SPAG6基因RNAi慢病毒载体的构建及其对SKM-1细胞凋亡的影响

目的 构建SPAG6-shRNA慢病毒载体靶向沉默SPAG6基因,探讨SPAG6基因沉默对人骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)细胞株SKM-1细胞增殖及凋亡的影响.方法 设计并构建3条针对SPAG6基因的shRNA质粒表达载体,共转染293T细胞后得到可表达SPAG6基因RNAi的慢病毒载体.转染SKM-1细胞,利用流式细胞术检测转染效率,qRT-PCR及Western blot验证SPAG6基因干扰效果,筛选最佳靶点.CCK-8法检测SPAG6基因沉默对SKM-1细胞生长的影响,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 成功构建SPAG6-shRNA慢病毒载体,流式细胞术检测转染效率均在60％以上.qRT-PCR及Western blot检测结果显示SPAG6-shRNA3慢病毒载体敲除效率最高,为最佳靶点.SPAG6基因干扰后,干扰组SKM-1细胞的增殖明显受抑,抑制率为(60.18 ±0.37)％,与阴性对照组相比差别有统计学意义(P＜0.05).干扰组SKM-1细胞凋亡率为(16.32±5.80)％,显著高于阴性对照组[(4.28±0.88)％,P =0.024]及空白对照组[(3.08±1.50)％,P=0.019].结论 SPAG6-shRNA慢病毒载体能有效降低SPAG6基因表达水平,抑制SKM-1细胞增殖并促进其凋亡.     

Prestin在Spag6基因敲除小鼠外毛细胞中的表达

目的 探究prestin在精子相关抗原6(Spag6)基因敲除小鼠中的表达及其与SPAG6之间的关系.方法 获取小鼠耳蜗基底膜组织,进行免疫染色,采用共聚焦显微镜观察prestin与SPAG6在毛细胞中的共同分布.比较野生小鼠(Spag6+/+) 、杂合型小鼠(Spag6+/-) 和同窝基因敲除小鼠(Spag6-/-) 外毛细胞prestin的荧光强度差异和毛细胞的形态改变,并以蛋白印记实验和实时定量聚合酶链反应检测3种基因型小鼠的prestin表达水平.结果 SPAG6存在于野生型和杂合型成年小鼠的外毛细胞中,在表皮板处呈阳性表达,与prestin共同分布于外毛细胞的外侧壁处.基因敲除小鼠prestin的荧光强度较野生小鼠更弱,并且外毛细胞出现形态异常.蛋白印迹实验和实时定量聚合酶链反应均显示,基因敲除小鼠prestin表达量显著降低.结论 SPAG6参与外毛细胞的构成,且影响外毛细胞prestin表达,提示两种蛋白之间存在相互作用.     

精子相关抗原9在卵巢浆液性上皮肿瘤中的表达

目的检测精子相关抗原9(SPAG9)在卵巢浆液性上皮肿瘤中的表达,初步探讨其在卵巢浆液性上皮肿瘤术前诊断中的意义。方法应用免疫组织化学SP法,检测良性组24例、交界性组27例、恶性组32例中SPAG9的表达,采用酶标记免疫吸附测定法(ELISA)检测卵巢浆液性上皮肿瘤患者血清中SPAG9的表达水平,与对应的血清CA125表达水平进行相关性分析,并用受试者工作特征(ROC)曲线评价两指标的诊断价值。结果①SPAG9在卵巢上皮性恶性肿瘤组织中的表达高于交界性组及良性组,并与恶性肿瘤的细胞分化程度相关(P<0.05);②卵巢浆液性上皮性肿瘤患者血清中SPAG9有表达,恶性组高于良性组,其血清学水平与CA125呈正相关(P<0.01),ROC曲线分析提示SPAG9对卵巢上皮性恶性肿瘤有较高的诊断意义,但并不优于CA125。结论SPAG9的表达与卵巢上皮性肿瘤的恶性程度相关,在卵巢上皮性恶性肿瘤中表达较高,可作为卵巢上皮性肿瘤术前诊断和术后治疗监测新的生物学指标。     

血管内皮生长因子在鼻咽癌中的表达及其临床意义

目的 :探讨血管内皮生长因子 (VEGF)在鼻咽癌 (NPC)中的表达特点及其临床意义。方法 :应用免疫组织化学S P法对 47例低分化NPC及 10例慢性鼻咽炎患者进行VEGF蛋白产物检测 ,并进行 5年以上随访观察。结果 :① 47例NPC组织中 32例 ( 6 8.0 %)VEGF蛋白表达阳性。 10例慢性鼻咽炎上皮VEGF表达均为阴性 ;②伴颈淋巴结转移的NPC组织中VEGF表达阳性率 ( 82 .6 %) ,明显高于不伴颈部淋巴结转移者 ( 5 4.2 %,P <0 .0 5 ) ;③NPC放疗后局部复发者VEGF阳性表达率 ( 85 .0 %) ,明显高于无局部复发者 ( 5 5 .5 %,P <0 .0 5 ) ;④NPC放疗后 <5年生存期者VEGF阳性表达率 ( 84.2 %) ,明显高于≥ 5年生存期者 ( 6 4.3%,P <0 .0 5 ) ;⑤Ⅲ～Ⅳ期NPC组织中VGEF的表达阳性率 ( 80 .0 %)明显高于Ⅰ～Ⅱ期表达阳性率 ( 49.0 %,P <0 .0 5 )结论 :VEGF蛋白过度表达可能在NPC发生、发展过程中起一定作用 ,检测VEGF在NPC组织中的表达对预测NPC颈淋巴转移和复发、临床分期及评估预后有一定意义。     

过表达精子相关抗原9对前列腺癌细胞PC3生物学行为的影响

目的 研究精子相关抗原9(sperm-associated antigen 9,SPAG9)对前列腺癌细胞增殖、细胞周期、侵袭转移等生物学行为的影响,探讨可能的分子机制.方法 前列腺细胞PC3中转染SPAG9后,qRT-PCR和Western blot检测转染后细胞SPAG9的表达变化;CCK-8检测SPAG9对PC3细胞增殖的影响;流式细胞术检测SPAG9对PC3细胞周期的作用;Transwell实验检测转染SPAG9对PC3细胞体外迁移能力的影响.结果 qRT-PCR检测结果表明SPAG9组的SPAG9的相对表达量(20.776 3±3.080 9)明显高于对照组(1.010 2±0.178 4)(P ＜0.01).Western blot结果显示在前列腺癌细胞PC3中过表达SPAG9后成功.CCK-8实验表明SPAG9促进细胞增殖;流式细胞术检测结果表明过表达SPAG9使PC3细胞周期加快;在Transwell迁移实验中,SPAG9转染细胞后,SPAG9组穿膜细胞数为(88.078 ±4.509)/视野,对照组穿膜细胞数为(54.333 ±4.582)/视野,SPAG9组细胞迁移能力明显高于对照组(P ＜0.05).结论 SPAG9促进前列腺癌细胞PC3的增殖、细胞周期及侵袭转移等生物学行为,并可能通过ERK和JNK信号通路发挥这些作用.     

SPAG9基因沉默对人非小细胞肺癌细胞生物学功能的影响

目的:研究精原相关抗原9(spermatogenic antigen 9,SPAG9)对非小细胞肺癌A549细胞增殖、细胞周期、凋亡、迁移等生物学功能的影响。方法:A549细胞转染SPAG9 siRNA后,qRT-PCR和Western blot检测转染前后SPAG9的表达变化;CCK-8检测SPAG9对A549细胞增殖的影响;流式细胞术检测SPAG9基因对A549细胞周期和凋亡的影响;Transwell实验检测SPAG9基因对A549细胞体外迁移能力的影响。结果:qRT-PCR检测结果表明:实验组的SPAG9的相对表达量为(0.28±0.12),明显低于对照组(1.04±0.06)(P0.05);Western blot结果表明:对照组相对蛋白表达水平为(0.34±0.12),实验组为(0.11±0.08),两组比较,差异有统计学意义(P0.05);CCK-8实验表明:SPAG9沉默可抑制细胞增殖;流式细胞术检测结果表明:沉默SPAG9可使A549细胞发生G0/G1期阻滞,凋亡增加;Transwell迁移实验表明:实验组细胞迁移能力明显低于对照组(P0.05)。结论:SPAG9沉默可抑制非小细胞肺癌A549的增殖、迁移,促进凋亡发生,为探寻中药治疗非小细胞肺癌的靶点奠定了实验基础。     

聚肌苷酸-聚胞苷酸对人髓核细胞基质金属蛋白酶-1、13表达的影响

目的 探究聚肌苷酸-聚胞苷酸[polyinosinic-polycytidylic acid,Poly(I:C)]对人髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPC)基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)-1、13表达的影响.方法 取人椎间盘组织,采用酶消化法分离并体外培养NPC.不同时间不同剂量的Poly(I:C)刺激NPC,利用qPCR和Western blot方法检测MMP-1、13的mRNA和蛋白质表达情况;siRNA分别沉默TLR-3、RIG-1和MDA-5后,Poly(I:C)刺激NPC,qPCR检测MMP-1、13的mRNA表达情况.结果 分离培养的NPC 5~6 d后,贴壁生长;Poly(I:C)刺激NPC后,MMP-1、13的mRNA和蛋白质表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);siRNA沉默TLR-3后,MMP-1、13的mRNA 表达水平受到明显抑制,差异有统计学意义(P<0.05);siRNA沉默RIG-1和MDA-5后,MMP-1、13的mRNA 表达水平不受影响(P>0.05).结论 Poly(I:C)通过TLR-3受体途径促进NPC表达MMP-1、13.     

SPAG5在原发性乳腺癌中的表达与TEC方案新辅助化疗敏感性的关系

目的 观察精子相关抗原5(SPAG5)在乳腺癌组织中的表达,探讨其表达情况与临床病理因素及TEC方案(T:多西他赛,E:表柔比星,C:环磷酰胺)新辅助化疗疗效之间的关系.方法 收集107例接受TEC方案新辅助化疗的乳腺癌患者化疗前的组织标本,通过免疫组织化学法检测各标本中SPAG5蛋白的表达,结合临床病理因素及新辅助化疗疗效进行分析.结果 107例原发性乳腺癌组织中SPAG5蛋白高表达率48.6％ (52/107),与人类表皮生长因子受体2过表达呈正相关性(P=0.000),与细胞增殖核抗原过表达呈正相关性(P =0.019).SPAG5的表达在患者年龄、肿瘤大小、肿瘤分期、组织学分级、淋巴结状况、雌激素受体及孕激素受体的表达情况中均差异无统计学意义.化疗总体客观缓解(OR)率为70.1％(75/107),其中病理完全缓解(pCR)率9.3％(10/107),SPAG5高表达组OR率为82.7％(43/52),低表达组56.1％(32/57),差异有统计学意义(P=0.006).SPAG5高表达组pCR率为15.4％ (8/44),SPAG5低表达组pCR率为3.6％(2/53),差异有统计学意义(P=0.048).结论 SPAG5作为肿瘤增殖指标,其表达状态对于乳腺癌患者TEC方案新辅助化疗的疗效具有预测作用.     

精子相关抗原6基因以非P53依赖方式促进TRAIL诱导的骨髓增生异常综合征细胞凋亡

目的 研究精子相关抗原6(sperm-associated antigen 6,SPAG6)基因是否以P53依赖方式促进TRAIL诱导的骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)细胞凋亡.方法 通过P53kdRNA慢病毒转染人结肠癌细胞株HCT116筛选P53基因沉默的最佳靶点,利用筛选出来的最佳靶点序列转染SKM-1细胞;加入嘌呤霉素提高转染效率,RT-PCR及Western blot检验P53基因的干扰效果,构建SKM-1 P53kd细胞模型.用SPAG6kd RNA慢病毒载体转染SKM-1和SKM-1 P53kd细胞,RT-PCR及Western blot验证.用CCK-8法检测重组人可溶性TRAIL蛋白(rTRAIL)对SKM-1细胞的适宜作用浓度.Western blot检测rTRAIL处理后SKM-1和SKM-1 P53kd细胞株中Caspase-8、cleaved-PARP、PARP的表达水平.结果 构建了SKM-1 P53kd细胞模型,转染率在90％以上,P53基因在mRNA和蛋白表达水平较对照组均显著降低(P＜0.01).SPAG6kd RNA慢病毒载体成功感染SKM-1细胞和SKM-1 P53kd细胞,转染率均在80％以上,SPAG6基因表达较对照组明显降低(P＜0.01).随着rTRAIL浓度的增加,细胞生长逐渐被抑制,30 ng/mL TRAIL诱导的细胞凋亡与对照组差异没有统计学意义,100 ng/mL和300 ng/mL TRAIL显著诱导SPAG6kd细胞凋亡(P＜0.05),而P53基因沉默与否并没有影响该结果,rTRAIL处理后细胞凋亡标志分子明显激活或水平升高,细胞中Caspase-8、cleaved-PARP、PARP的表达水平在SKM-1和SKM-1 P53kd细胞中差异无统计学意义(P＞0.05).结论 SPAG6基因以非P53依赖方式促进TRAIL诱导的MDS细胞凋亡.     

应用激光捕获显微切割和蛋白质组学技术筛选鼻咽癌的差异表达蛋白质

目的:筛选鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的差异表达蛋白质,为寻找NPC的分子标志物提供科学依据. 方法:采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)分别从NPC组织和正常鼻咽上皮组织(normal nasopharyngeal epithelial tissue,NNET)中纯化NPC细胞和正常鼻咽上皮细胞(normal nasopharyngeal epithelial cells,NNEC),应用二维凝胶电泳(2-DE)分离LCM 纯化细胞的蛋白质,图像分析识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和电喷雾电离串联质谱(ESI-Q-TOF-MS)鉴定差异蛋白质点,Western 印迹和组织芯片(tissue microarray,TMA)免疫组织化学验证差异蛋白鳞状细胞癌抗原1(SCCA1)在两种组织中的表达水平.结果:建立了LCM 纯化的NPC细胞和NNEC的2-DE图谱,质谱鉴定了36个差异蛋白质,其中20个蛋白只在NPC表达或表达上调,16个蛋白在NPC中表达下调或缺失. Western 印迹和组织芯片免疫组织化学结果显示:SCCA1在NPC中的表达水平较NNET明显下调,与比较蛋白质组学结果一致.结论:36个差异蛋白可能与NPC的发病有关,为筛选NPC分子标志物奠定了基础.     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

妊娠晚期重度妊高征的监测

重度妊高征表现为高血压、蛋白尿、浮肿等症状 ,严重可以导致母婴死亡。对妊娠足月的重度妊高征 ,可以根据其临产与否及宫颈条件 ,立即决定其为阴道分娩或是剖宫产术。对于妊娠晚期的重度妊高征 ,因其胎龄不足月 ,胎儿生长发育及胎肺成熟度情况需通过一定时间的治疗 ,根据其病情变化来决定其治疗方案或终止妊娠的时机[1,2 ] 。这就需要我们对这一阶段的治疗进行监测 ,防止母儿并发症的发生。现将 2 0 0 0年至今我院收治妊娠晚期重度妊高征 30例的监测结果回顾分析如下。1　资料和方法1.1　研究对象　选择孕 31～ 36周重度妊高征 30例 ,其中 …