薯蓣丸联合紫杉醇抑制三阴性乳腺癌侵袭转移的作用机制

目的 探究薯蓣丸联合紫杉醇在三阴性乳腺癌模型细胞及小鼠中抗三阴性乳腺癌侵袭转移的作用机制。方法 分别制备大鼠空白血清和薯蓣丸含药血清,体外培养MDA-MB-231细胞,设置空白组,紫杉醇组,薯蓣丸低、中、高剂量联合紫杉醇组(10%、20%、30%含药血清),Transwell小室实验检测细胞侵袭及迁移能力。将4T1细胞荷瘤BALB/c小鼠随机分为模型组、薯蓣丸组(0.024 g/kg)、紫杉醇组(10 mg/kg)、薯蓣丸联合紫杉醇组,每组12只,治疗期间记录小鼠一般状况及肿瘤大小,4周后处死小鼠,获取肿瘤组织。Western blot法检测PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR蛋白表达,RT-qPCR、Western-blot、免疫组织化学染色法检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP2 mRNA及蛋白表达。结果 与空白组比较,紫杉醇组与薯蓣丸各剂量联合紫杉醇组MDA-MB-231细胞的侵袭迁移能力降低,其中薯蓣丸各剂量联合紫杉醇组降低更明显(P<0.05)。荷瘤小鼠治疗4周后,与模型组比较,紫杉醇组、薯蓣丸联合紫杉醇组小鼠肿瘤体积...     

苦豆碱对三阴性乳腺癌细胞上皮间质转化的影响

目的 探讨苦豆碱(aloperine, Alo)对三阴性乳腺癌细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响。方法 体外培养人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和MDA-MB-468,加入不同浓度(50、100、200μmol/L)Alo干预处理,免疫细胞化学法观察三阴性乳腺癌细胞中上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)的表达;Real-time qPCR法检测三阴性乳腺癌细胞转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)及EMT相关标志物如：E-cadherin、胞质紧密粘连蛋白1(zonula occludens-1, ZO-1)、波形蛋白(Vimentin)、间质细胞钙黏蛋白(N-cadherin)和Snail的mRNA水平;Western blot法检测三阴性乳腺癌细胞内TGF-β1、ZO-1、Vimentin、 N-cadherin及Snail的表达;Transwell小室法检测三阴性乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力。结果 Alo可上调MDA-MB-231和MDA-MB-4...     

红花多糖通过阻断PI3K/Akt/mTOR通路诱导人乳腺癌MDA-MB-435细胞凋亡的机制研究

目的研究红花多糖通过阻断PI3K/Akt/mTOR通路诱导人乳腺癌MDA-MB-435细胞凋亡的作用及其作用机制。方法将MDA-MB-435细胞分为对照组和红花多糖0.5、1.0 mg/mL组。MTT法及流式检测仪分别检测不同质量浓度红花多糖对MDA-MB-435细胞生长及凋亡的影响;RT-PCR及Western blotting法分别检测不同质量浓度红花多糖对MDA-MB-435细胞PI3K、Akt、mTOR mRNA和蛋白表达的影响。结果与对照组比较,红花多糖0.5 mg/mL组MDA-MB-435细胞抑制率为(21.52±2.43)%,红花多糖1.0 mg/mL组细胞抑制率为(27.73±3.75)%,显著高于红花多糖0.5 mg/m L组(P0.05);与对照组比较,红花多糖能够显著提高MDA-MB-435细胞凋亡率(P0.01),且呈剂量依赖性。RT-PCR及Western blotting实验结果显示,与对照组比较,红花多糖能够使MDA-MB-435细胞中PI3K、Akt、mTOR mRNA和蛋白表达显著降低(P0.05、0.01)。结论红花多糖能有效抑制MDA-MB-435细胞的生长,促进其凋亡,作用可能是通过对PI3K/Akt/mTOR通路的阻断实现的。     

乌梅丸对乳腺癌MDA-MB-231-GFP细胞小鼠移植瘤的作用及其机制研究

目的 探讨乌梅丸对乳腺癌MDA-MB-231-GFP细胞小鼠移植瘤的作用及其可能机制。方法 选择SPF级雌性小鼠为试验动物,建立人乳腺癌MDA-MB-231-GFP细胞小鼠移植模型,随机分为模型组（灌胃口服0.9%氯化钠溶液）、阳性对照组（腹腔注射紫杉醇20 mg/kg）、乌梅丸组（灌胃乌梅丸颗粒剂药液）,每日1次,连续30 d。观察小鼠一般情况,利用荧光成像系统采集肿瘤图像,以系统自带软件计算肿瘤面积;称取小鼠肿瘤质量和肺癌转移灶数;q PCR检测小鼠肿瘤组织中Fas、Fas L mRNA水平;Western blotting检测小鼠肿瘤组织MDA-MB-231细胞中Fas相关死亡域蛋白（FADD）、活性半胱天冬酶8(cleaved caspase-8）、Fas、Fas L蛋白表达。结果 模型组、乌梅丸组和阳性对照组小鼠肿瘤面积持续增大,呈时间依赖性（P<0.05）;与模型组比较,乌梅丸组与阳性对照组小鼠肿瘤面积较小,肿瘤质量较低,肺癌转移灶数量较少（P<0.05）;与乌梅丸组比较,阳性对照组小鼠瘤面积较小,肿瘤质量较低,肺癌转移灶数量较少（P<0.05）。与模型组...     

千金子介导Akt信号通路抑制肺癌细胞A549迁移和侵袭及上皮间质转化的研究

目的:探讨千金子介导蛋白激酶B(Akt)信号通路对肺癌细胞A549迁移和侵袭及上皮间质转化(EMT)的影响.方法:用浓度分别为2、6、18 mg/mL的千金子处理A549作为千金子各浓度组,以不添加千金子培养的细胞作为空白对照组;用100 μg/mL的IGF-1和18 mg/mL的千金子共同处理A549作为千金子+IG...     

防己黄芪汤对三阴性乳腺癌细胞MB-MDA-231抑制作用研究

目的:研究防己黄芪汤对人三阴性乳腺癌细胞MB-MDA-231增殖、凋亡以及侵袭力的影响.方法:MTT法检测防己黄芪汤对人三阴性乳腺癌细胞MB-MDA-231的抑制作用;倒置显微镜下观察细胞形态变化.将实验组分成4、8、16 mg/ml的不同浓度组,AnnexinV-FITC/PI双染检测MB-MDA-231细胞凋亡;T...     

鸡血藤通过调控SNX9及β-catenin抑制三阴性乳腺癌细胞转移的作用机制

目的探索鸡血藤对乳腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响，以及抑制三阴性乳腺癌转移发生可能的作用机制。方法采用不同浓度（25、12.5、6.25、3.12、1.56 μg/mL）的鸡血藤提取物，干预三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231-luc，另设空白对照组。利用细胞划痕实验、Transwell实验检测其对细胞迁移能力及侵袭能力的影响。利用Western Blot检测不同浓度鸡血藤提取物干预后，乳腺癌细胞中的分类连接蛋白9（SNX9）和β-catenin的表达水平。结果与空白对照组同期比较，12.5及25 μg/mL组给药6 h细胞迁移率降低（P<0.05）；3.12、6.25、12.5及25 μg/mL组给药12 h后细胞迁移率降低（P<0.05，P<0.01）；各剂量组给药24 h后细胞迁移率均降低（P<0.05，P<0.01）；3.12 μg/mL组β-catenin表达降低（P<0.05）；25 μg/mL组SNX9表达增加（P<0.05），β-catenin表达降低（P<0.01）。与1.56 μg/mL组同期比较，12.5及25 μg/mL组给药12 h后细胞迁移率降低（P<0.05）。与3.12 μg/mL组比较，25 μg/mL组β-catenin表达降低（P<0.05）。结论鸡血藤可抑制三阴性乳腺癌细胞MDA-MD-231-luc的迁移及侵袭能力，其机制与调控SNX9及β-catenin表达有关。     

纳米雄黄抑制人乳腺癌MCF-7细胞上皮间质转化的机制探讨

目的:观察纳米雄黄对乳腺癌MCF-7细胞上皮间质转化的影响,并探讨其相关机制。方法:体外培养乳腺癌MCF-7细胞,不同浓度纳米雄黄溶液干预,并设立对照组,免疫组化实验检测各组细胞E-cad、HIF-1α表达情况,RT-PCR检测SnailmRNA表达情况。结果:各纳米雄黄组E-cad表达阳性率均明显高于对照组(P0.01),而HIF-1α表达阳性率均低于对照组(P0.01);对照组、纳米雄黄低、中、高剂量组、阿霉素组的SnailmRNA相对表达量依次为(52.16±3.87)、(30.10±2.48)、(47.08±3.45)、(41.42±4.35)、(36.07±2.45)。结论:纳米雄黄可通过上调E-cad表达、下调HIF-1α及Snail mRNA表达逆转乳腺癌MCF-7细胞上皮间质转化发挥抗肿瘤转移作用。     

异长春花碱抑制人乳腺癌细胞转移侵袭的作用及其机制

目的 探讨异长春花碱抑制人乳腺癌细胞转移侵袭的作用及其机制.方法 人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-435细胞分别用异长春花碱1、10 μmol/L处理后,MTS法检测细胞黏附能力,Transwell法检测细胞侵袭能力,ELISA法检测细胞转移生长因子-β (TGF-β)分泌的变化,明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9活性,Western blotting法检测肿瘤细胞E-钙黏素、N-钙黏素、MMP-2、MMP-9、p-JNK及p-Akt蛋白的表达,RT-PCR法检测肿瘤细胞E-钙黏素、N-钙黏素及MMP-2、MMP-9基因的表达,双荧光素酶报告基因实验考察AP-1和核因子-κB (NF-κB)活性的变化.结果 异长春花碱1、10 μmol/L给药后,细胞黏附能力:MCF-7细胞分别下降34.8％、66.8％,MDA-MB-435细胞分别下降42.6％、72.3％;侵袭能力:MCF-7细胞分别下降44.4％、72.2％,MDA-MB-435细胞分别下降47.7％、86.4％; TGF-β分泌:MCF-7细胞分别下降28.2％、52.1％,MDA-MB-435细胞分别下降39.0％、55.1％;E-钙黏素基因表达:MCF-7细胞分别上调86.5％、181.6％,MDA-MB-435细胞分别上调116.6％、160.7％; N-钙黏素基因表达:MCF-7细胞分别下降33.7％、74.1％,MDA-MB-435细胞分别下降57.6％、76.9％; MMP-2基因表达:MCF-7细胞分别下降71.6％、88.4％,MDA-MB-435细胞分别下降57.4％、69.4％; MMP-9基因表达:MCF-7细胞分别下降15.0％、84.0％,MDA-MB-435细胞分别下调22.1％、73.0％;E-钙黏素蛋白表达显著上调,N-钙黏素蛋白表达明显下调,MMP-2和MMP-9及p-JNK、p-Akt蛋白表达显著下降;AP-1活性:MCF-7细胞分别下降27.7％、68.2％,MDA-MB-435细胞分别下降34.8％、71.4％; NF-κB活性:MCF-7细胞分别下降18.4％、44.8％,MDA-MB-435细胞分别下降24.4％、51.9％.结论 异长春花碱可抑制人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-435细胞体外侵袭能力,其机制可能与下调肿瘤转移相关信号通路及上皮间质转化表达有关.     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨疏肝健脾解毒方含药血清对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:通过体外细胞实验研究疏肝健脾解毒方对三阴乳腺癌治疗的有效性和可能机制.方法:实验设置正常血清组、吡柔比星组和低、中、高剂量疏肝健脾解毒方含药血清组.将20只SD大鼠随机分成4组,按照体表面积换算分别予以16.8,8.2,4.05 g·kg-1的疏肝健脾解毒方药液和等体积的生理盐水灌胃制备血清.取血清配置各组药液后...     

五龙消癥丸抑制人胃癌BGC-823细胞侵袭与迁移作用及机制研究

目的探究五龙消癥丸对胃癌BGC-823细胞侵袭与迁移能力的影响及其作用机制。方法分别用五龙消癥丸、PI3K激动剂胰岛素样生长因子1(IGF-1)及PI3K特异性抑制剂LY294002作用于BGC-823细胞,采用MTT法检测不同质量浓度五龙消癥丸对BGC-823细胞增殖的影响;Transwell小室模型研究五龙消癥丸对BGC-823细胞垂直侵袭和迁移能力的影响;采用ELISA法检测五龙消癥丸对血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9表达的影响;采用Western blotting及RT-PCR法检测脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路中相关蛋白及m RNA的表达。结果五龙消癥丸可显著抑制BGC-823细胞的增殖、黏附、侵袭和迁移能力,显著抑制BGC-823细胞中VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白的表达,显著抑制p-PI3K、p-Akt、磷酸化Ik B激酶-α(p-IKK-α)、p-NF-κB p65Ser 276蛋白及PI3K、Akt、IKKα、NF-κB m RNA的表达,并且呈现一定的时效和量效关系。结论五龙消癥丸通过抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路相关蛋白及m RNA表达,从而达到抑制BGC-823细胞的增殖、迁移、侵袭作用。     

白皮杉醇对三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-468抗肿瘤作用及机制

目的:考察白皮杉醇(PIC)对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-468增殖、凋亡及细胞周期的作用,并对其作用机制进行探讨.方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法考察PIC(0,2.5,5.0,10.0,20.0,40.0,80.0,160.0μmol· L-1)对三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞成活率的影响,并计算半抑制率(...     

蓝萼甲素对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及细胞周期的影响

目的研究蓝萼甲素对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及细胞周期的影响及其作用机制。方法采用MTT法检测蓝萼甲素对MDA-MB-231细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期;Western blotting法检测细胞中cyclin B1、cyclin D1、细胞周期素依赖激酶2(CDK2)、CDK4、p53、p21、p27、组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)、组蛋白H3第4位赖氨酸二甲基化(H3K4me2)、组蛋白H3第9位赖氨酸二甲基化(H3K9me2)蛋白表达水平。结果蓝萼甲素能显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;提高G2/M期细胞比例;上调p53、p21、p27、H3K4me2、H3K9me2蛋白表达水平,下调cyclin B1、cyclin D1、CDK2、CDK4、LSD1蛋白表达水平。结论蓝萼甲素抑制MDA-MB-231细胞增殖,阻滞MDA-MB-231细胞周期于G2/M期,其机制可能与激活p53的表达及调控组蛋白的甲基化作用有关。     

薯蓣皂苷元对人骨肉瘤细胞自噬的影响

目的 探讨薯蓣皂苷元对人骨肉瘤细胞自噬的影响。方法 MTT法检测薯蓣皂苷元对人骨肉瘤MG63和U2OS细胞增殖的影响,透射电镜技术观察细胞超微结构,免疫荧光法观察细胞自噬蛋白Beclin1表达,Western blot法检测细胞自噬分子标记物LC3、Beclin1和PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达。薯蓣皂苷元联合PI3K通路抑制剂LY294002处理MG63和U2OS细胞,RT-qPCR法检测细胞Beclin1 mRNA表达;联合自噬抑制剂3-methyladenine(3-MA)处理MG63和U2OS细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,Western blot法检测细胞cleaved-caspase3蛋白表达,RT-qPCR法检测细胞caspase3 mRNA表达。结果 薯蓣皂苷元能抑制骨肉瘤MG63和U2OS细胞增殖,促使自噬体生成,增加LC3Ⅱ、Beclin1蛋白表达(P<0.05,P<0.01),降低LC3 I蛋白表达(P<0.01),可抑制PI3K/Akt/mTOR通路蛋白磷酸化水平(P<0.05,P<0.01);联合自噬抑制剂干预后...     

半枝莲含药血清通过抑制mTOR信号通路影响非小细胞肺癌NCI-H1650细胞上皮间质转化

目的 探讨半枝莲含药血清通过抑制雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)信号通路影响非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)NCI-H1650细胞上皮间质转化。方法 选取健康青紫蓝大白兔制备半枝莲含药血清,根据不同剂量分为对照组、低剂量组(A组)、中剂量组(B组)、高剂量组(C组)。选取人非小细胞肺癌细胞NCI-H1650与含药血清培养,采用逆转录RT-PCR、免疫印迹、MTT、划痕实验等方法,观察4组不同剂量半枝莲含药血清抑制mTOR信号通路对NCI-H1650细胞上皮间质转化、增殖、迁移的影响。结果 4组mTOR表达量差异具有统计学意义,其中C组mTOR表达量低于对照组和A组(P<0.05);4组Vimentin、N-cadherin、E-cadherin蛋白表达相对灰度值差异具有统计学意义,且C组Vimentin、N-cadherin灰度值低于对照组、A组、B组,E-cadherin灰度值高于对照组(P<0.05);4组24、48、72 h吸光度差异具有统计学意义,且C组24、4...     

西黄丸含药血清对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、迁移的影响

目的:研究西黄丸含药血清对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、迁移以及对环氧化酶2(COX-2)转录的影响,以期探讨西黄丸对三阴性乳腺癌细胞的作用。方法:大鼠灌胃给药制备西黄丸含药血清,实验设置大鼠空白血清组和西黄丸含药血清组,以含药血清干预三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,细胞划痕实验检测细胞迁移,RT-PCR法检测COX-2、TNF-αmRNA表达。结果:西黄丸含药血清可以抑制MDA-MB-231细胞增殖,可以促进MDA-MB-231细胞凋亡,并且西黄丸含药血清可以降低MDA-MB-231细胞划痕愈合率,可以降低在炎性环境下MDA-MB-231细胞中COX-2 mRNA表达(P<0.05)。结论:西黄丸含药血清可以有效地抑制MDA-MB-231细胞增殖,促进其细胞凋亡,可能抑制细胞迁移,并且可以减少炎性因子的转录。     

益气扶正复方联合依维莫司对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-468的增殖抑制作用及其对Akt/mTOR信号通路的影响

目的探讨益气扶正复方（简称复方）联合依维莫司对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-468细胞的增殖抑制作用及Akt/mTOR信号通路的影响。方法高效液相色谱法（HPLC）制备益气扶正复方药物,以MTT比色法分别检测10,20,40,80,160 mg?mL-1复方药物及1,10,100,1000 nmol?L-1依维莫司（Everolimus）12,24,48 h对MDA-MB-468细胞的增殖抑制作用;分别运用IC50浓度的复方40 mg?mL-1与Everolimus 100 nmol?L-1单独及联合干预MDA-MB-468乳腺癌细胞48 h,观察其对细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测其对细胞周期和凋亡的影响;Western blot法检测其对细胞Akt/mTOR信号通路的影响。结果复方及Everolimus均呈剂量、时间依赖性地抑制了MDA-MB-468乳腺癌细胞增殖,选择IC50浓度的复方40 mg?mL-1与Everolimus 100 nmol?L-1单独及联合干预细胞,联合用药组显著抑制了MDA-MB-468乳腺癌细胞的增殖,同时联合用药组抑制了p-mTOR和p-Akt的活性,提高了PTEN的表达。结论复方与Everolimus均能抑制MDA-MB-468乳腺癌细胞增殖,两药联用效果更为显著,其作用机制可能与复方与依维莫斯联用抑制了p-mTOR和p-Akt的活性,提高了PTEN的表达有关。     

八宝丹抑制胃癌细胞移植瘤生长及上皮-间质转化

目的 探讨八宝丹对胃癌细胞移植瘤生长及细胞上皮-间质转化(EMT)的影响及其作用机制,为八宝丹的临床应用提供实验依据.方法 构建MGC80-3裸鼠皮下移植瘤模型,分为对照组和八宝丹组各10只,八宝丹组按0.25 mg/kg予八宝丹药液灌胃,对照组予等容积的生理盐水灌胃,每周给药6 d.隔天测量裸鼠瘤体体积和体质量,We...     

贝母素乙调控PI3K/Akt/mTOR通路减缓上皮-间质转化进程抑制人肺癌A549细胞侵袭及迁移的研究

目的探讨贝母素乙对人肺癌A549细胞侵袭及迁移的影响。方法采用终浓度为0、50、100、200μmol/L贝母素乙处理A549细胞,通过细胞侵袭实验、细胞划痕实验、实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法、ELISA法及Western blotting实验检测贝母素乙对A549细胞侵袭、迁移的影响及潜在机制。结果与对照组比较,贝母素乙各浓度组的A549细胞穿膜数、细胞间划痕的愈合率及MMP-9、MMP-2表达显著下降(P0.01);与对照组比较,贝母素乙各浓度组的A549细胞E-cadherin m RNA表达明显增加(P0.01),而N-cadherin和vimentin mRNA表达均显著降低(P0.01);与对照组比较,除50μmol/L贝母素乙处理A549细胞24h后的FN蛋白表达无显著性变化外(P0.05),其余贝母素乙各浓度组在各时间点上的FN蛋白表达均显著下降(P0.05、0.01);与对照组比较,贝母素乙各浓度组的p-PI3K/PI3K、p-mTOR/mTOR值及100、200μmol/L贝母素乙组的p-Akt/Akt值显著下降(P0.05、0.01)。结论贝母素乙具有抑制A549细胞侵袭及迁移能力的作用,该作用与贝母素乙调控PI3K/Akt/mTOR通路活性进而减缓上皮-间质转化(EMT)进程有关。     

化瘀消癥复方对PI3 K/Akt/mTOR信号通路及输卵管妊娠滋养细胞的作用机制研究

目的 探讨化瘀消癥复方对输卵管妊娠滋养细胞的凋亡、侵袭影响及PI3K/Akt/mTOR信号通路的调控机制.方法 以不同浓度的化瘀消癥复方水提液干预输卵管妊娠滋养细胞,设立空白组、甲氨蝶呤作为西药组、胞磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)抑制剂LY294002与雷帕霉...