超高效液相色谱-四极杆静电场轨道离子阱质谱分析沼虾过敏原蛋白

目的建立超高效液相色谱-四极杆静电场轨道离子阱质谱法,分析沼虾中的过敏原蛋白。方法基于Bottomup(自下而上)蛋白分析策略,采用Tris-HCl提取罗氏沼虾样品中的目标蛋白,胰蛋白酶40℃消化6 h,肽段经过色谱分离后采用四极杆静电场轨道离子阱质谱(Full MS/dd-MS~2监测模式,TopN=10)测定,利用UniProt蛋白数据库和Proteome Discoverer软件鉴定过敏原蛋白。结果获得4种过敏原蛋白,分别为原肌球蛋白、精氨酸激酶、肌浆钙结合蛋白和血蓝蛋白,肽段覆盖率分别为53%、36%、12%和12%,翻译后修饰的位点有天冬氨酸(D)的甲基化,天冬酰氨(N)和谷氨酰氨(Q)的脱酰氨化以及蛋氨酸(M)的氧化。结论超高效液相色谱-四极杆静电场轨道离子阱质谱能获得丰富的肽段及碎片信息,灵敏度和分辨率较高,可用于虾及虾制品的过敏原蛋白鉴定和分析。     

淡水虾中诺氟沙星检测的3种液相色谱-四极杆串联质谱方法比较

目的 研究液相色谱-四极杆串联质谱采用多反应离子监测模式测定淡水虾中诺氟沙星时阳性结果的确认方法。方法 液相色谱-四极杆串联质谱通过改变流动相梯度条件和监测离子数量、液相色谱-四极杆线性离子阱串联质谱采用增强离子扫描方式、液相色谱-四极杆静电场轨道阱串联质谱运用full MS-dd-MS2采集模式,对诺氟沙星标准溶液、初次检测阳性样品和添加诺氟沙星标准品浓度在原方法检出限水平的样品进行检测。结果 3种方法对诺氟沙星标准溶液及添加诺氟沙星标准品的样品均能定性检出,初次检测的阳性样品未能检出。结论 原液相色谱-四极杆串联质谱法中为假阳性结果,建立的3种液相色谱-四极杆串联质谱法阳性结果确认检测的方法,为食品安全监管提供了有力的技术支持。     

高效液相色谱/离子阱质谱快速鉴定茚满二酮类鼠药

目的建立鼠药药饵中4种茚满二酮类鼠药的高效液相色谱/离子阱质谱快速鉴定方法。方法鼠药药饵经丙酮提取后,采用固相萃取净化,选择液相色谱/离子阱质谱仪(LC-IT/MS)的最佳仪器条件,进行液相色谱的分离和二级质谱的裂解,根据质谱分析三离子原则进行定性。结果 4种茚满二酮类鼠药的二级质谱碎片离子具有较好的特征性和稳定性,母离子和子碎片离子的关系清晰,敌鼠的定性离子对为m/z339→167和m/z339→145,氯敌鼠为m/z373→201和m/z373→145,异杀鼠酮为m/z229→145和m/z229→187,杀鼠酮为m/z229→172和m/z229→145。结论本实验建立的方法简便,结果准确可靠,适合于茚满二酮类鼠药的定性鉴别。     

阿尔茨海默病患者血清中5种磷脂的代谢水平

目的利用高效液相色谱法对阿尔茨海默病患者血清5种磷脂的代谢水平分析,探讨血清中磷脂在阿尔茨海默病发生、发展中的作用。方法采用Si60色谱柱(5μm,4.6 mm×250 mm),乙腈-甲醇-磷酸为流动相,3阶梯度洗脱,分离5种磷脂,紫外检测器,波长205nm处,高效液相色谱法检测血清5种磷脂。结果磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)和神经鞘磷脂(SM)的检出限分别为0.015、0.060、0.020、0.009和0.013 mg/m L;对照组血清中PS、PC、PE、SM含量明显高于病例组,而PI在两组间并无差异。结论阿尔茨海默病患者血清中PC、PE、PS、SM的含量水平与对照组比较呈现下降趋势,可能与阿尔茨海默病的发病有关。     

HPLC-MS-ESI法快速测定乳粉及乳制品中三聚氰胺的方法研究

目的 建立乳粉及乳制品中三聚氰胺含量的HPLC初筛、离子阱质谱确证的测定方法.方法 液相色谱以离子对缓冲液:乙腈=90:10(V/V)为流动相,Xtimate-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,240 nm检测波长,离子阱质谱电离方式:电喷雾电离(ESI),正离子.结果 回归方程为:y=1.085 ...     

蒸发光散射液相色谱法测定保健食品中磷脂酰胆碱的含量

目的 采用蒸发光散射检测器,建立高效液相色谱法测定保健食品中磷脂酰胆碱的含量。方法 以正已烷-异丙醇水溶液(0.1%的三乙胺,三氟乙酸调pH至3.5)为流动相,采用正相硅胶色谱柱和蒸发光散射检测器,高效液相色谱仪测定保健食品中磷脂酰胆碱的含量。结果 在0.05~2.0 mg/ml范围内,蒸发光散射检测器响应值的对数与磷脂酰胆碱质量浓度的对数线性相关,检测限为0.02 mg/ml。样品加标回收率为93.7%~102.3%,精密度(n=7)在1.3%以下。结论 液相色谱蒸发光散射法能够快速测定保健食品中磷脂酰胆碱的含量,具有操作简便、准确度高和重现性好等优点,适用于保健食品中磷脂酰胆碱含量的测定。     

超高效液相色谱-串联四极杆-线性加速离子阱复合质谱法对加工肉制品中防腐剂、甜味剂的筛查检测

目的建立加工肉制品中5种防腐剂、6种甜味剂同时定性、定量检测的超高效液相色谱-串联质谱方法。方法样品经50%甲醇溶液提取,正己烷净化,经Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱分离,以甲醇和0.02 mol/L乙酸铵水溶液为流动相进行梯度洗脱,电喷雾负离子(ESI-)模式电离,多反应监测(MRM)→信息相关采集(IDA)→增强子离子扫描(EPI)模式检测。结果应用超高效液相色谱-串联四极杆-线性加速离子阱复合质谱特有的MRM-IDAEPI扫描模式,可同时实现5种防腐剂、6种甜味剂的准确定性、定量分析。经方法学验证,相关系数均0.992,回收率为85.2%~96.7%,相对标准偏差为1.2%~12.5%,本方法的线性关系、回收率、精密度均符合要求。结论本方法应用Qtrap质谱的筛查功能,可对化合物进行进一步确证分析,避免假阳性样品的检出。     

饮用水中12种抗生素残留的固相萃取-超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱快速测定法

目的建立了饮用水中12种抗生素残留的固相萃取(SPE)-超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱(UPLCQTOF)快速测定法。方法水样经过HLB小柱浓缩萃取之后以ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm)为分析柱,以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱;质谱采用高分辨质谱、正离子模式,以精确质量数和二级特征离子定性,以准分子离子峰面积定量。结果在0.1~500 ng/L的线性范围内,所得12种抗生素的回归方程均呈较好的线性关系,r0.99;该方法的检出限为0.018~6.0 ng/L,定量下限为0.06~20 ng/L,回收率为65.4%~84.7%,RSD为4.5%~11.7%。结论该法操作简单、快速、准确、灵敏、适用于饮用水中抗生素的快速筛查测定。     

二十碳五烯酸改变JurkatT细胞膜脂肪微区域脂肪环境的研究

目的:研究二十碳五烯酸(EPA)处理后T细胞膜脂肪微区域中脂肪酸组成改变及其对磷脂分子中脂肪酰基取代基团的作用。方法:用不连续蔗糖密度梯度超速离心法分离T细胞膜脂肪微区域,然后用气相色谱分析细胞膜亚区域中脂肪酸组成,高效液相质谱联用测定膜脂肪微区域磷脂分子脂肪酸酰基取代基团的构成。结果:EPA处理使T细胞脂肪微区域中多不饱和脂肪酸(PUFAs),n-3PUFAs和n-3PUFAs/n-6PUFAs的比值升高;磷脂分子中除了鞘磷脂以外,其他的磷脂分子如磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇分子中一些脂肪酰取代基团有显著改变。结论:EPA处理明显改变T细胞膜脂肪微区域和可溶膜组分中脂肪酸的组成,改变磷脂分子脂肪酰基取代基团的构成,从而改变细胞膜脂肪微区域的脂肪环境。     

核桃仁和西瓜子仁中磷脂成分的分析

采用红外光谱法分别对核桃仁和西瓜子仁中总磷脂进行含量分析,方法回收率为97.2％,精密度实验CV为1.66％,总磷脂含量核桃仁为438.46～528.85mg％,西瓜子仁为241.78～247.47mg％;以薄层色谱扫描和吸光度比例系数校正法分别测定了各样品磷脂组成及相对含量,结果表明,核桃仁和西瓜子仁均以磷脂酰胆碱(PC)和磷脂酰乙醇胺(PE)为主要磷脂组分;采用气相色谱-质谱-计算机联用法分析了总磷脂中脂肪酸的组成及分布。     

化妆品中7种性激素的超高效液相色谱-串联质谱鉴定法

目的:建立化妆品中雌酮、雌二醇、雌三醇、己烯雌酚、睾丸酮、甲基睾丸酮和黄体酮7种性激素的液相色谱-串联质谱鉴定方法。方法:样品依次经提取、去脂、C18固相萃取小柱净化,以乙腈和水为流动相,在C18(1.7μm,2.1×50 mm)色谱柱上进行梯度洗脱分离,用多反应监测串联质谱定性。结果:利用该方法对某雌酮疑似阳性样品进行鉴定,结果为阴性。结论:该法选择性强,分析时间短,适合对化妆品中性激素的准确定性。     

超高效液相色谱-质谱联用定性定量测定硫酸阿托品片

目的建立超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS)法对硫酸阿托品片进行定性检测,并用内标法和外标法测定硫酸阿托品含量。方法采用超高效液相色谱串联四级杆质谱仪,色谱条件:Shim-pack XR-ODSⅡ(2.0 mm×75 mm,2.2μm)色谱柱,柱温为35℃,以乙腈-0.25%甲酸溶液为流动相梯度洗脱。质谱条件:ESI源,多反应监测(MRM),检测离子对(m/z):硫酸阿托品(290.2→124.2,290.2→93.1)。以保留时间和定性离子对之间的相对丰度定性,以定量离子对峰面积定量。内标法以氢溴酸东莨菪碱为内标。结果内标法和外标法均在0.104μg/ml～3.114μg/ml浓度内呈现良好的线性关系(r0.999)。内标法测定时,平均加样回收率为99.81%,重复性试验RSD为0.66%;外标法测定时平均加样回收率为96.79%,重复性试验RSD为0.98%。2种方法含量测定结果相似,均能满足检测要求。结论 UPLC-MS测定硫酸阿托品的方法简便、快速、准确,可有效控制硫酸阿托品片的质量。     

高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱法同时测定化妆品中12种紫外吸收剂

目的建立化妆品中12种紫外吸收剂的高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱(HPLC-Q-TOF-MS)检测方法。方法样品以甲醇-四氢呋喃-水-高氯酸(250∶450∶300∶0.2,V/V)的混合溶液溶解,经超声提取,0.22μm有机滤膜过滤,滤液以ZORBAX Eclipse XDB-C_(18)(3 mm×100 mm,1.8μm)为分离柱,5 mmol/L甲酸铵-0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱,用串联质谱电喷雾正离子模式(ESI+)进行测定,利用Targeted MS/MS模式,根据保留时间、一级质谱及二级质谱碎片信息进行定性、定量分析。结果 12种紫外吸收剂线性相关系数均0.990,RSD均5.7%,回收率为78.2%~119.7%。结论该方法简单、快速、灵敏,可用于化妆品中12种紫外吸收剂的检测。     

孕激素的UFLC/DAD/ESI/MS/MS定性确证体系研究

目的:建立牛奶中21а-羟基孕酮、17а-羟基孕酮、炔孕酮、甲羟孕酮、醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮、醋酸甲羟孕酮和孕酮等8种孕激素的快速液相色谱/二极管阵列/电喷雾电离串联质谱(UFLC/DAD/ESI/MS/MS)定性鉴别体系。方法:牛奶样品经甲醇提取、Oasis HLB固相萃取小柱净化和快速液相色谱分离后,利用DAD检测器在线检测,采用标准紫外光谱和三维光谱图对照方式进行初筛;按照三离子定性原则,利用电喷雾电离串联质谱(ESI-MS/MS)进行确证。结果:DAD在线扫描光谱信息丰富,超快速液相色谱分离良好,电喷雾电离准分子离子强而稳定,二级质谱裂解碎片离子稳定可靠,初筛和确证的定性依据充分。结论:本方法建立的超快速液相色谱、紫外光谱及串联质谱的联合定性方法适用于孕激素残留的筛选和确证检测。     

大豆磷脂对红细胞膜脂类成分的影响

目的:研究大豆磷脂对小鼠红细胞膜脂肪酸和磷脂成分的影响。方法:小鼠用不同剂量的大豆磷脂灌胃,分别为2.5、5.0、10.0 g/kg bw,同时设立对照组(去离子水灌胃),连续灌胃30 d后,心脏取血,高效液相色谱法测定小鼠红细胞膜中脂肪酸和磷脂的成分及含量。结果:(1) 10.0 g/kg剂量组小鼠红细胞膜中C18∶2、C18∶3含量等多不饱和脂肪酸(PUFA)含量显著增加(P<0.05),而C18∶1的含量则显著下降(P<0.05);5.0 g/kg剂量组C18∶2含量显著提高(P<0.05)。(2) 10.0 g/kg剂量组小鼠红细胞膜中磷脂酰丝氨酸(PS)、红细胞膜神经磷脂 (SM)、磷脂酰乙醇胺 (PE)、磷脂酰胆碱(PC)的含量均显著增加(P<0.05),而SM/PC的比值显著下降(P<0.05);5.0 g/kg剂量组PE、PC的含量显著增加(P<0.05)。结论:大豆磷脂能增加红细胞膜多不饱和脂肪酸和磷脂含量,改善红细胞膜脂类成分。     

化妆品中雄激素的高效液相色谱-质谱鉴定

目的 建立化妆品中雄性激素睾丸酮、甲基睾丸酮的高效液相色谱-质谱（HPLC-MS）鉴定方法.方法 样品用甲醇萃取后,用液相色谱-质谱分析鉴定,色谱柱为C18,流动相为甲醇：水=80：20（V/V）;流速为0.98 ml/min.质谱电离方式为ESI正模式,采用多级m/z 303的特征碎片离子峰质谱功能.结果 通过优化色谱和质谱仪器条件,选择二级质谱的特征碎片离子,睾丸酮离子峰m/z 289的特征碎片离子峰m/z 271,m/z253,甲基睾丸酮分子离子峰m/z 303的特征碎片离子峰m/z285,m/z267,可以对样品进行准确的定性;采用柱后添加0.2%的甲酸,在相同浓度下,信号强度提高了近20倍.利用该方法对某雄激素疑似阳性的化妆品样品中的睾丸酮、甲基睾丸酮的进行鉴定,结果 为阴性.结论该法特异性高,选择性强,灵敏度高,分析时间短,有较好的重现性,适合对化妆品中雄激素的定性.     

小知识

磷脂(phospholipids)各种含磷的脂类。主要存在于脑和神经组织、骨髓、心、肝、肾等器官中。蛋黄、植物种子及胚芽、大豆中均有丰富的磷脂,包括卵磷脂、脑磷脂、胆碱浆磷脂、乙醇胺浆磷脂等。人体中几乎一切组织都含有大量卵磷脂(又称磷脂酰胆碱)及脑磷脂(又称磷脂酰乙醇胺),二     

超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法快速筛查食品中9种工业染料

目的建立快速筛查食品中9种工业染料的超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q Extractive MS)测定方法。方法样品经乙腈提取,离心后取上清液,加入等体积纯水,29 000 r/min离心后取上清液上机。采用BEH C18色谱柱(50 mm×2.0 mm,2.1μm),以乙腈-0.1%甲酸水溶液作为流动相,梯度洗脱,采用电喷雾电离源正离子模式在t-SIM/dd-MS2模式下检测,通过准分子离子及子离子的理论精确质量数与所测得的精确质量数之间匹配度、目标化合物的元素组成、保留时间定性,以提取的准分子离子峰峰面积定量。结果 9种工业染料在0.263μg/L~526.7μg/L内线性关系良好,相关系数均≥0.995,检出限为0.002 mg/kg~0.02 mg/kg,平均加标回收率为65.0%~108.4%,相对标准偏差为0.3%~9.4%。结论该方法操作简便,灵敏度高,重现性好,选择性好,适用于食品中9种工业染料的快速定性定量检测。     

磷脂酰胆碱对血管性痴呆大鼠学习记忆的影响

目的:探讨大豆磷脂酰胆碱对血管性痴呆大鼠学习记忆能力的作用。方法:大鼠随机分为假手术组、模型组和磷脂酰胆碱组,采用双侧颈总动脉结扎法(2-VO法)建成血管性痴呆大鼠模型,分别通过Morris水迷宫系统和免疫荧光方法观察各组大鼠行为学和海马CA3区脑源性神经营养因子的变化。结果:长期服用磷脂酰胆碱可明显改善血管性痴呆模型大鼠的Morris水迷宫测试成绩,同时海马CA3区BDNF阳性细胞数目明显增多,光密度值减弱。结论:长期服用磷脂酰胆碱可对抗大鼠脑缺血后所致的学习记忆的损害。     

超高效液相色谱-串联质谱法快速测定鱼肉样品中的三氯生和三氯卡班

目的 建立鱼肉样品中三氯生和三氯卡班的QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱快速测定方法.方法 鱼肉样品经乙腈提取,十八烷基硅烷键合硅胶(C18)净化粉净化,甲醇和水为流动相梯度洗脱,采用电喷雾负离子模式电离,超高效液相色谱-串联质谱仪多反应监测模式,以保留时间和目标物的二级质谱特征碎片离子定性,内标法定量.结果 ...