大黄素联合吉西他滨抑制体内外胰腺癌生长及其机制研究

目的探讨大黄素联合吉西他滨对体内外胰腺癌生长的影响及其机制。方法采用吉西他滨(20μmol/L)、大黄素(40μmol/L)单独及联合作用胰腺癌细胞株SW1990后,CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Westernblot检测Bax及Bcl-2蛋白表达。建立人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,分别给予大黄素、吉西他滨单独及联合用药,监测移植瘤体积变化;免疫组化法检测移植瘤组织中Ki-67、Bax及Bcl-2表达。结果与吉西他滨组及大黄素组比较,联合用药组显著降低SW1990细胞存活率,提高细胞凋亡率(P<0.05);与对照组比较,大黄素组及联合用药组明显上调SW1990细胞中Bax蛋白表达水平,抑制Bcl-2蛋白表达(P<0.05)。与对照组比较,大黄素组及联合用药组可显著抑制裸鼠胰腺癌皮下移植瘤生长,提高Bax在肿瘤组织中阳性表达,明显降低Ki-67和Bcl-2的阳性表达(P<0.05),以联合用药组作用最佳(P<0.05)。结论大黄素可能通过上调Bax表达和下调Bcl-2表达增强吉西他滨对体内外胰腺癌的抑制作用。     

大黄素增强吉西他滨对裸鼠SW1990细胞移植瘤的抑瘤作用

目的:探讨大黄素增强吉西他滨对裸鼠SW1990细胞移植瘤的抑瘤作用及其机制。方法:在裸鼠SW1990细胞移植瘤的动物模型上,分为生理盐水组(N组),大黄素组(E组,40 mg.kg-1),吉西他滨组(G组,125 mg.kg-1),联合用药组(E+G组,大黄素40 mg.kg-1+吉西他滨80 mg.kg-1)。各组均采取腹腔注射药物,3 d 1次,前后共11次。观察各组用药过程中肿瘤体积、瘤重、体重的变化。末次用药后1周处死裸鼠取肿瘤组织。采用Tunel法检测各组肿瘤组织凋亡情况。采用免疫组织化学染色法和Western blot法检测肿瘤组织凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2和Cytochrome C的表达变化。结果:末次用药后1周E+G组肿瘤体积和瘤重明显小于其他各组;Tunel法显示E+G组肿瘤细胞凋亡比其余各组显著增多;免疫组织化学染色和Western blot法显示E+G组的Bax,Cytochrome C的表达比其他各组显著增多,而Bcl-2的表达比其余各组明显降低,经计算Bcl-2/Bax显著下降。结论:大黄素能显著增强吉西他滨对裸鼠体内人胰腺癌SW1990细胞移植瘤的抑瘤效果,其机制可能是大黄素通过促进胰腺癌SW1990细胞中Bax的表达和抑制Bcl-2的表达,降低Bcl-2/Bax,继而促进线粒体Cytochrome C释放,从而增强吉西他滨对胰腺癌SW1990细胞移植瘤的促凋亡作用,达到增强吉西他滨在体内的抑瘤效果。     

绿原酸联合吉西他滨对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨绿原酸联合吉西他滨对胰腺癌PANC-1细胞增殖和凋亡的影响。方法:以绿原酸、吉西他滨单独用药作用于体外培养的PANC-1细胞,采用细胞毒实验(MTT)法检测细胞半抑制浓度(IC50),确定药物给药浓度;以绿原酸(3μmol/L)、吉西他滨(0.2μmol/L)单独及联合作用于PANC-1细胞,采用台盼蓝染色法检测细胞存活率,PI染色检测细胞凋亡;采用细胞划痕实验检测细胞迁移能力;采用Western blot检测P-JNK、Bcl-2、IL-6、PSTAT3、NF-κB、COX-2蛋白表达。结果:与对照组比较,联合用药组的细胞凋亡率显著升高,存活率显著降低(P<0.01)。细胞划痕实验表明,联合用药组细胞迁移能力显著低于对照组(P<0.01)。Western blot结果表明,联合用药组显著下调COX-2、Bcl-2、IL-6、P-STAT3蛋白的表达,上调P-JNK蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论:绿原酸和吉西他滨联合应用能增强对胰腺癌细胞系PANC-1的增殖抑制和促凋亡作用。     

黄芪注射液对重症肺炎大鼠胸腺细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的:探讨黄芪注射液对重症肺炎大鼠胸腺细胞凋亡相关蛋白表达的影响。方法:将40只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为对照组、模型组、黄芪高剂量组、黄芪中剂量组和黄芪低剂量组,每组8只。采用气管穿刺注入感染法制作大鼠重症肺炎模型。分别采用原位末端转移酶标记法(Terminal deoxynucleotidyl transfer-ase dUTP nick end labeling,TUNEL)检测各组大鼠胸腺细胞凋亡及Western blot检测凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、Bcl-2和Bax的表达。结果:与对照组比较,模型组和黄芪治疗各组胸腺细胞凋亡增加,凋亡相关蛋白cleaved caspase-3和Bax表达增强,除黄芪高剂量组外Bcl-2表达均减弱,Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05);与模型组比较,黄芪高剂量组胸腺细胞凋亡减轻,Bcl-2表达增强,cleaved caspase-3和Bax表达减弱(P<0.05),Bcl-2/Bax比值增加。结论:黄芪注射液能减轻重症肺炎时胸腺细胞凋亡,其机制与促进Bcl-2表达,减轻Bax表达,增加Bcl-2/Bax比值有关。     

肝喜合剂含药血清对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究肝喜合剂对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法 采用不同浓度肝喜合剂含药血清(10%、15%、20%)处理HepG2细胞，CCK-8法检测细胞存活率，流式细胞术检测HepG2细胞凋亡情况，RT-qPCR和Western blot法检测细胞凋亡相关因子Bax、Puma、caspase-9 mRNA和蛋白表达。结果 肝喜合剂含药血清可抑制HepG2细胞生长(P<0.05,P<0.01),促进HepG2细胞凋亡(P<0.05,P<0.01),升高Bax、Puma、active caspase-9蛋白表达及Bax、Puma mRNA表达(P<0.05,P<0.01),并呈剂量依赖性。结论 肝喜合剂可有效抑制HepG2细胞增殖，促进凋亡，其机制可能与促进凋亡相关因子Bax、Puma、caspase-9表达有关。     

白屈菜红碱诱导人肝癌细胞HepG2凋亡及机制探讨

目的:研究白屈菜红碱(CHE)体外诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的作用与机制。方法:以肝癌HepG2细胞为研究对象,通过噻唑蓝(MTT)法测定CHE对细胞的增殖作用,荧光染料Hoechst 33285染色观察CHE对人肝癌细胞HepG2凋亡形态的变化,免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),Bcl-2家族的抑凋亡蛋白Bcl-xl,促凋亡相关半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白和基因表达。结果:与溶剂组比较,CHE能显著抑制HepG2细胞的增殖,其6,12,24 h的半数抑制浓度(IC50)分别为12.98,10.53,11.21μmol·L~(-1),在Hoechst 33258染色结果中,CHE组出现细胞凋亡的典型特征;与溶剂组比较,高浓度CHE能明显上调Bax,Caspase-3的蛋白及mRNA表达,明显降低Bcl-xl蛋白及mRNA表达(P0.05)。结论:白屈菜红碱能抑制肝癌细胞HepG2的增殖,并能上调促凋亡蛋白和mRNA,下调抗凋亡蛋白和mRNA表达,进而诱导凋亡。     

黄芩汤体外诱导人结肠癌SW620细胞凋亡及其对凋亡相关因子表达的影响

目的：研究黄芩汤对人结肠癌SW620细胞凋亡的作用及其机制。方法：CCK-8和MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot方法检测Bcl-2、Bax蛋白表达;酶标免疫测定Caspase-3和Caspase-8的相对活性。结果：与对照组相比,不同浓度黄芩汤处理的细胞增殖抑制率显著增加（P<0.05或P<0.01）,细胞凋亡率升高（P<0.05或P<0.01）,抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2表达降低而促细胞凋亡蛋白Bax表达明显增高（P<0.05或P<0.01）,Caspase-3和Caspase-8活性增强（P<0.05或P<0.01）,并呈量效依赖关系。结论：黄芩汤能够有效的促进结肠癌SW620细胞凋亡,其机制可能与抑制Bcl-2表达而促进Bax表达并增强Caspase的活性有关。     

芥子碱硫氰酸盐提高卵巢癌SKOV3细胞对吉西他滨敏感性的研究

目的：观察卵巢癌SKOV3细胞对吉西他滨(gemcitabine, GEM)敏感性受芥子碱硫氰酸盐影响的情况,探讨其作用机制。方法：取对数期SKOV3/GEM细胞,随机分为耐药组(完全培养基)、干预组(100μmol/L芥子碱硫氰酸盐)、激动剂组(100μmol/L NSC 228155)、联合组(100μmol/L芥子碱硫氰酸盐+100μmol/L NSC228155)。干预48 h进行后续实验。采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,血管生成拟态实验检测细胞血管生成能力,免疫印迹法检测细胞血管内皮钙黏蛋白(vascular endothelial cadherin, VE-cadherin)、Eph受体酪氨酸激酶A2 (Eph receptor tyrosine kinase A2,EphA2)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)、磷酸化EGFR(phospho-EGFR,p-EGFR)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、磷酸化Akt (phospho-Akt, p-Akt)、...     

活血胶囊对动脉粥样硬化兔平滑肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的探讨活血胶囊干预对动脉粥样硬化兔主动脉平滑肌细胞凋亡及凋亡相关因子Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法通过高脂饮食建立实验性动脉粥样硬化兔动物模型,采用TUNEL法检测平滑肌细胞凋亡,SP免疫组化法检测凋亡相关因子Bcl-2、Bax蛋白表达。结果与模型组比较,活血胶囊低、高剂量组均能降低兔主动脉平滑肌细胞凋亡的凋亡指数(P<0.05,P<0.01),降低Bax蛋白表达(P<0.05,P<0.01),升高Bcl-2蛋白表达(P<0.05,P<0.01),并呈现一定的量效关系(P<0.05)。结论活血胶囊可能通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,减少平滑肌细胞凋亡,从而抑制动脉粥样硬化斑块的形成。     

芪楼丸通过调控JAK/STAT信号通路对人肝癌HepG2细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨芪楼丸通过调控JAK/STAT信号通路对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响。方法 40只大鼠随机分为对照组(10 mL/kg生理盐水)和芪楼丸低、中、高剂量组(6.75、13.5、27 g/kg芪楼丸浸膏),各组连续干预5 d,腹主动脉取血制备含药血清。取对数生长期人肝癌HepG2细胞，分别给予各组芪楼丸含药血清干预24、48、72 h。采用CCK8法检测细胞增殖抑制情况，Annexin V-FITC/PI双染流式细胞法检测细胞凋亡情况，ELISA法检测细胞Bax、Bcl-2、caspase-3、caspase-9水平，RT-qPCR法检测细胞Bax、Bcl-2 mRNA表达，Western blot法检测细胞JAK2、STAT3、STAT5、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达。结果 与对照组比较，芪楼丸含药血清能抑制HepG2细胞增殖(P<0.01),促进细胞凋亡(P<0.01),细胞中Bax、caspase-3、caspase-9水平和Bax mRNA表达均升高(P<0.01),Bcl-2水平、Bcl-2 mRNA表达和JAK2、STAT3、p-JA...     

红景天苷对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响简

 目的 观察红景天苷(salidroside)对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响, 探讨其抗肿瘤的可能机制。方法 以体外培养的人肝癌HepG2细胞作为研究对象, 倒置显微镜观察红景天苷对肝癌细胞形态的影响;采用MTS法检测红景天苷对细胞生长的抑制作用;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-8的表达。结果 红景天苷能显著抑制肝癌细胞HepG2增殖并促进其凋亡, 下调细胞Bcl-2 表达, 上调Bax、caspase-3及caspase-8的蛋白表达量。结论 红景天苷在体外对人肝癌HepG2细胞具有显著的抑制增殖和促进凋亡作用, 其机制可能与其调节凋亡基因Bcl-2、Bax、caspase-3与caspase-8的蛋白表达有关。     

芪玉三龙汤药物血清对肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的观察芪玉三龙汤药物血清对人肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响。方法制备芪玉三龙汤药物血清,体外培养A549细胞。将A549细胞分为正常血清组、5%药物血清组、10%药物血清组和20%药物血清组。CCK-8法和集落形成实验检测A549细胞增殖,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、cleaved Caspase-3、Bcl-2表达。结果与正常血清组比较,不同浓度芪玉三龙汤药物血清组A549细胞活力明显降低(P<0.001),细胞凋亡率明显升高(P<0.001),10%药物血清组和20%药物血清组A549细胞Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.001)。结论芪玉三龙汤可能通过上调A549细胞Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达,进而诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖。     

斑蝥酸钠维生素B6诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及周期阻滞

目的: 研究斑蝥酸钠维生素B6（艾易舒）注射液对人肝癌HepG2细胞增殖、细胞周期与凋亡的影响,探讨其分子机制。 方法: 将不同浓度的斑蝥酸钠维生素B6注射液（0,1,5,10 mg·L^-1）作用于人肝癌HepG2细胞12,24,48 h,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞学技术检测细胞凋亡率及细胞周期的变化,Western blot检测蛋白激酶B（Akt）,磷酸化蛋白激酶B（pAkt）,B细胞淋巴瘤-2基因相关X蛋白（Bax）,B细胞淋巴瘤-2基因（Bcl-2）及细胞周期依赖性激酶抑制因子p21蛋白表达变化,RT-PCR检测Bax,Bcl-2及p21 mRNA表达变化。 结果: 斑蝥酸钠维生素B6可显著抑制HepG2细胞的增殖,诱导细胞凋亡,具有显著的时间和浓度效应（P<0.05）;同时G₀/G₁期细胞比例显著升高,S期细胞比例显著降低（P<0.05）。Western blot结果显示斑蝥酸钠维生素B6可下调HepG2细胞中pAkt和Bcl-2蛋白的表达,上调Bax和p21蛋白的表达（P<0.05）。RT-PCR结果显示Bax,p21 mRNA的表达水平明显升高,而Bcl-2 mRNA的表达水平下降（P<0.05）。 结论: 斑蝥酸钠维生素B6可抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,诱导其凋亡并引发G₀/G₁期阻滞,其机制可能与斑蝥酸钠维生素B6参与调控磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）通路有关。     

氧化苦参碱抑制HepG2细胞增殖的研究

目的:探讨氧化苦参碱对人肝癌细胞株(HepG_2)增殖抑制的影响及其作用机制.方法:以0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.8,1,2,5,8,10,15 g·L~(-1)的氧化苦参碱处理HepG_2细胞,四噻唑蓝法(MTT)检测其对细胞增殖的影响;苏木精-伊红(HE)染色比较细胞形态差异;免疫组化染色进一步检测HepG_2细胞肿瘤相关蛋白表达量的变化.结果:不同浓度氧化苦参碱处理HepG_2细胞,低于1 g·L~(-1)对细胞抑制不明显;1～8 g·L~(-1)对细胞生长有明显的抑制作用,呈现时间和剂量依赖性;大于8 g·L~(-1)时,对细胞虽有明显的抑制作用,但未表现出明显的时间和剂量依赖性.进一步免疫组化分析结果显示,HepG_2细胞肿瘤相关蛋白P53和Bcl-2表达量明显减少,而Bax表达量明显增加.结论:氧化苦参碱对HepG_2细胞增殖具有明显的抑制作用;其作用机制可能是通过上调或者下调肿瘤相关蛋白的表达来实现的.     

藤黄酸对HepG2细胞的抗增殖作用及其机制研究

目的观察藤黄酸对人肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用,探讨其作用机制。方法将体外培养的HepG2细胞按随机数字表法分为对照组及藤黄酸低、中、高剂量组,每组5个复孔。对照组以正常培养液培养,加入0.5%二甲基亚砜作为溶媒对照。藤黄酸低、中、高剂量组分别加入依藤黄酸0.1、1.0、10.0μmol/L进行干预。采用MTT法检测细胞增殖抑制率,采用流式细胞术测定细胞凋亡率,Hoechst染色法观察细胞核凋亡情况,Western blot法检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果与对照组比较,藤黄酸低、中、高剂量组HepG2细胞增殖率[(68.00±3.55)%、(51.93±4.36)%、(47.16±4.73)%比(99.87±4.53)%]降低(P<0.01),凋亡率[(23.00±1.22)%、(40.09±4.65)%、(70.32±4.99)%比(4.33±0.57)%]升高(P<0.01),Bcl-2[(0.73±0.10)、(0.25±0.10)、(0.19±0.08)比(0.97±0.11)]蛋白表达降低(P<0.01),Bax[(0.39±0.14)、(0.88±0.15)、(0.85±0.13)比(0.22±0.08)]蛋白表达升高(P<0.01),Bax/Bcl-2比值[(0.34±0.10)、(1.87±0.29)、(1.63±0.23)比(0.13±0.06)]升高(P<0.01);Hoechst染色结果显示,随着藤黄酸作用浓度的递增,HepG2细胞凋亡率呈剂量依赖性递增。结论藤黄酸可通过调控HepG2细胞中Bax及Bcl-2表达抑制细胞增殖。     

Antihepatocarcinoma Effect of Solanine and Its Mechanisms

Objective To explore the antitumor effect of solanine and its mechanisms.Methods The in vivo antitumor effect of solanine was observed using models developed through in vivo transplantation of tumor cells;In vitro lines of sensitive antitumor cells were selected from the digestive system using MTT assay;The effect of solanine on cell morphology was observed using transmission electronic microscopy;The morphology of apoptotic cells was observed using Annexin V/PI double staining and laser confocal scanning microscopy(LCSM);The rate of cell apoptosis was measured using Annexin V/PI double staining and flow cytometry;The concentration of intracellular Ca 2+ ([Ca 2+ ]i)was determined using Fluo-3/AM staining and LCSM;The membrane potential of cellular mitochondria was determined using TMRE staining and LCSM;The protein expression of Bcl-2 and Bax was measured using immunological marking and LCSM;And the activity of caspase-3 was measured using the colorimetric method.Results Solanine could inhibit the growth of tumor weight in S180 tumor-bearing mice and prolong the survival time of H22 tumor-bearing mice.MTT assay revealed that HepG2 cells were quite sensitive to solanine because solanine could induce morphological changes in HepG2 cells,with the rate of early apoptosis being 4%,8.5%,and 20.1%,for HepG2 cells treated for 24 h with solanine at concentration of 0.4,2,and 10μg/mL, respectively.Solanine could raise the[Ca 2+ ]i and lower the membrane potential.It could reduce the protein expression of Bcl-2 while increase that of Bax,thus increasing the activity of caspase-3.Conclusion The obvious antitumor activity of solanine in human hepatocarcinoma is demonstrated.This inhibitory effect is achieved through solanine decreasing the Bcl-2/Bax ratio,thus increasing[Ca 2+ ]i,which could enhance the enzymatic activity of the caspase family,thus inducing the apoptosis of HepG2 cells.     

山绿茶中Ilexgenin A对HepG2肿瘤细胞抑制作用的研究

目的:探讨3β,19α-二羟基乌苏-12-烯-24,28-二羧酸(IA)对肝癌细胞株HepG2细胞周期、凋亡的影响及其作用机制。方法:人肝癌细胞株HepG2以IA 20,40,60,80 g·L-1作用不同的时间后,分别使用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT),吖啶橙(AO)荧光染色法,免疫细胞化学SP法,流式细胞术检测HepG2细胞的增殖抑制情况,细胞周期和凋亡的形态学变化,以及细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax表达的变化。结果:IA对HepG2细胞增殖有抑制作用,其作用随着药物浓度和作用时间的增加而增强。IA作用24 h后HepG2细胞周期的主要特点是大量细胞累积于G1期,进入S期的细胞减少,IA能够诱导HepG2细胞凋亡,IA(40,60,80 g·L-1)经过24 h作用后,细胞凋亡率分别为7.89%,8.37%,9.93%,AO染色观察到大量凋亡细胞,凋亡细胞染色减弱、荧光较暗、呈均匀一致的圆状或固缩状,细胞内Bcl-2的表达随着药物浓度增加逐渐减少;Bax蛋白的表达随着药物浓度增加逐渐增加。结论:IA能够抑制HepG2细胞的增殖,并使细胞大量累积于G1期,进入S期的细胞减少,通过影响凋亡蛋白表达诱导细胞凋亡。     

心脑舒通胶囊对大鼠缺血再灌注脑损伤后细胞凋亡的影响

目的:探讨心脑舒通胶囊对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡,及其对凋亡调控因子蛋白表达的影响。方法:采用线栓法阻塞大脑中动脉致大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(MCAO),24 h后断头取脑,免疫组织化学法测定大脑皮层中Bax,Bcl-2,Fas,Fas-L以及caspase-3蛋白的表达,TUNEL法检测皮层区神经细胞凋亡。结果:缺血再灌注模型组大脑皮层内Bax,Fas,Fas-L和caspase-3蛋白明显升高,Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax明显降低,与假手术组比较,均有显著性差异(P<0.01)。心脑舒通胶囊能明显降低缺血侧大脑皮层内Bax蛋白表达,增加皮层内Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax;减少皮层内Fas和Fas-L蛋白表达,降低皮层内caspase-3蛋白和基因表达,显著减少凋亡的神经细胞数量,与模型组比较,有统计学意义(P<0.01)。结论:心脑舒通胶囊保护受损的脑组织,其机制可能与降低脑组织神经细胞凋亡,调节凋亡调控因子的蛋白表达有关。