枯草芽孢杆菌等益生菌对白术白绢病的防治研究

前期工作中发现蚕沙发酵肥能有效缓解白术的连作障碍,并从发酵肥中筛选到4株可能缓解白术连作障碍的益生菌。为进一步探讨蚕沙有机肥缓解杭白术连作障碍的微生物作用机制,从致病白术根际分离并培养白绢病致病菌齐整小核菌(Sclerotium rolfsii),利用平板对峙实验将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、荧光性假单胞菌(Psdeuomnoda fluoerncnet)、类芽孢杆菌(Paenibacillus Ash)和黄杆菌(Flavobacterium mizutaii)4种菌与齐整小核菌进行拮抗,并通过盆栽实验验证。对峙实验结果表明,黄杆菌对齐整小核菌的抑菌率为43.6%;枯草芽孢杆菌的抑菌率为67.6%;荧光性假单胞菌的抑菌率为52.5%,而类芽孢杆菌的抑菌率为12.4%其中枯草芽孢杆菌的抑菌效果最为显著,说明黄杆菌、枯草芽孢杆菌和荧光性假单胞菌能够有效拮抗白绢病病菌,而类芽孢杆菌效果不佳。在致病白术土壤中添加这3种有效益生菌,也能够有效提高白术存活率,而且存活率随着益生菌浓度增加而增加,高浓度(2×108CFU/m L)枯草芽孢杆菌效果最明显,达到100%,另外2种益生菌均为80%。结论:从蚕沙发酵肥中筛选出的3种益生菌均能抑制白绢病病原菌的生长,且枯草芽孢杆菌的防治效果最好,可提高病株的存活率及改善病株生长,提示可以用于生物菌肥的开发。     

发酵乳杆菌发酵人参工艺优化及人参皂苷抗氧化活性测定

目的优化发酵乳杆菌发酵人参的工艺,分析发酵前后人参皂苷抗氧化活性。方法以人参为发酵基质,发酵乳杆菌为发酵菌株,活菌数为响应值,对发酵时间、人参添加量、发酵温度、接种量等因素进行设计及响应面分析。采用HPLC法对人参皂苷含有量进行测定,利用T-SOD试剂盒测定发酵前后SOD活性变化。结果最佳条件为发酵时间42 h,人参添加量8.03%,温度28.24℃,接种量2%,乳酸菌活菌数为4.5×10~(13)CFU/mL。发酵后人参皂苷含有量均有一定升高,表明发酵过程存在其转化。人参匀浆SOD活性较发酵前提高了26%。结论益生菌发酵人参具有潜在的应用价值。     

发酵桔梗活性成分分析及抗氧化能力研究

目的：筛选有助于提高桔梗发酵液活性成分的优势菌株,研究微生物发酵前后桔梗抗氧化能力的变化。方法：以分离得到的来源于新鲜桔梗根部土壤的巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium ZY2104、人参芽孢杆菌B.ginsengisoliZY2103,来源于桔梗泡菜的类肠膜魏斯菌WeissellaparamesenteroidesZY2101、绿色魏斯菌W.viridescensZY2102,以及实验室已有的鼠李糖乳杆菌Lactobacillusrhamnosussw01、枯草芽孢杆菌B. subtilis RZ001、啤酒酵母Saccharomyces pastorianus S5、酿酒酵母S. cerevisiae AY12和S. cerevisiae BY14作为实验菌对桔梗进行发酵,检测发酵前后桔梗中总多酚、总黄酮、总多糖含量的变化;通过测定桔梗皂苷D含量、总抗氧化能力、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率、羟基自由基清除率、还原能力分析微生物发酵对桔梗提取液体外抗氧化能力的影响。结果：在温度37℃、时间72 h、接种量2%的条件下,相较于其他菌株及未发酵组,...     

人参致病菌拮抗菌株的筛选及鉴定

目的:筛选对人参黑斑菌、人参锈腐菌等人参致病菌有较好抑菌活性的微生物菌株,为人参病害生防防治提供参考依据。方法:采用平板稀释法从人参栽培土壤和菌剂产品中分离菌株;以人参致病菌为靶标,采用对峙培养法筛选拮抗菌;分别采用16S r DNA和28S r DNA序列分析方法鉴定细菌和真菌菌株的分类学地位。结果:共计从人参栽培土壤中分离到66株菌,其中菌株X对人参致病菌表现较好抑菌活性;从商品化菌剂中分离出17株菌,其中菌株QM、BM2、HZ3、GG、HC和DD对人参致病菌表现较好抑菌活性。经鉴定,菌株X为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),QM、BM2和HZ3为甲基营养型芽孢杆菌(B.methylotrophicus),GG为枯草芽孢杆菌(B.subtilis),HC为棘孢木霉(Trichoderma asperellum),DD为平展木霉(T.effusum)。结论:筛选出的7株拮抗菌对多种人参致病菌有较好抑菌活性,菌株X可用于生防菌剂开发,与菌株QM、BM2、HZ3、GG、HC和DD对应的商品化菌剂可用于人参病害防治。     

人肠道菌对人参皂苷的代谢及相关产物的抗变态反应活性

人参皂苷R_(b1)、R_(b2)、R_c可转化为20-O-β-原人参萜二醇(IH-901,化合物K)。对人参皂苷R_c经人肠道菌代谢及其相关生物活性的研究尚不完善。本次对此进行了研究,包括人参皂苷R_c经人肠道微生物区系代谢物的分离、代谢人参皂苷R_c细菌的筛选、人肠道菌代谢人参皂苷R_c活性检测、人粪便微生物区系代谢人参皂苷R_c的时效研究及人参皂苷类对RBL-2H3细胞系的抗变态反应活性检测等实验。     

枯草芽孢杆菌固态发酵黄精工艺优化及其质量、药理活性

目的 优化枯草芽孢杆菌固态发酵黄精工艺,并考察其质量及抗疲劳、抗氧化作用.方法 在单因素试验基础上,以发酵时间、用菌量、药材含水量为影响因素,多糖、浸出物含量为评价指标,响应面试验优化发酵工艺.观察发酵前后黄精性状,测定总多糖、总浸出物、总皂苷含量.60只小鼠随机分为空白组(生理盐水)、阳性组(人参)、生黄精提取液组及...     

基于本草基因组学应用流式细胞术和高通量测序技术检测人参基因组大小

人参（Ginseng）是五加科植物人参（Panax ginseng C. A. Mey.）的干燥根和根茎。由于其基因组数据的缺乏制约了人参基础研究和产业发展。本实验以水稻（Oryza sativa ssp. Nipponbare）和大豆（Glycine max(L.) Merrill）为内参,通过流式细胞术检测人参基因组大小约为3.42 Gb;同时,分别构建人参基因组插入片段大小为250 bp和500 bp的鸟枪法（shotgun）文库,利用Illumina Hiseq X Ten平台进行双端PE 150高通量测序,过滤原始测序数据后获得183.82 Gb高质量数据,K-mer分析法预估人参基因组大小为3.35 Gb,测序深度为54.87 X。本研究采用流式细胞术结合K-mer分析法测定人参基因组大小,为人参全基因组测序以及本草基因组学的研究提供基础数据。     

藏药短穗兔耳草有效部位的抑菌活性研究

目的对短穗兔耳草Lagotis brachystachyM axim挥发油及全草分萃取段进行了抑菌活性研究。方法选择金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、伤寒沙门氏菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌为代表菌种,筛选出了对所选细菌的生长具有明显抑制作用的抗菌活性部分。结果短穗兔耳草挥发油、石油醚萃取部分、醋酸乙酯萃取部分、正丁醇萃取部分都具有部分活性。结论短穗兔耳草挥发油对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌有抑菌活性,石油醚萃取部分对5种细菌都不敏感,醋酸乙酯萃取部分对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和大肠埃希菌有抑菌活性,正丁醇萃取部分对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、伤寒沙门氏菌和铜绿假单胞菌有抑菌活性。     

中药饮片耐热菌微生物类群的分析

探索污染中药饮片的耐热菌微生物组成和多样性特征。以9个品种中药饮片为研究对象,采用MALDI-TOF-MS蛋白质指纹图谱技术和Illumina Miseq的16S rRNA宏基因组高通量测序技术对样品的耐热菌微生物群落进行分析。茎类饮片(鸡血藤、通草、小通草)的污染菌检出率最高,种类最多;而果实类饮片(南五味子)检出率最低,污染菌种类最少;根类饮片中,广山药和熟地黄的污染菌检出率和种类偏低。耐热菌微生物类群以芽胞杆菌科和类芽孢杆菌科为主;其中检出率最高的菌属为芽孢杆菌属,还包括短小芽孢杆菌属、类芽孢杆菌属、土壤芽胞杆菌属,高通量测序注释的其他菌属为肠杆菌属、短波单胞菌属、明串珠菌属、甲基杆菌属、脱氯单胞菌、泛菌属、克雷伯菌属和欧文氏菌属等。中药饮片的耐热菌微生物群落潜在危害因子,应完善其微生物限度标准,严格控制产品中的致病菌,加强中药饮片在生产和流通环节的监督管理。     

UPLC⁃QQQ⁃MS/MS法同时测定风湿安泰片中12种成分

目的建立UPLC?QQQ?MS/MS法同时测定风湿安泰片(马钱子、羌活、麻黄等)中麻黄碱、伪麻黄碱、士的宁、马钱子碱、绿原酸、小檗碱、柚皮苷、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、淫羊藿苷、人参皂苷Rb1、异欧前胡素的含量。方法该药物70%甲醇提取液的分析采用Agilent Zorbax SB?C₁₈色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm);流动相水(含0??1%乙酸)?甲醇,梯度洗脱;体积流量0.2 mL/min;柱温40℃;ESI离子源正离子模式,多反应监测。结果12种成分在各自范围内线性关系良好(r>0.9983),平均加样回收率93.5%~103.2%,RSD 0.9%~1.9%。结论该方法简单灵敏,专属性强,可用于风湿安泰片的质量控制。     

基于网络药理学及分子对接研究三七总皂苷治疗肾纤维化的作用机制

目的：本研究利用网络药理学及分子对接技术预测三七总皂苷入血成分的抗纤维化作用机制,探讨其药效物质基础及作用途径。方法：检测并确定三七总皂苷的主要入血成分为潜在活性成分,采用PharmMapper系统,结合CooLGeN及GeneCards服务器筛选成分的潜在靶点;通过DAVID平台进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;采用STRING数据库和Cytoscape软件绘制蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络及“入血成分-靶点-通路-疾病”网络;使用Autodock Vina软件对入血成分与潜在关键靶点进行分子对接。结果：确认三七总皂苷入血成分20个,得到入血成分治疗肾纤维化的潜在靶点31个,涉及细胞内信号转导、凋亡、增殖、基质分解等生物过程和PI3K-AKT、Rap1、HIF-1、FoxO等8个显著相关信号通路。网络分析表明,AKT1、SRC、CASP3、NOS2、EGFR等是抗肾纤维化的关键靶点。分子对接结果显示,入血成分人参皂苷Rh2、丙二酰人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg2、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rg3等与主...     

Ri质粒人参转化系统的建立及鉴定

目的 :建立人参毛状根转化体系。方法 :利用含有Ri质粒的发根农杆菌Agrobacterium rhizogenes感染人参Panax ginseng进行毛状根诱导 ,利用PCR技术及TLC分析方法对毛状根进行鉴定。 结果 :首次从人参带叶幼茎处诱导出毛状根 ,用激素和AS(乙酰丁香酮 )处理可提高转化率并缩短转化时间。毛状根在无激素B5培养基上生长并失去向地性 ,月增长倍数可达 50倍 (鲜重 )。PCR分析证实农杆菌Ri质粒含有rolC序列 (564bp)的T DNA已整合到人参转化株的染色体组中 ,TLC分析证明T DNA特异的表达产物冠瘿碱在转化细胞中合成。人参毛状根中人参总皂苷含量为 2.486% (干重 ) ,而人参原药材总皂苷含量为 1.403% (干重 )。结论 :人参毛状根生长迅速 ,皂苷含量高于原药材 ,该体系的建立为利用生物技术工业化生产人参活性成分奠定了基础。     

商陆提取物抑菌活性评价研究

目的:探讨商陆的有效抑菌活性成分。方法:采用琼脂扩散法测定不同商陆提取物对临床常见的15株病原菌的抑菌圈;采用液体稀释法测定最小抑菌浓度。结果:商陆不同粗提物对病原菌有不同程度的抑制作用,商陆水煎液仅对不动杆菌、白假丝酵母、新生隐球菌有一定抑制作用,最小抑菌浓度分别为500.0,500.0,62.5mg.mL-1,抑菌作用不明显;多糖提取物仅对产气荚膜梭菌、痢疾志贺菌有一定抑制作用,最小抑菌浓度为60.0,7.5mg.mL-1;商陆皂苷30%乙醇提取物抑菌效果较明显、抗菌谱较广,对产气荚膜梭菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、不动杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、志贺菌、甲型副伤寒菌、枯草芽孢杆菌、普通变形杆菌、白假丝酵母均有抑菌作用,最小抑菌浓度范围为17.6～70.0mg.mL-1;商陆皂苷60%和90%乙醇提取物无抑菌活性。结论:商陆抑菌活性主要有效部位为极性较大的皂苷类提取物。     

基于转录组测序分析人参皂苷Rh2抗宫颈癌的潜在作用机制

目的 研究人参皂苷Rh2抗宫颈癌潜在作用机制。方法 采用CCK-8法检测人参皂苷Rh2处理后的细胞活力。采用转录组测序技术检测对照组及人参皂苷Rh2处理组样本生物学重复的有效性、筛选差异表达基因、探寻人参皂苷Rh2抗宫颈癌相关的靶基因和信号通路。qPCR验证转录组数据可靠性。采用分光光度法检测Caspase 1/4酶活性。通过TUNEL染色检测人参皂苷Rh2诱导宫颈癌细胞死亡的形式。结果 人参皂苷Rh2的IC₅₀值为45μmol/L。各组测序样本生物学重复相似度高。GO和KEGG分析结果揭示人参皂苷Rh2主要参与免疫系统进程、细胞增殖、转录调节活性等功能以及细胞焦亡相关NOD样受体信号通路。qPCR验证显示细胞焦亡相关差异表达基因的表达趋势与转录组数据一致。人参皂苷Rh2干预后HeLa细胞的Caspase 1/4酶活性增加,细胞焦亡水平明显升高。结论 人参皂苷Rh2可能通过激活NOD样受体信号通路中的GSDMD、Caspase 1、Caspase 4、NLRP3、IL-1β基因表达诱导细胞焦亡发挥抗宫颈癌作用。     

人参皂苷的体外模拟代谢及转化研究进展

人参系传统名贵中药,近年来对其代谢的研究成为热点.通过查阅国内外相关文献,作者主要从人工胃液、肠道菌代谢、酶和微生物体外转化4个方面对人参皂苷体外模拟代谢及转化进行阐述,分析人参皂苷体外代谢的主要途径,为人参皂苷代谢的系统性研究提供参考.     

人参病害生防细菌分离鉴定及其抑菌活性测定

目的:筛选对人参黑斑菌、人参菌核菌、人参立枯丝核菌等有抑菌活性的微生物菌剂产品,有效解决人参生产过程中的农残超标问题,为人参病害绿色防控提供参考依据。方法:采用稀释平板法从微生物菌剂中分离活体菌株,室内对峙培养验证菌株的抑菌活性;根据菌落形态特征、显微结构及gyr A、gyr B基因序列鉴定菌株的归属。结果:从"KDL"复合微生物菌剂中分离出12株细菌(编号:Y1～Y12),除Y12外,其余菌株对七种人参致病菌均有抑菌活性。其中,Y4对人参菌核菌的抑菌率最高(68. 42%),Y9对人参立枯丝核菌的抑菌率最高(54. 07%),Y2对人参疫病菌、人参黑斑菌、人参灰霉菌和人参锈腐菌的抑菌率最高(分别为68. 25%、52. 58%、49. 46%和40. 65%),Y3对人参根腐菌的抑菌率最高(47. 37%)。经鉴定,Y1、Y2和Y8为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis,Y3～Y7、Y9～Y11为解淀粉芽孢杆菌B. amyloliquefaciens。结论:分离自"KDL"复合微生物菌剂的绝大部分菌株对七种人参致病菌均有较好的抑菌活性,推测该菌剂可能对人参病害具有生防潜力,可尝试用于人参病害防控。!     

发酵三七中的皂苷成分研究

微生物发酵中药将成为中药研究的新内容[1]。微生物与中药相结合,通过微生物发酵传统中药,使微生物中丰富的酶系与中药中复杂的化学成分反应,可能会产生一些中药中不具有的成分或改变一些成分含量的变化,从而可能为活性化合物的筛选提供一种新的途径。三七皂苷是三七的主要活性成分,具有多方面的药理作用,本实验用枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis(Ehrenberg)Cohn对三七须根进行发酵,对发酵后三七中的皂苷成分进行分离得到5个化合物,其中化合物人参皂苷Rh4在三七中未见报道,也未在三七原料药中检测到该化合物,说明该化合物是通过发酵产生的。…     

基于高通量测序的三七微生物群落结构特征分析

目的获得鲜三七和干三七菌群结构信息。方法以鲜三七和干三七为研究材料,利用Illumina MiSeq平台,采用高通量测序并进行数据分析。结果鲜三七和干三七共获得637个操作分类单元(OTUs),其中15个OTU为共有,鲜三七和干三七特有的OTU数量分别为484、123个。新鲜三七中占比较大的菌门为变形菌门(Proteobacteria,59.7%)、厚壁菌门(Firmicutes,40.1%);干三七中占比较高的菌门为厚壁菌门(Firmicutes,99.8%)。鲜三七中占比较大的菌属为肠杆菌属(Enterobacter,37.4%)、嗜碱菌属(Alkaliphilus,11.5%);干三七中占比较大的菌属是芽孢杆菌属(Bacillus,54.6%),类芽孢杆菌(Paenibaciiius,44.9%)。KEGG功能预测表明干三七的萜类化合物和聚酮类化合物代谢功能菌群的相对丰度高于鲜三七。结论鲜三七菌群多样性高于干三七;干三七中的萜类化合物和聚酮类化合物代谢功能菌群丰富度高于鲜三七,这为三七发酵皂苷菌株筛选提供了重要参考。     

离体大鼠肠道菌对6种皂苷类成分代谢研究

为考察离体大鼠肠道菌群对6种皂苷类成分代谢转化的情况,将6种皂苷类成分单体(三七皂苷R_1,人参皂苷Rg_1,人参皂苷Rg_2,人参皂苷Re,人参皂苷Rd和人参皂苷Rb_1)分别与离体大鼠肠道菌群在厌氧条件下孵育8,24 h,通过乙腈沉淀蛋白和乙酸乙酯萃取处理后,采用LC-Q-TOF-MS/MS对代谢产物进行定性分析。通过比较空白对照样品和加药孵育样品的总离子流以及各个色谱峰的准分子离子和多级碎片离子,分析各皂苷类成分在大鼠粪便中可能的代谢产物。结果发现,大鼠肠道菌群对6种皂苷类成分具有显著的代谢转化作用,三七皂苷R_1主要被代谢为5个产物,代谢途径为三七皂苷R_1→人参皂苷Rg_1→人参皂苷Rh_1和人参皂苷F_1→原人参三醇→脱氢原人参三醇;人参皂苷Rg_1主要被代谢为4个产物,代谢途径为人参皂苷Rg_1→人参皂苷Rh_1和人参皂苷F_1→原人参三醇→脱氢原人参三醇;人参皂苷Rg_2主要被代谢为2个产物,代谢途径为人参皂苷Rg_2→原人参三醇→脱氢原人参三醇;人参皂苷Re主要被代谢为4个产物,代谢途径为人参皂苷Re→人参皂苷Rg_2→人参皂苷F_1→原人参三醇→脱氢原人参三醇;人参皂苷Rd主要被代谢为4个产物,代谢途径为人参皂苷Rd→人参皂苷Rg_3和人参皂苷F_2→人参皂苷Rh_2→原人参二醇;人参皂苷Rb_1主要被代谢为5个产物,分别为人参皂苷Rb_1→人参皂苷Rd→人参皂苷Rg_3和人参皂苷F_2→人参皂苷Rh_2→原人参二醇。综上所述,6种皂苷类单体均能够被离体大鼠肠道菌群代谢,主要的代谢途径为脱糖基和脱氢。     

淡豆豉炮制中产γ-氨基丁酸微生物在不同pH值和不同温度下产酶能力比较研究

目的阐明淡豆豉炮制中微生物调控γ-氨基丁酸(γ-amino butyric acid,GABA)的形成机制。方法采用Berthelot比色法、福林酚法测定枯草芽孢杆菌、鸟肠球菌、屎肠球菌、解淀粉芽孢杆菌、黑曲霉、黄曲霉、溜曲霉、桔青霉、极细支孢霉、白腐菌、米根霉、鲑色锁掷酵母菌12种微生物在不同pH值和不同温度条件下产谷氨酸脱羧酶(glutamicacid decarboxylase,GAD)、蛋白酶(中性蛋白酶、碱性蛋白酶、酸性蛋白酶)能力。结果 12种微生物在pH 5～7、28～37℃时产GAD和蛋白酶酶活较高。其中黄曲霉产GAD酶活最高,为41.97 U/h,最适pH 7、温度28℃;其次是鲑色锁掷酵母菌、黑曲霉、米根霉、枯草芽孢杆菌,酶活分别为29.04、25.78、22.42、19.43 U/h。枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶活最高,为24.80 U/mL,最适pH 7、温度37℃;其次是解淀粉芽孢杆菌、米根霉、鸟肠球菌,酶活分别为16.86、12.51、9.18 U/mL。解淀粉芽孢杆菌产碱性蛋白酶活最高,为13.29U/m L,最适pH7、温度34℃;其次是枯草芽孢杆菌、米根霉...