基因突变与α-突触核蛋白在帕金森病的研究进展

帕金森病( Parkinson' s disease,PD)是目前世界第二大神经退行性疾病.PD是由黑质致密部的多巴胺能神经元大量丢失和α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)聚集形成路易小体( Lewy Body,LBS)和路易神经纤维( Lewy Neurites)为特征的病变[1].Spillanti...     

帕金森病组织和体液中α-突触核蛋白检测进展

帕金森病(PD)是一种中枢神经系统退行性疾病,其流行度及产生的社会经济负担仅次于阿尔茨海默病(AD)。PD以静止性震颤、肌强直、运动迟缓和姿势平衡障碍等为主要临床表现;病理特征为路易小体(LB),即黑质致密部的多巴胺能神经元大量变性丢失、残存的神经元胞质内出现的嗜酸性包涵体。PD诊断主要依据长期临床观察及对左旋多巴治疗是否敏感,但容易漏诊和误诊。PD确定诊断只能依据死亡后的尸检病理结果,尚无特异敏感的生化指标可作为确诊的依据。研究人员就PD生物学标志物进行了不同形式、不同规模的研究,以期探寻一种理想的PD生物学标志物,望其兼具灵敏度高、特异性强、微创甚至无创、可重复等特点,为PD早期诊断、与其他疾病鉴别、掌控疾病进程、评估疗效提供确切依据。当前PD的生物化学标志物研究涉及临床前期症状、生物化学、影像学及基因学多个方面,近年来对于α-突触核蛋白的研究相对深入。     

帕金森病前驱期α-突触核蛋白生物标志物的研究进展

帕金森病（PD）是最常见的神经退行性疾病之一,临床诊断的PD患者已出现实质性、不可逆的神经退行性病变,临床上通过多巴胺能药物对症治疗并不能阻止疾病进展和降低致残率。近年来,帕金森病研究关口前移,众多研究在其前驱期探索神经保护疗法,以期延缓与阻止疾病进展。在此类型研究中,如何大范围准确筛选、检测、识别PD前驱期患者是目前所面临的难题。α-突触核蛋白是PD的标志性蛋白,本文以α-突触核蛋白为切入点,阐述其在PD发病过程中的重要理论地位,整合近年来已报道的PD前驱期患者脑脊液、组织、粪便中α-突触核蛋白的检测特异性,整理各研究所采用的检测方法及其优缺点,为临床进一步探索该标志物提供参考。     

α-突触核蛋白过表达转基因帕金森病动物模型研究进展

帕金森病是最常见的神经变性疾病之一。帕金森病动物模型是解释疾病病因学根本机制,开发新的神经保护药物和治疗策略研究的必不可少的工具。该文综述了目前常用的几类帕金森病α-突触核蛋白过表达转基因动物模型及其优缺点。转基因动物模型是目前最为重要的帕金森病动物模型;较全面地反映帕金森病病因及发病机理、病理特点,将是帕金森病动物模型研究新时代的开始,也是今后研究探讨的方向。     

α-突触核蛋白及其在帕金森病发病中的可能机制

α-突触核蛋白（AS）足Lewy体的重要组成成分。AS基因定位于第4号染色体，其突变型与常染色体显性遗传性帕金森病（PD）的发病密切相关。在PD中，AS出现了折叠错误和排列混乱。AS的聚集能力，特别是在氧化应激状态下，被认为是其病理机制的核心，AS的异常聚集和降解障碍导致蛋白酶的抑制和多巴胺能神经元的死亡。因此，AS致病形式对认识PD的发生有重要意义。     

外周组织中α-突触核蛋白作为帕金森病生物标志物的研究进展

帕金森病(PD)是以黑质多巴胺能神经元变性丢失和路易小体形成为特征的神经系统退行性疾病,由于缺乏特异性生物标志物,其早期诊断准确率受限.α-突触核蛋白(α-syn)是构成路易小体的关键蛋白,α-syn不仅存在于中脑多巴胺能神经元,还在皮肤、唾液腺等外周组织中广泛分布,并且外周神经系统α-syn病理改变可能早于中枢神经系...     

盐酸苯海索对帕金森病大鼠脑内突触素和α-突触核蛋白的影响

目的 观察盐酸苯海索干预后的帕金森病(Parkinson's disease,PD)模型大鼠脑内突触素和α-突触核蛋白的表达改变,探讨盐酸苯海索引起帕金森病认知功能障碍的病理改变.方法 雄性Wistar大鼠选取30只,随机分为空白组及假手术组,30只模犁大鼠随机分为帕金森病组、药物干预组.水迷宫试验检测大鼠学习和记忆功能.免疫组化检测突触素和α-突触核蛋白的表达.结果 药物干预组突触素在额叶免疫反应阳性细胞数少于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),α-突触核蛋白在额叶免疫反应阳性细胞数多于对照组,差异有统计学意义(P<0.01).结论 服用盐酸苯海索可导致大鼠记忆力减退,额叶α-突触核蛋白表达增多及突触素表达减少与服盐酸苯海索有关.     

血浆及唾液中α-突触核蛋白作为帕金森病生物学标记物的研究

目的研究帕金森病(PD)患者血浆及唾液中α-突触核蛋白的浓度能否作为帕金森病的外周生物学标记物。方法选择患者35例(PD组).健康者25例(对照组)。α-突触核蛋白通过ELISA方法检测。结果与对照组比较,PD组血浆α-突触核蛋白浓度较高,而唾液中较低,在血浆中α-突触核蛋白作为PD标记物的诊断中,ROC曲线下面积为0.727(P=0.003),最佳临界值为157.86 ng/L,敏感性为68.6%,特异性为72.0%。而唾液α-突触核蛋白作为诊断指标,ROC曲线下面积为0.785(P=0.00),最佳临界值为211.14 ng/L,敏感性为82.9%,特异性为80.0%。结论血浆及唾液中α-突触核蛋白浓度可作为帕金森病诊断指标,有望成为诊断PD的外周生物学指标。     

α-突触核蛋白聚集及传播模型的构建

目的 建立α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)聚集及传播的细胞和动物模型,为帕金森病的发病机制研究提供基础。方法 亲和层析法纯化α-syn蛋白,体外诱导其聚集成为α-syn纤维(Preformed fibrils,PFFs); 培养稳定表达GFP-α-syn的HEK293细胞系及原代神经元,转导α-synPFFs后免疫荧光染色法观察细胞内α-syn聚集情况; 小鼠立体定位注射α-syn PFFs,免疫组织化学法检测内源性α-syn的聚集及传播情况。结果 纯化的α-syn可在体外聚集形成聚集体; 在细胞及动物水平观察到α-syn PFFs可诱导内源性蛋白的聚集和传播。结论 本研究建立了α-syn聚集及传播的细胞和动物模型,为帕金森病的相关研究打下了基础。     

急性鱼藤酮中毒大鼠α-突触核蛋白与酪氨酸羟化酶的表达

目的探讨鱼藤酮中毒大鼠α-突触核蛋白与酪氨酸羟化酶免疫活性的变化。方法采用大鼠背部皮下持续注射小剂量鱼藤酮的方法,观察大鼠运动功能和生物学特征的变化。结果接受鱼藤酮注射的大鼠均出现明显的运动功能障碍,最严重表现是运动不能。大部分大鼠的黑质-纹状体酪氨酸羟化酶阳性神经元数目减少,全部大鼠的黑质细胞内均有α-突触核蛋白的过度表达。结论鱼藤酮中毒大鼠可以产生帕金森病的运动障碍及有关病理生理学特征。     

α-突触核蛋白在帕金森病发病机制中的作用

帕金森病（Parkinson disease，PD）是一种常见于中老年期的慢性进展的神经系统变性疾病，其病因及发病机制尚不完全清楚，目前认为可能是遗传因素与环境因素共同作用的结果。自1997年从常染色体显性遗传家族性PD中发现α-突触核蛋白（α-synuclein）氨基末端两个罕见的错义突变（A30P和A53T）后，α-synuclein引起了广泛的关注。α-synuclein是淀粉样斑块（NAC）的前体蛋白（NACP），在神经组织中广泛表达。目前有关α-synuclein的结构与功能、α-synuclein与PD关系的研究层出不穷。α-synuclein在PD的发病机制中究竟扮演了什么角色？我们对目前有关研究作一综述。     

α-突触核蛋白通过抑制Wnt/β-catenin信号通路参与帕金森病发病机制

目的探讨帕金森病动物模型和细胞模型中α-突触核蛋白与Wnt/β-catenin信号通路的相关关系及其导致神经元损伤的可能机制。方法在动物水平和细胞水平上应用western blotting方法、流式细胞术、免疫荧光法等方法研究α-synuclein与Wnt/β-catenin信号通路关键信号分子GSK-3β的表达关系及其对细胞活性的影响。结果α-syn转基因小鼠脑组织中α-synuclein、p-GSK-3β蛋白表达量均明显增加,与对照组和MPTP组相比具有统计学差异(P 0. 05);α-syn过表达组SH-SY5Y细胞中α-synuclein、p-GSK-3β表达量较对照组及MPP+损伤组明显升高,结果具有统计学差异(P 0. 05);阿立哌唑预处理组α-synuclein较对照组及MPP+组明显增加,p-GSK-3β与对照组及MPP+组差异不具有统计学差异;阿立哌唑预处理组细胞活性明显高于α-syn过表达组,细胞凋亡率较α-syn过表达组明显下降,差异具有统计学意义(P 0. 05);免疫荧光法示α-synuclein与p-GSK-3β存在共定位关系。结论α-synuclein可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路导致神经元损伤,从而参与帕金森病的发病机制。     

鱼藤酮致大鼠脑内α-突触核蛋白的表达分布变化

目的 研究鱼藤酮所致的帕金森病大鼠的脑内α-突触核蛋白（α—synuclein,ASN）分布。方法 Wistar大鼠随机分成两组,分别给予鱼藤酮和／或溶剂（对照组）皮下注射,4周后取脑组织,对黑质部位HE染色,光镜下观察Lewy小体形态;对黑质、海马、纹状体等脑区进行酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）、ASN免疫组织化学染色。结果 在对照组大鼠脑内,ASN广泛分布于各脑区,尤其在皮质、纹状体、海马等纤维投射丰富的区域。鱼藤酮处理的大鼠脑中,黑质TH阳性多巴胺能神经元数目减少、纹状体区TH阳性纤维脱失,黑质部位可见Lewy小体样结构;ASN阳性染色在各个脑区均有增强但各个脑区增强程度不一,黑质部位神经元胞浆和胞核内均有ASN明显聚集,纹状体可见ASN聚集围绕在细胞周围。海马部位偶见ASN在胞浆中点状聚集,胞核中无明显改变。结论 在鱼藤酮皮下注射导致的帕金森病大鼠的脑内,ASN在多个脑区中表达增加,而在黑质纹状体部位聚集最为明显,蛋白分布由多巴胺能神经元的突触末端向胞浆和胞核扩展。     

鱼藤酮致大鼠脑内α-突触核蛋白的表达分布变化(英文)

目的研究鱼藤酮所致的帕金森病大鼠的脑内α-突触核蛋白(α-synuclein, ASN)分布。方法 Wistar大鼠随机分成两组,分别给予鱼藤酮和/ 或溶剂(对照组)皮下注射,4 周后取脑组织,对黑质部位HE 染色,光镜下观察Lewy小体形态;对黑质、海马、纹状体等脑区进行酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase, TH)、ASN 免疫组织化学染色。结果在对照组大鼠脑内,ASN 广泛分布于各脑区,尤其在皮质、纹状体、海马等纤维投射丰富的区域。鱼藤酮处理的大鼠脑中,黑质TH阳性多巴胺能神经元数目减少、纹状体区TH阳性纤维脱失,黑质部位可见Lewy小体样结构;ASN阳性染色在各个脑区均有增强但各个脑区增强程度不一,黑质部位神经元胞浆和胞核内均有ASN明显聚集,纹状体可见ASN聚集围绕在细胞周围。海马部位偶见ASN在胞浆中点状聚集,胞核中无明显改变。结论在鱼藤酮皮下注射导致的帕金森病大鼠的脑内,ASN在多个脑区中表达增加,而在黑质纹状体部位聚集最为明显,蛋白分布由多巴胺能神经元的突触末端向胞浆和胞核扩展。     

新疆维吾尔族、汉族帕金森病患者α-突触核蛋白SNCA基因多态性与临床症状的关系

目的探讨新疆维吾尔族、汉族帕金森病(PD)患者α-突触核蛋白SNCA基因多态性与临床症状的关系。方法应用PCR-限制性片段长度多态性分析法对新疆地区的90例维吾尔族和135例汉族PD患者进行SNCA基因rs3822086位点多态性分析。采集相关临床资料;采用H-Y分期法判断PD严重程度;采用统一PD评定量表(UPDRS)、日常生活能力问卷(ADL)、MMSE和神经精神问卷(NPI)进行评分。比较SNCA基因rs3822086位点不同基因型PD患者间临床症状的差异。结果基因检测结果显示,SNCA基因rs3822086位点C/T基因型111例,T/T基因型61例,C/C基因型53例;不同基因型PD患者间年龄、性别、民族及病程的差异均无统计学意义。不同基因型PD患者间H-Y分期的差异无统计学意义(P=0.237);PD严重程度的差异无统计学意义(P=0.068);首发症状的差异无统计学意义(P=0.746);UPDRSⅡ评分的差异无统计学意义(P=0.598);UPDRSⅢ评分的差异无统计学意义(P=0.815);UPDRSⅣ评分的差异无统计学意义(P=0.096);ADL评分的差异无统计学意义(P=0.464);MMSE评分的差异无统计学意义(P=0.475)。SNCA基因rs3822086位点T/T基因型PD患者NPI评分明显高于C/C基因型PD患者(P0.05)。结论新疆维吾尔族、汉族PD患者SNCA基因T/T基因型在神经精神症状方面的风险要高于C/C基因型,其他临床症状与SNCA基因多态性无关。     

左旋多巴-聚酰胺-胺树突状大分子共轭体抑制帕金森病α-突触核蛋白纤丝化过程

目的构建左旋多巴-聚酰胺-胺(PAMAM)树突状大分子共轭体,评价其在α-突触核蛋白(α-Syn)纤丝化过程中的作用。方法采用左旋多巴对PAMAM树突状大分子进行表面修饰,合成端基改性产物左旋多巴-PAMAM树突状大分子共轭体。应用超视光谱和衰减傅里叶变换红外光谱仪(FTIR)鉴定左旋多巴-PAMAM树突状大分子共轭体合成,硫磺素含量测定及FTIR评价左旋多巴-PAMAM树突状大分子共轭体在α-Syn纤丝化中的作用。结果超视光谱和FTIR可以鉴定共轭体是否形成,相对于单独的左旋多巴及PAMAM树突状大分子,共轭体的FTIR峰值区域吸收增加。α-Syn与PAMAM树突状大分子共孵育后,与空白对照组(硫磺素+缓冲液)比较,其硫磺素荧光染色显著减少(P0.05);与左旋多巴-PAMAM树突状大分子共轭体共孵育后,硫磺素荧光染色进一步减弱。α-Syn的FTIR显示,左旋多巴-PAMAM树突状大分子共轭体组随时间延长,峰值区域明显下降,且吸收率的差异发生在1 636 cm-1和1 655 cm-1。结论左旋多巴与PAMAM树突状大分子可以形成共轭体,左旋多巴-PAMAM树突状大分子共轭体显著抑制α-Syn纤丝化,且各时间点的效果均较单独应用左旋多巴或PAMAM树突状大分子更好。     

帕金森病患者皮肤神经磷酸化α-突触核蛋白研究

目的探讨帕金森病患者磷酸化α-突触核蛋白(phosphorylated α synuclein,p-α-syn)在皮肤神经中的沉积特点,以及其作为帕金森病外周生物标志物的可能性。方法纳入2017年6月1日至2018年8月31日就诊于郑州大学第一附属医院神经内科的15例帕金森病患者及同期年龄匹配的健康志愿者31名,进行13项小纤维神经病和症状问卷(SFN-SIQ)评分。将帕金森病患者按照主要临床表现分为运动迟缓(n=7)和静止性震颤(n=8)2个亚组,并以Hoehn-Yahr分级评价病情的严重程度,其中0~2.5级为早期组(n=11),3.0~5.0级为中晚期(n=4)。采用环形钻孔器取帕金森病患者小腿和颈部皮肤,健康对照组只取小腿部位皮肤,进行免疫组织化学和免疫荧光染色,观察p-α-syn在皮肤神经中的沉积情况并计数穿过单位长度基底膜的神经纤维数量即表皮内神经纤维密度(intraepidermal nerve fiber density,IENFD)。结果12/15的帕金森病患者表皮下神经丛、真皮神经束、汗腺、立毛肌、血管或毛囊周围神经中可见点状或线状p-α-syn沉积,健康对照组皮肤中未见沉积。p-α-syn在单个部位沉积的阳性率分别为小腿6/15、颈部7/15,总阳性率为12/15。帕金森病组的IENFD为(6.85±1.94)根/mm,较对照组[(10.45±3.70)根/mm]明显下降(t=-3.303,P=0.002),与SFN-SIQ评分呈负相关(r=-0.561,P=0.046)。疾病早期与中晚期患者之间,以及以震颤和以运动迟缓为主要表现的患者之间比较,p-α-syn沉积阳性率和IENFD差异均无统计学意义。结论p-α-syn在帕金森病患者皮肤神经纤维中沉积,伴随IENFD明显下降。提示皮肤神经中p-α-syn沉积可能是帕金森病固有的外周病理改变,有作为帕金森病患者诊断外周生物标志物的可行性。     

百草枯诱导小鼠α-突触核蛋白表达升高并聚集的实验研究

目的观察除草剂百草枯诱导小鼠黑质细胞α-突触核蛋白(α—synuclein，α-syn)表达及聚集，探讨环境因素在帕金森病(Parkinsondisease，PD)发病中的作用机制。方法C57BL小鼠按体重10mg／kg经腹腔注射百草枯，应用原位杂交、RT—PCR分析α—syn mRNA表达．免疫组化、免疫荧光双标染色观察黑质区α—syn显色．并进一步确定表达rsyn的神经元表型及α—syn聚集。结果注射百草枯组小鼠黑质区α—syn mRNA表达量升高，rsyn阳性细胞数相对增加；rsyn与硫磺素、酩氨酸羟化酶(tyroxine hydroxylase，TH)及硫磺素复合染色的阳性细胞数均升高。结论百草枯诱导小鼠黑质细胞α—syn表达升高并出现蛋白聚集可能是导致PD发病的机制之一。     

α-突触核蛋白病类朊蛋白样发病机制研究进展

突触核蛋白病是具有α-突触核蛋白病理特征的疾病,包括帕金森病、路易体痴呆、路易体变异型阿尔茨海默病、多系统萎缩、单纯性自主神经功能障碍以及脑内铁沉积神经变性病-1型,其共同病理特征是α-突触核蛋白选择性地在易损的神经元和神经胶质细胞中积聚,形成包涵体。近年来多项研究表明错误折叠的α-突触核蛋白是引起这一类疾病的主要原因,而且其具有与朊蛋白相似的作用方式,在细胞内和细胞间发生转移从而在神经系统内播散,导致多种神经变性疾病的发生和进展。本文就α-突触核蛋白病类朊蛋白样发病机制研究进展进行综述。     

体液中α-共核蛋白与帕金森病的相关研究进展

帕金森病(PD)是仅次于阿尔茨海默病(AD)的第二大神经系统退行性疾病。α-共核蛋白在神经元内错误折叠或大量聚集形成嗜酸性包涵体,是PD主要的病理特征之一,分布于中枢神经系统以及外周自主神经系统中。近年多项临床研究证实,在PD患者体液(如脑脊液、血浆、唾液等)中α-共核蛋白存在特征性的变化。此外,α-共核蛋白的其他形式(如寡聚体、磷酸化形式等)联合AD病理蛋白(如tau蛋白、Aβ1-42蛋白等)对诊断PD可能具有更高的敏感度和准确度。因此,文中将体液中α-共核蛋白水平与PD的相关研究进行综述。