肝组织及肿瘤最佳FISH实验条件的探讨

<正>随着医学科学的进步及分子检测技术的不断发展,荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测在病理诊断与临床治疗方面应用越来越广,按照规范化实验操作流程,在多种肿瘤中可得到较为理想的检测结果[1,2]。我们实验室的FISH检测已从乳腺癌HER-2基因发展为软组织肿瘤、淋巴瘤、妇科肿瘤等组织。正常肝组织细胞丰富,间质少,在进行FISH检测时,如果按照检测其他肿瘤组织的实验条件进行,则对于细     

荧光原位杂交技术在尿路上皮肿瘤诊断中的作用

荧光原位杂交(FISH)技术是一种使用荧光标记的DNA探针评估细胞基因改变的技术,其依据为癌症是一种基因缺陷性疾病,大多数癌症伴有染色体的异常改变,采用FISH技术可检测到这些异常改变。目前美国食品药品管理局(FDA)已批准的通过尿液诊断膀胱癌的技术中,包括BTA、NMP22、ImmunoCyt以及FISH等,灵敏度和特异性最高的是FISH。近来研究还发现FISH技术有助于评估表浅膀胱癌患者对卡介苗治疗的反应,另外,FISH还可用于上尿路尿路上皮癌的诊断。本文对FISH技术在尿路上皮肿瘤诊断和随访监测中的临床应用进行综述。     

分子诊断的有力武器——FISH

荧光原位杂交(Florescence In—Situ Hybridization，FISH)是一种利用非放射性的荧光信号对原位杂交样本进行检测的技术。FISH技术是用荧光基团标记特异性的DNA探针，再将标记了荧光信号的探针与待测样本进行原位杂交，在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数。最终通过荧光信号的颜色和数目的异常与否，达到诊断疾病的目的。利用荧光标记的DNA探针，可对染色体或基因异常的细胞和组织样本进行检测和诊断，从而为染色体疾病的诊断、恶性肿瘤的预前和预后提供准确的依据。由于FISH具有快速、准确的特点，因而在问世之初就备受关注。20世纪80年代末，Pinkel和Heiles将FISH技术引入染色体检测领域后，FISH就在临床及科研工作中得到了广泛的运用。20世纪分子生物学和细胞遗传学的发展，逐步揭示了人类各种疾病的分子机制，人类染色体草图的绘制更帮助我们了解了疾病产生与自身染色体或基因异常的关系。为了更好地治疗甚至根除疾病，就必须找到一种能在分子水平对疾病进行准确、快速诊断的工具，而传统的细胞遗传学检测手段并不能满足分子诊断的需要。例如，细胞遗传学传统的核型分析仅能检测染色体数目异常和大片断的缺失，对于基因水平或核苷酸水平的异常变化则无能为力，而且核型分析需要大量的中期细胞，这就需要对样本细胞进行长达7d以上的培养。一些需要及时进行诊断和治疗的患者无法忍受如此漫长的等待。例如，利用常规的核型分析进行产前诊断需要7～22d，而利用Vysis的Aneu Vysion产前FISH诊断试剂盒仅需9～19h。因此，快速准确的FISH检测成为许多疾病诊断的首选。     

膀胱移行细胞癌各分期分级中荧光原位杂交检测敏感性比较

目的评价荧光原位杂交(FISH)在诊断膀胱移行细胞癌各分期分级中的敏感性。方法应用荧光标记的3、7、17号染色体及p16基因探针检测138例血尿患者尿液中脱落细胞的染色体及基因畸变情况,根据诊断标准计算FISH诊断膀胱移行细胞癌的敏感性。同时留取上述患者尿液送病理科行尿找瘤细胞检查,并比较两种方法对膀胱移行细胞癌的诊断效能。结果 FISH图像中细胞核大且不规则者更易观察到染色体基因异常情况,并可见具有较多染色体改变的细胞呈花斑状的染色图像。FISH和尿细胞学诊断膀胱移行细胞癌的总敏感性为83.9%和36.8%,在各分期分级中敏感性为T1期83.6%和31.3%,T2-4期100%和55.6%,G1级36.3%和9.1%,G2级95.2%和42.9%,G3级100%和50%。FISH诊断膀胱移行细胞癌的总敏感性及在肿瘤各种分期分级中敏感性与尿细胞学结果比较均有统计学差异(P<0.05)。FISH诊断膀胱移行细胞癌敏感性高于尿细胞学。结论 FISH对膀胱移行细胞癌的诊断有较高的敏感度。     

FISH技术应用于石蜡切片的操作质控要素

正荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术是根据碱基互补的原则,通过荧光标记的DNA探针与细胞核内待检测的DNA靶序列结合,在荧光显微镜下显示出DNA靶序列杂交信号的一种技术~([1])。已广泛应用于淋巴瘤、软组织肿瘤、尿路上皮癌等肿瘤的辅助诊断,是乳腺癌、肺癌等肿瘤选择靶向药物的重要检测方法。但该技术的操作相对复杂,易受各种因素影响质量,价格相对昂贵,所以做     

分子细胞遗传学技术在血液病中的应用

染色体异常是导致先天性缺陷和肿瘤等疾病的主要原因，传统的细胞遗传学显带技术的染色体核型分析费时、费力，敏感性和特异性差，特别是对复杂染色体异常的分析尤为困难。荧光原位杂交（FISH）、比较基因组杂交（CGH）和多色荧光原位杂交技术包括多重FISH（M—FISH）、光谱核型分析（SKY）等分予细胞遗传学技术克服了传统细胞遗传学缺陷，是对传统核型分析的有力补充。本文对上述分子细胞遗传学技术在血液病中的应用作一综述。     

肺癌ALK、ROS1基因荧光原位杂交检测技术要点

正荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术是分子病理学检测中一种常用的方法,利用荧光素标记探针与细胞核内特定的DNA序列进行杂交,在荧光显微镜下观察结合的探针荧光信号,以检测细胞内的基因状况。该项技术在产前诊断、血液学诊断、实体瘤诊断中均发挥重要作用~([1])。近年来,随着肺癌靶向药物治疗的发展,肺癌靶向基因检测位点也在不断增加。荧光原位杂交技术是肺癌靶     

荧光原位杂交技术诊断膀胱尿路上皮癌临床研究

目的:探讨荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术早期诊断膀胱尿路上皮癌的可行性和有效性.方法:采用3、7、17号染色体着丝粒探针和9p21区带探针对20例健康成人晨尿脱落细胞及100例膀胱尿路上皮癌患者尿液脱落细胞行FISH,并分析膀胱尿路上皮癌FISH阳性表达的相关因素.结果:100例膀胱尿路上皮癌患者均经病理检查确诊,FISH检测均为阳性,膀胱尿路上皮癌FISH阳性表达在年龄、性别、肿瘤类型方面差异无统计学意义(P>0.05),但病理分级越低FISH阳性突变越高(P<0.01).结论:FISH对膀胱尿路上皮癌的早期诊断年龄、性别、肿瘤类型有重要价值.     

UroVysion荧光原位杂交技术检测在泌尿系统肿瘤诊断及膀胱癌预后监测中应用的初步探索

目的:评估UroVysion荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测(以下简称FISH)在诊断不同部位发生的泌尿系统肿瘤中的灵敏度和特异度,探究其在泌尿系统肿瘤筛查中的应用前景,并初步探讨将其检测结果结合临床病史以监测膀胱癌患者预后的价值。方法:收集368例泌尿外科疑似泌尿系统恶性肿瘤住院患者的新鲜晨尿标本,采用FISH检测,比较其检测结果与临床病理特征间的相关性,分析该检测在不同发生部位泌尿系统肿瘤诊断中的价值,尤其是对于血尿患者的肿瘤筛查以及在膀胱癌随访监测中的临床应用价值。结果:(1)采用FISH检测诊断不同发生部位泌尿系统恶性肿瘤(膀胱癌、肾癌、输尿管癌和前列腺癌)时,其对于血尿标本的诊断灵敏度高于非血尿标本(P0.05)。(2)采用FISH检测诊断不同病理分级、分期的泌尿系统肿瘤时,其对于高级别肿瘤的诊断灵敏度和特异度明显高于低级别肿瘤,尤其对于血尿标本呈现出较高的诊断灵敏度(P0.05)。(3)在最终确诊为膀胱癌的156例患者中,有45.51%(71/156)的患者在随访中出现肿瘤复发,而FISH监测膀胱癌患者复发的阳性检出率为57.75%(41/71)。(4)采用FISH法随访监测156例最终确诊为膀胱癌的患者,诊断血尿患者在随访中复发的灵敏度高于有泌尿系统肿瘤病史患者的灵敏度。结论:(1)FISH检测在泌尿系统肿瘤诊断中具有较高的灵敏度和特异度,且与肿瘤的恶性程度及浸润程度间有一定的相关性,尤其在诊断高级别肌层浸润性膀胱癌中具有重要价值。(2)FISH检测可用于监测膀胱癌患者的复发及预后,尤其应加强对血尿患者的随访。     

疑似膀胱肿瘤的血尿患者中荧光原位杂交技术的应用

目的利用荧光原位杂交技术（FISH）俭测尿脱落细胞中阳性细胞百分卒的不同,探讨其在膀胱肿瘤诊断中的意义。方法因血尿怀疑膀胱肿瘤的患者40例,留取患者的尿液做FISH检测,根据FISH结果阳性细胞百分率不同分成4组,分别是0％～5％、6％～10％、11％～20％、≥21％。结果FISH阳性细胞百分率为0％～5％、6％～10％、11％～20％、≥21％4组诊断膀胱肿瘤的准确率分别是55．6％、71．4％、92．3％、100％。高级别膀胱肿瘤与低级别膀胱肿瘤阳性细胞百分率差异具有统计学意义（P〈005）。Ta、T1、T2期膀胱肿瘤阳性细胞百分率差异无统计学意义。结论膀胱肿瘤的发生与FISH阳性细胞百分率具有正相关性,阳性细胞百分率越高膀胱肿瘤发生率越高。     

荧光原位杂交和基因组半定量法检测乳腺癌组织中c-erbB-2基因扩增

目的利用荧光原位杂交(FISH)与基因组半定量法检测乳腺正常良性和恶性组织中原癌基因c-erbB-2的扩增情况。方法收集50例临床切除的乳腺肿瘤组织,抽提收集样品基因组DNA并扩增c-erbB-2的特异序列构建转化子,以c-erbB-2的特异序列为探针进行间期核FISH检测乳腺肿瘤组织中c-erbB-2基因的扩增,并采用基因组半定量法比较不同组别乳腺组织中c-erbB-2基因的扩增。结果FISH检测发现正常乳腺组织中未出现c-erbB-2扩增,而良性与恶性组织中有不同程度的扩增,基因组半定量分析显示恶性肿瘤组织中c-erbB-2扩增程度高于良性与正常组织。结论c-erbB-2扩增是乳腺癌变的可靠的分子指标。可用荧光原位杂交与基因组半定量法对乳腺癌进行分子生物学诊断,且前者的敏感性与稳定性优于后者。     

FISH在肿瘤临床诊断中应用研究的进展

荧光原位杂交（fluorescence in situhy bridization，FISH）是一种快速、有效的分子细胞遗传学技术，该技术可将特异核酸序列探针在中期染色体上精确定位，也可以在问期核上测定目的靶点。随着医学的发展，FISH这项原本用于基础研究领域的技术已经被迅速推广应用于临床。FISH技术弥补了传统显带技术仅能用于分析中期分裂相的缺点，其在检测肿瘤染色体畸变或确定畸变染色体断裂点等方面具有重要价值。     

分子细胞遗传学技术在血液病中的应用

染色体异常是导致先天性缺陷和肿瘤等疾病的主要原因,传统的细胞遗传学显带技术的染色体核型分析费时、费力,敏感性和特异性差,特别是对复杂染色体异常的分析尤为困难.荧光原位杂交(FISH)、比较基因组杂交(CGH)和多色荧光原位杂交技术包括多重FISH(M-FISH)、光谱核型分析(SKY)等分子细胞遗传学技术克服了传统细胞遗传学缺陷,是对传统核型分析的有力补充.本文对上述分子细胞遗传学技术在血液病中的应用作一综述.……     

多探针荧光原位杂交技术在膀胱尿路上皮癌诊断中的意义

目的探讨多探针荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization,FISH）在膀胱尿路上皮癌诊断的可行性,并探讨其与肿瘤临床分期和病理分级的关系。方法收集经膀胱镜检查诊断为膀胱移行细胞癌35例患者,及10例非肿瘤病人,10例正常人群的新鲜尿液标本,应用FISH检测膀胱尿路上皮癌患者尿液脱落细胞中的3、7、17、9号染色体异常,并进行尿细胞学检测（Urinary cytological examination,UCE）。统计学分析FISH和UCE诊断膀胱癌的灵敏性和特异性,并分析FISH检测染色体突变与膀胱肿瘤分期及分级的相关性。结果多探针联合FISH技术与UCE诊断膀胱癌的灵敏度分别为82.86%和37.14%（P〈0.05）,特异度分别为95.0%和100%（P〉0.05）。3、7及17号染色体着丝粒特异性探针及9号染色体长臂2区1带（9p21）的p16位点特异性探针联合应用诊断膀胱癌的灵敏度为82.86%,而单一探针诊断膀胱癌的灵敏度最高仅为65.71%。膀胱癌患者中发生3、7、17号染色体畸变及9号染色体p16基因畸变均与不同病理分级（G1-G3）有关（P〈0.05）;3、7号染色体畸变与临床分期（T0-T4）有相关性（P〈0.05）,而17号染色体及9号染色体p16基因畸变与临床分期无相关性（P〉0.05）。结论多荧光探针FISH诊断膀胱尿路上皮癌敏感性高、特异性强、无创,且与肿瘤分期和分级有一定相关性,临床应用价值高。     

荧光原位杂交和基因组半定量法检测乳腺癌组织中c—erbB-2基因扩增

目的利用荧光原位杂交（FISH）与基因组半定量法检测乳腺正常良性和恶性组织中原癌基因c-erbB-2的扩增情况。方法收集50例临床切除的乳腺肿瘤组织，抽提收集样品基因组DNA并扩增c—erbB-2的特异序列构建转化子，以c-erbB-2的特异序列为探针进行间期核FISH检测乳腺肿瘤组织中c-erbB-2基因的扩增，并采用基因组半定量法比较不同组别乳腺组织中c-erbB-2基因的扩增。结果FISH检测发现正常乳腺组织中未出现c-erbB-2扩增，而良性与恶性组织中有不同程度的扩增，基因组半定量分析显示恶性肿瘤组织中c-erbB-2扩增程度高于良性与正常组织。结论c-erbB-2扩增是乳腺癌变的可靠的分子指标。可用荧光原位杂交与基因组半定量法对乳腺癌进行分子生物学诊断，且前者的敏感性与稳定性优于后者。     

荧光原位杂交技术在尿路上皮细胞癌诊断中的应用

目的应用荧光原位杂交技术（fluorescenceinsituhybridization,FISH）检测分析3、7、17号染色体及9p21位点异常与尿路上皮细胞癌发生、发展的关系,评估其用于尿路上皮细胞癌诊断的可行性和临床应用前景。方法选取2011年7月至2013年8月在青海红十字医院泌尿外科经膀胱镜活检确诊为尿路上皮细胞癌的患者116例作为实验组,另外选取正常体检者92例作为对照组,分别行尿脱落细胞学检查和FISH检测,比较两种方法诊断的特异性和灵敏性,统计分析3、7和17号染色体及9p21位点的畸变率与尿路上皮肿瘤分级的相关性。结果①尿路上皮细胞癌患者中,FISH和细胞学诊断尿路上皮细胞癌的灵敏度分别为81．0％和37．9％;对照组中,FISH和细胞学诊断尿路上皮细胞癌的特异度分别为90．2％和93．4％。②各染色体及区带呈较高的畸变发生率,3、7、17号染色体畸变阳性率分别为94．3％、95．6％和88．5％;9号染色体p21位点畸变阳性率为63．2％。③FISH的灵敏性随着肿瘤分级分期的升高而增高。结论FISH技术能明显改进尿路上皮细胞癌的诊断,对于尿路上皮细胞癌的诊断及复发监测具有重要意义。     

荧光原位杂交在膀胱尿路上皮癌诊断中的应用

目的评价尿脱落细胞荧光原位交（fluorescenceinsituhybridization,FISH）检测在膀胱肿瘤诊断中的应用价值。方法分别对69例疑似膀胱尿路上皮癌及20例对照组的尿液标本进行FISH及细胞学检测,比较两者诊断的敏感性及特异性,统计膀胱尿路上皮癌各个染色体畸变的几率。结果 FISH诊断膀胱尿路上皮癌的总的敏感度高于尿脱落细胞学检查（分别为79.7%、22.0%,P〈0.05）,两者的特异度分别为93.3%、100%（P〉0.05）。结论 FISH在诊断膀胱尿路上皮癌中敏感性高于尿细胞学检查,同时其特异性亦较高,在早期诊断中具有重要意义。     

FISH技术及细胞学技术检测尿脱落细胞对膀胱尿路上皮肿瘤诊断价值研究

目的：比较荧光原位杂交（FISH）技术及细胞学技术检测尿脱落细胞对膀胱尿路上皮肿瘤诊断价值。方法采用CSP3/CSP7组合探针和GLPp16/CSP17组合探针对膀胱尿路上皮肿瘤疑似患者的尿脱落细胞进行FISH检测,同时采用细胞学技术检测尿脱落细胞,比较2种方法的灵敏度和特异度。结果FISH技术筛查膀胱尿路上皮肿瘤的灵敏度和特异度分别为92．5％和85．0％,细胞学技术的灵敏度和特异度分别为27．5％和90．0％。FISH技术的灵敏度显著高于细胞学技术（P＜0．05）,但2种方法的特异度差异无统计学意义（P＞0．05）。结论FISH技术有望成为筛查膀胱尿路上皮肿瘤的新方法。     

光学分子影像学技术在肿瘤中的应用进展

分子影像学技术是一种在活体状态下从微观上显示组织、细胞及亚细胞水平的影像技术,具有实时、无创、精准及灵敏等特点,可在细胞和分子水平进行肿瘤早期筛查和诊断。随着生物发光与荧光成像技术的进步,光学分子影像学技术快速发展。本文就光学分子影像学技术在肿瘤中的应用进展进行综述。     

探讨FISH技术在TCT收集宫颈脱落细胞中的应用

荧光原位杂交(fluorescence in hybridization,FISH)是一种快速、有效的分子细胞遗传学技术.采用荧光标记的特异核酸序列,根据探针与被检测样本中核酸序列的互补性,探针与样本核酸杂交后,在荧光显微镜下检测荧光信号,从而对样本中待测核酸进行定性、定位与定量分析[1].本研究应用FISH技术探讨hTERC(即人染色体末端酶)基因在宫颈脱落细胞的表达.