新风胶囊通过miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR抑制骨关节炎CD4+T与软骨细胞共培养的免疫炎症

目的 观察新风胶囊（XFC）含药血清通过调控miR-23a-3p /PTEN/PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制骨关节炎（OA）CD4+T与软骨细胞共培养中免疫炎症反应的作用机制。方法 选取30例OA患者（OA组）及30例正常人（NC组）检测miR-23a-3p、10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因（PTEN）、磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（AKT）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的表达,观察临床指标：红细胞沉降率（ESR）、超敏C反应蛋白（hs-CRP）、IgA、IgG、IgM、补体 C3、补体C4的表达,并观察通路与临床指标的相关性。观察 30 例 OA 患者经 XFC 治疗后通路及临床指标的变化。分离及提取 OA-CD4 +T 细胞,transwell小室培养OA-CD4+T细胞与OA-CH,SD大鼠给药灌胃制备XFC含药血清;采用CCK8法检测OA-软骨细胞的细胞增殖;双荧光素酶报告实验分析miR-23a-3p和PTEN的靶向关系;RT-PCR技术检测共培养细胞中miR-23a-3p、PTENmRNA、PI3KmRNA、AKTmRNA、mTORmRNA 的表达;采用 ELISA 法检测 IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的水平;Western blotting 检测PTEN、PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR蛋白表达。结果 与NC组相比,OA组miR-23a-3p、PTEN、PI3K、AKT、IL-1β、IL-6、TNF-α表达显著上调,而PTEN、IL-10表达显著下调（P<0.01）;相关性分析表明：miR-23a-3p与IL-6呈正相关（P<0.01）,PI3K与IL-10呈正相关,mTOR与IL-6、IL-10、补体C3、补体C4呈正相关（P<0.01或P<0.05）;加入XFC含药血清,miR-23a-3p及PI3K/AKT/mTOR通路被抑制,L-1β、IL-6、TNF-α表达水平下降、IL-10表达水平升高（P<0.01）;Model组miR-23a-3p、PI3K、AKT、mTOR、IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平升高,PTEN、IL-10表达水平降低（P<0.01）;miR-23a-3p经过表达后,miR-23a-3p、PI3K、AKT、mTOR、IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平显著升高,PTEN、IL-10表达水平显著降低（P<0.01或P<0.05）;XFC组IL-1β、IL-6、TNF-α表达降低,IL-10表达升高,miR-23a-3p、PI3K、AKT、mTOR表达下调,PTEN表达上调（P<0.01或P<0.05）。结论 XFC可通过下调miR-23a-3p的表达,抑制PTEN/PI3K/AKT/mTOR通路的活化,改善IL-1β、IL-6,IL-10和TNF-α的表达,降低OA患者炎症反应。     

miR-20a-5p通过下调BMPR2促进人脑微血管内皮细胞增殖和抑制凋亡

目的 探讨微小RNA-20a-5p（miR-20a-5p）是否通过下调骨形成蛋白2型受体（BMPR2）基因调控人脑微血管内皮细胞增殖和抑制凋亡。 方法 在永生化人脑微血管内皮细胞（hCMEC/D3）中分别转染miR-20a-5p mimics,BMPR2小干扰RNA(si-BMPR2)或过表达质粒（pcDNA-BMPR2）。实时定量PCR（qRT-PCR）测定miR-20a-5p表达,免疫印迹（Western Blot）检测BMPR2、细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、活化的的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（Cleaved caspase-3）、磷酸化-磷脂酰肌醇-3激酶（p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）蛋白水平,噻唑蓝（MTT）检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡。生物信息学预测与荧光素酶报告基因检测分析miR-20a-5p和BMPR2之间的关系。共转染miR-20a-5p mimics和pcDNA-BMPR2,利用上述方法评估其对细胞增殖、凋亡和PI3K/AKT信号通路的影响。 结果 过表达miR-20a-5p明显增加hCMEC/D3的细胞活性,CyclinD1、p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平,显著减少细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3蛋白表达水平（P＜0.05）。低表达BMPR2明显提高hCMEC/D3的细胞活性、CyclinD1蛋白表达水平,显著减少细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3蛋白表达水平（P＜0.05）,高表达BMPR2时具有相反的效果。miR-20a-5p靶向BMPR2,并调控BMPR2蛋白的表达。高表达BMPR2可以逆转miR-20a-5p促hCMEC/D3增殖、PI3K/AKT信号通路活性和抑凋亡的作用。 结论 miR-20a-5p通过靶向BMPR2激活PI3K/AKT信号通路,促进人脑微血管内皮细胞的增殖,并抑制凋亡。     

MiR-148a-3p通过靶向SRPK2抑制结肠癌细胞转移

目的:MicroRNA (miRNA/miR)参与结肠癌各种生物学过程。目前,miR-148a-3p在结肠癌中的作用还不完全清楚。本研究旨在探讨miR-148a-3p对结肠癌细胞转移及侵袭能力的影响及机制。方法:实时定量PCR （qRT-PCR）检测结肠癌细胞系中miR-148a-3p及SRPK2 mRNA的表达,Western blot检测SRPK2 蛋白的表达。使用miR-148a-3p mimic, miR-148a-3p inhibitor调节HCT-116及SW480细胞中miR-148a-3p的水平。通过划痕及transwell实验检测miR-148a-3p对结肠癌细胞迁移及侵袭能力的影响。生物信息学分析预测miR-148a-3p的靶点,荧光素酶报告实验验证。Western blot及qRT-PCR检测miR-148a-3p对结肠癌细胞上皮-间质转化及SRPK2表达的影响。结果:与正常结直肠粘膜细胞FHC相比,结肠癌细胞系中miR-148a-3p水平降低（P<0.05）。结肠癌细胞中miR-148a-3p过表达可以明显抑制结肠癌细胞转移及侵袭能力（P<0.05）。相反的,敲低miR-148a-3p结肠癌细胞转移及侵袭能力增强（P<0.05）。荧光素酶报告系统结果提示SRPK2是miR-148a-3p的直接作用靶点。过表达miR-148a-3p可以抑制SRPK2在结肠癌中的表达（P<0.05）,但是敲低miR-148a-3p时SRPK2表达明显增高（P<0.05）。结论:MiR-148a-3p可能通过靶向SRPK2抑制结肠癌细胞的转移及侵袭能力。MiR-148a-3p可能成为诊断和治疗结肠癌的靶点之一。     

miR-15b通过靶向LPAR3抑制子宫内膜癌细胞PI3K/AKT信号通路活化

【摘要】 目的 探讨miR-15b靶向溶血磷脂酸受体3（LPAR3）调控PI3K/AKT信号通路对子宫内膜癌细胞（HEC-1B）增殖的影响。方法 生物信息学分析预测并通过荧光素酶报告基因实验验证miR-15b与LPAR3之间的靶向结合作用;将HEC-1B细胞分为NC组、miR-15b mimic组、miR-15b inhibitor组、siRNA-LPAR3组和miR-15b inhibitor+ siRNA-LPAR3组,实时荧光定量PCR和Western blot检测miR 15b、LPAR3和PI3K/AKT信号通路相关因子磷脂酰肌醇 3 激酶（PI3K）、苏氨酸激酶（AKT）在HEC 1B和人子宫内膜上皮细胞（HEEC）中的表达水平;噻唑蓝（MTT）法检测HEC-1B的细胞活力;流式细胞术检测HEC-1B的细胞周期分布;Transwell测定法检测HEC-1B的细胞迁移和侵袭能力。结果 LPAR3为miR-15b的靶基因;与HEEC组相比,HEC-1B组中LPAR3、PI3K和AKT mRNA和蛋白表达水平均显著升高（P＜0.05）,而miR-15b表达显著降低（P＜0.05）;与NC组相比,siRNA-LPAR3组细胞PI3K/AKT信号通路相关因子mRNA和蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）,miR-15b mimic组细胞LPAR3和PI3K/AKT信号通路相关因子mRNA和蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）;与NC组相比,siRNA-LPAR3组HEC-1B的细胞活力、S期细胞比例、迁移和侵袭能力均明显降低（P＜0.05）,miR-15b mimic组HEC-1B的细胞活力、S期细胞比例、迁移和侵袭能力均明显降低（P＜0.05）,抑制miR-15b的表达后,上述现象被逆转(P＜0.05)。与miR-15b inhibitor组相比,miR-15b inhibitor+ siRNA-LPAR3组HEC-1B的细胞活力、S期细胞比例、迁移和侵袭能力均显著下降（P＜0.05）。结论 miR-15b可能通过靶向LPAR3抑制HEC-1B的PI3K/AKT信号通路活化,从而抑制HEC-1B细胞的增殖。     

hsa-miR-23a-3p靶向TGFβ2对急性淋巴细胞白血病CEM/C1细胞增殖、凋亡、侵袭及细胞骨架重组的影响

目的:探究hsa-miR-23a-3p靶向转化生长因子β2(TGFβ2)对急性淋巴细胞白血病细胞株CEM/C1增殖、凋亡、侵袭及细胞骨架重组的影响.方法:将CEM/C1细胞随机分为4组:Control组、mimic组、pcDNA-TGFβ2组和mimic+TGFβ2组,采用Li-pofectamine 2000分别转染mimic对照、miR-23a-3p mimic、TGFβ2过表达质粒及共转染miR-23a-3p mimic+TGFβ2过表达质粒.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测miR-23a-3p、TGFβ2表达;荧光素酶报告实验验证miR-23a-3p与TGFβ2的靶向关系;克隆形成实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Transwell检测细胞侵袭;微管形成实验检测细胞微管形成的结节数;Western blotting法检测 Ki67、Survivin、Caspase-3、Bax、Bcl-2、VEGF 蛋白表达.结果:与 Control 组相比,mimic 组miR-23a-3p表达、细胞凋亡率、Caspase-3蛋白表达量和Bax/Bcl-2比值升高,TGFβ2mRNA表达、克隆形成率、微管形成结节数及Ki67、Survivin、VEGF蛋白表达量降低,侵袭细胞数减少(均P＜0.05),pcDNA-TGFβ2组与mimic组各指标变化相反(均P＜0.05);与pcDNA-TGFβ2组比较,mimic+TGFβ2组克隆形成率、微管形成结节数和Ki67、Survivin、VEGF蛋白表达量降低,细胞凋亡率和Caspase-3蛋白表达量及Bax/Bcl-2比值升高,侵袭细胞数减少(均P＜0.05).荧光素酶报告实验证实miR-23a-3p和TGFβ2存在靶向关系.结论:hsa-miR-23a-3p通过靶向下调TGFβ2表达抑制人白血病细胞增殖、侵袭、细胞骨架重组,促进细胞凋亡.     

miRNA-455-3p对HCT116结肠癌细胞迁移、侵袭的影响及机制研究

目的 探讨miRNA-455-3p对HCT116结肠癌细胞迁移、侵袭的影响及机制研究.方法 采用脂质体LipofectamineTM 3000将miR-455-3p mimics和miR-455-3p NC转入HCT116结肠癌细胞中,Real-time PCR检测细胞中miR-455-3p表达,MTT法检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blot检测细胞中基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinases 2,MMP2)、MMP9、磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路相关蛋白的表达.结果 与miR-455-3p NC组比较,miR-455-3p mimics组miR-455-3p表达量显著提高(P＜0.01),细胞活力、迁移能力、侵袭能力均显著降低(P＜0.01),MMP2、MMP9、PI3K及p-AKT表达量均显著下调(P＜0.01).结论 miR-455-3p mimics可能通过阻断PI3K/AKT信号通路抑制HCT116细胞的迁移及侵袭.     

miR-148a-3p抑制NRAS表达调控乳腺癌细胞增殖与凋亡的机制

目的 探讨miR-148a-3p在乳腺癌中的作用及可能的机制.方法 根据人乳腺癌细胞株-7(MCF-7)细胞是否转染及是否存在miR-148a-3p的模拟物分为3个组:未转染组、miR-148a-3p对照组和miR-148a-3p转染组.通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测转染后miR-148a-3p在各组的信使RNA(mRNA)水平,运用四唑盐比色法(MTT)比较MCF-7细胞在3组的增殖情况,应用RT-qPCR检测各组神经母细胞瘤病毒性ras致癌因子的同原体(NRAS)的基因水平,应用Western blot检测各组RAS病毒致癌基因同源物NRAS的蛋白水平,应用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,应用双荧光素酶报告基因实验验证miR-148a-3p与NRAS之间的作用.结果 过表达miR-148a-3p显著抑制乳腺癌细胞株MCF-7的增殖(P＜0.05),促进其凋亡(P＜0.05),降低NRAS基因和蛋白的表达(P＜0.05),双荧光素酶报告基因实验证明NRAS是miR-148a-3p的直接作用靶点.结论 miR-148a-3p可能通过靶向NRAS抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖,促进细胞凋亡.     

miR-23a-3p在脂多糖诱导的人肾小管上皮细胞中的表达及作用

目的探讨miR-23a-3p在脂多糖诱导的人肾小管上皮细胞中的表达及其作用。方法使用LPS诱导人肾小管上皮细胞HK-2细胞建立脓毒症性急性肾损伤细胞疾病模型，用CCK-8法检测细胞活力，实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测IL-6 mRNA和miR-23a-3p的相对表达量。将实验细胞分为3组： 正常对照组、LPS＋空白对照(NC)组和LPS＋miR-23a-3p模拟物（mimic）组，采用Western印迹法检测炎症和凋亡相关蛋白p-NF-κB、IL-6、Cleaved Caspase-3和Usp5的表达水平。结果LPS可以抑制HK-2的细胞活力并增加炎症因子IL-6 mRNA的表达水平，同时，miR-23a-3p在LPS诱导的HK-2细胞中表达下降。与正常对照组相比，LPS增加了p-NF-κB、IL-6、Cleaved Caspase-3和Usp5蛋白的表达水平，而转染miR-23a-3p模拟物可以逆转以上这些变化。结论miR-23a-3p模拟物可以显著减轻LPS诱导的HK-2细胞的炎症和凋亡水平，其作用机制可能与靶向抑制Usp5有关。     

miR-21-3p靶向VEGFA调节PI3K/AKT信号通路对子痫前期大鼠肾损伤的影响

目的:探究microRNA-21-3p(miR-21-3p)通过靶向血管内皮生长因子A(VEGFA)调节磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路对子痫前期(PE)大鼠肾损伤的改善作用。方法:将60只孕鼠随机分为正常组、模型组、mimics NC组、miR-21-3p mimics组、miR-21-3p inhibitor组。除正常组外,其余4组建立PE模型,造模成功后,mimics NC组注射miRNA-NC空质粒腺病毒载体; miR-21-3p mimics组注射携带miR-21-3p基因腺病毒载体; miR-21-3p inhibitor组注射携带抑制miR-21-3p基因表达腺病毒载体,连续7d。实验结束后动脉取血,检测血清中SCr、BUN、IL-6、TNF-α以及尿液中尿蛋白水平;采用HE染色法制作切片,光镜观察肾组织病理变化; RT-PCR法检测miR-21-3p、VEGFA mRNA相对表达水平; Western Blot法检测VEGFA、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-21-3p与VEGFA的靶向...     

SOCS3基因3’端非翻译区荧光素酶报告载体的构建及活性鉴定

目的:研究细胞因子信号抑制蛋白-3(suppressors of cytokine signaling-3,SOCS3)基因3’端非翻译区(3’-un-translated region,3’-UTR)微小RNA(microRNA,miRNA)的调控作用,构建重组SOCS3基因3’-UTR荧光素酶报告载体,并通过荧光素酶活性测定,初步分析可能调控SOCS3基因表达的miRNAs。方法:采用PCR方法从原代培养的小鼠星形胶质细胞基因组DNA中扩增SOCS3基因3’-UTR序列,插入荧光素酶报告载体pGL3-Promoter,获得重组载体pGL3-Promoter/SOCS3;通过Target Scan5.2、RNAhybrid和FINDTAR3软件预测可能与SOCS3基因3’-UTR结合的miR-NAs;将pGL3-Promoter/SOCS3重组质粒和miRNAs共转染HEK 293T细胞,测定SOCS3 3’-UTR荧光素酶的活性。结果:酶切及核酸测序证实,成功构建了SOCS3基因3’-UTR序列的荧光素酶报告重组子;miRNA靶位点预测显示,SOCS3基因可能是miR-203、miR-291a-5p、miR-9、miR-140和miR-130b的作用靶标;与对照组相比,miR-203、miR-291a-5p、miR-140能使SOCS3 3’-UTR荧光素酶的活性显著降低。结论:成功构建了SOCS3基因3’-UTR荧光素酶报告载体,且miR-203、miR-291a-5p、miR-140可显著降低其荧光素酶的活性。     

lncRNA MAGI2-AS3靶向调控miR-130a-5p对柯萨奇病毒B3诱导的大鼠心肌细胞H9C2损伤的影响

目的:探讨lncRNA MAGI2-AS3靶向miR-130a-5p调控柯萨奇病毒B3(CVB3)诱导的大鼠心肌细胞H9C2损伤的分子机制。方法:对照组,用不含药物、病毒的DMEM处理H9C2细胞48 h。CVB3组,用含有100倍半数组织培养感染剂量CVB3的DMEM处理H9C2细胞48 h(感染)。CVB3+sh-NC组,H9C2细胞转染sh-NC慢病毒后感染CVB3。CVB3+sh-MAGI2-AS3组,H9C2细胞转染sh-MAGI2-AS3慢病毒后感染CVB3。CVB3+miR-NC组,H9C2细胞转染miR-NC后感染CVB3。CVB3+miR-130a-5p组,H9C2细胞转染miR-130a-5p mimic后感染CVB3。sh-MAGI2-AS3+抗miR-NC组,sh-MAGI2-AS3、抗miR-NC共转染H9C2细胞后感染CVB3。sh-MAGI2-AS3+抗miR-130a-5p组,sh-MAGI2-AS3、抗miR-130a-5p共转染H9C2细胞后感染CVB3。qRT-PCR检测MAGI2-AS3、miR-130a-5p相对表达量;Annexin V/PI...     

环状RNA FAT1(hsa_circ_0001461)通过调控miR⁃181d⁃5p/miR⁃199a⁃5p促进口腔鳞状细胞癌进展

目的：探讨环状RNA FAT1(hsa_circ_0001461)-miR-181d-5p/miR-199a-5p轴在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞生物学功能中的作用及机制。方法：收集 30 例 OSCC 患者的临床组织,采用实时定量 PCR 检测 circ- FAT1、miR-181d-5p及miR-199a-5p在OSCC组织和细胞中的表达。通过StarBase和双荧光素酶报告基因实验验证 miR-181d- 5p/miR-199a-5p与circFAT1的靶向关系。利用CCK-8、Transwell、流式细胞术检测 circFAT1-miR-181d-5p/miR-199a-5p轴对于 OSCC细胞活力、迁移、侵袭、凋亡和周期的影响。采用免疫印迹法结合LY294002处理检测PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达。结果：在OSCC中circFAT1表达升高,miR-181d-5p、miR-199a-5p表达下降(P ＜ 0.001)。circFAT1可以同时靶向miR- 181d-5p和miR-199a-5p(P ＜ 0.01)。沉默circFAT1、过表达miR-181d及miR-199a-5p抑制了OSCC细胞活力、迁移、侵袭和周期进展、诱导凋亡,同时抑制PI3K/Akt/mTOR 通路的激活;过表达circFAT1、抑制miR-181d-5p及miR-199a-5p则发挥相反作用 (P ＜ 0.05)。miR-181d-5p、miR-199a-5p可部分逆转circFAT1对OSCC细胞生物学功能的影响(P＜0.05)。LY294002预处理逆转了过表达circFAT1对PI3K/Akt/mTOR通路和细胞活力的影响(P ＜ 0.05)。结论：circFAT1通过调控miR-181d-5p和miR-199a-5p 促进OSCC细胞恶性进展。     

miR-125a-3p靶向作用P2RX7抑制糖尿病肾病小鼠肾纤维化发展

目的探究miR-125a-3p靶向作用P2RX7对糖尿病肾病(DN)小鼠肾纤维化发展的影响。 方法60只小鼠均分为对照组、模型组、miR-125a-3p NC组和miR-125a-3p mimic组,构建DN小鼠模型,腹腔注射miR-125a-3p NC或mimic。qRT-PCR检测肾组织miR-125a-3p表达,Western blotting检测P2RX7、Col-I、α-SMA蛋白表达,ELISA检测血肌酐(Cr)和血尿素氮(BUN),HE染色和Masson染色检测肾脏病理改变和胶原蛋白体积分数(CVF),双荧光素酶报告检测miR-125a-3p与P2RX7的靶向关系。 结果与对照组比较,模型组和miR-125a-3p NC组P2RX7、Cr、BUN和CVF、Col-I和α-SMA蛋白升高,miR-125a-3p表达降低(P＜0.05);与模型组和miR-125a-3p NC组比较,miR-125a-3p mimic组上述趋势得到逆转(P＜0.05)。miR-125a-3p可与P2RX7靶向结合(P＜0.05)。 结论miR-125a-3p高表达靶向抑制P2RX7蛋白,缓解DN小鼠的肾纤维化,保护肾功能。     

长链非编码RNA生长抑制特异因子5调控微小RNA-137对Aβ诱导大鼠海马神经元损伤的影响

目的探究长链非编码RNA(LncRNA)生长抑制特异因子5(GAS5)调控微小RNA(miR)-137对淀粉样β蛋白(Aβ)诱导的大鼠海马神经元损伤的影响。方法实验分为对照(control)组、Aβ组、Aβ+si-NC组、Aβ+siGAS5组、Aβ+si-GAS5+anti-miR-NC组、Aβ+si-GAS5+anti-miR-137组,每组10只。Y迷宫法检测大鼠学习记忆力;实时荧光定量逆转录多聚酶链反应(RT-qPCR)检测海马CAI区GAS5、miR-137水平;蛋白质免疫印迹(Western blot)实验检测海马CAI区B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase3)蛋白水平;尼氏染色观察神经元形态; Tunel染色观察大鼠神经元凋亡情况;双荧光素酶鉴定miR-137与GAS5的靶向关系。结果与对照组相比,Aβ组、Aβ+si-NC组海马CAI区GAS5 mRNA水平,BAX、caspase3蛋白水平,神经元死亡率、凋亡率升高(P0.05),正确反应次数比例、学会次数比例,miR-137水平、Bcl2蛋白水平降低(P0.05);分别与Aβ组、Aβ+si-NC组相比,Aβ+si-GAS5组、Aβ+si-GAS5+anti-miR-NC组海马CAI区GAS5 mRNA水平,BAX、caspase3蛋白水平,神经元死亡率、凋亡率降低(P0.05),正确反应次数比例、学会次数比例,miR-137水平、Bcl2蛋白水平升高(P0.05);分别与Aβ+si-GAS5组、Aβ+si-GAS5+anti-miR-NC组相比,Aβ+si-GAS5+anti-miR-137组海马CAI区GAS5mRNA水平,BAX、caspase3蛋白水平,神经元死亡率、凋亡率升高(P0.05),正确反应次数比例、学会次数比例,miR-137水平、Bcl2蛋白水平降低(P0.05)。经验证,miR-137与GAS5之间存在靶位点。结论干扰GAS5可上调miR-137从而保护Aβ诱导的大鼠海马神经元损伤,缓解神经元凋亡过程;而进一步下调miR-137可逆转上述过程。     

miR-365a-3p靶向调控JAK-STAT信号通路抑制三阴性乳腺癌细胞的恶性生物行为研究

目的 针对三阴性乳腺癌(TNBC)探究微小RNA(miRNA)-365a-3p对其恶性生物行为的影响并分析潜在的分子调控机制.方法 选取2018年6月至2019年12月该院收治的行外科手术切除治疗的TN-BC患者50例作为研究对象,收集TNBC组织和癌旁组织,并统计TNBC患者的肿瘤相关临床资料.采用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-365a-3p在组织和乳腺癌细胞中的表达水平,将miR-365a-3p模拟物(mim-ic)及阴性对照(NC)mimic转染至MDA-MB-453细胞后分别通过CCK-8实验、克隆平板形成、Transwell和划痕实验检测TNBC细胞的恶性生物行为.采用双荧光素酶报告基因实验预测miR-365 a-3 p靶通路,并对细胞质双面蛋白酪氨酸激酶(JAK)和信号传导及转录激活因子(STAT)蛋白进行定量检测.结果 TNBC组织及乳腺癌细胞系中miR-365a-3p表达均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);且肿瘤越大、Ki67表达水平越高、浸润范围越深、存在淋巴结转移及TNM分期越差者miR-365 a-3 p表达水平越低,差异均有统计学意义(P<0.05).同时转染miR-365a-3p mimic后能显著抑制MDA-MB-468细胞株增殖、集落形成、迁移及侵袭能力.JAK与miR-365a-3p存在相同位点,且JAK-WT+miR-365a-3p共转染组荧光素酶活性与JAK-MUT+miR-365a-3p共转染组比较,差异有统计学意义(P<0.05);此外miR-365a-3p mimics明显抑制JAK、STAT蛋白水平,差异有统计学意义(P<0.05).结论 miR-365a-3p与TNBC肿瘤不良进展有关,并通过抑制JAK-STAT信号通路抑制TNBC细胞的恶性生物行为.     

miR-20a-5p通过调控细胞周期蛋白D1抑制肾小管上皮细胞增殖

目的观察miR-20a-5p对肾小管上皮细胞增殖的影响,并验证其对细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的靶向调控作用。方法使用Lipofectamine TM2000脂质体将微小RNA(miRNA)转染入人肾小管上皮细胞HK-2,实验分为3组,miR-20a-5p组转染miR-20a-5p,对照组转染阴性对照miRNA,空白组未做任何转染。CCK-8实验检测转染后各组细胞的吸光度值,流式细胞术检测各组的细胞周期变化。Western blot检测各组细胞cyclin D1的蛋白表达情况。构建荧光素酶报告基因,内含cyclin D1的3’端非翻译区(3’UTR),双荧光素酶报告基因实验验证miR-20a-5p对3’UTR的直接结合作用。结果Mi R-20a-5p组在转染后48~120 h的吸光度值均低于对照组和空白组(P0.05),另外两组差异无统计学意义(P0.05)。转染后72 h,miR-20a-5p组处于G1期的比例为(63.89±3.61)%,高于另外两组(P0.05),而另外两组差异无统计学意义(P0.05)。转染后48 h,miR-20a-5p组的cyclin D1蛋白表达减少(P0.05)。与阴性对照miRNA相比,miR-20a-5p能抑制荧光素酶的活性(P0.05)。结论 miR-20a-5p能抑制肾小管上皮细胞的增殖,并将细胞阻滞在G1期,其可能机制是miR-20a-5p抑制cyclin D1的表达,cyclin D1是miR-20a-5p的直接靶基因。     

miR-92a-3p靶向调控NOTCH信号通路对T-ALL细胞增殖的影响机制

目的 探讨微小RNA(miR)-92a-3p对急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)SupT1细胞增殖的影响及其机制.方法 将体外培养的SupT1细胞分为未转染组(正常培养)、阴性对照组(转染阴性对照)、模拟物组(转染miR-92a-3p模拟物)和抑制剂组(转染miR-92a-3p抑制剂),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测SupT1细胞中miR-92a-3p表达水平,噻唑蓝(M T T)实验检测SupT1细胞增殖活力,流式细胞仪检测SupT1细胞周期分布情况,Western blot检测SupT1细胞中果蝇翅膀边缘出现缺口(NOTCH)信号通路相关蛋白NOTCH1、NOTCH配体Jagged1和效应分子Hes1蛋白表达情况,双荧光素酶报告基因(DLR)实验检测miR-92a-3p和NOTCH1的靶向关系.结果 与阴性对照组比较,模拟物组SupT1细胞中miR-92a-3p表达水平、G0/G1期细胞所占百分比明显升高,且细胞增殖活力和细胞在S期、G2/M期所占百分比及细胞中N O T C H1、Jagged1、Hes1蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);而抑制剂组细胞各指标变化与模拟物组结果相反;阴性对照组与未转染组比较,各指标差异无统计学意义(P>0.05);DLR实验结果证实miR-92a-3p可与NOTCH1靶向结合.结论 miR-92a-3p可通过诱导细胞周期阻滞抑制SupT1细胞增殖,其作用机制可能与靶向调控NOTCH信号通路有关.     

miRNA-23a-3p和TLR4在急性脑出血患者血清中的表达及临床意义

目的 探究微小RNA-23a-3p (miR-23a-3p)、Toll样受体4 (TLR4)在急性脑出血(ACH)患者血清中的水平及其临床意义。方法 选取2020年1月至2022年3月西安宝石花长庆医院收治的110例ACH患者为ACH组，并纳入同期110例健康体检者为对照组。采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)法测定两组受检者的血清miR-23a-3p表达水平，酶联免疫吸附法(ELISA)测定两组受检者的血清核因子κB (NF-κB)、TLR4、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)水平；采用Pearson法分析ACH患者血清miR-23a-3p、TLR4水平与TNF-α、NF-κB的相关性；比较不同预后ACH患者一般资料及血清miR-23a-3p、TLR4、TNF-α、NF-κB水平；采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miR-23a-3p、TLR4水平对ACH患者预后的评估价值。结果 ACH组患者血清miR-23a-3p、TLR4、TNF-α、NF-κB水平分别为2.29±0.67、(32.94±10.98)μg/L、(51.28±21.37) pg/mL、(17....     

miR-34a-5p通过调控CDK6表达和PI3K/AKT信号通路调节滋 养层细胞的增殖、浸润和凋亡

目的 探讨miR-34a-5p及CDK6对滋养层细胞增殖,浸润和凋亡的作用和下游机制以及二者的调节关系。方法 培养滋养 层细胞HTR-8/Svneo和人绒毛膜癌细胞系BeWo和JEG-3HTR-8/Svneo,使用RTqPCR法检测3种细胞中miR-34a-5p的表达差 异。根据对HTR-8/Svneo细胞的不同处理进行如下分组：无处理的HTR-8/Svneo细胞（对照组）;miR-34a-5p拟似物mimic转染 细胞（mimic组）,pcDNA-CDK6和mimic共转染HTR-8/Svneo细胞（pcDNA-CDK6+mimic组）,miR-34a-5p抑制剂inhibitor转 染HTR-8/Svneo细胞（inhibitor组）。MTT法检测细胞增殖,ELISA法测定caspase 3活性检测细胞凋亡水平,Transwell实验检 测细胞浸润能力;Western blot 检测细胞周期依赖性蛋白激酶CDK6,凋亡标记物cleaved-caspase 3,浸润标记物MMP-9的表达; 荧光素酶报告基因实验确认miR-34a-5p对CDK-6的直接靶向关系。结果 过表达miR-34a-5p抑制HTR-8/Svneo细胞的增 殖活性（P=0.000）和浸润能力（P=0.049）,下调细胞中MMP-9（P=0.004）和CDK6（P=0.014）的表达水平,上调caspase 3活性 （P=0.018）和cleaved caspase 3的表达水平（P=0.003）;CDK6是miR-34a-5p的靶基因,过表达CDK6削弱miR-34a-5p对细胞 增殖（P=0.000）、凋亡（P=0.015）和浸润（P=0.046）的作用;使用IFG-1激活PI3K/AKT通路部分逆转miR-34a-5p对细胞增殖 （P=0.011）、凋亡（P=0.004）和浸润（P=0.002）的作用。结论 miR-34a-5p通过调控CDK6表达和PI3K/AKT信号通路激活调节滋 养层细胞的增殖,浸润和凋亡。     

miR-125a-5p对卵巢癌细胞的增殖迁移和侵袭能力的影响

目的探讨miR-125a-5p对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用的靶基因。方法购入正常人卵巢上皮细胞HOSEpi C,卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910各1株,通过实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测人卵巢上皮细胞HOSEpi C以及卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平。利用生物信息学方法预测miR-125a-5p的靶基因,构建预测靶基因3’端非编码区(3’-UTR)的野生型(WT)和突变型(mut)荧光素酶报告基因质粒,通过双荧光素酶报告基因法验证miR-125a-5p与预测靶基因的靶向作用。利用慢病毒感染的方法建立稳定过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞,使用荧光定量PCR和Western blot检测靶基因的表达水平。利用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞增殖能力的变化,通过Transwell迁移和侵袭试验分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞迁移和侵袭能力的变化。结果正常人卵巢上皮细胞HOSEpi C中miR-125a-5p的表达水平高于卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平,其中SKOV3中miR-125a-5p的表达水平最低,差异均有统计学意义(P <0. 05),选择SKOV3进行后续实验。生物信息学分析显示,miR-125a-5p能够靶向结合Rab3D的3’-UTR;双荧光素酶报告基因分析证实miR-125a-5p能够靶向作用于Rab3D的3’-UTR。筛选稳定表达miR-125a-5p和si-Rab3D及相应对照的SKOV3细胞,分别命名为SKOV3/miR-125a-5p组,SKOV3/si-Rab3D组,SKOV3/miR-NC组和SKOV3/si-NC组。在SKOV3/miR-125a-5p组中,Rab3D的表达水平低于SKOV3组和SKOV3/miR-NC组,差异均有统计学意义(P <0. 05)。细胞增殖能力检测结果显示,与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,SKOV3/miR-125a-5p组在72小时和96小时细胞增殖能力降低,差异有统计学意义(P <0. 05)。Transwell迁移和侵袭试验结果显示,SKOV3/miR-125a-5p组分别与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,细胞迁移和侵袭能力均显著下降,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论 miR-125a-5p能够靶向作用Rab3D,抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。