杀菌性/通透性增加蛋白的研究进展

内毒素是革兰氏阴性菌败血症、感染性休克发生和发展的主要因素,因此,抗内毒素治疗是治疗败血症、感染性休克的重要环节.杀菌性/通透性增加蛋白有较强的杀菌和中和内毒素作用,在抗内毒素治疗中有很好的应用前景.     

猪源杀菌性/通透性增加蛋白(BPI)体内外生物活性的研究

革兰氏阴性杆菌感染能导致机体严重的病理改变,包括发热、低血压、休克、DIC、ARDS、MOF甚至死亡。作为革兰氏阴性菌外膜主要成分的内毒素(LPS),近来被认为是导致革兰氏阴性菌脓毒症中最主要的介质,内毒素可触发一系列机体效应分子的释放(包括TNF、IL—6、IL—1等),这些效应分子可介导内毒素血症的致死效应。虽然有效的抗生素可杀灭大部分细菌,但抗生素在杀灭细菌的同时也促使内毒素的释放,使得革兰氏阴性菌脓毒血症的治疗更为棘手。因此寻找一种既能杀菌又能中和内毒素的制剂显得越发重要。杀菌性/通透性增加蛋白(BPI)就是一种既能杀菌又能中和内毒素的蛋白质,它存在于人、兔、牛等哺乳动物中性粒细胞(PMN)的嗜天青颗粒中。     

杀菌性/通透性增加蛋白(BPI)模拟肽体内拮抗内毒素作用的研究

本试验观察杀菌性/通透性增加蛋白(BPI)模拟肽对内毒素(LPS)攻击小鼠死亡的保护作用。以一个LD_(50)为LPS(20mg·kg~(-1))静脉注射攻击小鼠,分别于LPS攻击后20s内静脉注射不同剂量的BPI模拟肽;于LPS攻击前及攻击后不同时间内分别静脉注射5mp·kg~(-1)和10mg·kg~(-1)的BPI模拟肽,以观察BPI模拟肽对LPS攻击所致小鼠死亡的保护作用、BPI模拟肽对LPS攻击小鼠死亡保护作用的时效关系及BPI模拟肽对LPS攻击小鼠死亡的预防作用。结果表明BPI模拟肽对LPS所致小鼠死亡有明显的保护作用及预防作用,并有一定的量效关系及时效关系。从而可见BPI模拟肽,不仅保留了BPI特异性中和LPS的特性,而且对LPS攻击小鼠具有     

杀菌性/通透性增加蛋白(BPI)模拟肽兔体内拮抗内毒素作用的研究

目的:观察杀菌性/通透性增加蛋白(BPI)模拟肽对内毒素(LPS)血症大白兔的治疗作用。方法:以LPS250μg·KG~(-1)剂量静脉注射攻击日本大白兔制造兔内毒素血症模型,分别于LPS攻击后20秒内静脉注射不同剂量的BPI模拟肽;于LPS攻击前及攻击后不同时间内分别静脉注射5mg·kg~(-1)和10mg·kg~(-1)的BPI模拟肽,并观察BPI模拟肽对LPS攻击所致兔体温、中性     

杀菌性/通透性增加蛋白模拟肽(BNEP)体内外中和内毒素的实验研究

目的 :观察杀菌性 /通透性增加蛋白模拟肽(BNEP)在体内、体外中和内毒素的能力。方法 :1 .BNEP与LPS结合的亲和力的测定 :应用生物传感器测定BNEP与LPS及LPS的活性中心LipidA结合的亲和力。 2 .体外中和作用 :将不同浓度的BNEP、多粘菌素B与定量的LPS 3 7℃孵育 3 0min ,分别应用生物传感器及动态比浊法鲎试验检测孵育后混合溶液中的LPS残余量。 3 .体内中作用 :NIH小鼠 1 5只随机分为生理盐水 (NS)、LPS、BNEP组 ,每组 5只。通过尾静脉给药 ,LPS组 :E .coliO5 5 .B5按 1 0mg/kg +等量生理盐水 ;BNEP组 :按BNEP 1 0…     

杀菌/通透性增加蛋白N端片段在原核细胞中的表达及其临床应用的初步探讨

目的：构建编码杀菌，通透性增加蛋白(BPI)N端片段基因原核表达载体，并在大肠杆菌中表达重组蛋白。方法：采用RT-PCR技术，从人外周血中性粒细胞的总RNA中扩增BPI蛋白N端片段cDNA编码区基因，DNA序列分析鉴定；将测序证实的BPI蛋白N端片段编码区基因PCR产物直接克隆于原核表达载体pBAD／Thio-TOPO中，再次测序鉴定；通过在大肠杆菌中以L-阿拉伯糖进行诱导表达，然后以SDS-PAGE、Westerm blot对表达的重组蛋白进行分析。重组蛋白经初步纯化处理后，进行生物学活性检测。结果：RT-PCR扩增出一个835bp的DNA片段，DNA测序表明为所需目的基因。限制性内切酶酶切和DNA序列分析表明，BPI蛋白N端片段正确克隆到大肠杆菌表达载体pBAD／Thio-TDPO中，SDS-PAGE和Wester blot结果表明在大肠杆菌中成功表达了BPI蛋白N端片段。对该蛋白进行初步活性测定显示其可与BPI单克隆抗体结合并具有杀灭耐药铜绿假单胞菌的活性。结论：成功构建了BPI蛋白N端片段编码区基因原核表达载体，并在大肠杆菌中进行了表达，表达的重组蛋白具有一定的生物活性。     

杀菌性通透性增强蛋白对大肠杆菌脓毒症小鼠的保护作用

本文观察了ＢＰＩ对大肠杆菌脓毒症小鼠预后的影响及其可能机制。研究结果显示〉ＢＰＩ治疗组动物７２小时存活率明显高于生理盐水对照组；注菌后０．５，１ｈ，ＢＰＩ组血清内毒素水平明显低于生理盐水对照组；注菌后１．５ｈ，ＢＰＩ组血清ＴＮＦα峰值也明显低于ＮＳ对照组；但两组间血液细菌计数在注菌后０．５，１．５和３ｈ均明显差异。     

杀菌/通透性增加蛋白基因Glu216Lys多态性与中国汉族人群炎症性肠病无关

 目的：探讨杀菌/通透性增加蛋白（BPI）基因Glu216Lys多态性与中国汉族人群炎症性肠病（IBD）发病及各种临床特征的相关性。方法：纳入286例确诊的汉族IBD患者［173例克罗恩病（CD）和113例溃疡性结肠炎（UC）］及年龄、性别匹配的332名健康人进行病例对照研究。采用引物介导的限制性分析PCR方法检测基因分型;应用单因素分析和Logistic回归模型分析该位点多态性对IBD发病及临床特征的影响。结果：CD和UC病例组与正常对照组间Glu216Lys基因型和等位基因频率差异均无统计学意义（均P>0.05）;进一步分析Glu216Lys与CD和UC的临床特征关系,差异均无统计学意义（P>0.05）。结论：BPI基因 Glu216Lys多态性与中国汉族人群IBD发病和临床特征无明显相关。IBD的遗传易感性具有种族差异性。     

杀菌/通透性增强蛋白对腹腔感染脓毒症大鼠的治疗作用

目的：探讨杀菌／通透性增强蛋白（ＢＰＩ）对腹腔感染脓毒症大鼠的治疗作用及其机制。方法：腹腔感染脓毒症模型采用盲肠结扎穿孔法,分别在盲肠结扎穿孔后即刻和１２ｈ腹腔内注射ＢＰＩ各２．５ｍｇ／ｋｇ或等容量生理盐水,血浆内毒素采用鲎试验显色定量测定法。结果：９１）ＢＰＩ治疗组动物存活时间明显长于生理盐水组;（２）ＢＰＩ治疗组动物平均动脉压,左室收缩压,心室等容收缩压,左室压力最大上升和下降速率等虽有一定下     

Hcy的基础及临床研究进展

同型半胱氨酸（homocysteine,Hey）是一种与半胱氨酸同系的四碳含硫氨基酸,它是蛋氨酸循环的正常代谢产物,是能量代谢和许多需甲基化反应的重要中间产物,其本身并不参与蛋白质的合成。近来,随着检测技术的不断提高和发展,越来越多的研究证实,高同型半胱氨酸血症（Hyperhomocysteinemia,HHcy）不仅与冠状动脉粥样硬化性心脏病有关,     

人杀菌/通透性增强蛋白活性片段基因在CHO细胞中的表达

目的获得人杀菌/通透性增强蛋白(bactericidal/permeability-increasing protein,BPI)N端活性片段蛋白,为BPI结构和功能的研究提供有力的工具。方法提取人外周血多形核白细胞(PMN)总RNA进行逆转录反应,经套式PCR扩增出BPIN端基因片段,将其克隆入pUC19载体中并进行酶切鉴定和序列测定,然后亚克隆入质粒pcDNA3构建真核表达载体pcDNA-BPI;重组载体通过脂质体转染CHO细胞并筛选阳性克隆,免疫荧光法鉴定重组BPI的表达和免疫学活性。结果酶切鉴定和序列分析证实重组质粒含有包括信号肽在内的BPI活性片段编码序列,与文献报道的序列相比,有6个核苷酸差异。转染筛选的阳性CHO细胞克隆表达产物能够被抗BPI的单克隆抗体所识别。结论BPI活性片段表达载体的构建及真核表达成功,为BPI功能的研究奠定了基础。     

SIgA基础与临床研究进展

分泌型免疫球蛋白A(SIgA)是人类黏膜免疫的主要抗体,由双体IgA[IgA(d)]、J链和分泌片(SC)共价结合构成。J链和IgA(d)由局部活化B细胞产生,SC由黏膜上皮细胞合成;SC与J链共价结合后与IgA(d)形成二聚体结构即SIgA。SIgA与多种疾病的发生、发展密切相关。最新研究表明,SIgA与慢性鼻窦炎。反复呼吸道感染、消化道感染、泌尿生殖系统感染、肝胆疾病、癌症局部免疫、口腔尖周病、缺铁性贫血、偏头痛和银屑病等疾病都有密切的关系;环境和大气污染可导致人体SIgA水平低下,局部免疫力下降。调节SIgA水平有益于改善临床疾病黏膜免疫状况。     

免疫毒素的基础与临床研究进展

免疫毒素，又称生物导弹，由导向性的载体分子与具有毒性的弹头蛋白进行交联而制备，主要用于治疗肿瘤顽症。近年来，在免疫素素的弹头设计、载体选择及导向策略上都有了很大的发展，其临床应用方面也取得了一定的成绩。本文就其基础研究与临床应用方面的进展做一综述。     

免疫毒素的基础与临床研究进展

免疫毒素,又称生物导弹,由导向性的载体分子与具有毒性的弹头蛋白进行交联而制备,主要用于治疗肿瘤顽症。近年来,在免疫素素的弹头设计、载体选择及导向策略上都有了很大的发展,其临床应用方面也取得了一定的成绩。本文就其基础研究与临床应用方面的进展做一综述。     

Sema 4D/CD100的基础和临床研究进展

Sema4D/CD100是一种免疫信号素,参与了免疫和非免疫系统的多种重要的生理功能.本文对Sema4D/CD100分子及其受体的结构、生物学功能及其参与的多种病理生理过程进行综述.     

内毒素增加微血管通透性的细胞信号机制

内毒素(LPS)主要激活PMNs和内皮细胞,通过复杂的信号转导通路,引起微血管内皮细胞屏障功能和形态的损伤,使血管通透性增加,血容量下降,是导致内毒素性休克和多器官功能损害的重要原因.     

重组梅毒螺旋体蛋白Tp47通过诱导uPA增加血管内皮细胞通透性

目的探讨重组梅毒螺旋体蛋白Tp47(rTpp47)对单核-巨噬细胞系THP-1合成尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)的调控及其对人脐静脉/血管内皮细胞(HUVECs)通透性的影响。方法用rTpp47刺激THP-1细胞24 h后,分别收集细胞培养上清和THP-1细胞,用ELISA和Western blot检测THP-1细胞表达的uPA含量;用THP-1细胞培养上清刺激人单层血管内皮细胞后,使用FITC-葡聚糖评价单层内皮细胞通透性的变化,用Western blot检测uPA对HUVECs细胞紧密连接蛋白claudin-5表达的影响以及PKC信号通路是否参与rTpp47诱导的THP-1细胞表达uPA。结果重组蛋白rTpp47刺激THP-1细胞合成和分泌的uPA显著高于对照组(P<0.05,P<0.001);用rTpp47与THP-1细胞共培养24 h后收集的细胞培养上清刺激单层血管内皮细胞12和24 h,实验组血管内皮细胞相对通透性显著高于对照组(P<0.05,P<0.000 1);uPA活性抑制剂阿米洛利(amiloride)抑制了rTpp47刺激THP-1细胞分泌...     

TNF-α激活RhoA/ROCK信号通路增加单核细胞增生性李斯特菌感染内皮细胞的通透性

目的探讨大鼠肉瘤同源基因A/Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(RhoA/ROCK)信号通路在肿瘤坏死因子α(TNF-α)促进单核细胞增生性李斯特(Lm)感染致内皮细胞通透性升高的调控作用。方法培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为未感染细胞对照组、 TNF-α处理组(100 ng/mL TNF-α处理2 h)、 Lm感染组(以MOI=10的Lm感染2 h,加入庆大霉素杀菌0.5 h)、 TNF-α处理的Lm感染组(Lm感染组细胞加入100 ng/mL TNF-α处理2 h)、 Y-27632联合TNF-α处理的Lm感染组(细胞用50μmol/L ROCK抑制剂Y-27632处理30 min,再如上进行Lm感染和TNF-α刺激)。Western blot法检测HUVEC的RhoA、闭锁小带蛋白1(ZO-1)、闭合蛋白(occludin)、 ROCK蛋白水平,检测辣根过氧化物酶(HRP)渗漏量分析HUVEC通透性变化,用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的鬼笔环肽染色检测纤维型肌动蛋白(F-actin)细胞骨架的改变。结果 TNF-α可降低Lm感染的内皮细胞紧密连接蛋白ZO-1、 occludin的表达,促进其通透性升高、细胞骨架重排,并上调RhoA和ROCK的表达。ROCK抑制剂Y-27632可明显抑制TNF-α所致的HUVEC细胞骨架重排及通透性增高的作用。结论 TNF-α促进感染Lm的血管内皮细胞通透性增高可能通过RhoA/Rock信号通路调控。     

神经干细胞衰老基础与临床研究进展

神经干细胞具有多向分化潜能和自我更新能力,广泛分布于哺乳动物胚胎脑内,在成年脑内室管膜下区、颗粒细胞下层及胼胝体下区等区域也有神经干细胞的聚集分布.神经干细胞在一定条件的刺激下可生成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,从而修复受损神经组织,对神经系统起到保护作用.神经干细胞所处微环境改变或调节增殖与分化功能的基因突变,...     

人工神经导管基础与临床研究进展

周围神经损伤和缺损的治疗是显微外科的难题之一,神经缺损修复,尤其是长段周围神经缺损的重建仍是当前临床医学面临的一个难题,目前尚缺乏有效的治疗手段,一直以来自体神经移植是修复周围神经缺损最理想的手术方法,临床上已广泛应用,也是衡量各种神经桥接材料的金标准.但往往会造成供体神经支配区感觉、功能障碍,且自体神经来源有限,因而临床上迫切需要更安全有效的治疗策略.近年来组织工程化神经为提高长节段周围神经缺损的修复带来了新希望,因此,寻找合适的组织材料,构建组织工程化神经是目前周围神经再生的研究热点.本文就人工神经移植物材料选择、支架构建及临床应用研究进展作一简要综述.