LncRNA MEG3调控microRNA-181b-5p/TIMP3对前列腺癌细胞侵袭、迁移的影响

目的 探究长链非编码RNA母系表达基因3(lncRNA MEG3)调控微小RNA-181b-5p(microRNA-1816-5P,简称miR-181b-5p)/组织金属蛋白酶抑制因子3(TIMP3)对前列腺癌细胞侵袭、迁移的影响。方法 收集2019年12月—2021年12月本院所收治的20例前列腺癌患者前列腺癌组织及其对应癌旁组织；实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测组织MEG3、miR-181b-5p表达；将前列腺癌细胞(PC3细胞)随机分为对照组(未处理)、pcDNA3.1-NC组(转染pcDNA3.1-NC)、pcDNA3.1-MEG3组(转染pcDNA3.1-MEG)、pcDNA3.1-MEG3+miR-NC组(pcDNA3.1-MEG3与miR-NC共转染)、pcDNA3.1-MEG3+miR-181b-5p mimic组(pcDNA3.1-MEG3与miR-181b-5p mimic共转染);qRT-PCR检测细胞MEG3、miR-181b-5p表达；MTT实验、Transwell实验、划痕实验分别检测PC3细胞活力、侵袭及迁移能力；Western blot检测PC3...     

微小RNA-642a-5p通过靶向作用于Ⅰ型胶原α1对结肠癌细胞的迁移和侵袭的影响

目的:探讨微小RNA-642a-5p(miR-642a-5p)对结肠癌细胞株SW620细胞迁移和侵袭的影响及分子机制。方法:将人结肠癌细胞SW620细胞分成4个组：对照组(OE-NC+mimic-NC组：共转染miR-642a-5p mimics阴性对照与空载体);过表达miR-642a-5p组(OE-NC+mimic...     

miR-342-5p 调控靶基因Merlin 表达促进肝细胞癌侵袭转移的实验研究

目的：探讨miR-342-5p及其可疑靶基因Merlin在肝细胞癌（HCC）中表达及意义。 方法：用qRT-PCR检测miR-342-5p和Merlin mRNA在HCC组织与癌旁组织，以及正常肝细胞系与各种不同HCC细胞系中的表达；用重组慢病毒包装质粒pGCSIL-GFP-miR-342-5p或空载体（阴性对照）转染HCCLM3细胞，以无处理的HCCLM3细胞作为空白对照，划痕愈合及Transwell实验观察细胞侵袭运动能力；Western blot法检测细胞中Merlin蛋白的表达。采用双荧光素酶基因报告系统，将含野生型或突变型Merlin基因3''UTR质粒（psiCHECK-Merlin）分别与pGCSIL-GFP-miR-342-5p、空载体（阴性对照）共转染或单独转染（空白对照）HCCLM3细胞后，检测各组细胞荧光素酶活性。 结果：与癌旁组织比较，HCC组织中miR-342-5p表达明显上调，Merlin mRNA表达明显下调（均P<0.05）；HCC组织中，血管侵犯组较无血管侵犯组miR-342-5p表达明显上调，Merlin mRNA表达明显下调（均P<0.05），且miR-342-5p与Merlin mRNA表达呈负相关（r2=5.364，P<0.05）。各HCC细胞系中miR-342-5p表达均明显高于正常肝细胞系，且miR-342-5p的表达随HCC细胞系的侵袭性增高而上调，而Merlin mRNA表达则呈相反趋势（均P<0.05）。与空白对照组及阴性对照组比较，HCCLM3细胞转染pGCSIL-GFP-miR-342-5p质粒后，细胞侵袭运动能力明显下降（均P<0.05），而Merlin蛋白表达明显上调。psiCHECK-Merlin野生型与pGCSIL-GFP-miR-342-5p质粒共转染HCCLM3细胞后，细胞的荧光素酶活性较其阴性对照组或空白对照组明显降低（P<0.05），而psiCHECK-Merlin突变型与pGCSIL-GFP-miR-342-5p质粒共转染HCCLM3细胞后，细胞的荧光素酶活性与其空白对照组或阴性对照组无统计学差异（P>0.05）。 结论：Merlin是miR-342-5p的靶基因，miR-342-5p可能通过调控MerlinmRNA的表达促进肝细胞癌侵袭转移。     

miR-26a-5p靶向PTEN基因影响成骨细胞分化及基质矿化

摘要：目的 探究微小RNA-26a-5p（miR-26a-5p）对第10染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因（PTEN）的靶向作用及对成骨细胞分化及基质矿化的影响。方法 通过在线软件预测miR-26a-5p与PTEN基因的结合位点，并经双荧光素酶报告基因检测验证。取生长状态良好的MC3T3-E1细胞，分为miR-26a-5p模拟物（mimic）组、miR-26a-5p mimic阴性对照（NC）组、pcDNA3.1-PTEN组、miR-26a-5p+pcDNA3.1-PTEN组，通过MTT法检测细胞增殖、碱性磷酸酶活性测定研究细胞分化情况、骨钙素定量检测分析和茜素红染色观察细胞基质矿化情况、Western blot检测成骨分化标志物和Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路蛋白表达变化。结果 与NC组比较，miR-26a-5p mimic组miR-26a-5p水平、细胞增殖率、碱性磷酸酶活性、Ⅰ型胶原（ColⅠ）、骨桥蛋白（OPN）、骨钙素、矿化率及β-catenin表达升高，PTEN mRNA及蛋白表达和糖原合成酶激酶-3b（Gsk-3b）表达降低（P＜0.05），pcDNA3.1-PTEN组PTEN mRNA及蛋白表达和Gsk-3b表达升高，细胞增殖率、碱性磷酸酶活性、ColⅠ、OPN、骨钙素、矿化率及β-catenin表达降低（P＜0.05）；与miR-26a-5p mimic组比较，miR-26a-5p+pcDNA3.1-PTEN组PTEN mRNA及蛋白表达和Gsk-3b表达升高，细胞增殖率、碱性磷酸酶活性、ColⅠ、OPN、骨钙素、矿化率及β-catenin表达降低（P＜0.05）。结论 miR-26a-5p可靶向下调PTEN表达，调控Wnt/β-catenin信号通路，促进成骨细胞增殖、分化及基质矿化。     

微小核糖核酸-24-3p抑制肝细胞癌增殖、迁移及侵袭机制

目的探讨微小核糖核酸-24-3p(miR-24-3p)对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其机制。方法收集2019年6月至2021年8月长江大学附属荆州医院诊治的肝癌患者肝癌组织及癌旁组织。分别将miR-NC组、miR-24-3p inhibitor组、pcDNA3.1组、pcDNA3.1-WNK2组、miR-24-3p inhibitor+pcDNA3.1-NC组、miR-24-3p inhibitor+pcDNA3.1-WNK2组、miR-24-3p inhibitor+shRNA-NC组、miR-24-3p inhibitor+sh-WNK2组转染至HepG2细胞。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-24-3p表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测WNK赖氨酸缺陷型蛋白激酶2(WNK2)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、金属基质蛋白2(MMP-2)蛋白表达;噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;Transwell法检测细胞侵袭、迁移情况;荧光素酶报告基因实验验证miR-24-3p与WNK2的靶向关系;体内成瘤实验检测肿瘤体积及重量。两组间均数比较采用...     

miR-26b的表达及其与Foxf2相互作用在乳腺癌细胞生物学行为中的作用

目的:探讨miR-26b在乳腺癌细胞中的表达及其对乳腺癌细胞生物学行为的的影响。方法:比较正常乳腺细胞系MCF-10A及乳腺癌细胞系MCF-7中miR-26b的表达差异。以无处理的MCF-7细胞为空白对照,分别检测MCF-7细胞转染miR-26b模拟物(miR-26b组)、空质粒(阴性对照组)后的miR-26b表达与增殖、迁移、侵袭能力,以及Foxf2的mRNA与蛋白表达的变化。用双荧光素酶报告系统检测miR-26b对MCF-7细胞中Foxf2转录活性的影响。结果:miR-26b在MCF-7细胞中的表达水平明显低于MCF-10A细胞(P0.05)。与空白对照组和阴性对照组比较,miR-26b组miR-26b mRNA表达水平明显升高、细胞增殖迁移、侵袭能力明显降低,Foxf2的mRNA和蛋白表达量均明显下调(P0.05)。转染miR-26b模拟物后,MCF-7细胞中Foxf2-3'UTR的转录活性明显抑制(P0.05)。结论:miR-26b在乳腺癌细胞中表达降低、增加其表达能抑制乳腺癌细胞的恶性生物学行为,机制可能与其下调Foxf2的表达有关。     

微小RNA-130a-3p靶向硫氧还蛋白结合蛋白减轻缺氧/复氧心肌微血管内皮细胞的炎性反应

目的探讨微小RNA(miR)-130a-3p减轻缺氧/复氧心肌微血管内皮细胞(CMECs)炎症的调控机制。方法分离培养CMECs, 分别将miR-130a-3p模拟物(mimics)及其阴性对照(miR-NC)、硫氧还蛋白结合蛋白过表达载体(pc-TXNIP)及其对照(pcDNA3.1)转染细胞, 细胞共分为6组:对照组、缺氧/复氧(H/R)组、mimic组(转染mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、pcDNA3.1组(转染mimics和pcDNA3.1)和pc-TXNIP组(转染mimics和pc-TXNIP), 除对照组以外的其他细胞在转染后建立H/R模型(缺氧6 h后复氧4 h), 再培养24 h。观察miR-130a-3p表达水平以及对细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)、白细胞介素(IL)-1β和TXNIP、NLRP3表达的影响。双荧光素酶报告基因实验验证miR-130a-3p和TXNIP之间的靶向关系。各组间差异比较采用方差分析。结果 H/R组及miR-NC组细胞活力均低于对照组(0.39±0.03、0.35±0.04比1.00±0.01, t=6.753、7.24...     

微小RNA-139-3p靶向调控性别决定区相关高迁移率族盒蛋白4减轻心肌细胞氧化应激损伤

目的研究微小RNA(miR)-139-3p对H2O2诱导的大鼠心肌细胞系H9c2细胞氧化应激的影响及其可能机制。方法分别将miR-139-3p模拟物(mimics)及其阴性对照(miR-NC)、性别决定区相关高迁移率族盒蛋白4(Sox4)过表达载体(pc-Sox4)及其对照(pcDNA3.1)转染H9c2细胞, 细胞共分为6组:对照组、H2O2组、mimic组(转染mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、pcDNA3.1组(转染mimics和pcDNA3.1)和pc-Sox4组(转染mimics和pc-Sox4), 除对照组外的其他细胞均在转染后建立H2O2诱导的H9c2细胞氧化应激损伤模型。细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测H9c2细胞活力;比色法检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)的含量;原位缺口末端标记法(TUNEL)染色检测H9c2细胞凋亡;蛋白质印迹法(Western blot)检测Sox4表达;荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-139-3p表达水平;生物信息学网站预测miR-139-3p与Sox4的互补结合位点, 双荧光素酶报告基因实验验证两者之间的靶...     

lncRNA CDKN2B-AS1靶向miR-98-5p对肺癌A549细胞增殖、侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA（lncRNA）CDKN2B-AS1靶向miR-98-5p对肺癌A549细胞增殖、侵袭的影响。方法:体外培养肺癌A549细胞,分为对照组、pcDNA组（转染pcDNA）、CDKN2B-AS1组（转染pcDNA CDKN2B-AS1）和双转染组（转染pcDNA CDKN2B-AS1、pcDNA ...     

mitofusin-2对乳腺癌细胞RECK基因表达及MMPs活性的影响

目的 探讨线粒体融合素基因-2(mitofusin-2)对乳腺癌MCF-7细胞株中RECK表达及MMP-9,MMP-2活性的影响.方法 利用脂质体lipofectamine2000将构建的重组真核表达质粒pEGFPmfn2转染MCF-7细胞.RT-PCR检测细胞mfn2和RECK基因mRNA的转录水平;Weastem Blot法检测mfn2及RECK蛋白的表达;明胶酶谱试验检测转染前后MMP-9及MMP-2的活性.结果 转染pEGFP-mfn2质粒的MCF-7细胞可以稳定高表达Mfn2;RECK基因在转染空质粒组和未转染组细胞中无表达;转染mfn2基因后RECK基因mRNA转录及蛋白的表达显著升高,且MMP-9及MMP-2的活性显著降-低(P＜0.05).结论 mfn2基因可激活MCF-7细胞中RECK基因的表达,并显著抑制其MMP-9及MMP2的活性.该途径可能是mfn2基因抗肿瘤作用的新机制.     

VEGF-C基因转染对人乳腺癌MCF-7细胞VEGF-C表达的影响

目的探讨将真核表达载体pcDNA3．1-VEGF—C重组质粒转染入人乳腺癌MCF-7细胞后VEGF-C表达的变化。方法通过脂质体介导方法，将构建好含有VEGF—C的重组质粒转染入人乳腺癌MCF-7细胞中，新霉素（G418）筛选得到稳定转染细胞系，RT—PCR和Western blot方法检测稳定转染后细胞中VEGF—C mRNA和蛋白的表达。结果成功转染并获得稳定高表达VEGF—C的乳腺癌MCF-7细胞系，其转染组VEGF—C mRNA相对吸光度值（12．382&#177;2．183）较空载组（6．039&#177;1．950）显著上调（P〈0．01）。Western blot检测转染组VEGF-C蛋白相对灰度值（0．971&#177;0．186）较空载组（0．594&#177;0．196）明显上调（P〈0．05）。结论脂质体介导重组质粒pcDNA3．1-VEGF-C转染入人乳腺癌MCF7细胞中可显著增加VEGF—C表达水平。     

脆性组氨酸三联体基因FHIT对乳腺癌细胞株MCF-7的作用

目的 克隆人类脆性组氨酸三联体基因(FHIT)并构建其真核表达载体pcDNA3.1(+)/FHIT,将人FHIT基因转染人乳腺细胞MCF-7中稳定表达,检测转染后细胞生物学特性的变化.方法 构建FHIT基因表达载体pcDNA3.1(+)/FHIT,用脂质体法将FHIT基因的真核质粒表达载体pcDNA3.1(+)/FHIT导入人乳腺癌细胞MCF-7中,细胞计数、流式细胞术分析转染后细胞的生物学特性变化.结果 将逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增后的产物克隆到表达载体peDNA 3.1(+)上,经PCR扩增筛选鉴定和测序鉴定证实为所需序列,转染乳腺癌MCF-7细胞后,FHIT基因的表达明显增强,细胞周期分析发现MCF-7/FHIT与MCF-7比较S期及G2/M期的细胞减少,G0/G1期的细胞增加,MCF-7/FHIT细胞的凋亡率为(29.75±5.90)%,MCF-7细胞的凋亡率为(11.21±6.10)%,和MCF-7比较,转染后的MCF-7/FHIT细胞的凋亡明显增加,MCF-7细胞的增殖明显抑制.结论 FHIT基因表达载体可有效抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖.     

长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因22靶向作用于微小RNA-27a-3p/胰岛素样生长因子-1信号轴对三阴性乳腺癌细胞侵袭能力的影响

目的观察三阴性乳腺癌细胞中长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因22(SNHG22)靶向作用于微小RNA(miR)-27a-3p/胰岛素样生长因子-1对细胞侵袭能力的影响。方法选取2019年6月至2022年3月河北医科大学第二医院甲状腺乳腺外科收治30例三阴性乳腺癌及其癌旁组织标本作为研究对象, 采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析癌及癌旁组织中SNHG22和miR-27a-3p的表达变化;将SNHG22过表达质粒和miR-27a-3p模拟物(mimics)分别转染至三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞中, 利用细胞侵袭实验观察两者对细胞侵袭能力的影响;利用生物信息学软件及双荧光素酶报告基因分析SNHG22和miR-27a-3p的关系及miR-27a-3p的下游靶基因。将miR-27a-3p mimics、miRNA阴性对照(miR-NC)分别与SNHG22共转染后, 观察上调miR-27a-3p表达对过表达SNHG22的MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响。两组间比较采用t检验。结果荧光定量PCR实验结果显示, SNHG22在三阴性乳腺癌组织中的表达水平(3.184±1.800)明...     

miR-432-5p靶向UCK2调控乳腺癌细胞MCF-7凋亡的研究

目的:探讨miR-432-5p调控乳腺癌细胞MCF-7凋亡的分子机制.方法:过表达或敲低miR-432-5p后,检测乳腺癌细胞MCF-7的凋亡水平.敲低miR-432-5p后,检测miRDB数据库在线分析的靶标的mRNA水平.通过荧光素酶报告系统检测miRNA是否与潜在靶标直接结合.过表达或敲低靶标后,分析乳腺癌细胞M...     

MiR-30c-2-3p对足细胞Nephrin、Podocin保护作用及雷公藤甲素干预作用研究

目的:探讨miR-30c-2-3p对小鼠足细胞Nephrin、Podocin保护作用及雷公藤甲素(TP)干预作用。方法:采用嘌呤霉素(PAN)致小鼠足细胞损伤的体外模型,将足细胞分成5组:空白组、转染阴性质粒组(阴性质粒组)、转染阴性质粒+PAN组(阴性质粒+PAN组)、转染miR-30c-2-3p+PAN组(阳性质粒+PAN组)、转染miR-30c-2-3p+PAN+TP组(阳性质粒+PAN+TP组)。瞬时转染miR-30c-2-3p mimics,质粒终浓度均为50 nmol/L,转染6 h后进行药物干预,PAN干预浓度均为45 mg/L,TP干预浓度均为1 ng/ml,药物干预时间均为48 h。CCK-8法检测足细胞活力;实时荧光定量PCR检测细胞中miR-30c-2-3p表达;Western Blot检测足细胞Nephrin、Podocin蛋白表达。结果:(1)阴性质粒+PAN组足细胞活力明显低于空白组及阴性质粒组(P0.01),阳性质粒+PAN组较阴性质粒+PAN组足细胞活力提高(P0.05),使用TP干预后其活力进一步提高(P0.05)。(2)与空白组、阴性质粒组比较,阴性质粒+PAN组miR-30c-2-3p表达减少,差异有统计学意义(P0.01);与阴性质粒+PAN组相比,阳性质粒+PAN组、阳性质粒+PAN+TP组miR-30c-2-3p表达均增加(P0.05);但与阳性质粒+PAN组相比,雷公藤甲素干预组未见统计学意义(P0.05)。(3)与空白组及阴性质粒组比较,阴性质粒+PAN组Nephrin、Podocin两者表达均减少,差异有统计学意义(P0.01);与阴性质粒+PAN组相比,阳性质粒+PAN组Nephrin、Podocin蛋白表达增加(P0.05);在使用了TP干预后两者表达进一步增加(P0.05)。结论:PAN能降低足细胞活力,降低miR-30c-2-3p表达,而增加其表达可以上调足细胞活力以及Nephrin、Podocin的表达。TP可以减轻PAN诱导的足细胞损伤以及Nephrin、Podocin的表达下降,但其作用机制似乎与miR-30c-2-3p无关。     

circ＿0001982靶向miR-578对乳腺癌细胞自噬、增殖及细胞周期影响的机制研究

目的：探讨环状RNA0001982(circ＿0001982)对乳腺癌细胞自噬、增殖和细胞周期的影响及分子机制。方法：RT-qPCR检测乳腺癌患者癌组织和癌旁组织circ＿0001982和miR-578表达水平。将乳腺癌细胞MCF-7分为NC组、si-NC组、si-circ＿0001982组、pc DNA-circ＿0001982组、miR-578组和pc DNA-circ＿0001982+miR-578组。RT-qPCR检测circ＿0001982和miR-578表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）和流式细胞术检测细胞增殖和周期;Western blot法检测Cyclin D1、p21、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证circ＿0001982和miR-578的关系。结果：乳腺癌组织和MCF-7细胞中circ＿0001982表达水平升高,miR-578表达水平降低（P<0.05）。敲低MCF-7细胞circ＿0001982可降低细胞活性和G2/M期细胞比例,减少Cyclin D1、LC3-Ⅰ蛋白表达,升高G0/G1期细胞比例,促进p21、LC3-Ⅱ蛋白表...     

反义RNA抑制Ezrin表达对乳腺癌细胞侵袭能力的影响

目的 观察特异性阻断Ezrin的表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7的增殖和侵袭能力的影响.方法 将anti-pCR3.1-Ezrin质粒经脂质体介导,转染人人乳腺癌细胞MDA-MB-231 6、12和24 h,应用Western blot和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Ezrin的表达变化情况;转染质粒24h后,噻唑蓝(MTT)比色法检测抑制Ezrin对MDA-MB-231和MCF-7细胞体外增殖能力的影响,Boyden小室法检测抑制Ezrin对MDA-MB-231和MCF-7细胞体外侵袭能力的影响.结果 转染anti-pCR3.1-Ezrin后,对MDA-MB-231细胞中的Ezrin表达抑制在24 h时达高峰.MTT法比色实验结果显示,MDA-MB-231和MCF-7细胞中转染anti-pCR3.1-Ezrin组、转染空质粒组和对照组的A值分别为0.410±0.018、0.765±0.058、0.795±0.061和0.480±0.021、0.632±0.052、0.648±0.059.转染anti-pCR3.1-Ezrin组细胞的增殖受到明显抑制,抑制率分别为(47.9±3.1)%和(32.0±2.8)%(P<0.05).Boyden小室法检测结果显示,MDA-MB-231和MCF-7细胞中转染anti-pCR3.1-Ezrin组细胞的侵袭能力分别为对照组的(50.5±3.2)%和(74.8±4.6)%(P<0.05).结论 Ezrin在乳腺癌的生长和侵袭过程中发挥重要作用.     

pcDNA3.1/hTIMP-1-EGFP真核表达载体的构建及其在血管平滑肌细胞中的表达

目的 构建标记有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的人基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(hTIMP-1)真核表达质粒pcDNA3.1/hTIMP-1-EGFP,并通过转染大鼠血管平滑肌细胞(SMCs)验证hTIMP-1的表达.方法 将hTIMP-1及编码EGFP的互补脱氧核糖核酸(cDNA)序列通过扩增、酶切、插入pcDNA3.1质粒的多克隆位点,构建pcDNA3.1/hTIMP-1-EGFP真核表达质粒;应用脂质体介导的基因转染技术,将基因导入SMCs(pcDNA3.1/hTIMP-1-EGFP转染组).应用荧光显微镜观察EGFP的表达情况;流式细胞仪检测转染效率;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blotting)等方法检测hTIMP-1的表达情况;明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9活性.用空质粒pcDNA3.1转染SMCs(空质粒pcDNA3.1转染组)和未转染质粒的SMCs(未转染组)作为对照.结果 pcDNA3.1/hTIMP-1-EGFP转染组重组质粒转染SMCs后,SMCs生长受到抑制;转染24 h后在荧光显微镜下可见强绿色荧光,流式细胞仪检测转染效率约为15%;RT-PCR检测结果显示,SMCs出现646 bp目的基因;Western blotting检测显示,在转染后的血管SMCs中有hTIMP-1表达;明胶酶谱法检测结果显示,MMP-2、MMP-9活性降低;与空质粒pcDNA3.1转染组和未转染组比较差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 TIMP-1真核表达质粒的构建和在血管SMCs中的表达,为TIMP-1基因治疗的研究奠定了基础.     

线粒体融合素基因-2对乳腺癌细胞增殖的影响及其机制

目的 观察外源性线粒体融合素基因-2(Mfn2)对乳腺癌细胞(MCF-7)增殖的影响,探讨其抑制乳腺癌细胞产生增殖的机制.方法 将含有Mfn2cDNA的质粒在阳离子聚合物的介导下在体外转染MCF-7,蛋白印记法(Western blot)检测绿色荧光蛋白(GFP)、p21waf1、CDK2蛋白的表达,细胞计数测定Mfn2对MCF-7细胞增殖的影响,DNA直方图分析法测定Mfn2对MCF-7周期分布的影响,用Cyclins/DNA双参数流式细胞术对Cyclin A进行标记,Cellquest软件分析.结果 转染Mfn2基因的MCF-7细胞可以稳定高表达GFP蛋白;细胞计数测定表明转染Mfn2cDNA后,MCF-7细胞增殖明显受抑,DNA直方图分析法测定显示细胞停滞于S期;转染质粒组S期细胞占42.70%,转染空质粒组和空白对照组分别为17.15%、19.58%(P《0.05);用Cyclins/DNA双参数流式细胞术检测转染质粒组Cyclin A较对照两组明显升高;Western blot显示转染质粒组p21高表达,磷酸化CDK2低表达.结论 转染Mfn2基因可以明显抑制MCF-7细胞的增殖,并使细胞停滞于S期.     

HSPb1真核表达载体的构建及其在乳腺癌细胞中表达的研究

目的:构建重组人HSPb1真核表达载体质粒,为研究HSPb1与乳腺癌发生和化疗耐药的关系做准备。方法:从人乳腺癌细胞MCF-7中提取总RNA,RT-PCR法反转录合成cDNA。设计引物调取目的基因片段,与T载体连接后转化大肠埃希菌DH-5α,筛选菌落并抽提质粒。测序正确后双酶切克隆进入真核表达载体pcDNA3.1中,得到重组质粒pcDNA3.1-HSPb1。用pcDNA3.1-HSPb1转染人乳腺癌细胞MDA-MA-231,RT-PCR法和Western blot法鉴定重组质粒在其中的表达。结果:经酶切证实重组质粒pcDNA3.1-HSPb1含有目的基因HSPb1。RT-PCR和Western blot检测表明,mRNA和蛋白水平,转染细胞HSPb1的表达均明显增强。结论:pcDNA3.1-HSPb1真核表达载体构建成功,它在乳腺癌细胞中可高表达目的基因,为进一步研究HSPb1在乳腺癌发生及化疗耐药中的作用奠定了基础。