微小RNA-21对急性肾损伤模型大鼠线粒体氧化磷酸化的影响及机制研究

目的:研究微小RNA(miR)-21对急性肾损伤(AKI)大鼠线粒体氧化磷酸化的影响及其相关机制.方法:选取40只雄性SPF级SD大鼠,随机分为对照组、模型组、阴性对照组和miR-21抑制剂组,每组10只.模型组、阴性对照组和miR-21抑制剂组腹腔注射脂多糖(LPS)诱导建立AKI模型,阴性对照组腹腔注射转染阴性对照...     

白藜芦醇对乌头碱诱发大鼠心律失常的预防作用及其可能机制

目的 探讨白藜芦醇(Res)对乌头碱诱发大鼠心律失常的预防作用及其可能机制.方法 取80只大鼠随机分为模型组、模型+Res组、模型+Res+EX-527组、对照组,各20只.模型组和对照组均给予5％羧甲基纤维素钠灌胃,模型+Res组、模型+Res+EX-527组分别给予Res、Res联合EX-527灌胃;两周后,对照组...     

微小RNA-133b对心肌纤维化的影响

目的 研究微小RNA-133b(miR-133b)对心肌纤维化的影响。方法 选取人心肌成纤维细胞(CFs),采用CCK8检测过表达及敲低miR-133b时细胞增殖情况,qRT-PCR及Western blot检测结缔组织生长因子(CTGF)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)及Ⅲ型胶原蛋白(collagen Ⅲ)的表达水平;生物学软件预测miR-133b的靶基因,双荧光素酶报告实验证实miR-133b与靶基因的直接调控作用。 结果 qRT-PCR检测结果显示,转染miR-133b mimic后miR-133b的表达水平明显高于阴性对照组(t=26.219,P=0.000),转染miR-133b inhibitor后miR-133b的表达水平明显低于阴性对照组(t=6.738,P=0.003)。转染CFs 21、45、69、93和117 h后,与阴性对照组相比,miR-133b mimic组CFs增殖能力明显降低,而miR-133b inhibitor组CFs增殖水平明显上升(P均<0.05)。与阴性对照组相比,过表达miR-133b后,CTGF(t=9.213,P=0.001;t=8.195,P=0.001)、α-SMA(t=6.511,P=0.003;t=4.434,P=0.011)、collagenⅠ(t=3.172,P=0.034;t=4.053,P=0.015)及collagen Ⅲ(t=6.404,P=0.003;t=5.319,P=0.006)的mRNA和蛋白表达水平均明显下调;敲低miR-133b后,CTGF(t=9.439,P=0.001;t=14.100,P=0.000)、α-SMA(t=4.519,P=0.011;t=4.377,P=0.012)、collagenⅠ(t=5.966,P=0.004;t=5.514,P=0.005)及collagen Ⅲ(t=4.622,P=0.010;t=4.996,P=0.008)的mRNA和蛋白表达水平均明显上升。共转染miR-133b mimic和WT 3’UTR表达载体细胞的相对荧光素酶活性明显低于共转染mimic control和WT 3’UTR表达载体的细胞(t=5.654,P=0.005),共转染miR-133b mimic和MUT 3’UTR表达载体细胞的相对荧光素酶活性与共转染mimic control和MUT 3’UTR表达载体的细胞差异无统计学意义(t=0.380,P=0.724)。结论 miR-133b可能是通过靶向抑制CTGF来影响CFs的活化增殖,从而改善心肌纤维化。     

结肠癌患者血清微小RNA-193a-5p和微小RNA-139-5p表达检测及其对预后的影响

目的:检测结肠癌患者血清微小RNA-193a-5p(miR-193a-5p)和微小RNA-139-5p(miR-139-5p)表达水平,分析其对预后的影响。方法:选取结肠癌患者109例为结肠癌组,选取同期体检健康者100例为健康组。收集两组临床资料,采用实时荧光定量PCR检测血清miR-193a-5p和miR-139-5p的表达。分析miR-193a-5p和miR-139-5p表达与结肠癌患者临床病理特征的关系。采用Cox风险比例模型分析结肠癌患者预后的影响因素。绘制Kaplan-Meier曲线进行生存分析。结果:结肠癌组miR-193a-5p和miR-139-5p表达明显低于健康组(均P<0.001)。结肠癌患者血清miR-193a-5p和miR-139-5p表达与性别、年龄、病理分型、肿瘤部位、肿瘤直径无明显相关性(均P>0.05),与临床分期、分化程度、局部浸润深度和淋巴结转移具有明显相关性(均P<0.001)。Cox风险比例模型分析结果显示,临床分期、分化程度、局部浸润深度、淋巴结转移、miR-193a-5p和miR-139-5p是结肠癌患者预后的影响因素(均...     

地黄饮子对运动性疲劳小鼠运动能力的影响

目的 探讨地黄饮子对运动性疲劳小鼠运动能力的影响.方法 将昆明小鼠30只随机分为安静对照组(安静组)、疲劳模型组(模型组)和地黄饮子组,每组10只.采用游泳训练方式建立小鼠疲劳模型.常规饲料喂养外,地黄饮子组给予地黄饮子水煎液灌胃,安静组和模型组给予蒸馏水灌胃,连续给药28 d.ELISA法检测血尿素氮、睾酮、皮质醇含...     

紫云英苷对慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化及AMPK/Nrf2通路的影响

目的观察紫云英苷对慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/核因子E2相关因子2(Nrf2)通路的影响。方法2020年8—9月于华北理工大学附属医院基础实验室进行实验。48只大鼠建立慢性心力衰竭模型,而后随机数字表法分成模型组、卡托普利组(10 mg/kg)、紫云英苷低剂量组(25 mg/kg)、紫云英苷高剂量组(50 mg/kg),另选取12只大鼠作为空白对照组(不进行任何处理),各药物组大鼠给予相应药物灌胃,空白对照组及模型组给予等体积生理盐水灌胃,每天1次,连续给药4周。实验结束后,彩色多普勒超声诊断仪测定大鼠左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(FS)、左心室收缩末期内径(LVESD)和左心室舒张末期内径(LVEDD)。取心肌组织行Masson染色测定并计算心肌胶原容积分数(CVF)和血管周围胶原面积与血管管腔面积比值(PVCA/LA),HE染色观察大鼠心肌组织形态学,荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法测定心肌组织中AMPK、Nrf2 mRNA和蛋白水平。结果心肌组织HE染色显示,空白对照组心肌结构正常;模型组心肌横纹紊乱,心肌组织纤维化明显,有明显炎性反应细胞浸润;卡托普利组及紫云英苷低、高剂量组心肌组织纤维化程度减轻,炎性反应细胞浸润减少,心肌纤维排列整齐。与空白对照组比较,模型组大鼠LVEDD、LVESD、CVF、PVCA/LA水平升高,FS、LVEF、心肌组织中AMPK、Nrf2 mRNA和蛋白水平降低(P<0.05);与模型组比较,卡托普利组、紫云英苷各剂量组大鼠LVEDD、LVESD、CVF、PVCA/LA水平降低,FS、LVEF、心肌组织中AMPK、Nrf2 mRNA和蛋白水平升高(P<0.05);紫云英苷高剂量组大鼠LVEDD、LVESD、CVF、PVCA/LA水平低于紫云英苷低剂量组,FS、LVEF、心肌组织中AMPK、Nrf2 mRNA和蛋白水平高于紫云英苷低剂量组(P<0.05);卡托普利组和紫云英苷高剂量组大鼠上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论紫云英苷可改善慢性心力衰竭大鼠心功能,减轻心肌纤维化程度,其机制可能与紫云英苷激活AMPK/Nrf2通路有关。     

介导油酸对小鼠c2c12细胞PGC-1α表达的影响

目的 研究油酸(OA)对小鼠c2c12细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)表达的影响,探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在其中的作用.方法以不同浓度油酸及p38抑制剂SB203580(SB)分别处理c2c12细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测PGC-1α mRNA表达,Western Blot检测PGC-1α蛋白表达.结果油酸处理组PGC-1α mRNA及蛋白表达明显高于对照组(P＜0.05); OA+SB组PGC-1α表达减低(P＜0.05).结论油酸能促进c2c12细胞PGC-1α mRNA转录和蛋白的表达,该作用可能与p38 MAPK信号通路有关.     

参附强心合剂对心衰大鼠心肌能量代谢AMPK-PGC-1α通路的影响

目的探讨参附强心合剂对心衰大鼠心肌能量代谢单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)-过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α(PGC-1α)通路的调控及其作用机制。方法采用腹主动脉缩窄法制作大鼠心衰模型,经4周造模成功后将造模组大鼠随机分为:模型组,参附强心合剂高、中、低剂量组,曲美他嗪组,予药物溶液灌胃4周后,取腹主动脉血及左心室组织,用ELISA法测血清中血清B型脑尿钠肽(BNP)、乳酸脱氢酶(LDH)、游离脂肪酸(FFA)含量,Western blot法对心室组织中AMPK、p-AMPK、PGC-1α进行半定量分析。结果 (1)各中药组血清BNP、LDH、FFA较模型组显著降低(P0.05)。其中,中药高剂量组BNP、FFA水平与曲美他嗪组无显著差异[(265.74±19.89)ng/mL比(240.62±21.40)ng/mL,(482.64±23.89)ng/mL比(463.09±25.95)ng/mL(P0.05)];中药高、中剂量组LDH水平与曲美他嗪组相当(295.25±29.34)ng/mL、(317.83±25.99)ng/mL比(283.09±31.41)ng/mL(P0.05);(2)各组大鼠心肌组织中AMPK蛋白表达水平未见显著差异(P0.05);中药高剂量组p-AMPK蛋白表达与曲美他嗪组均明显增加(P0.01),两者之间未见明显差异[(1.128±0.085)ng/mL比(1.180±0.208)ng/mL(P0.05)];各用药组PGC-1α蛋白表达均明显增加(P0.05),但中药各剂量组PGC-1α蛋白表达与曲美他嗪组之间无显著差异(P0.05)。结论参附强心合剂可以降低心衰大鼠的血清BNP、FFA、LDH水平从而减轻心衰。参附强心合剂可能通过激活AMPK-PGC-1α信号通路,提高p-AMPK、PGC-1α的表达以调节脂肪酸氧化代谢及葡萄糖转运,从而改善心衰大鼠心肌能量代谢,从而起到治疗心衰的作用。     

p38MAPK对大鼠肾小球系膜细胞表达PPAR-γ的影响

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase, p38MAPK)和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ (peroxisome proliferator-activated receptors-γ, PPAR-γ)的关系,从而研究p38MAPK和PPAR-γ在糖尿病肾病中的作用机制.方法 分别以高葡萄糖、高胰岛素、过氧化氢和糖基化终产物孵育大鼠肾小球系膜细胞系HBZY-1;先分别以p38MAPK特异抑制剂SB203580预处理细胞系HBZY-1,再给予上述4种因素孵育细胞系HBZY-1,观察细胞系HBZY-1 p38MAPK和PPAR-γ的表达.结果 高葡萄糖、高胰岛素、过氧化氢和糖基化终产物均可独立激活p38MAPK,使其磷酸化表达量增加,PPAR-γ表达明显减少;SB203580预处理后,PPAR-γ表达显著增加.结论 在大鼠肾小球系膜细胞,p38 MAPK对PPAR-γ具有拮抗作用,表明PPAR-γ的激活可能具有直接的肾脏保护作用.     

探讨保元汤加减方通过AMPK/SIRT1/PGC-1α通路对小鼠的抗疲劳作用

目的 探讨保元汤加减方(人参、黄芪、甘草、肉桂、红景天)缓解疲劳的作用及机制。方法 用HPLC检测保元汤加减方主要成分及含量。将160只SPF级ICR雄性小鼠分为4部分(各40只),每部分均完全随机分为空白对照组(等体积纯化水)及保元汤加减方低、中、高剂量(1.9、2.1、2.3 g/kg)组,各组每日灌胃1次,共30 d。末次灌胃后取材并处死。(1)40只小鼠分别于第21天检测行为学指标(抓力、背温、自主活动次数、转棒疲劳时间),第30天检测负重游泳时间。(2)40只小鼠用于检测肝/肌糖原水平。(3)40只用于检测血乳酸(BLA)含量及计算血乳酸曲线下面积。(4)40只小鼠用于检测机体代谢产物[血清尿素氮(BUN)、乳酸脱氢酶(LDH)、BLA]水平,氧化应激相关酶[骨骼肌及心脏中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)]活性,血液运氧能力[全血红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、平均血红蛋白浓度(MCHC)],三磷酸腺苷(ATP)相关酶[骨骼肌及心脏中Na⁺-K⁺-ATP酶、Ca²⁺-Mg<...     

PPARγ在糖尿病心肌纤维化大鼠心肌细胞及微血管内皮中的表达

目的通过观察过氧化物酶体增殖物激活型受体γ（PPARγ）与血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）在糖尿病心肌纤维化模型大鼠心肌细胞及微血管中表达情况,初步探讨PPARγ在糖尿病心肌纤维化中的作用。方法雄性Wistar大鼠27只,随机分为①糖尿病组（n=15）,给予大鼠腹腔内注射链佐菌素(STZ)65mg/kg以制备糖尿病心肌纤维化大鼠模型;②正常对照组（n=12）。均给与标准饲料喂养5个月,糖尿病组大鼠成功建模并最终存活11只。采用放射免疫法测定各组血浆AngⅡ水平;心肌组织HE染色及Masson染色观察心肌细胞、胶原分布形态,测定胶原容量及微血管密度;采用免疫组织化学法测定AngⅡ及PPARγ在心肌细胞及微血管中表达。结果糖尿病组大鼠血浆AngⅡ水平明显高于正常对照组(P＜0.05);糖尿病组心肌内胶原组织明显增多,微血管密度降低,胶原容量明显高于对照组(P均＜0.05);镜下可见,糖尿病组心肌组织微血管内皮细胞及心肌细胞中PPARγ的大量表达,均明显高于正常对照组(P＜0.05);AngⅡ在糖尿病组心肌细胞中的表达明显增高(P＜0.05),而两组内皮细胞中的表达无差异(P>0.05)。结论糖尿病心肌纤维化大鼠心肌细胞和微血管内皮细胞中PPAR表达均明显增强,提示PPARγ可能在糖尿病心肌纤维化中发挥重要作用。     

益母草碱对异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌纤维化IGF-1表达的影响研究

目的:探讨益母草碱对异丙肾上腺素(ISO)诱导的大鼠心肌纤维化胰岛素样生长因子-1(IGF-1)表达的影响。方法:10只SD大鼠作正常对照组;另80只SD大鼠作为实验鼠,连续2周腹腔注射ISO诱导心肌纤维化动物模型。造模成功后将实验鼠随机分为5组,模型组、益母草碱低剂量组(7. 5mg·kg~(-1)d~(-1))、中剂量组(15 mg·kg~(-1)d~(-1))、高剂量组(30 mg·kg~(-1)d~(-1))、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂组(0. 3 mg·kg~(-1)d~(-1)),连续给予相应药物腹腔注射2周后,分别以免疫组织化学法检测左心室肌IGF-1蛋白质的表达水平和酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清B型利钠肽(BNP)的含量。结果:与模型组比较,高剂量益母草碱能明显减少左心室肌IGF-1蛋白质的表达水平(P0. 05)及血清BNP的含量(P0. 05)。结论:益母草碱(30 mg·kg~(-1)d~(-1))具有抑制ISO诱导大鼠心肌纤维化作用,其机制可能与减少左心室肌组织IGF-1蛋白质的表达及血清BNP的含量有关。     

微RNA-133a-3p靶向调控转化生长因子-β1/Smad3对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨微RNA(miR)-133a-3p靶向调控转化生长因子-β₁(TGF-β₁)/Smad3对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法 选择2020年2月至2021年2月焦作市人民医院皮肤科收治的瘢痕疙瘩患者29例为研究对象,手术切取瘢痕疙瘩组织及其周围正常皮肤组织,分离培养瘢痕疙瘩成纤维细胞(KF)和正常皮肤组织成纤维细胞(NF)。取对数生长期KF细胞,随机分为空白对照组、miR-阴性对照(NC)组、miR-133a-3p组、miR-133a-3p+pcDNA3.1组、miR-133a-3p+pcDNA3.1-TGF-β₁组;空白对照组细胞不做任何转染,miR-NC组细胞转染miR-NC,miR-133a-3p组细胞转染miR-133a-3p mimic, miR-133a-3p+pcDNA3.1组细胞共转染miR-133a-3p mimic和pcDNA3.1,miR-133a-3p+pcDNA3.1-TGF-β₁组细胞共转染miR-133a-3p mimic和pcDNA3.1-TGF...     

沉默信息调节因子1/叉头转录因子1通路上调微小RNA-203对慢性心力衰竭大鼠的干预实验研究

目的:探究沉默信息调节因子1/叉头转录因子1(Sirt1/Foxo1)通路上调微小RNA-203(miR-203)对慢性心力衰竭大鼠的干预效果。方法:选取45只SD健康大鼠,随机选中10只作为对照组,其余采用左冠状动脉结扎术建立慢性心力衰竭模型,共有30只大鼠建模成功,分为模型组、下调组、上调组,每组各10只,对照组只做穿线不结扎。对照组和模型组每天给予等量0.9%氯化钠溶液,下调组大鼠注射miR-203 inhibitor慢病毒注射,上调组大鼠注射miR-203 mimics慢病毒,观察大鼠的情况变化。结果:与对照组比较,模型组、下调组、上调组miR-203表达量均降低(均P<0.05);与模型组比较,下调组miR-203表达量降低,上调miR-203表达量升高(均P<0.05);与下调组比较,上调组miR-203表达量升高(P<0.05),说明转染成功。与对照组比较,经干预2、4周后模型组、下调组、上调组大鼠的心室射血分数(LVEF)、左心室短轴收缩率(LVFS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-P_X)、超氧化物歧化酶(SOD)水平均降低,左心室...     

淫羊藿苷上调PPARα和PGC-1α蛋白的表达改善慢性脑低灌注大鼠模型的空间学习记忆

目的观察淫羊藿苷（ICA）抗慢性脑低灌注大鼠模型学习记忆减退的可能机制。方法雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、低、高剂量ICA治疗组（n=15）。双侧颈总动脉结扎（BCCAO）建立慢性脑低灌注模型,低、高剂量ICA治疗组造模后第10天分别每日灌胃ICA10、40 mg/kg,连续灌胃23d。制模后第28天后Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆功能,处死大鼠,Western blot法分别检测海马过氧化物酶体增殖物激活型受体α（PPARα）和过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α（PGC-1α）的蛋白表达。结果定位航行实验中,模型组大鼠运动距离较假手术组明显增加,而给予ICA低、高剂量组大鼠运动距离较模型组减少（P〈0.01,P〈0.05）。空间探索实验中,模型组大鼠目标象限停留时间较假手术组明显减少,而给予ICA低、高剂量组大鼠在目标象限停留时间较模型组明显延长（P均〈0.05）。而且,模型组大鼠海马PPARα和PGC-1α蛋白表达均明显下降,而ICA低、高剂量能明显增加其表达（P〈0.01,P〈0.05）。结论 ICA可改善慢性脑低灌注大鼠模型的空间学习记忆减退,其机制至少与其上调大鼠海马PPARα和PGC-1α蛋白表达有关。     

清肠化湿方对TNBS大鼠结肠组织PPAR-γ/p38 MAPK的影响

目的 :观察清肠化湿方(QHD)对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的大鼠结肠炎结肠组织中过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR-γ)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)表达的影响,探讨其治疗溃疡性结肠炎(UC)的可能作用机制。方法:采用80只Wistar大鼠建立UC大鼠模型,随机分为8组,分别为空白对照组、模型对照组、QHD低剂量组、QHD中剂量组、QHD高剂量组、柳氮磺胺吡啶(SASP)组、柳氮磺胺吡啶+双酚A-二甘氨酸醚(SASP+BADGE)组及中药中剂量+BADGE组,每组10只。除空白对照组以生理盐水灌肠外,其余组采用TNBS/乙醇灌肠造UC大鼠模型。以柳氮磺胺吡啶(SASP)为阳性对照,同时联合使用PPAR-γ抑制剂双酚A-二甘氨酸醚(BADGE),给药7 d后病理检测各组大鼠结肠组织的损伤情况,并通过蛋白质印迹法(Western blot)和实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(Real-time PCR)实验分别检测大鼠结肠组织中PPAR-γ、p38 MAPK的蛋白和基因表达,同时检测各组大鼠结肠组织中黏蛋白2(MUC2)和三叶因子3(TFF3)的表达情况。结果:清肠化湿方可上调TNBS大鼠结肠组织PPAR-γ的表达(P<0.01),同时抑制p38 MAPK的活性(P<0.01),并促进结肠组织中MUC2和TFF3表达(P<0.01),当联用PPAR-γ抑制剂BADGE后其对p38 MAPK的抑制作用减弱(P<0.05)。结论:清肠化湿方对TNBS大鼠结肠炎有明显的保护作用,其作用机制可能与激活PPAR-γ信号通路、抑制p38 MAPK的激活、减轻炎症反应、升高结肠组织中MUC2与TFF3的表达水平、参与肠黏膜的修复有关。     

罗格列酮对转移生长因子诱导的大鼠肺纤维化的影响及其作用机制研究

目的采用转化生长因子（TGF-β1）诱导肺成纤维细胞,给予罗格列酮（过氧化物体增殖活化受体γ激动剂）干预,明确其对肺纤维的治疗作用及其作用机制。方法以组织贴块法培养肺成纤维细胞。实验分为0.4%血清组、TGF-β1刺激组、罗格列酮＋TGF-β1处理组,采用免疫细胞化学染色法检测TGF-β1和罗格列酮对肺成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的作用;采用Westernblot法检测肺脏成纤维细胞ERK1/2及磷酸化ERK1/2蛋白的表达。结果罗格列酮能够抑制TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞的增殖,抑制了Ⅰ型、Ⅲ型胶原的表达。同时磷酸化的ERK1/2蛋白的表达下降,而ERK1/2表达无明显改变,表明罗格列酮抑制了肺成纤维细胞的ERK1/2信号转导途径的活化。结论 TGF-β1能够通过激活ERK1/2途径促进大鼠肺成纤维细胞的增殖和胶原合成,而罗格列酮能够通过阻断TGF-β1介导的ERK1/2通路的激活进而抑制大鼠肺成纤维细胞增殖和胶原合成,对肺间质纤维化存在一定治疗作用。