毒素性肝损伤的保护作用

目的探讨赶黄草水提取物、70%乙醇提取物、95%乙醇提取物对小鼠内毒素性肝损伤的保护作用。方法脂多糖刺激RAW264. 7细胞建立体外炎症模型,尾静脉注射脂多糖建立小鼠体内肝损伤模型,3种提取物干预,肝苏颗粒为阳性对照。Giemsa法观察细胞形态学变化,MTS法检测细胞活力,ELISA法检测细胞上清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平,HE染色观察肝组织病理学变化,赖氏法测定血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,超氧化物歧化酶法测定肝组织超氧物歧化酶(SOD)水平,TBA法检测肝组织丙二醛(MDA)水平,免疫荧光法检测肝组织凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)表达。结果与脂多糖组比较,脂多糖+70%乙醇提取物组(25、50 mg/L)明显抑制细胞形态学变化,TNF-α、IL-1β水平显著降低(P0. 05,P0. 01)。与模型组比较,70%乙醇提取物组明显改善肝组织病理损伤,降低ASC、NLRP3表达,显著降低ALT、AST、MDA水平(P0. 05)。结论赶黄草70%乙醇提取物对小鼠内毒素性肝损伤具有明显保护作用,其机制可能与减少TNF-α产生、调控ROS/NLRP3/IL-1β通路有关。     

失笑散降低氧糖剥夺再灌注BV2细胞损伤及NLRP3的表达

目的：研究失笑散对BV2细胞氧糖剥夺再灌注（OGD/R）模型的保护作用及潜在机制。方法：将BV2细胞分为对照组,模型（OGD/R）组及失笑散组。失笑散组用不同浓度（1、10、20、50、100 μg/mL）预处理BV2细胞2 h。对照组正常培养,不给药,不进行糖氧剥夺（OGD）;模型组不给药,与失笑散组同时进行OGD,缺氧结束后再灌注24 h,收集细胞及其上清液。CCK-8法检测BV2细胞的活力;流式细胞术检测BV2细胞的凋亡;实时定量PCR和ELISA分别检测BV2细胞TNF-α、IL-6和NLRP3及相关蛋白Caspase-1、IL-1β、IL-18的mRNA和蛋白表达。结果：不同浓度失笑散并不影响BV2细胞活力。与对照组比较,模型组BV2细胞凋亡显著增多（P<0.01）,而高浓度失笑散明显减少BV2细胞凋亡（P<0.05）。实时定量PCR和ELISA结果表明,与模型组比较,失笑散观察组BV2细胞TNF-α、IL-6和NLRP3炎性小体及相关蛋白Caspase-1、IL-1β、IL-18的mRNA和蛋白表达量明显减少（P<0.05)。结论：失笑散减轻OGD/R对BV2细胞的损伤及降低炎症介质的表达,机制可能与调控NLRP3炎性小体介导的炎症信号通路有关。     

补骨脂二氢黄酮甲醚对Aβ 诱导PC12 细胞损伤的保护作用及机制研究

目的探讨补骨脂二氢黄酮甲醚对β淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)诱导PC12细胞损伤的保护作用及其相关机制。方法采用Aβ(1.5×10-4mol·L-1)诱导的PC12细胞作为阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)细胞模型,并以补骨脂二氢黄酮甲醚(1×10-6mol·L-1)、雌二醇(1×10-5mol·L-1)进行干预。实验设置空白组、Aβ组、补骨脂二氢黄酮甲醚组、雌二醇组。采用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;试剂盒检测细胞线粒体膜电位,以及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性和丙二醛(MDA)含量;采用Western Blot法检测细胞中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白表达水平。结果与空白组比较,Aβ组的细胞存活率、线粒体膜电位及SOD、GSH-PX活性明显降低(P<0.01),细胞凋亡率、MDA含量以及IL-1β、IL-6、TNF-a蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。与Aβ组相比,补骨脂二氢黄酮甲醚组的细胞存活率、线粒体膜电位及SOD、GSH-PX活性明显升高(P<0.01),细胞凋亡率、MDA含量以及IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论补骨脂二氢黄酮甲醚对Aβ诱导的PC12细胞损伤具有保护作用,可能与提高其抗氧化酶活性及线粒体膜电位,减少炎症因子分泌有关。     

红花清肝十三味丸对急性肝损伤大鼠的影响

目的探讨红花清肝十三味丸对急性肝损伤大鼠的影响。方法 48只大鼠随机分为正常对照组、模型组、水飞蓟宾组(0.1 g/kg)及红花清肝十三味丸低、中、高剂量组(0.25、0.5、1 g/kg),连续灌胃8 d,末次给药1 h后,除正常组外,各组大鼠注射四氯化碳-花生油溶液以建立急性肝损伤模型。生化法测定血清ALT、ALP、TP及肝脏MDA水平,ELISA法检测肝组织CAT、GSH-Px水平,HE染色观察肝脏病理变化,流式细胞术检测肝细胞凋亡率,Western blot法检测TNF-ɑ、IL-1β、IL-6、iNOS、caspase-3、cleaved caspase-3的蛋白表达。结果与模型组比较,红花清肝十三味丸组大鼠肝组织损伤程度明显改善;ALT、ALP、MDA水平,肝细胞凋亡率,TNF-ɑ、IL-1β、IL-6、iNOS、cleaved caspase-3蛋白表达降低(P<0.01),并且中、高剂量组CAT、GSH-Px活性升高(P<0.01)。结论红花清肝十三味丸通过抑制氧化损伤、炎症反应和凋亡过程改善大鼠急性肝损伤,从而发挥保肝效应。     

蓬子菜总黄酮经调控TGF-β/Smad3信号通路对内皮细胞增殖、凋亡的影响研究

目的研究蓬子菜总黄酮经调控TGF-β/Smad3信号通路对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、凋亡的影响。方法实验分为5组,对照组HUVECs正常培养,其余组HUVECs培养后建立H_2O_2氧化损伤模型,其中蓬子菜总黄酮低、中、高浓度组分别加入12.5 mg/L、25 mg/L、50 mg/L的蓬子菜总黄酮培养。采用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,酶联免疫法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、内皮素-1(ET-1)、降钙素基因相关肽(CGRP)水平,Western blot法检测细胞中转化生长因子-β_1(TGF-β_1)、Smad3蛋白表达量。结果模型组及各浓度蓬子菜总黄酮组细胞增殖率及细胞中SOD、CGRP水平和TGF-β_1蛋白表达量均明显低于对照组(P均0.05),细胞凋亡率及细胞中MDA、ET-1水平和Smad3蛋白表达量均明显高于对照组(P均0.05)。各浓度蓬子菜总黄酮组细胞中SOD、CGRP水平和TGF-β_1蛋白表达量均明显高于模型组(P均0.05),MDA、ET-1水平和Smad3蛋白表达量均明显低于模型组(P均0.05)。中、高浓度蓬子菜总黄酮组细胞增殖率及细胞中SOD、CGRP水平和TGF-β_1蛋白表达量均明显高于低浓度蓬子菜总黄酮组(P均0.05),且高浓度蓬子菜总黄酮组均明显高于中浓度蓬子菜总黄酮组(P均0.05);中、高浓度蓬子菜总黄酮组细胞凋亡率及细胞中MDA、ET-1水平和Smad3蛋白表达量均明显低于低浓度蓬子菜总黄酮组(P均0.05),且高浓度蓬子菜总黄酮组均明显低于中浓度蓬子菜总黄酮组(P均0.05)。结论蓬子菜总黄酮能促进HUVECs增殖,抑制其凋亡,可通过调控TGF-β/Smad3信号通路减轻氧化应激反应,改善血管功能,从而对HUVECs起到保护作用。     

红花清肝十三味丸对急性肝损伤大鼠的影响

目的探讨红花清肝十三味丸对急性肝损伤大鼠的影响。方法 48只大鼠随机分为正常对照组、模型组、水飞蓟宾组(0.1 g/kg)及红花清肝十三味丸低、中、高剂量组(0.25、0.5、1 g/kg),连续灌胃8 d,末次给药1 h后,除正常组外,各组大鼠注射四氯化碳-花生油溶液以建立急性肝损伤模型。生化法测定血清ALT、ALP、TP及肝脏MDA水平,ELISA法检测肝组织CAT、GSH-Px水平,HE染色观察肝脏病理变化,流式细胞术检测肝细胞凋亡率,Western blot法检测TNF-ɑ、IL-1β、IL-6、iNOS、caspase-3、cleaved caspase-3的蛋白表达。结果与模型组比较,红花清肝十三味丸组大鼠肝组织损伤程度明显改善;ALT、ALP、MDA水平,肝细胞凋亡率,TNF-ɑ、IL-1β、IL-6、iNOS、cleaved caspase-3蛋白表达降低(P<0.01),并且中、高剂量组CAT、GSH-Px活性升高(P<0.01)。结论红花清肝十三味丸通过抑制氧化损伤、炎症反应和凋亡过程改善大鼠急性肝损伤,从而发挥保肝效应。     

淫羊藿苷调控NLRP3缓解小鼠类风湿关节炎的研究

目的：探讨淫羊藿苷是否通过上调miR-223-3p表达抑制NLRP3缓解小鼠类风湿关节炎。方法：采用骨胶原诱导法建立关节炎小鼠模型，分别为对照组、模型组、淫羊藿苷组（10 mg/kg与40 mg/kg组）。监测小鼠关节炎发生情况并进行评分，收集小鼠血清和滑膜组织。CCK-8检测滑膜成纤维样细胞活性；ELISA检测TNF-α与IL-6、IL-1β炎症因子；q RT-PCR检测miR-223-3p的表达；Western bolt检测NLRP3炎性体、抗凋亡蛋白Bcl-2与凋亡蛋白Bax、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9表达；免疫组化检测滑膜组织中NLRP3表达。结果：淫羊藿苷以剂量依赖的方式抑制滑膜成纤维样细胞活性。淫羊藿苷组小鼠关节病变显著低于模型组（P<0.05），与剂量呈负相关。模型组中3种炎症因子水平显著高于其他组（P<0.05）。淫羊藿苷组Bcl-2显著低于模型组（P<0.05），凋亡蛋白及miR-223-3p表达显著高于模型组（P<0.05）；免疫组化显示NLRP3表达在模型组显著增多。结论：淫羊藿苷可通过上调miR...     

青蒿琥酯对乙酰氨基酚诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用研究

目的探讨青蒿琥酯在对乙酰氨基酚诱导的小鼠急性肝损伤中的保护作用及其机制。方法建立对乙酰氨基酚诱导的急性肝损伤模型,将小鼠随机分为对照组、模型组、联苯双酯组和青蒿琥酯低、中、高剂量组。通过检测肝脏血清中的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(GOT)、肝组织匀浆中的丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)水平及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平,检测肝细胞的凋亡率、观察肝脏病理学改变,评价青蒿琥酯在对乙酰氨基酚诱导的小鼠急性肝损伤中的保护作用。结果与对照组比较,模型组ALT、GOT、MDA水平显著升高,GSH和SOD水平显著下降(P 0.05),炎症因子TNF-α、IL-6水平和肝细胞凋亡率显著升高(P 0.05),说明造模成功。与模型组比较,青蒿琥酯组ALT、GOT及MDA水平显著下降,GSH和SOD水平显著上升(P 0.05);炎症因子TNF-α、IL-6水平和肝细胞凋亡率显著下降(P 0.05),并有效减轻肝细胞的坏死程度。结论青蒿琥酯在对乙酰氨基酚诱导的小鼠急性肝损伤中具有明显的保护作用,其机制可能与其抗氧化作用、减少炎症反应及抑制细胞凋亡有关。     

炎性和凋亡因子在小鼠急性肾损伤中的表达特点及白头翁皂苷B4的调节作用

观察白头翁皂苷B4(以下简称B4)对顺铂所致小鼠急性肾损伤(acute kidney injure,AKI)的影响,并基于炎症和凋亡的机制初步探讨其抗肾损伤的作用机制。将小鼠分为正常组,模型组,地塞米松对照组及B4高、中、低剂量(5,2.5,1.25 mg·kg~(-1))干预组。除正常组外,其他各组小鼠经尾静脉注射顺铂15 mg·kg~(-1)诱导急性肾损伤模型。造模当天开始尾静脉注射给药,连续4 d,末次给药后1 h小鼠眼眶取血,生化仪检测血清中BUN,Cre,TP,ALB;取小鼠肾脏,PAS糖原染色法观察小鼠肾脏组织病理形态变化;Western blot法检测肾脏组织中核苷酸结合寡聚域样受体3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor,NLRP3)、半脱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(cysteinyl aspartate specific proteinase 1,caspase-1)、白细胞介素18(interleukin-18,IL-18)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor α,TNF-α)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、p53、半脱氨酸天冬氨酸蛋白3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,caspase-3)、cleaved-caspase-3、B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)蛋白表达水平。结果显示,B4能明显降低急性肾损伤小鼠血清中BUN,Cre含量,同时减轻肾脏肾小管上皮细胞脱落、变性及肾小管蛋白管型等病理损伤;B4可下调肾脏中p53,Bax,cleaved-caspase-3的蛋白表达,上调Bcl-2/Bax的表达。该研究中模型组的炎症因子NLRP3,pro-caspase-1,IL-18,IL-1β,TNF-α,IL-6的蛋白表达均未见明显上调。结果表明B4对顺铂诱导的急性肾损伤有明确的保护作用,顺铂所致的AKI可激活p53信号通路相关凋亡因子,B4发挥肾保护作用主要与调控p53信号通路有关,而NLRP3炎性小体及相关炎性因子在此模型中并没有明显响应。