舌癌exosomes诱导CTL细胞体外抗瘤效应的观察

目的：研究舌癌exosomes诱导CTL体外抗肿瘤效应。方法：通过连续离心及超滤法从Tca8113细胞培养上清中分离、纯化出exosomes,然后与树突状细胞（DC）共培养,诱导T淋巴细胞活化为CTL。通过乳酸脱氢酶法测定特异性CTL对Tca8113的杀伤效应。采用SPSS11.0软件包对数据进行t检验。结果：exosomes可促使DC成熟。杀伤实验表明：负载exosomes的DC诱导CTL对Tca8113细胞的杀伤率显著高于未用exosomes负载的DC诱导的CTL及加IL-2培养的T细胞,其差异有显著性（P〈0.01）。结论：Tca8113细胞来源的exosomes负载DC后,可以诱导T细胞成为抗原特异性CTL,具有特异性杀伤肿瘤细胞的功能。     

盐酸氮芥对Tca8113 细胞即时杀伤效应的观察

肿瘤手术中,用抗癌药物盐酸氮芥冲洗或湿敷创面,洗涤器械,以打击脱落的癌细胞,已被列为无瘤操作常规。但是其不同的浓度及作用时间是否能有效地抑制癌细胞,尚无有关实验根据。本实验目的在于评价盐酸氮芥在不同的作用时间及浓度条件下的抗癌效应。１材料和方法１．１...     

肿瘤exosome诱导特异性T杀伤细胞的研究

目的检测癌细胞来源的exosome在体外刺激细胞毒性T淋巴细胞(CTL)特异性杀伤癌细胞的能力.方法分离纯化舌鳞癌Tca8113细胞,培养上清液中的exosome,制备癌细胞的冻融抗原(FTA),并把两者负载到从血液分离和培养的树突状细胞(DC)上,测定其诱导的CTL对Tca8113的杀伤活性,以SPCA-1人肺腺癌细胞系和95-D人巨细胞癌为对照组.结果体外FTA和exosome冲击致敏的DC能显著刺激T淋巴细胞增殖,其诱导的CTL对细胞系Tca8113具有显著的杀伤作用,在效靶比为20:1时12 h平均分别为45.19%+4.57%和43.60%+5.66%(P＜0.01);exosome冲击致敏的DC诱导的CTL对SPCA-1人肺腺癌也有明显的杀伤作用(P＜0.05),但FTA冲击致敏的DC诱导的CTL却无此功能.结论肿瘤细胞培养上清液中分离出的exosome,负载到DC上后,可以活化T细胞,使之成为抗原特异性的CTL,具有特异性的杀伤肿瘤细胞的功能,为口腔癌的免疫治疗开拓了新的途径.exosome特异的CTL也可杀死其他肿瘤细胞,说明肿瘤来源的exosome是一种可引起肿瘤消退的共同抗原.     

体外诱导Tca8113细胞产生耐药性的分析

目的探讨Tca8113细胞长期接触卡铂以后耐药性表达情况。方法以Tca8113细胞系为研究对象,采用间歇性加药,逐步递增剂量,体外连续培养诱导其产生耐药性。用MTT法检测细胞耐药指数,LsAB免疫组化法检测耐药蛋白P糖蛋白- 170（Pgp- 170）、谷胱苷肽S转移酶- π（GST- π）、多药抗药性相关蛋白（MRP）和拓扑异构酶Ⅱ（TopoⅡ）的表达,RT- PCR检测多药耐药基因（MDR）、MRP和GST- π的表达。结果诱导后Tca8113/卡铂（CBP）对氨甲喋呤（MTX）、CBP、平阳霉素（PYM）、长春新碱（VCR）的抗药性明显升高,但对5- 氟尿嘧啶（5- FU）抗药性增加不明显。在免疫组化和RT- PCR中Pgp- 170、MRP和GST- π表达升高,TopoⅡ表达降低。结论Tca8113细胞系在卡铂长期刺激的环境中多种耐药相关蛋白表达上升,表明肿瘤细胞的耐药现象受到多种基因的调节。Tca8113/CBP可以作为一个肿瘤耐药研究的平台。     

链球菌722制剂对人舌鳞癌Tca8113细胞直接作用的实验研究

本文作者报告了链球菌７２２制剂对人舌鳞状细胞癌Ｔｃａ８１１３细胞直接作用的观察，结果表明，虽然癌细胞在０．２～１．０ＫＥ／ｍｌ浓度持续作用下，丧失了集落形成的能力，镜下连续观察见细胞生长抑制；抽去７２２后细胞立即恢复原生长速度增殖。在荷人舌癌裸小鼠的瘤内、瘤周和腹腔内注射，由于裸小鼠先天缺乏Ｔ细胞免疫功能，均未见移植瘤缩小。提示：７２２对癌细胞的直接作用是暂时和可逆的，其抗癌作用主要是通过促进机体     

热休克诱导人舌鳞癌Tca8113细胞HSP70表达的研究

目的:研究热休克恢复期人舌癌Tca8113细胞热休克蛋白(HSP70)的表达和热动力学变化,为人舌鳞癌的免疫治疗提供理论基础。方法:通过人舌鳞癌细胞Tca8113在43℃加热30min,运用免疫组化和流式细胞技术检测在各时间点细胞HSP70的表达,各时间点再次以相同条件加热后用MTT法测各组细胞活性,以期了解Tca8113细胞HSP70表达的动态变化。结果:热休克后恢复2h即出现HSP70的表达,8~12h达到高峰,之后逐渐减少,48h后基本恢复至加热2h后的水平,热休克后恢复12h细胞活性最强。结论:HSP70的迅速表达与缓慢降解对维持Tca8113细胞的生理功能有重要作用。为进一步研究HSP70在人舌癌热疗联合免疫治疗初步提供了理论依据。     

人巨噬细胞与Tca8113细胞融合瘤苗的制备及体外抗肿瘤效应

目的 探讨巨噬细胞融合瘤苗在舌癌免疫治疗中的应用。方法 利用人巨噬细胞与Tca8113细胞融合，通过磁微珠筛选出融合细胞(FC)并扩大培养，观察Fc的生物学特性及其体外诱导抗肿瘤特异性免疫的能力。结果 FC瘤苗的生长低于其亲本Tca8113细胞，流式细胞仪检测融合细胞的主要组织相容性抗原(MHC)Ⅰ、Ⅱ类分子的表达高于Tca8113，能有效刺激混合淋巴细胞反应(MLR)，并能在体外诱导淋巴细胞抑制肿瘤细胞Tca8113的生长。结论 融合细胞瘤苗能显著提高亲源舌癌细胞Tca8113的免疫原性，提示融合细胞瘤苗是一种新的抗肿瘤免疫治疗方法，可作为个体化肿瘤疫苗的新方案。     

量子点对口腔鳞癌Tca8113活细胞中bcl-2、bax的荧光标记观察

目的:探讨量子点对口腔鳞癌(OSCC)活细胞bcl-2、bax蛋白进行观察研究。方法:量子点QD605,QD545通过间接免疫荧光法,在激光共聚焦显微镜下观测人舌癌Tca8113活细胞内bcl-2、bax蛋白与量子点孵育0.5 h、1.0h、1.5 h和2.0 h的荧光成像。结果:量子点对OSCC活细胞中的bcl-2、bax蛋白的观察研究显示:在0.5 h～2.0 h时,QD605和QD545与bcl-2、bax蛋白结合,荧光从分布于胞浆边缘逐渐至胞浆。结论:量子点能对活细胞内蛋白进行观察。     

口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞中透明质酸酶的表达及意义

目的 探讨口腔鳞状细胞癌(OSCC)Tca8113细胞中透明质酸(HAase)表达及意义.方法 以正常人牙龈上皮细胞作对照,采用RT.PCR、免疫荧光技术检测人OSCC Tea8113细胞株中HAase的mRNA水平及其蛋白表达.结果 HAase主要在Tca8113细胞和正常上皮细胞胞浆内表达;HAase mRNA的半定量检测表明,Tea8113细胞内HAase的表达强度比相对应的正常牙龈上皮细胞内HAase的表达强度显著增高,差异有统计学意义.结论 细胞胞浆中HAase的表达水平可能与细胞的恶变有关.     

SRB法检测As_2O_3对KB细胞和Tca8113细胞毒性的研究

目的:采用SRB(Sulforhodamine B)法研究三氧化二砷(As2O3)对人口腔鳞癌KB细胞和Tca8113的细胞毒性。方法:采用SRB法检测As2O3作用于KB细胞和Tca8113细胞前后的A值变化。结果:SRB法检测结果显示在KB组,1、1×10-1、1×10-2、1×10-3、1×10-4μg/mL质量浓度的As2O3所对应的A值分别为0.11、0.21、0.26、0.27、0.27;在Tca8113组,1、1×10-1、1×10-2、1×10-3、1×10-4μg/mL质量浓度的As2O3对应的A值分别为0.48、0.81、0.93、0.97、0.97。结论:As2O3对人口腔鳞癌KB细胞和Tca8113细胞的增殖有明显抑制作用,癌细胞抑制率呈现出剂量依赖性效应关系。     

热疗对舌鳞癌Tca8113细胞及其耐药细胞株耐药性的影响

目的 探讨热疗对舌鳞癌Tca8113细胞和耐药的Tca8113/CBDEA细胞耐药性的影响。方法 采用实时定量逆转录PCR（RT-PCR）检测42 ℃,0.5 h热疗对Tca8113细胞 和耐药的Tca8113/CBDEA细胞多药耐药基因1（MDR1）、多药耐药相关蛋白1基因（MRP1）和谷胱甘肽硫-转移酶π基因（GST-π）表达的影响以及检测热疗对细胞内阿霉素浓度的影响。结果 Tca8113/CBDEA细胞在热疗后4 h和24 hMDR1、MRP1、GST-π耐药基因表达量明显下降（P<0.01）,Tca8113细胞的MDR1、MRP1耐药基因表达在4 h和24 h时亦有明显下降（P<0.05）,GST-π在24 h有明显下降（P<0.01）。热疗以后肿瘤细胞内阿霉素（ADM）浓度有明显上升（P<0.01）。结论 热疗抑制了耐药基因的表达,增加了细胞内的药物浓度, 热疗可能是逆转肿瘤细胞耐药,提高化疗效果的一种有效手段。     

Tca8113细胞系耐药性的实验研究

目的：建立耐顺铂（CDDP）人舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113/CDDP,对其耐药特性进行研究,方法：应用间歇性加药,逐步递增剂量,体外连续透导培养方法,获得Tca8113耐药细胞,采用MTT法,琼脂糖凝胶电泳和免疫组化法对细胞增增时间、裸鼠成瘤性、化疗药敏感性,P-gp和GST－π蛋白表达进行研究。结果：初步建成耐CCDP的人舌鳞癌细胞系（Tca8113／CDDP）,其耐CDDP浓度为10μmol/L。该细胞同时对卫猛（Vm-26)、博来霉素（BLM）、长春地辛、（VDS）、表阿霉素（E－ADM）、泰素（Taxol)等化疗药物产生交叉耐药。连续传代1月后,倍增时间从29．9h降至16．7h,具有裸鼠成瘤性,瘤体倍增加速。CDDP作用Tca8113细胞后,电泳显示有凋亡细胞特有的“梯状”条带,耐药细胞Tca8113／CDDP则无。P－gp（P－糖蛋白）及GST－π表达量升高,表明MDR－1mRNA表达水平增高,结论：CDDP能致Tca8113细胞耐药性。Tca8113／CDDP细胞系具有多药耐药特性,GSH／GST解毒系统可能与Tca8113／CDDP耐药性的产生。     

塞来昔布对Tca8113细胞侵袭性影响的体外研究

目的:探讨环氧化酶-2(cyclooxygenease-2,COX-2)抑制剂——塞来昔布(celecoxib)对Tca8113细胞侵袭性的抑制作用。方法:用划痕实验检测Tca8113细胞的迁移能力;不同浓度的塞来昔布处理人舌鳞癌Tca8113细胞后,用MTT法检测细胞-基质黏附力的变化;用Transwell小室结合Matrix胶检测肿瘤细胞侵袭能力的变化。结果:10、20μmol/L的塞来昔布作用24 h后,细胞的侵袭能力分别下降了54%和73%(P<0.001),细胞-基质黏附力也明显降低(P<0.001)。结论:Tca8113细胞是高侵袭性细胞,塞来昔布对Tca8113细胞侵袭的抑制作用呈剂量依赖性。     

放疗对舌鳞癌Tca 8113细胞多药耐药蛋白及耐药性的影响

目的：探讨放疗对舌鳞癌Tca 8113细胞和耐药的Tca 8113／CBDEA细胞耐药性的影响。方法：应用免疫组化SP法检测放疗对P-糖蛋白（P-glycoprotein,P—gP）、多药耐药相关蛋白1（muhidrug resistance associate protein 1,MRP1）和谷胱甘肽硫-转移酶π（glutathione S—tranferase π,GST-π）表达的影响和检测放疗对细胞内阿霉素浓度的影响。结果：Tca 8113／CBDEA细胞在放疗后4hP—gP,MRP1,GST-π耐药蛋白表达无明显上升,24h耐药蛋白的表达明显升高（P〈0．01）,Tca8113细胞的耐药蛋白表达在4h和24h时均有明显上升（P〈0．01）。放疗以后肿瘤细胞内阿霉素（ADM）浓度有明显下降。结论：放疗可引起舌鳞癌细胞的耐药。提醒我们对舌癌患者进行放疗和化疗的方案设计时应考虑此点。     

稀土离子镧与镨对人舌癌细胞的抑制作用

目的:观察稀土离子镧与镨(LaCl3、PrCl3)对体外培养的人舌癌Tca8113细胞的影响及两种稀土离子作用的差别。方法:!用三种浓度的LaCl3、PrCl3处理体外培养的人舌癌Tca8113细胞并测定细胞生长曲线、用MTT法检测细胞增殖活性、以琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:!Tca8113细胞经镧与镨离子作用后细胞增殖活性明显下降并出现明显的细胞凋亡;镧与镨对细胞的抑制作用比较差异无显著性。结论:稀土离子镧与镨对人舌癌Tca8113细胞有生长抑制作用,且作用呈剂量依赖性和时间依赖性;二者均能引起细胞凋亡,细胞凋亡率也呈剂量依赖性。两种稀土离子的细胞抑制作用差异无显著性。     

Fas基因转染对舌鳞癌细胞系Tca8113凋亡的影响

目的探讨外源性Fas基因介导舌鳞癌细胞凋亡的可行性及其可能的分子机制。方法脂质体法将重组人Fas真核表达载体转染人舌鳞癌细胞系Tca8113，抗Fas单克隆抗体诱导其凋亡，Western blotting检测转染前后Tca8113细胞Fas蛋白表达水平，TUNEL法检测转染前后细胞凋亡水平。结果转染后Tca8113细胞Fas蛋白表达上调；抗Fas单克隆抗体可诱导Tca8113细胞凋亡，凋亡指数升高。结论上调Fas基因表达及应用抗Fas单克隆抗体可诱导肿瘤细胞凋亡，有可能作为肿瘤基因治疗的新途径。     

体内诱导法建立的Tca8113细胞耐卡铂细胞株的耐药性表达研究

目的探讨通过体内诱导法得到的耐药细胞株的耐药性表达情况。方法以人舌癌Tca8113细胞系为研究对象,实验组采用荷瘤耐药动物的肿瘤细胞培养获得,对照组为体外连续培养诱导其产生耐药性。用四唑蓝法检测细胞耐药指数,标记生物素链亲和素法免疫细胞化学检测耐药相关蛋白P糖蛋白、谷胱甘肽S转移酶π、多药耐药蛋白和拓扑异构酶Ⅱ的表达,逆转录PCR检测多药耐药基因、多药耐药蛋白、拓扑异构酶Ⅱ和谷胱甘肽S转移酶π的表达。结果免疫细胞化学和逆转录PCR显示2组细胞多药耐药蛋白、谷胱甘肽S转移酶π、拓扑异构酶Ⅱ等表达均升高,但体内诱导较体外诱导可以获得更高、更稳定的耐药性。诱导后的Tca8113细胞对氨甲喋呤、卡铂、平阳霉素、长春新碱耐药性明显升高,而对5-氟尿嘧啶耐药性增加不明显。结论体内诱导得到的细胞株耐药性明显高于体外诱导株,肿瘤细胞的耐药现象受多种基因的调节。体内诱导Tca8113卡铂耐药细胞株Tca8113/CBP-vo可以作为肿瘤耐药研究的平台。     

人舌鳞状细胞癌顺铂耐药细胞系的建立及其耐药基因表达

目的建立耐顺铂(cisplatin,CDDP)人舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113/CDDP,探讨其与亲代细胞耐药基因表达水平的差异。方法以人舌鳞癌Tca8113细胞系为实验对象,采用间歇性加药,逐步递增剂量,体外连续诱导培养,诱导其耐药性。用MTT法测定细胞的耐药指数和IC50。RT-PCR检测MDR-1、MRP、GST-π和Bcl-2的表达状况,测其光密度比值。结果建立顺铂耐药细胞系Tca8113/CDDP,耐药指数为9.2倍。RT-PCR显示:其MDR-1、MRP、GST-π和Bcl-2的表达均升高,光密度比值MRP:Tca8113/CDDP∶Tca8113=6.667∶1.111=6倍,Bcl:Tca8113/CDDP∶Tca8113=0.912∶0.549=1.6倍,GST-π∶Tca8113/CDDP∶Tca8113=2∶1=2倍。结论耐CDDP人舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113/CDDP有多种耐药基因的表达上升,提示肿瘤细胞的耐药现象受到多种基因的调节。     

舌鳞癌细胞系Tca8113 Fas表达水平与凋亡的关系

目的研究舌鳞癌Tca8113细胞Fas表达水平与细胞凋亡的关系,了解细胞凋亡的相关机制。方法采用脂质体法将含Fas基因片段的真核表达重组质粒pBK-Fas导入舌鳞癌Tca8113细胞,检测转染前后FasmRNA表达水平、Fas蛋白阳性表达率和阳性表达强度。以及细胞凋亡指数,分析细胞凋亡的相关因素。结果Fas转染不提高舌鳞癌Tca8113细胞Fas蛋白阳性表达率(P>0.05),但能提高FasmRNA表达水平、Fas蛋白表达强度,以及细胞凋亡指数。各项指标分别由转染前的0.201±0.015,31.02±4.63,0.88%±0.16%上升到0.399±0.073,54.32±6.38和10.21%±1.46%,统计分析均有显著性差异(P<0.01)。结论Fas介导Tca8113凋亡与Fas蛋白阳性率可能无关,而与Fas蛋白阳性强度有关。Fas蛋白激活细胞凋亡可能存在阈值。只有Fas表达达到一定强度,细胞凋亡才被激活。     

岩黄连脱氢卡维丁体外抑制Tca8113增殖及对端粒酶活性影响的研究

目的：研究中草药岩黄连脱氢卡维丁（Tetradehydroscoulerine，YHL－1）对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖的抑制作用，及其对端粒酶活性和端粒酶催化亚基（hTERT）表达的影响，探讨其抗癌机制。方法：采用噻唑蓝比色法（MTT法）检测不同浓度的YHL-1对Tca8113细胞增殖的影响，同时以TRAP—ELISA法检测Tca8113细胞端粒酶活性改变情况，并用Western blotting法半定量检测端粒酶hTERT的表达。结果：YHL-1能明显抑制Tca8113细胞增殖，且随时间延长和药物浓度的增高，抑制作用增强。72h时，0．200、0．100、0．050、0．025 g／LYHL-1组细胞增殖抑制率分别为（64．1±1．5）％、（47．3±3．3）％、（35．6±5．0）％、（31．8±5．87）％。72 h时，0．100、0．050 g／L组端粒酶活性和hTERT蛋白含量均低于空白对照组（P〈0．05）。结论：岩黄连脱氢卡维丁可以明显抑制Tca8113细胞的增殖，并显著降低其端粒酶活性及hTERT的表达，这可能是其抗舌癌的机制之一。