杏仁中央核NMDA受体对急性吗啡依赖大鼠戒断诱发条件性位置厌恶的影响

目的:研究杏仁中央核(Central nucleus of the amygdala,CeA)N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体在纳络酮诱发急性吗啡依赖大鼠戒断性情绪反应中的作用.方法:吗啡、纳络酮间隔4小时皮下注射,通过两轮纳络酮匹配训练建立条件性位置厌恶(Conditioned place aversion,CPA),作为急性吗啡依赖戒断诱发的情绪反应模型.观察纳络酮匹配训练前CeA微量注射NMDA受体拮抗剂地卓西平(MK801)对大鼠训练后在纳络酮匹配侧停留时间的影响.结果:戒断组大鼠经过两轮训练后在纳络酮匹配侧停留时间(230.4±32.8s)比假手术组(457.6±47.8s)显著缩短(P＜0.01),训练前CeA微量注射MK801大鼠在纳络酮匹配侧停留时间(447.0±51.8s)比戒断组(230.4±32.8s)显著延长(P＜0.01),非戒断组大鼠(急性吗啡依赖组,未接触吗啡组)训练前CeA注射MK801训练前后在处理侧停留时间差异无显著性(P＞0.05).结论:CeA注射MK801既无奖赏效应也无厌恶效应,但能阻断CPA的建立,提示CeA的NMDA受体参与急性吗啡依赖戒断诱发的情绪反应.     

GluN2亚基在海洛因诱导CPP模型大鼠PrL区的表达

目的:研究大鼠内侧前额叶皮质(m PFC)边缘前区(Pr L) Glu N2亚基在海洛因诱导条件位置性偏爱(CPP)及戒断状态的表达。方法:24只SD大鼠随机分为对照组(control)和海洛因诱导组。海洛因诱导组大鼠按实验进程分为两种状态,即海洛因诱导CPP状态(heroin)和海洛因戒断状态(withdrawal)。用小剂量递增法皮下注射海洛因,行大鼠海洛因诱导CPP建模,并自然戒断,免疫荧光染色检测各组大鼠Pr L区Glu N2亚基NR2A、NR2B、NR2C、NR2D的表达。结果:大鼠经过连续7 d小剂量递增法注射海洛因,形成了稳定的CPP;免疫荧光染色结果显示,大鼠CPP状态Pr L区NR2B表达较对照组显著增强(P <0. 01),其他亚基无明显变化。海洛因自然戒断7 d后,戒断状态大鼠Pr L区NR2A、NR2C表达较对照组和CPP状态皆显著增强(P <0. 01)。戒断状态NR2B表达水平显著高于对照组(P <0. 01),但与CPP状态无显著差异。结论:大鼠海洛因依赖CPP的形成与Pr L区NR2B亚基的活性密切相关,NR2A和NR2C可能参与药物戒...     

慢性复合应激对大鼠学习与记忆及海马 NMDA受体NR1亚基表达的影响

目的：观察慢性复合应激对大鼠学习与记忆的影响和海马内NMDA受体亚基NR1表达的变化。方法：成年雄性Wistar大鼠实验组每天交替暴露于复合应激原环境中达6w,然后作Morris水迷宫和Y迷宫作业测试,再采用免疫组织化学和图像处理方法分析海马CA1、CA3和齿状回区内NR1的表达变化。结果：慢性复合应激组大鼠寻找平台的潜伏期较对照组明显缩短,学会躲避电击的正确次数较对照组明显增多;海马内NMDA受体亚基NRI的表达水平较对照组明显上调。结论：慢性复合应激可增强学习与记忆能力,NMDA受体表达变化可能是影响学习与记忆的机制之一。     

慢性复合应激对大鼠学习与记忆及海马NMDA受体亚基NR2A和NR2B表达的影响

为了观察慢性复合应激对大鼠学习与记忆的影响和海马内 NMDA受体亚基 NR2 A、NR2 B表达的变化。本研究将成年雄性 Wistar大鼠分为实验组和对照组 ,实验组动物每天交替暴露于复合应激原环境中达 6周 ,用 Morris水迷宫和 Y迷宫作业测试其空间学习与记忆成绩 ,再采用免疫组织化学和图像处理方法分析海马 CA1 、CA3、齿状回区的 NR2 A和 NR2 B的表达。结果显示 :( 1) Morris水迷宫测试 :慢性复合应激组大鼠寻找平台的潜伏期较对照组明显缩短 ,Y迷宫测试 :慢性复合应激组大鼠学会躲避电击的正确次数较对照组明显增多 ;( 2 )慢性复合应激组海马内 NMDA受体亚基 NR2 B表达水平较对照组明显上调 ,NR2 A表达水平无显著变化。结论 :慢性复合应激可增强学习与记忆能力 ,NMDA受体表达变化可能是影响学习与记忆的机制之一     

鞘内注射丹参酮ⅡA对坐骨神经慢性压迫性痛大鼠脊髓背角N-甲基-D-天冬氨酸受体表达的影响

目的:研究丹参酮ⅡA对坐骨神经慢性压迫性痛大鼠脊髓背角内N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(NR2B)表达的影响,探讨丹参酮ⅡA的镇痛机制。方法:SD雄性大鼠随机分为假手术组和模型组。模型组又分为生理盐水组和处理组。模型组在手术当日及术后每日在大鼠鞘内注射生理盐水0.1 ml和丹参酮ⅡA 20 mg/kg,连续注射14 d。检测各组大鼠在手术前及术后14 d的机械痛阈和热痛阈;术后第14天,免疫组织化学检测大鼠脊髓背角内NR2B的表达。结果:与假手术组比较,生理盐水组大鼠的机械痛阈和热痛阈明显降低,NR2B的表达增多;与生理盐水组比较,处理组的机械痛阈和热痛阈明显升高,脊髓背角内NR2B的表达下降,差异均有统计学意义。结论:鞘内注射丹参酮ⅡA对坐骨神经慢性压迫性痛模型大鼠的镇痛作用可能与降低脊髓背角内NR2B的表达有关。     

SD大鼠海洛因CPP易感性差异的伏隔核壳区D2受体及DAT机制

目的:建立大鼠海洛因成瘾易感性差异的条件性位置偏爱模型,检测海洛因CPP易感性差异大鼠伏隔核壳区(AcbSH)D2受体(dopamine D2 receptor,D2R)及多巴胺转运体(dopamine transportor,DAT)蛋白表达的动态变化,探讨海洛因精神依赖易感性差异可能机制.方法:130只雄性SD大鼠随机抽取30为生理盐水对照组(SC),其余100只大鼠为海洛因处理组进行条件性位置偏爱(CPP)训练,海洛因处理组根据海洛因诱导的CPP强度不同再分为高CPP组(HP)和低CPP组(LP),各占总数的30%,利用免疫组化方法对高、低偏爱组及生理盐水对照组大鼠末次海洛因注射后30分钟、戒断第1、3、7、14天AcbSH D2R和DAT蛋白表达进行检测.结果:①海洛因处理后大鼠AcbSH区D2R和DAT蛋白表达均显著下降,而在戒断后逐渐回升;②海洛因高偏爱组大鼠在所有检测时点AcbSH区D2R下凋比低偏爱组大鼠更为明显;③海洛因高偏爱组大鼠各脑区所有检测时点DAT表达与低偏爱组大鼠均无明显差别.结论:①海洛因慢性处理后,大鼠AcbSH区D2R和DAT均出现适应性下调;②不同个体D2R敏感性或受体水平存在差异,低D2R可能与海洛因成瘾的高易感性与有关;③未发现不同易感性的大鼠DAT蛋白水平存在差异,海洛因成瘾易感性与DAT的表达可能没有直接的相关性.     

大鼠局灶性脑缺血后GABAA受体亚基α2和α3在梗死对侧皮层表达的动态变化

目的 研究大鼠大脑中动脉缺血再灌注后, 梗死对侧皮层氨基丁酸A(GABAA)受体α2 和α3亚基的表达变化.方法 采用大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,分为MCAO组(n=18)和假手术组(n=18),分别于术后7d、30d和6个月断头取脑,采用免疫组织化学技术检测各组中梗死对侧皮层GABAA受体亚基α2 和α3的表达情况.结果 MCAO组大鼠与假手术组大鼠相比,在7d时梗死对侧亚基α2 和α3在皮层各个脑区改变无明显差异(P>0.05);30d和6个月时,亚基α3在各个脑区均显著升高(P <0.05);30d时亚基α2在梗死对侧的Par1和Par2脑区表达增加(P ＜0.05);6个月时, 梗死对侧亚基α2在Par1脑区表达增加而在Par2脑区表达降低(P ＜0.05).结论 大鼠大脑中动脉缺血再灌注后梗死塞对侧皮层GABAA受体亚基α2 和α3发生了广泛而长效的变化,这种变化提示脑缺血后GABAA受体功能受损,GABAA受体的改变可能参与了缺血后突触的重塑和神经网络重建.     

NMDA受体亚单位NR1、NR2A和NR2B在大鼠海马的免疫组织化学表达

目的 :观察N 甲基 D 门冬氨酸受体亚单位 1 (N methyl D aspartatereceptorsubunit 1 ,NR1 )、亚单位 2A(NR2A)和亚单位 2B(NR2B)在成年大鼠海马结构各区的表达特点 ,为研究三者在海马生理和病理过程中的作用提供形态学资料。方法 :大鼠脑 2 0 μm厚冰冻切片 ,免疫组织化学ABC法显色 ,图像分析。结果 :NR1、NR2A和NR2B在海马CA1～CA3区锥体细胞以及齿状回颗粒细胞普遍表达 ,三者中以NR1免疫组织化学反应最强 ,NR2A最弱 ,NR2B居中。NR1与NR2A在海马各区间的表达水平都无显著差异 ;NR2B在海马CA1区的表达明显强于其在CA3区及齿状回的表达 ,尤其是CA1区锥体细胞的顶树突在贯穿辐射层及腔隙分子层的全长中都呈高表达。结论 :NR1、NR2A和NR2B在正常海马结构各区的表达强度和形式存在差异 ,提示各区间天然N 甲基 D 门冬氨酸(N methyl D aspartate ,NMDA)受体的亚单位构成比例可能有所不同     

脑缺血大鼠大脑皮质NMDA受体的早期表达

目的　探讨脑缺血和缺血再灌注早期大脑皮质NMDA受体的变化规律。方法　健康雄性SD大鼠 4 8只 ,随机分为 6组 :假手术对照组、单纯脑缺血 1 5min、2 0min和 30min组及脑缺血 1 5min再灌流 30min和 2 4h组 ;4血管脑缺血动物模型 ;连续冰冻冠状切片观察 ,NR1 免疫组化染色特异性地显著NMDA受体的变化 ,图象分析及计算阳性单位PU值。结果　①单纯脑缺血各组PU值分别为 7 5 5± 1 81、6 91± 2 5 3和 6 0 9± 1 5 0 ,与对照组PU值 9 0 4± 1 5 7相比呈下降趋势 (P≤ 0 0 5 ) ;②再灌流 30min和 2 4h组PU值分别为 5 76± 2 2 4和 4 73± 1 34,与对照组PU值相比明显减少 36 2 9%～ 4 7 6 8% ,有统计学意义(P <0 0 5 ) ;③再灌流 0min、30min和 2 4h组两两比较 ,除 2 4h和 0min组相比NR1 阳性反应物减少有统计学意义 (P <0 0 5 )外 ,其它组别间NMDA受体下降的变化无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论　脑缺血和缺血再灌流早期NMDA受体都存在下行调节 ,这种调节可能是一种保护性作用     

β-淀粉样蛋白对大鼠海马星形胶质细胞N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位表达的影响

目的 探讨Wistar大鼠海马星形胶质细胞N-甲基-D-天冬氨酸受体（NMDAR）亚单位在β-淀粉样蛋白（Aβ）25~35毒性作用下的表达变化特点。方法 大鼠海马原代培养细胞,加Aβ _25~35（10μmol/L）分别作用1h、24h后,应用免疫荧光方法检测对照组和加药组中NR1、NR2A和NR2B的表达情况（n =10）。 结果 对照组海马星形胶质细胞表达NR1、NR2A和NR2B,阳性点状颗粒主要分布在细胞胞体和突起上,在胞体部位分布密集,在细胞突起则散在分布。经Aβ _25~35作用后,三者表达均显著增强（ P <0．05)。Aβ1h组和24h组相比,NR1无显著变化,NR2A、NR2B的表达随作用时间增加显著增强（　P　<0．05)。结论　正常状态下海马星形胶质细胞可表达NMDAR亚单位（NR1、NR2A和NR2B);Aβ _25~35作用会引起NMDAR各亚单位表达显著增强,NR1的表达变化与NR2A和NR2B的变化表现出不一致性。     

髓鞘形成相关NMDA-R亚基在精神分裂症小鼠模型中的变化

目的:探讨髓鞘形成相关N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDA-R)亚基在MK-801诱导的精神分裂症小鼠模型大脑中的变化。方法:35只雄性C57BL/6J小鼠,随机分为:对照组(control)和地卓西平马来酸盐处理组(MK-801),利用旷场实验、探孔实验及高架十字迷宫检测小鼠行为学改变,免疫荧光染色观察小鼠大脑NMDAR亚基NR1的表达,real time RT-PCR检测髓鞘形成相关NMDA-R亚基NR1、NR2C和NR3A mRNA的表达。结果:与对照组小鼠相比,MK-801处理组在旷场内10 min总运动路程较对照组显著增加;3 min及5 min内探孔次数较对照组显著降低;模型组小鼠在开臂内停留总时间较对照组显著降低。NR1在小鼠神经细胞胞膜、轴突周围和髓鞘部位均有表达。大脑皮层、海马内的NMDA-R亚基NR1,NR2C及NR3A mRNA的表达在两组间均无显著差异;胼胝体区域NR1和NR2C mRNA表达在两组间同样无显著差异;但相较于对照组,MK-801慢性给药组小鼠胼胝体区域NMDA-R亚基NR3A mRNA表达显著上调。结论:NMDA-R在少突胶质细胞、髓鞘等部位确有表达;胼胝体部位NR3A亚基上调可能在MK-801诱导的精神分裂症中发挥作用。     

NMDA受体1和雌激素受体在白细胞介素-2致痫大鼠脑内的表达变化和共存

目的 探讨白细胞介素2(IL-2)致痫与NMDA受体(NMDAR)和雌激素受体(ER)的关系.方法 应用免疫组织化学、免疫荧光双标和激光共焦显微镜技术研究IL-2致痫大鼠及经免疫抑制剂预处理后再致痫大鼠脑内NMDAR-1、ER的表达变化以及NMDAR/ER和NMDAR/IL-2R共存情况.结果 大鼠侧脑室注射IL-2以后,动物出现明显的癫痫发作,其大脑皮质和海马部位NMDAR-1及ER表达较对照组明显增多,免疫反应平均吸光度(A)值与对照组相比有极显著性差异;而用IL-2抑制剂环胞霉素(CsA)或糖皮质激素(G)预处理后再注射IL-2,动物未出现或仅出现轻微的癫痫发作,其NMDAR-1和ER表达较IL-2组明显减少(P＜0.05).研究还观察到大鼠脑内大脑皮质和海马部位NMDAR/ER或NMDAR/IL-2R之间存在着广泛共存.结论 IL-2有致痫作用,NMDAR-1、IL-2R和ER在致痫活动中可能存在协同和互动作用.     

慢性疲劳应激对大鼠伏隔核一氧化氮合酶表达的影响

目的:探讨长时间游泳引起的疲劳应激对大鼠伏隔核(NAc)中神经元型一氧化氮合酶(nNOS)表达的影响.方法:采用成年雄性大鼠连续4周每天强迫游泳至力竭,用免疫组织化学方法结合图像处理测定伏隔核中nNOS的表达.结果:长时间强迫游泳应激可使大鼠伏隔核巾nNOS免疫细胞化学反应阳性神经元的数量(106.7%)、面积(150.2%)和灰度值(11.3%)显著增加.结论:nNOS参与疲劳应激的形成,一氧化氮在伏隔核对应激调节中起重要作用.     

GABA与NOS在大鼠杏仁皮质核神经元内的共存

本文采用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPHd)组织化学和γ氨基丁酸(GABA)免疫组化双重染色相结合的方法,观察杏仁皮质核(Co)神经元内GABA与NADPHd的共存。结果显示GABA样阳性神经元多散在分布于杏仁皮质后内侧核(PMCo)和杏仁皮质后外侧核(PLCo),以小型为主,中型较少;NADPHd阳性神经元多散在分布于PMCo、PLCo、杏仁皮质前核(ACo),以中、小型神经元为主;双标神经元(GABA/NADPHd均阳性)多散在分布于PLCo,以中、小型神经元为主。大鼠Co内有GABA与NADPHd共存的神经元,提示一氧化氮(NO)对Co内的GABA能神经元可能有调控作用。     

不同临床相双相障碍患者血液NMDA受体NR1亚基mRNA的表达

目的:探讨谷氨酸(Glu)能神经递质及传递功能异常在双相障碍病理机制中的作用。方法:选取符合ICD-10诊断标准的双相障碍抑郁发作期患者35例,躁狂发作期患者33例,缓解期患者28例及40例正常对照,用汉密顿抑郁量表(HAMD-17)、汉密顿焦虑量表(HAMA)、贝克-拉范森躁狂量表(BRMS)评估被试临床症状,以酶联免疫吸附法测定血清Glu水平,以RT-PCR技术检测NR1亚基mRNA表达水平。结果:抑郁发作期组、躁狂发作期组血清Glu水平[(35.3±6.1) mg/L,(35.8±6.3) mg/L vs.(27.8±5.4) mg/L,(28.6±5.7) mg/L,P<0.01]及NR1亚基mRNA水平[(1.6±0.4),(1.4±0.3) vs.(0.7±0.4),(0.6±0.5),P<0.01]高于缓解期组及对照组;抑郁发作期组血清Glu水平与HAMD总分呈正相关(r=0.58,P<0.05),躁狂发作期组NR1亚基mRNA水平与BRMS总分呈正相关(r=0.42,P<0.05)。结论:双相障碍疾病发作期可能存在Glu能神经递质水平紊乱及NR1...     

雷公藤内酯醇对阿尔茨海默病模型大鼠突触后致密物蛋白N-甲基-D-天门冬氨酸受体亚基2B和突触后致密物质95的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇(TP)对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马神经元突触后致密物中N-甲基-D-天门冬氨酸受体亚基2B(NR2B)和突触后致密物质95(PSD-95)表达的影响.方法:30只SD雄性大鼠随机分成对照组、模型组、用药组.应用免疫组织化学法和RT-PCR法检测各组大鼠海马NR2B和PSD-95蛋白和mRNA的表达.结果:免疫组织化学显色结果显示,用药组NR2B和PSD-95阳性细胞数较模型组均增多,平均光密度较模型组增加.RT-PCR结果显示,用药组NR2B和PSD-95 mRNA水平较模型组升高.结论:TP能促进AD模型大鼠海马神经元NR2B和PSD-95的表达,表明其对突触可塑性有一定的改善作用.     

糖尿病大鼠视网膜N-甲基-D-天门冬氨酸受体表达的变化

目的:观察糖尿病不同时期视网膜 N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体各亚基的表达.方法:采用雄性 SD 大鼠腹腔内注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,分别于4、8、12周灌注,取眼球、冷冻切片;免疫组织化学、原位杂交方法检测NMDA 受体 NRl、NR2A、NR2B 亚基表达的变化;用 RS IMAGE 软件进行图像分析.结果:NRl、NR2A、NR2B 基因及其蛋白表达在糖尿病第 4 周时开始升高,至12周升高具有统计学意义,特别是 NRl 的变化更为显著.结论:NMDA 受体各亚基的高表达参与了糖尿病视网膜病变.     

大鼠丘脑前核神经元内γ-氨基丁酸及其受体的表达

目的:探讨大鼠丘脑前核内γ-氨基丁酸(GABA)及其GABAA受体(GABAARα1和β2subunits)的表达,从形态学角度为系统研究丘脑前核的功能提供依据。方法:分别采用包埋后胶体金免疫电镜技术和原位杂交检测丘脑前核内GABA及GABAARα1和β2mRNA的表达。结果:(1)在丘脑前核,GABAARα1和GABAARβ2阳性神经元分布较密集,细胞形态较一致。空白对照切片为阴性,未见GABAARα1和GABAARβ2mRNA表达阳性神经元。(2)GABA胶体金免疫反应切片上,GABA胶体金颗粒浓重标记GrayⅡ型轴突终末,而树突、神经元、胶质细胞及背景标记极少。GABA能阳性轴突终末与中小型树突形成对称性轴-树突触,也与神经元胞体形成对称性轴-体突触。结论:提示在丘脑前核能够合成GABAARα1和GABAARβ2,且GABA能轴突终末与神经元的树突或胞体形成对称性突触。     

GABA_A受体亚基在神经病理性痛大鼠DRG神经元的表达

目的:观察神经病理性痛模型大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元上GABAA受体亚基表达的改变。方法:建立坐骨神经压榨性损伤动物模型(CCI),热板实验检测热刺激缩足反射潜伏期(TWL);并取大鼠L4-L6DRG神经元进行膜片钳实验,观测术后DRG神经元GABA介导的内向电流的变化;分别应用Western Blot技术和免疫荧光技术检测术后GABAA受体γ2和α2亚基表达的变化。结果:(1)CCI模型鼠的TWL比正常组明显缩短(P0.05);(2)膜片钳实验观察到术后14 d CCI术侧DRG神经元GABA介导的内向电流较正常组明显减小(P0.05),对侧电流较正常组明显增强(P0.05);(3)Western Blot检测观察到CCI术侧和对侧DRG神经元上GABAA受体γ2亚基的表达量较对照组均明显下调(P0.05),术侧和对侧磷酸化γ2亚基表达量较对照组明显上调(P0.05);(4)术侧GABAA受体α2亚基表达量下调(P0.05),对侧表达量上调(P0.05)。结论:神经病理性痛时,磷酸化GABAA受体γ2亚基表达的增多以及GABAA受体亚基组合方式的变化,可能参与了痛觉形成的过程。