大黄素对TNF⁃α诱导的类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的影响

目的探讨大黄素对TNF?α诱导的类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的影响。方法将人类风湿关节炎成纤维样滑膜HFLS?RA细胞随机分为对照组(未处理)、诱导组(TNF?α处理)、25μmol/L大黄素组(TNF?α和大黄素处理)、50μmol/L大黄素组(TNF?α和大黄素处理)和100μmol/L大黄素组(TNF?α和大黄素处理)。采用MTT法和克隆形成实验检测细胞的存活率和克隆形成率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,RT?PCR检测凋亡相关基因Bcl?2和Bax mRNA的表达,ELISA检测细胞上清液中IL?6和IL?1β水平,Western blot检测细胞中NF?κB信号通路相关蛋白p?IκBα和p?NF?κB p65的表达。结果TNF?α能够使HFLS?RA细胞的存活率、克隆形成率、Bcl?2 mRNA的表达和p?IκBα、p?NF?κB p65蛋白的表达以及细胞上清液中IL?6和IL?1β水平升高(P<0.05),而细胞凋亡率和Bax mRNA表达降低(P<0.05);25、50、100μmol/L大黄素能够呈浓度依赖性抑制TNF?α引起的上述变化(P<0.05)。结论大黄素可能通过抑制NF?κB信号通路的活化抑制类风湿关节炎滑膜细胞增殖和炎症反应。     

蒺藜皂苷通过调控lncRNA AGAP2⁃AS1/miR⁃646表达抑制结肠癌细胞的增殖和诱导细胞凋亡

目的探讨蒺藜皂苷对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法实验设置对照组,蒺藜皂苷低、中、高剂量组,pcDNA组,pcDNA?AGAP2?AS1组,si?NC组,si?AGAP2?AS1组,miR?NC组,miR?646组,蒺藜皂苷+pcDNA组和蒺藜皂苷+pcDNA?AGAP2?AS1组。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1 A(p21)、B细胞淋巴瘤/白血病?2(Bcl?2)、Bcl?2相关X(Bax)的蛋白表达;实时荧光定量PCR(RT?qPCR)检测ln?cRNA AGAP2?AS1和miR?646的表达;荧光素酶报告实验检测lncRNA AGAP2?AS1和miR?646的靶向关系。结果不同浓度蒺藜皂苷处理结肠癌HCT116细胞后,细胞增殖抑制率升高,细胞凋亡率升高,CyclinD1、Bcl?2蛋白表达降低,p21、Bax表达升高,lncRNA AGAP2?AS1表达降低,miR?646表达升高,并呈浓度依赖性(P<0.05)。lncRNA AGAP2?AS1靶向调控miR?646,抑制lncRNA AGAP2?AS1表达或过表达miR?646可抑制结肠癌细胞增殖并诱导细胞凋亡。蒺藜皂苷处理的同时过表达lncRNA AGAP2?AS1,增殖抑制率降低,细胞凋亡率降低,CyclinD1、Bcl?2蛋白表达升高,p21、Bax表达降低(P<0.05)。结论蒺藜皂苷可通过调控lncRNA AGAP2?AS1/miR?646表达抑制结肠癌细胞的增殖、诱导细胞凋亡。     

大黄素对LPS诱导的心肌细胞炎症反应和细胞凋亡的影响及机制

目的探讨大黄素对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞炎症反应和细胞凋亡的影响及分子机制。方法培养心肌细胞H9c2,以1μg/mL的LPS诱导心肌细胞建立炎症反应模型,实验分为正常对照组、LPS诱导组、LPS+低剂量大黄素组(5μmol/L)、LPS+中剂量大黄素组(10μmol/L)和LPS+高剂量大黄素组(20μmol/L)。采用噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞相对存活率;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF?α)、白细胞介素1β(IL?1β)I和白细胞介素6(IL?6)水平;流式细胞术检测细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中核因子?κB(NF?κB)P65、NF?κB抑制蛋白(IκB?α)表达。在LPS+低剂量大黄素组中添加NF?κB激动剂佛波酯(PMA),观察其对心肌细胞炎症反应和细胞凋亡的影响。结果与正常对照组比较,LPS诱导组心肌细胞相对存活率降低,TNF?α、IL?1β和IL?6水平增多,凋亡率升高,NF?κB P65表达上调,IκB?α表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05);低、中、高剂量大黄素均可逆转LPS诱导心肌细胞以上指标,且三剂量组间差异有统计学意义(P<0.05)。而PMA能够逆转大黄素的作用。结论大黄素能够抑制LPS诱导的心肌细胞炎症反应和细胞凋亡,该作用机制与大黄素抑制NF?κB信号通路的激活有关。     

金丝桃苷对IL⁃1β诱导的小鼠骶髂关节软骨细胞损伤的影响

目的探讨金丝桃苷对IL?1β诱导的小鼠骶髂关节软骨细胞活性、炎性因子水平、细胞外基质(ECM)平衡,以及核因子NF?κB信号通路的影响。方法分离培养BALB/c小鼠骶髂关节软骨细胞,并将其随机分成5组,对照组、IL?1β组、IL?1β+金丝桃苷(25、50、100μg/mL)组。MTT检测细胞活性;ELISA试剂盒检测白介素(IL)?6、肿瘤坏死因子(TNF)?α、Ⅰ型胶原(Col?Ⅰ)和Ⅲ型胶原(Col?Ⅲ)水平;Western blot检测基质金属蛋白酶(MMP)?3、MMP?9、p?IκB?α和p?p65的表达。结果IL?1β处理显著抑制软骨细胞活性,提高IL?6和TNF?α水平,降低Col?Ⅰ和Col?Ⅲ的水平,并上调MMP?3、MMP?9、p?IκB?α和p?p65的表达;而金丝桃苷呈浓度依赖性抑制IL?1β诱导的细胞活性下降,IL?6和TNF?α水平上升,Col?Ⅰ和Col?Ⅲ水平下降,以及MMP?3、MMP?9、p?IκB?α和p?p65的表达上调。结论金丝桃苷能够抵抗IL?1β诱导的小鼠骶髂关节软骨细胞损伤,提高细胞活性、抑制炎性因子和ECM紊乱,这与其抑制NF?κB信号通路有关。     

白术多糖通过调控TLR4/NF⁃κB信号通路对重症急性胰腺炎大鼠肠黏膜免疫屏障的影响

目的探讨白术多糖对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠黏膜免疫屏障的保护作用及其机制研究。方法采用逆行胆胰管注射5%牛磺胆酸钠溶液法建立SAP模型,术后立即给予相应药物处理。于术后48 h,检测血清中淀粉酶、TNF?α(肿瘤坏死因子?α)、白介素IL?6和IL?1β水平;HE染色观察胰腺和小肠组织病理学变化;流式细胞术检测小肠黏膜中CD4⁺T细胞和CD8⁺T细胞亚群比例;放射免疫法检测小肠黏膜中sIgA(分泌性免疫球蛋白A)水平;Western blot检测小肠组织中TLR4/NF?κB通路相关蛋白表达。结果与假手术组比较,SAP模型组大鼠胰腺和小肠组织损伤严重,血清淀粉酶活性及TNF?α、IL?6和IL?1β水平增加,小肠黏膜CD4+T细胞亚群比例及CD4⁺/CD8⁺比值和sIgA水平降低,而CD8+T细胞亚群比例上升,同时小肠组织中MyD88(髓样分化因子)和TLR4蛋白及NF?κB p65蛋白磷酸化水平增加(均P<0.05)。与SAP模型组比较,白术多糖高剂量组和乌司他丁组大鼠胰腺和小肠组织损伤有所改善,血清淀粉酶活性和TNF?α、IL?6、IL?1β水平降低,小肠黏膜中CD4⁺T细胞亚群比例及CD4⁺/CD8⁺比值和sIgA水平增加,CD8⁺T细胞亚群比例降低,而小肠组织中MyD88、TLR4蛋白及NF?κB p65磷酸化水平降低(均P<0.05)。结论白术多糖可改善重症急性胰腺炎大鼠肠黏膜免疫屏障损伤,其机制可能与抑制TLR4/NF?κB信号通路活化有关。     

基于JNK/p38 MAPK/NF-κB信号通路探究八桂止痛散对脂多糖诱导脊髓星形胶质细胞凋亡的影响

目的:基于JNK/p38 MAPK/NF-κB信号通路探究八桂止痛散对脂多糖(LPS)诱导的脊髓星形胶质细胞凋亡的影响。方法:从SD乳鼠脊髓中分离星形胶质细胞并鉴定。CCK-8法检测不同浓度八桂止痛散(2.5、5、10、20、40、80 mg/ml)对细胞存活的影响;随后分别设置对照组、LPS组、LPS+药物-L组、LPS+药物-M组、LPS+药物-H组、LPS+药物-H+Anisomycin组。CCK-8法、流式细胞术检测细胞存活、凋亡;ELISA法检测细胞中白介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;qRT-PCR检测细胞中JNK、p38 MAPK、NF-κB p65 mRNA表达水平;Western blot检测JNK/p38 MAPK/NF-κB通路相关蛋白表达水平。结果:与对照组相比,LPS组细胞存活率显著降低,细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、JNK mRNA、p38 MAPK mRNA、NF-κB p65 mRNA表达、p-JNK/JNK、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65表达显著增加...     

玉泉丸对糖尿病肾病大鼠GSK⁃3β/Nrf2通路及YKL⁃40表达的影响

目的探讨玉泉丸对糖尿病肾病大鼠GSK?3β/Nrf2通路及肾小球内皮损伤标志物YKL?40表达的影响。方法采用高脂高糖饲料喂养结合一次性腹腔注射链脲佐菌素制备大鼠糖尿病肾病模型,大鼠随机分为正常组,模型组,玉泉丸低、中、高(4、8、12 g/kg)剂量组和二甲双胍(50 mg/kg)组(阳性对照),每组10只。全自动生化分析仪检测血糖、甘油三酯、总胆固醇、肌酐、尿素和24 h尿微量白蛋白水平,HE染色观察肾组织病理学变化并评分,ELISA检测血清YKL?40、TNF?α、IL?6、内皮素(ET)水平及肾组织SOD、CAT活性和MDA水平,免疫组织化学法检测肾组织YKL?40表达,Western blot检测肾组织GSK?3β、p?GSK?3β、Nrf2蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠肾组织病理学评分,血糖,甘油三酯、总胆固醇、肌酐、尿素、24 h尿微量白蛋白水平,YKL?40、TNF?α、IL?6、ET、MDA水平和YKL?40阳性表达指数升高(P<0.01),SOD、CAT活性,p?GSK?3β/GSK?3β、Nrf2蛋白表达降低(P<0.01);与模型组比较,玉泉丸低、中、高剂量组和二甲双胍组大鼠肾组织病理学评分、血糖、甘油三酯、总胆固醇、肌酐、尿素、24 h尿微量白蛋白、YKL?40、TNF?α、IL?6、ET、MDA水平和YKL?40阳性表达指数降低(P<0.01),SOD、CAT活性、p?GSK?3β/GSK?3β和Nrf2蛋白表达升高(P<0.01)。结论玉泉丸可降低糖尿病肾病大鼠肾小球内皮损伤标志物YKL?40表达,减轻氧化应激和炎症反应,可能与激活GSK?3β/Nrf2通路有关。     

金雀异黄素对脂多糖诱导人肺泡上皮细胞A549炎症及凋亡的影响

目的观察金雀异黄素对脂多糖(LPS)诱导人肺泡上皮细胞A549发生炎症与凋亡的影响,探讨其改善肺损伤的作用机制。方法 CCK-8法检测不同浓度金雀异黄素和/或LPS干预细胞12 h后的活力;RT-PCR检测金雀异黄素对LPS诱导的炎性因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达;TUNEL法检测细胞凋亡;Western blot检测信号通路的变化。结果金雀异黄素(1、5、10μmol/L)对细胞活力无明显影响,LPS(1μg/m L)可显著降低细胞活力,而金雀异黄素与LPS共同干预则细胞活力呈浓度依赖性升高;RT-PCR结果显示,LPS可显著提高炎性因子的基因表达,而金雀异黄素则可呈浓度依赖和时间依赖抑制其表达;TUNEL染色结果显示,金雀异黄素(10μmol/L)与LPS联合干预12 h可显著减少LPS诱导的细胞凋亡;Western blot结果显示,金雀异黄素(10μmol/L)与LPS(1μg/m L)协同刺激A549细胞30 min可显著抑制LPS诱导的IκBα、p65信号通路的磷酸化水平。结论金雀异黄素可抑制LPS诱导的人肺泡上皮细胞发生炎症和凋亡,从而发挥保护作用。     

柚皮素对LPS诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的 探讨柚皮素对LPS诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及其机制。方法 MTT法检测5、20、80、160μmol/L柚皮素对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)活力的影响，以筛选适宜实验剂量。细胞分为对照组、LPS组和5、20μmol/L柚皮素组，MTT法检测细胞活力，ELISA法检测细胞上清液中炎症因子IL-6、TNF-α水平，DCFH-DA染色观察细胞内活性氧(ROS)水平，免疫荧光法观察细胞骨架蛋白及细胞连接蛋白形态变化，Western blot、RT-qPCR法检测细胞ICAM1、VCAM1、p-NF-κB p65蛋白和mRNA表达。结果 0～20μmol/L柚皮素对HUVEC细胞无明显的毒副作用。与对照组比较，LPS组细胞活力降低(P<0.01),细胞凋亡率、ROS荧光强度、IL-6和TNF-α水平、ICAM1、VCAM1、p-NF-κB p65蛋白表达升高(P<0.01),细胞骨架蛋白出现聚集，细胞萎缩；与LPS组比较，柚皮素组细胞活力增加(P<0.05),细胞凋亡率、ROS荧光强度、IL-6和TNF-α水平、ICAM1、VCAM1、p-NF-κB p65蛋...     

虎杖苷通过调控Nrf2/HO⁃1信号通路减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤

目的探究虎杖苷对大鼠肝脏缺血再灌注损伤(HIR)的保护作用及其与核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶1(HO?1)信号通路的作用关系。方法采用随机数字法将40只SD大鼠分为5组(每组8只),即假手术组、模型组、低剂量虎杖苷组、高剂量虎杖苷组、高剂量虎杖苷联合Nrf2抑制剂组。建立大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型,并于造模前连续3 d给予不同剂量虎杖苷或联合Nrf2抑制剂ML385预处理。再灌注6 h后,检测各组大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性、白细胞介素1β(IL?1β)、白细胞介素6(IL?6)和肿瘤坏死因子α(TNF?α)表达水平以及肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平;HE染色观察大鼠肝组织病理特征并进行病理评分;TUNEL法检测大鼠肝组织细胞凋亡情况;Western blot检测肝组织核蛋白Nrf2、全蛋白HO?1、Bax、Bcl?2及cleaved caspase?3等表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠肝组织病理评分、血清ALT与AST活性及IL?1β、IL?6和TNF?α水平升高,肝组织细胞凋亡率、MDA水平以及Nrf2、HO?1、Bax、cleaved caspase?3蛋白表达增加,而SOD活性和Bcl?2表达水平降低,组间差异显著。高剂量虎杖苷能显著缓解模型大鼠肝组织损伤,降低炎症水平、氧化应激以及细胞凋亡,并且促进Nrf2及HO?1的蛋白表达,组间差异显著。ML385处理可抑制高剂量虎杖苷的干预效果。结论虎杖苷可能通过激活Nrf2/HO?1信号通路,抑制HIR诱导的炎症、氧化应激以及肝细胞凋亡,改善大鼠肝脏缺血再灌注损伤。     

槲皮素对LPS诱导小鼠RAW264.7细胞炎症的保护作用

目的研究槲皮素对脂多糖(LPS)诱导小鼠RAW264.7细胞炎症的保护作用。方法 CCK-8法检测细胞活力,Griess法检测NO释放,RT-PCR法检测TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS、COX-2、MCP-1、TLR2、TLR4、MyD88 mRNA表达,Western blot法检测iNOS、COX-2、TLR4、IκBα、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达。结果不同浓度(0～50μmol/L)槲皮素对细胞活力无明显影响(P0.05)。与LPS组比较,槲皮素组(25、50μmol/L)显著抑制NO释放(P0.05);槲皮素组(5、15、25μmol/L)显著降低TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS、COX-2、MCP-1、TLR4、MyD88 mRNA表达和iNOS、COX-2蛋白表达(P0.05,P0.01),并呈浓度依赖性;槲皮素组(25μmol/L)显著下调TLR4、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达(P0.05),显著上调IκBα蛋白表达(P0.05)。结论槲皮素可抑制LPS诱导小鼠RAW264.7细胞炎症,其机制可能与调节TLR4/NF-κB信号通路有关。     

蒺藜超微粉对血管紧张素Ⅱ诱导的下丘脑神经元细胞损伤IKK-β/NF-κB信号通路的影响

目的 探讨蒺藜治疗高血压病的可能作用机制。方法 体外原代培养Wistar乳鼠下丘脑神经元细胞,并以血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导细胞损伤即高血压细胞模型。药效学观察时细胞分为5组,模型组(2×10-6mol/L AngⅡ)、蒺藜低剂量组(3μg/ml蒺藜预孵育2 h后加入2×10-6mol/L AngⅡ)、蒺藜高剂量组(30μg/ml蒺藜预孵育2 h后加入2×10-6mol/L AngⅡ)、缬沙坦组(10-5mol/L缬沙坦预孵育2 h后加入2×10-6mol/L AngⅡ)、正常组(无任何干预),分别于AngⅡ作用24、48、72 h时检测各组细胞绝对数量、神经元轴突长度、胞体面积、存活率、凋亡率,并于72 h时检测细胞因子IKK-α、IKK-β、NF-κB p65、IκBα、JAK2、STAT3、AT1、GnRH、PKC、PI3K的mRNA表达;药理学观察时细胞分为6组,模型组(2×10-6mol/L AngⅡ)、蒺藜组(30μg/ml蒺藜预孵育2 h后加入2×10-6mol/L AngⅡ)、缬沙坦组(10-5mol/L缬沙坦预孵育2 h后加入2×10-6mol/L AngⅡ)、拮抗剂组(20μmol/L TPCA-1预孵育2 h后加入2×10-6mol/L AngⅡ)、蒺藜+拮抗剂组(30μg/ml蒺藜+20μmol/L TPCA-1预孵育2 h后加入2×10-6mol/L AngⅡ)、正常组(无任何干预),根据药效学观察结果确定AngⅡ作用时间及相关细胞因子,并检测各组细胞相关因子mRNA及蛋白的表达。结果 与正常组比较,模型组从AngⅡ干预24 h开始的各时间点细胞绝对数量、胞体面积、存活率、凋亡率均显著升高,神经元轴突长度显著降低;与模型组比较,蒺藜高剂量组、缬沙坦组各时间点细胞绝对数量、胞体面积、存活率、凋亡率均显著下降,神经元轴突长度增加(P0.05)。与正常组比较,模型组IKK-β、NF-κB p65、JAK2、STAT3、AT1、GnRH、PKC、PI3K表达显著上调,IKK-α、IKBα表达显著下调(P0.05)。与模型组比较,蒺藜高剂量组IKK-β、NF-κB p65、JAK2、AT1、GnRH、PKC表达下降,IKK-α、IκBα表达升高;蒺藜低剂量组IKK-β、NF-κB p65、AT1、PKC表达下降,IKK-α、IκBα表达升高;缬沙坦组IKK-β、NF-κB p65、AT1、GnRH、PKC表达下降,IKK-α、IκBα表达上调(P0.05)。根据以上结果确定药理学观察时AngⅡ干预时间为24 h,相关细胞因子为IκBα、IKK-β、NF-κB p65、NF-κB p50。与正常组比较,模型组下丘脑神经元细胞IKK-β、NF-κB p50、NF-κB p65mRNA和蛋白表达上调,IκBα表达下调;与模型组比较,缬沙坦组和蒺藜组NF-κB p50、NF-κB p65、IKK-β的表达下调,IκBα表达上调;与缬沙坦组比较,蒺藜组NF-κB p65、IKK-β表达下调,IκBα表达上调(P0.05)。结论 蒺藜可有效维持血压调节中枢功能,其降压机制可能与调节下丘脑IKK-β/NF-κB信号通路活性有关。     

五味子甲素对溃疡性结肠炎大鼠的保护作用

目的研究五味子甲素对溃疡性结肠炎大鼠的保护作用。方法SD大鼠灌肠三硝基苯磺酸/乙醇制造溃疡性结肠炎模型,确认造模成功后分为模型对照组、美沙拉嗪组及五味子甲素低剂量组、中剂量组、高剂量组。各组大鼠每天进行1次灌胃给药,共2周。每周测定各组大鼠体质量变化、大便性状及隐血情况,进行大鼠疾病活动指数DAI评分,并测定血清转化生长因子(TGF)?β1、白细胞介素(IL)?6、IL?10、肿瘤坏死因子?α(TNF?α)水平,以及尿液中乳果糖和甘露醇水平,进行组织切片的病理学组织评分。测定结肠组织TLR4、NF?κB p65、p?NF?κB p65、IκB?α和p?IκB?α蛋白表达。结果给药1、2周时五味子甲素中、高剂量可剂量依赖性降低溃疡性结肠炎大鼠DAI评分以及大鼠血清IL?6和TNF?α水平,升高TGF?β1、IL?10水平(P<0.05);给药2周时五味子甲素中、高剂量可剂量依赖性降低溃疡性结肠炎大鼠尿液中乳果糖、L/M比值,升高尿液中甘露醇水平、大鼠结肠组织病理学评分及TLR4、IκBα、p?IκBα、NF?κB p65、p?NF?κB p65蛋白表达(P<0.05)。结论五味子甲素对溃疡性结肠炎大鼠具有保护作用,可能与调控血清促炎和抑炎因子水平,降低肠道黏膜通透性及抑制结肠组织中TLR4/NF?κB信号通路有关。     

黄芩素通过调控cAMP-PKA-NF-κB/CREB通路改善人脑小胶质细胞的炎性反应北大核心CSCD

该文旨在研究黄芩素(baicalein,BAI)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人脑小胶质细胞(HMC3)的影响,从抑制炎性反应的角度,并基于调控cAMP-PKA-NF-κB/CREB通路,阐释BAI用于治疗缺血性脑卒中的潜在作用机制,对中药治疗脑缺血疾病具有借鉴意义。该实验首先筛选了BAI的安全用药浓度,再采用LPS诱导HMC3细胞24 h的方法制作细胞炎性模型,将分组设定为control组,model组,BAI高、中、低剂量(5、2.5、1.25μmol·L^(-1))组。分别测定细胞提取物中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量以及细胞上清液中白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)的含量,用Wes-tern blot法观察蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)、磷酸化环磷腺苷效应元件结合蛋白(phosphory cAMP-response element binding protein,p-CREB)、核因子-κB p65(nuclear factor kappaB p65,NF-κB p65)的表达,用Hoechst 33342/PI染色法观察LPS诱导后细胞凋亡的情况。在机制探讨过程中采用BAI高、低剂量作为给药组。实验结果显示,BAI在10μmol·L^(-1)及以下的浓度对正常培养的HMC3细胞无影响;200 ng·mL^(-1)的LPS诱导24 h后可以降低HMC3细胞的SOD酶活力并提高MDA的含量,BAI在5、2.5、1.25μmol·L^(-1)的浓度下均能显著提高SOD酶活力,并在5μmol·L^(-1)的浓度下均能显著降低MDA含量;细胞形态结果显示,BAI可以改善因LPS诱导所致的HMC3细胞向M1型转变;ELISA检测的结果显示,BAI能使细胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6、cAMP的含量显著降低;Western blot结果显示,BAI能够提高PKA和p-CREB的蛋白表达,降低NF-κB p65的表达;Hoechst 33342/PI染色结果显示,BAI能够减少HMC3细胞的凋亡情况。以上结果表明,BAI对LPS诱导的HMC3细胞具有保护作用,能够抑制炎性反应和改善细胞凋亡的情况,这可能与调控HMC3细胞上cAMP-PKA-NF-κB/CREB通路有关。     

川陈皮素调节AMPK/NLRP3信号通路对脂多糖诱导的肾小球系膜细胞炎性损伤的影响

目的 探讨川陈皮素(Nobiletin)调节AMP激活的蛋白激酶(AMPK)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的肾小球系膜细胞HBZY-1炎性损伤的影响。方法 将HBZY-1细胞分为5组：正常组、LPS组(100 ng·m L^-1LPS)、川陈皮素组(100 ng·m L^-1LPS+40μmol·L^-1川陈皮素)、AMPK/NLRP3信号通路抑制剂雷帕霉素组(100 ng·m L^-1LPS+0.5μmol·L^-1雷帕霉素)、川陈皮素+雷帕霉素组(100 ng·m L^-1LPS+40μmol·L^-1川陈皮素+0.5μmol·L^-1雷帕霉素)。MTT法检测HBZY-1细胞毒性和增殖;ELISA法检测HBZY-1细胞白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)含量;流式细胞术检测细胞凋亡;Western...     

黄芩苷通过IκBα/NF-κB通路调节Aβ_(25-35)诱导的HT22细胞凋亡

目的探讨黄芩苷通过IκBα/NF-κB通路调节Aβ25-35诱导的HT22细胞凋亡。方法将HT22细胞分为空白组、模型组(40μmol/L Aβ_(25-35))、黄芩苷组(50μmol/L),多奈哌齐组(20μmol/L),给药组预处理1 h后加入Aβ_(25-35)。24 h后,MTT检测细胞存活率并观察细胞形态,Annexin V-FITF/PI检测细胞凋亡,Western blot法检测p-IκBα、p-NF-κB、TNF-α, IL-1β蛋白表达。结果与模型组比较,黄芩苷组与多奈哌齐组的细胞形态较完整、细胞密度较高、细胞间隙较小,细胞存活率升高(P0.01),细胞凋亡率降低(P0.01);p-IκBα,p-NF-κB, TNF-α, IL-1β蛋白表达较低(P0.05,P0.01)。结论黄芩苷可能通过抑制由Aβ_(25-35)激活的IκBα/NF-κB通路,减少TNF-α, IL-1β分泌,从而以减少神经元的凋亡,提高细胞的存活率。     

佛手苷内酯对H9C2心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用及机制研究?

目的:研究佛手苷内酯(bergapten?BG)预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制?方法:将H9C2心肌细胞系传代培养?随机分为正常对照组、缺氧复氧模型组、佛手苷内酯低、中、高浓度预处理组(浓度为5、10、20μmol氧24 h模拟构建心肌缺血再灌注模型?采用CCK￣8法检测细胞活性?按试剂盒方法检测LDH、CKMB漏出量?ELISA法检测SOD、MDA水平?流式细胞学检测细胞凋亡水平?Western blot法检测IL￣6、TNF￣α和p￣PI3K、p￣Akt的蛋白表达?结果:与H10、20μmol活性?下调MDA水平?抑制TNF￣α、IL￣6的释放?促进p￣PI3K、p￣AKT的表达?并有浓度依赖性?结论:佛手苷内酯预处理对心肌细胞缺氧复氧损伤有保护作用?并且可能与PI3K     

氧化苦参碱通过调控SIRT1-TSC2抑制人子宫内膜癌HEC-1B细胞生长及Wnt信号通路的研究

目的 探究氧化苦参碱通过调控SIRT1-TSC2抑制人子宫内膜癌HEC-1B细胞生长及Wnt信号通路。方法 采取MTT法对不同浓度50、100、200、400μmol/L下氧化苦参碱对HEC-1B细胞抑制率;氧化苦参碱+pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1)、氧化苦参碱+pcDNA3.1-SIRT1-TSC2组(转染pcDNA3.1-SIRT1)均用脂质体法转染,加入氧化苦参碱(200μmol/L)处理;应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法、Western blotting法对细胞内信息调节因子1(SIRT1)、TSC2、β-catenin、c-Myc的mRNA水平与蛋白表达分别进行检测和评估,予以流式细胞术对细胞凋亡率进行检测。结果 相比对照组,予以不同浓度50、100、200、400μmol/L下氧化苦参碱各组的细胞增殖抑制率与凋亡率均呈增高趋势(P<0.05),氧化苦参碱(200μmol/L)组细胞内SIRT1、TSC2的mRNA和蛋白水平均呈显著降低趋势(P<0.05);过表达SIRT1-TSC2可逆转氧化苦参碱对HEC-1B细胞增殖、Wnt信号通路失活效...     

常春藤皂苷元对葡聚糖硫酸钠诱导小鼠溃疡性结肠炎的作用及机制研究

目的 研究常春藤皂苷元对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠溃疡性结肠炎(UC)的作用及其机制。方法 (1)体外实验：用不同浓度(0、2.5、5、10、20、40μmol·L^-1)常春藤皂苷元处理RAW264.7细胞24 h后,采用MTT法检测细胞存活率。将RAW264.7细胞分为：空白组、脂多糖(LPS)组(1μg·L^-1)、LPS+2.5μmol·L^-1常春藤皂苷元组、LPS+5μmol·L^-1常春藤皂苷元组和LPS+10μmol·L^-1常春藤皂苷元组;采用LPS干预24 h建立体外细胞炎症模型,并用常春藤皂苷元共孵育24 h进行干预。采用ELISA法测定细胞上清液中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;Western Blot法检测细胞中TLR4/NF-κB通路相关蛋白的表达水平。(2)体内实验：将C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、柳氮磺吡啶组(200 mg·kg^-1)及常春藤皂苷元低、中、高剂量组(12.5、2...     

薯蓣皂苷元对LPS诱导的人胚肺成纤维细胞的干预机制研究

目的基于MAPK信号通路研究薯蓣皂苷元对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的人胚肺成纤维细胞(MRC-5)的影响,探讨薯蓣皂苷元干预肺间质纤维化的机制。方法通过LPS诱导MRC-5细胞建立肺纤维化模型,利用CCK-8法检测细胞增殖水平,免疫荧光法检测α-平滑肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)表达水平,ELISA法检测TGF-β1、IL-6蛋白表达水平,Western blot测定p-38、p-p38、jnk、p-jnk表达水平。结果以LPS诱导MRC-5细胞能够成功建立肺纤维化细胞模型,40μmol/L薯蓣皂苷元组细胞增殖水平较模型组明显降低(P0.01),薯蓣皂苷元组α-SMA表达水平较模型组均有明显下降(P0.01)。与模型组比,10μmol/L薯蓣皂苷元组、40μmol/L薯蓣皂苷元组TGF-β1表达水平明显下降(P0.01),20μmol/L薯蓣皂苷元组TGF-β1表达水平未见明显下降(P0.05);与模型组比,10μmol/L薯蓣皂苷元组IL-6表达水平未见明显下降(P0.05),而20μmol/L及40μmol/L薯蓣皂苷元组IL-6表达明显高于模型组(P0.01);各组p-38、jnk表达水平无明显差异(P0.05),p-p38、p-jnk表达水平薯蓣皂苷元组较模型组明显下降(P0.01)。结论薯蓣皂苷元通过下调LPS诱导的MRC-5细胞中的TGF-β1的表达,可以抑制Smad通路及非Smad通路中诱导肺纤维化的信号通路,阻碍上皮细胞间质化(EMT)进程。并且通过下调TGF-β1表达,薯蓣皂苷元可以有效地抑制MAPK通路中的p38MAPK通路及jnk通路的磷酸化激活,降低α-SMA表达,减少炎性反应、细胞凋亡的发生,从而达到抗肺纤维化的目的。